The aim of this study was to carry out experiments with maize (Zea mays) for the purpose of finding out the efficiency of phytoextraction of chosen pharmaceuticals from the nutrient solution. The plants were cultivated for three weeks in a sterile environment. Then was added a nutrient solution enriched with chosen benzodiazepines - diazepam, flunitrazepam, nitrazepam and bromazepam - in concentration 5-10 mg/L. The samples from each plant were taken every day (24 hours) and then were analyzed with HPLC/UV. The efficiency of phytoextraction was evaluated in two ways. The first one as an percentage of a decrease of the concentration of the pharmaceuticals in the solution with time, the second one as an amount of phytoextracted pharmaceutical in milligrames per gram of the plant matter. From the standpoint of the decrease of the concentration was as the most efficient measured the phytoextraction of nitrazepam (74,7 %), less efficient diazepam and bromazepam (55,2 %, respectively 53,9 %) and the least efficient flunitrazepam (38,0 %). When converted to the mass of the plant matter the most efficient was found the phytoextraction of bromazepam (0,08 mg of drug to 1 gram of plant matter), lower efficiency by bromazepam and diazepam (both 0,02 mg) and the lowest again by flunitrazepam (0,01 mg). key...

Benzodiazepínicos são as drogas lícitas mais vendidas no Brasil - certa de 50 milhões de brasileiros fazem uso diário desse tipo de droga. É clara a importância de se conhecer os efeitos que essas drogas podem ter sobre o comportamento. Existem diversas lacunas no conhecimento de como afetam diferentes aspectos do comportamento operante, entretanto. Especificamente, o efeito do tratamento sobre o responder por reforçadores condicionados tem sido uma área pouco explorada. O presente estudo se propôs a investigar os efeitos do tratamento com bromazepam sobre o responder por um estímulo condicionado e um incondicionado, em dois esquemas complementares, razão progressiva e segunda ordem. Foram conduzidos três experimentos. Experimento I: 9 ratas de aproximadamente 9 meses de idade foram submetidas à um esquema de razão progressiva, tendo um composto de luz (LUZ) e solução de sacarose (SAC) como consequência; uma vez obtida uma linha de base foi iniciado tratamento com 1 mg/kg de bromazepam em 4 dos sujeitos (BRO) e salina (VEI) nos demais. Após 28 dias, foi removida SAC. Após 8 dias, foi removida também LUZ. Ocorreram então 5 sessões de extinção. Foi observada uma redução no responder durante o tratamento em BRO. O tratamento não apresentou efeitos adicionais durante a fase de remoção das consequências. Experimento II: replicação do I utilizando 18 machos de aproximadamente 3 meses de idade e com uma entrefase de adaptação ao procedimento de injeção. O tratamento levou ao aumento do responder em BRO (F2,23=8,13; p=0,001), porém não trouxe diferenças após a remoção das consequências. Experimento III: 20 ratos machos de 3 meses de idade foram submetidos à duas fases experimentais: manutenção (no qual, por quatro dias, eram expostos à esquemas de segunda ordem de Razão/Intervalo com a duração do intervalo crescente a cada sessão (FI 2min (FR5:luz); FI 5min(FR5:luz); FI10min(FR5:luz) e FI20min(FR5:luz), e teste (T1 FI20min(FR5luz)), T2 FR5 e T3 FI20min). As fases de manutenção tinham por objetivo estabelecer e fortalecer a relação LUZ/SAC. Responder para VEI se mostrou estável nas fases teste, enquanto foi observada uma redução em T3 para BRO. Os resultados indicam que BRO teve efeito de modular o responder pelo reforçador incondicionado em todas as situações experimentais, interagindo com o esquema vigente e outras variáveis experimentais como sexo. Não foi observado, entretanto, efeito específico sobre a eficácia de reforçadores condicionados / Benzodiazepines are the most sold of legal drugs in Brazil about 50 million Brazilians use this kind of drug on a daily basis. The importance of knowing the effects of these drugs on behavior is clear. There are several gaps in the knowledge of these drugs affect operant behavior, however. Specifically, the effect of treatment on the responding for conditioned reinforcements is an area that has seldom been investigated. The present study proposed to investigate the effects of bromazepam treatment on the responding for a conditioned and an unconditioned stimulus, in two complementary schedules, namely, progressive ratio and second order. Three experiments were held. Experiment I: 9 female rats of approximately 9 months of age underwent a progressive ratio schedule, with a sucrose solution (SUC) and a light presentation (LIGHT) as