Objetivo general Estudiar los mecanismos patogénicos moleculares en tipos celulares claves en la infección experimental por CVB3. Objetivos específicos e hipótesis de trabajo 1. Estudiar la expresión de los receptores celulares y su correlación con la susceptibilidad a la infección por virus Coxsackie B (CVB) en células cardíacas murinas y humanas y en ratones de distintas cepas Acorde a trabajos previos (Kandolf et al. 1985; Gomez et al. 1993), los cardiomiocitos murinos y humanos son susceptibles a la infección por CVB. Partiendo de la hipótesis que la susceptibilidad a la infección correlaciona con la expresión del o los receptores virales, se propone estudiar en modelos in vitro de cardiomiocitos humanos derivados de células embrionarias madres totipotenciales (hESC-C) y en cardiomiocitos murinos recién nacidos y adultos, la infección con CVB a nivel de la replicación viral, y la sobrevida celular y su correlación con los niveles de expresión del receptor viral CAR y DAF, en el caso humano. Asimismo se buscará determinar si existen cambios en los niveles de CAR entre distintas cepas de ratones y la asociación de estos eventuales cambios con la susceptibilidad a la infección viral. Para ello se procederá a inocular ratones de distintas cepas con CVB3 para determinar en los mismos los niveles de replicación viral en corazón; el grado de injuria tisular y los niveles tisulares de CAR. Estos estudios podrán determinar la susceptibilidad de hESC-C a la infección por CVB3, la correlación con la expresión de los receptores y las eventuales diferencias en el sistema murino donde DAF no es utilizado y clarificar el rol de la expresión de CAR en la miocarditis y si aquellas cepas de ratones que expresan más o menos CAR son más o menos susceptibles a la replicación viral y a la subsecuente enfermedad. 2. Estudiar la infección de macrófagos por CVB Considerando como hipótesis de trabajo que los macrófagos juegan un rol esencial en la miocarditis y sus secuelas, se intentará caracterizar la infección de CVB3 en macrófagos teniendo en cuenta los niveles de replicación viral, el estado de activación y/o diferenciación celular y el efecto en la síntesis de moléculas con eventual rol en la patogénesis de la infección por CVB3. 3. Estudiar el rol de macrófagos en la miocarditis viral y la fibrosis Partiendo de la hipótesis ya mencionada, se analizará el rol de los macrófagos en la replicación de CVB3 in vivo y su estado de activación en los distintos estadios de la infección viral. Asimismo se buscará correlacionar la activación de macrófagos, la expresión de Gal-3 y la activación de fibroblastos con la fibrosis cardíaca y las consecuencias por la depleción de macrófagos.

Master of Science in Biomedical Sciences / Department of Diagnostic Medicine/Pathobiology / Alison P. Adams / The animal health industry is a growing industry. Owners of pets and other animals want to ensure their animals are healthy. To do this, the animal health industry markets a variety of products from pharmaceutical products, such as antibiotics, to biological products, such as vaccines. These products are developed and marketed after the company provides regulators the necessary information as guided by a set of regulations. Pharmaceutical products follow Title 21 of the Code of Federal Regulations, while biological products follow Title 9 of the Code of Federal Regulations. During the product development process as well as after marketing, regardless of the regulations to follow, each product must go through testing for efficacy, safety, potency, and stability. The regulatory guidelines provide direction to companies on expectations of the testing requirements for each type of product. Different analytical techniques are used to provide the necessary data in support of product development. Discussed in this report, two analytical techniques are well known in the industry, and one is quickly becoming a technique of great value. Mass spectrometry, coupled with liquid chromatography, is an industry standard for testing product potency and purity as well as pharmacokinetics. The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) is also used to measure potency of products as well as product stability. The newest technique is flow cytometry that characterizes cells within a suspension, most often with the use of cellular biomarkers as targets. By understanding the application of each technique as well as how it relates to regulatory requirements, the industry can provide assurances to regulators that their products are safe and efficacious for the treatment and/or prevention of animal diseases. This report outlines the history, theory, and use of three different analytical techniques currently used for pharmaceutical and biological products in animal health.