Submitted by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-10-23T20:48:04Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fábio Muniz de Oliveira - 2014.pdf: 12287155 bytes, checksum: 58eb4d1e227a17283f27cf610577402a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-10-23T20:49:02Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Fábio Muniz de Oliveira - 2014.pdf: 12287155 bytes, checksum: 58eb4d1e227a17283f27cf610577402a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-23T20:49:02Z (GMT). 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M. smegmatis mc2 155 was transformed with pLA71-CMX by electroporation, and the presence of the CMX protein was confirmed by imuno blotting. BALB/c mice were distributed in four groups: saline, infection, BCG and mc2-CMX. The groups were immunized with their respective vaccines in two moments with an interval of fifteen days and the animal blood was collected fifteen days after the last immunization. Thirty days after the last immunization, the animals were challenged with Mtb H37Rv (intravenously) and thirty days after the challenge, the blood was collected to perform ELISA test. Seventy days after the challenge, the lungs from all mice were collected to obtain cells for flow-cytometry, histological analysis and also to determine the bacillary burden. The immunization with mc2-CMX induced higher levels of antibodies of IgG1 (1,910±0,70) and IgG2a (0,139±0,020) class anti-CMX when compared with BCG group (0,646±0,19 and 0,413±0,24; respectively, p<0,05). These results demonstrated the relevance of CMX antigen in the immunogenicity of the recombinant vaccine. Seventy days after the challenge, the amount of T CD4 cells in the lung producing Th1- type cytokines was assessed. It was observed a significant increase in the percentage of T CD4 cells positive for IFN-γ and TNF-α in the immunized mice with mc2-CMX vaccine, when compared with the group immunized with BCG. Mice challenged with Mtb presented significant higher percentage of IL-2 producer cells when compared with the non-immunized group. However, only the mice immunized with the vaccine mc2- CMX presented significant higher percentage when compared with the infection group. The immune response induced by the vaccine was effective in the control of Mtb infection, confirmed by the histological analysis and the bacillar burden determined. The groups vaccinated with mc2-CMX and BCG presented a significant reduction of the lung lesion induced by the Mtb infection, and also lung bacterial load, when compared with the infection group. Thus, the recombinant vaccine mc2-CMX presents potential characteristics to be used in the prevention of TB. / Há séculos a tuberculose (TB), doença infectocontagiosa causada por Mycobacterium tuberculosis (Mtb), vem sendo um problema de saúde pública mundial. Mesmo após o surgimento da vacina BCG em 1921, o controle da tuberculose continua a passos lentos. Isso se deve à eficácia variável de 0 a 80% apresentada pela vacina na proteção contra TB em indivíduos adultos. Deste modo, o desenvolvimento de uma nova vacina contra a TB é necessário. Neste estudo, avaliou-se uma vacina recombinante composta por Mycobacterium smegmatis expressando a proteína de fusão CMX (mc2-CMX), formada por três antígenos do Mtb: Ag85C, MPT51 e HspX. M. smegmatis mc2 155 foi transformado com pLA71-CMX por eletroporação, sendo a expressão da proteína CMX confirmada por imunoblot. Camundongos BALB/c foram distribuídos em quatro grupos: salina, infecção, BCG e mc2-CMX. Os grupos foram imunizados com suas respectivas vacinas em dois momentos com intervalos de 15 dias, e o sangue de todos os animais coletado quinze dias após a última imunização. Trinta dias após a imunização, os animais foram desafiados com Mtb H37Rv (via endovenosa) e trinta dias após o desafio, o sangue foi coletado para realização de ELISA. Setenta dias após desafio, o pulmão e o baço de todos os camundongos foi coletado para obtenção de células para realização de citometria, histopatológico e determinação da carga bacilar. A imunização com o mc2-CMX induziu níveis maiores de anticorpos da classe IgG1 (1,910±0,70) e IgG2a (0,139±0,020) anti-CMX quando comparado com o grupo BCG (0,646±0,19 e 0,413±0,24, respectivamente, p<0,05). Estes resultados demonstram a relevância do antígeno CMX na imunogenicidade da vacina recombinante. Após setenta dias do desafio, a quantidade de células T CD4 produtoras de citocinas do tipo Th1 foi analisada no pulmão. Foi observado um aumento significativo na porcentagem de células T CD4 positivas para IFN-γ e TNF-α nos camundongos imunizados com vacina mc2-CMX, quando comparado com o grupo BCG. Camundongos desafiados com Mtb apresentaram porcentagens maiores de células produtoras de IL-2, quando comparado com o grupo não desafiado. Todavia, somente os camundongos imunizados com a vacina mc2-CMX apresentaram porcentagens significativamente maiores em comparação ao grupo infecção. A resposta imune observada foi efetiva no controle da infecção por Mtb, sendo isto confirmado quando os pulmões dos camundongos foram analisados histologicamente e a carga bacilar determinada. Os grupos vacinados com as vacinas mc2-CMX e BCG apresentaram uma redução significativa da lesão pulmonar induzida pela infecção por Mtb, e também da carga bacilar no pulmão, quando comparados com o grupo infecção. Conclui-se que mc2-CMX tem um bom potencial para ser explorado como vacina contra a TB.