concomitant consequences. Once baseline was stablished, treatment with 1mg/kg bromazepam was started for 4 subjects (BRO). The remaining received saline (VEI). After 29 days, SAC was removed. After 8 days, LIGHT was also removed. Then 5 sessions of extinction took place. Lower responding was observed in BRO. Treatment did not further effect behavior in the remaining experimental stages (consequence removal). Experiment II: pilot replication using 18 male rats and including a stage of habituation to the injection procedure. Treatment incurred in the increase of responding for BRO (F2,23=8.13; p=0.001), but had no further effects on the subsequent stages. Experiment III: 20 male rats underwent two experimental stages: maintenance (for four days the animal underwent second order schedules composed of a Ratio and an Interval component, in which the interval increased with each session ( (FI 2min(FR5:light); FI 5min(FR5light); FI10min(FR5light) E FI20min(FR5light) and test (T1 FI20min(FR5light)), T2 FR5 and T3 FI20min). Maintenance stages were intended to stablish and strengthen the LIGHT/SUC relation. VEI responded in a stable manner in all test stages, while BRO showed a reduction in responding in T3. Overall results indicate BRO was able to modulate responding for the unconditioned reinforcer in all experimental situations, interacting with other variables such as schedule and sex. No particular effect was found on the efficacy of the conditioned stimulus, however

Benzodiazepínicos são as drogas lícitas mais vendidas no Brasil - certa de 50 milhões de brasileiros fazem uso diário desse tipo de droga. É clara a importância de se conhecer os efeitos que essas drogas podem ter sobre o comportamento. Existem diversas lacunas no conhecimento de como afetam diferentes aspectos do comportamento operante, entretanto. Especificamente, o efeito do tratamento sobre o responder por reforçadores condicionados tem sido uma área pouco explorada. O presente estudo se propôs a investigar os efeitos do tratamento com bromazepam sobre o responder por um estímulo condicionado e um incondicionado, em dois esquemas complementares, razão progressiva e segunda ordem. Foram conduzidos três experimentos. Experimento I: 9 ratas de aproximadamente 9 meses de idade foram submetidas à um esquema de razão progressiva, tendo um composto de luz (LUZ) e solução de sacarose (SAC) como consequência; uma vez obtida uma linha de base foi iniciado tratamento com 1 mg/kg de bromazepam em 4 dos sujeitos (BRO) e salina (VEI) nos demais. Após 28 dias, foi removida SAC. Após 8 dias, foi removida também LUZ. Ocorreram então 5 sessões de extinção. Foi observada uma redução no responder durante o tratamento em BRO. O tratamento não apresentou efeitos adicionais durante a fase de remoção das consequências. Experimento II: replicação do I utilizando 18 machos de aproximadamente 3 meses de idade e com uma entrefase de adaptação ao procedimento de injeção. O tratamento levou ao aumento do responder em BRO (F2,23=8,13; p=0,001), porém não trouxe diferenças após a remoção das consequências. Experimento III: 20 ratos machos de 3 meses de idade foram submetidos à duas fases experimentais: manutenção (no qual, por quatro dias, eram expostos à esquemas de segunda ordem de Razão/Intervalo com a duração do intervalo crescente a cada sessão (FI 2min (FR5:luz); FI 5min(FR5:luz); FI10min(FR5:luz) e FI20min(FR5:luz), e teste (T1 FI20min(FR5luz)), T2 FR5 e T3 FI20min). As fases de manutenção tinham por objetivo estabelecer e fortalecer a relação LUZ/SAC. Responder para VEI se mostrou estável nas fases teste, enquanto foi observada uma redução em T3 para BRO. Os resultados indicam que BRO teve efeito de modular o responder pelo reforçador incondicionado em todas as situações experimentais, interagindo com o esquema vigente e outras variáveis experimentais como sexo. Não foi observado, entretanto, efeito específico sobre a eficácia de reforçadores condicionados / Benzodiazepines are the most sold of legal drugs in Brazil about 50 million Brazilians use this kind of drug on a daily basis. The importance of knowing the effects of these drugs on behavior is clear. There are several gaps in the knowledge of these drugs affect operant behavior, however. Specifically, the effect of treatment on the responding for conditioned reinforcements is an area that has seldom been investigated. The present study proposed to investigate the effects of bromazepam treatment on the responding for a conditioned and an unconditioned stimulus, in two complementary schedules, namely, progressive ratio and second order. Three experiments were held. Experiment I: 9 female rats of approximately 9 months of age underwent a progressive ratio schedule, with a sucrose solution (SUC) and a light presentation (LIGHT) as concomitant consequences. Once baseline was stablished, treatment with 1mg/kg bromazepam was started for 4 subjects (BRO). The remaining received saline (VEI). After 29 days, SAC was removed. After 8 days, LIGHT was also removed. Then 5 sessions of extinction took place. Lower responding was observed in BRO. Treatment did not further effect behavior in the remaining experimental stages (consequence removal). Experiment II: pilot replication using 18 male rats and including a stage of habituation to the injection procedure. Treatment incurred in the increase of responding for BRO (F2,23=8.13; p=0.001), but had no further effects on the subsequent stages. Experiment III: 20 male rats underwent two experimental stages: maintenance (for four days the animal underwent second order schedules composed of a Ratio and an Interval component, in which the interval increased with each session ( (FI 2min(FR5:light); FI 5min(FR5light); FI10min(FR5light) E FI20min(FR5light) and test (T1 FI20min(FR5light)), T2 FR5 and T3 FI20min). Maintenance stages were intended to stablish and strengthen the LIGHT/SUC relation. VEI responded in a stable manner in all test stages, while BRO showed a reduction in responding in T3. Overall results indicate BRO was able to modulate responding for the unconditioned reinforcer in all experimental situations, interacting with other variables such as schedule and sex. No particular effect was found on the efficacy of the conditioned stimulus, however

Desenvolveu-se método de alta sensibilidade e especificidade por cromatografia liquida de alta eficiência acoplada a detecção por espectrometria de massas (LC-MS/MS) para quantificação do lorazepam em plasma humano visando aplicação em estudo de bioequivalência entre duas formulações de comprimidos contendo esse fármaco. A preparação das amostras de plasma foi feita por extração líquido-líquido usando hexano:diclorometano (60:40 v/v) como solvente de extração. O padrão interno usado foi o bromazepam. A separação cromatográfica ocorreu utilizando-se coluna analítica modelo Gemini® C18 110 A (150 mm x 4,6 mm; partículas de 5µm). Mistura de metanol e tampão acetato de amônio 10 mM (80:20, v/v), acrescida de 0,1% de ácido fórmico ao final da preparação, foi usada como fase móvel. A interface entre HPLC e MS/MS foi a fonte de ionização por eletrospray (ESI) operando em modo positivo (ES+). O analito e o PI foram monitorados e quantificados através de multiple reaction monitoring (MRM). As transições monitoradas foram m/z 320,69 > 274,96 para o lorazepam e m/z 318,00 > 182,20 para o padrão interno. O método foi validado na faixa de concentração de 0,50 a 80,0 ng/ml em plasma humano. A bioequivalência entre as formulações foi determinada através dos intervalos de confiança 90 % obtidos para as razões dos parâmetros farmacocinéticos Cmax (99% - 114%), AUC0-t (93% - 105%) e AUC0-inf (96% - 107%). Concluiu-se que as duas formulações podem ser administradas de maneira intercambiável sem prejuízo da eficácia terapêutica. / A method of liquid chromatography coupled to mass spectrometric detection (LC-MS/MS) with high sensitivity and specificity was developed to quantify Lorazepam in human plasma. This method was applied in a bioequivalence study between two tablet formulations. The preparation of plasma samples were performed by liquid-liquid extraction using hexanedichloromethane (60:40 v/v) as extraction solvent. The internal standard was bromoazepam. The chromatographic separation was achieved using the Gemini® C18 110A (150 mm x 4.6mm; 5µm particles) analytical column. The mobile phase was prepared from a mixture of methanol and 10mM of ammonium acetate (80:20, v/v), and finally adding 0.1% of formic acid. The HPLC and MS/MS interface was the electrospray ionization source (ESI), operating in positive mode (ESI+). The analyte and internal standard were monitored and quantified through multiple reaction monitoring (MRM). The monitored transitions were m/z 320.69 > 274.96 for lorazepam and m/z 318.00 > 182.20 for the internal standard. The method was validated over the range 0.50 to 80.0 ng/mL in human plasma. The bioequivalence between the two formulations was determined inside the 90% confidence interval for the pharmacokinetic parameters, Cmax (99% - 114%), AUC0-t (93% - 105%) and AUC0-inf (96% - 107%). It was concluded that the two formulations can be administered in an interchangeable manner without losing the therapeutic efficiency.

Desenvolveu-se método de alta sensibilidade e especificidade por cromatografia liquida de alta eficiência acoplada a detecção por espectrometria de massas (LC-MS/MS) para quantificação do lorazepam em plasma humano visando aplicação em estudo de bioequivalência entre duas formulações de comprimidos contendo esse fármaco. A preparação das amostras de plasma foi feita por extração líquido-líquido usando hexano:diclorometano (60:40 v/v) como solvente de extração. O padrão interno usado foi o bromazepam. A separação cromatográfica ocorreu utilizando-se coluna analítica modelo Gemini® C18 110 A (150 mm x 4,6 mm; partículas de 5µm). Mistura de metanol e tampão acetato de amônio 10 mM (80:20, v/v), acrescida de 0,1% de ácido fórmico ao final da preparação, foi usada como fase móvel. A interface entre HPLC e MS/MS foi a fonte de ionização por eletrospray (ESI) operando em modo positivo (ES+). O analito e o PI foram monitorados e quantificados através de multiple reaction monitoring (MRM). As transições monitoradas foram m/z 320,69 > 274,96 para o lorazepam e m/z 318,00 > 182,20 para o padrão interno. O método foi validado na faixa de concentração de 0,50 a 80,0 ng/ml em plasma humano. A bioequivalência entre as formulações foi determinada através dos intervalos de confiança 90 % obtidos para as razões dos parâmetros farmacocinéticos Cmax (99% - 114%), AUC0-t (93% - 105%) e AUC0-inf (96% - 107%). Concluiu-se que as duas formulações podem ser administradas de maneira intercambiável sem prejuízo da eficácia terapêutica. / A method of liquid chromatography coupled to mass spectrometric detection (LC-MS/MS) with high sensitivity and specificity was developed to quantify Lorazepam in human plasma. This method was applied in a bioequivalence study between two tablet formulations. The preparation of plasma samples were performed by liquid-liquid extraction using hexanedichloromethane (60:40 v/v) as extraction solvent. The internal standard was bromoazepam. The chromatographic separation was achieved using the Gemini® C18 110A (150 mm x 4.6mm; 5µm particles) analytical column. The mobile phase was prepared from a mixture of methanol and 10mM of ammonium acetate (80:20, v/v), and finally adding 0.1% of formic acid. The HPLC and MS/MS interface was the electrospray ionization source (ESI), operating in positive mode (ESI+). The analyte and internal standard were monitored and quantified through multiple reaction monitoring (MRM). The monitored transitions were m/z 320.69 > 274.96 for lorazepam and m/z 318.00 > 182.20 for the internal standard. The method was validated over the range 0.50 to 80.0 ng/mL in human plasma. The bioequivalence between the two formulations was determined inside the 90% confidence interval for the pharmacokinetic parameters, Cmax (99% - 114%), AUC0-t (93% - 105%) and AUC0-inf (96% - 107%). It was concluded that the two formulations can be administered in an interchangeable manner without losing the therapeutic efficiency.

Tikslas: optimizuoti instrumentinės analizės metodus (plonasluoksnė chromatografija ir efektyvioji skysčių chromatografija) bromazepamo, klorazepato ir nimesulido mišinio išskirstymui ir komponentų identifikavimui.Uždaviniai:optimizuoti bromazepamo, klorazepato, nimesulido mišinio komponentų atskyrimą ir identifikavimą plonasluoksnės chromatografijos metodu. Optimizuoti plonasluoksnės chromatografijos metodą kiekybiniam bromazepamo, klorazepato ir nimesulido nustatymui. Optimizuoti bromazepamo, klorazepato, nimesulido mišinio komponentų atskyrimą ir identifikavimą efektyviosios skysčių chromatografijos metodu, sukurtą metodiką pritaikyti kraujo plazmos mėginio tyrimui. / The aim of this work was to optimize instrumental analysis methods designed for separation and identification of bromazepam, clorazepate and nimesulide from their mixture samples. In order to achieve our goal we have set ourselves these tasks – to optimize thin-layer chromatography method for separation and identification of bromazepam, clorazepate, nimesulide mixture components; to optimize the thin-layer chromatographic method for the quantitative determination of bromazepam, clorazepate and nimesulide; to optimize separation and identification of components from bromazepam, clorazepate, nimesulide mixture using high-performance liquid chromatography method and to adapt and develop methodology design for plasma sample analysis.