Orientador: Ana Maria Aparecida Guaraldo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:18:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alves_DelmaPegolo_D.pdf: 14273336 bytes, checksum: cb38808a46cc15c8f94cd7571412f840 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Cryptosporidium é um protozoário oportunista que causa diarréia em indivíduos imunocompetentes e imunodeficientes. A duração e severidade dos sintomas clínicos dependem do sistema imunológico do hospedeiro. Nas pessoas imunocompetentes, a infecção pode ser as sintomática ou induzir uma diarréia autolimitante, enquanto nos indivíduos imunodeficientes, resulta em doença acentuada ou diarréia que pode ser fatal. O objetivo deste estudo foi avaliar a evolução da infecção experimental pela linhagem MMC, de Cryptosporidium sp de origem humana, nas linhagens de camundongos imunodeficientes C57BL/6 KO para IFN-y, C.B-17/Uni scid,' C57BL/Uni bg, C3H/Uni nu e imunocompetentes BALB/c/Uni e C57BL/6/Uni. Para tanto, a manutenção do cultivo "in vivo" da linhagem MMC de Cryptosporidium sp foi realizada mediante várias passagens em camundongos neonatos imunocompetentes e camundongos adultos KO para IFN-y. Foram utilizadas remeas SPF com 04 a 06 semanas de vida das linhagens imunodeficientes e imunocompetentes, inoculadas com 105 oocistos de Cryptosporidium sp por tubagem esofágica. Para a avaliação da dinâmica da eliminação de oocistos de Cryptosporidium sp, as fezes dos animais foram colhidas diariamente, durante 15 dias e armazenadas em dicromato de potássio 2,5% a 4°C. Para o estudo da patologia intestinal, os animais foram sacrificados no 15° ou 44° dias após a infecção, e retirados segmentos do jejuno, íleo, ceco e colon para posterior avaliação histológica. A análise conjunta da mortalidade dos camundongos infectados pelo Cryptosporidium sp e da eliminação de oocistos indica que o perfil da resistência à infecção nas linhagens em estudo apresentou o seguinte padrão: C57BL/6/Uni> BALB/c/Uni > scid> bg> nude > KO. As alterações histológicas no intestino das linhagens estudadas apresentaram um perfil de severidade das lesões na seguinte ordem: KO > bg> nude > scid> BALB/c/Uni = C57BL/6/Uni. Dentre as linhagens avaliadas, os camundongos KO foram os mais susceptíveis a infecção pelo Cryptosporidium sp, quanto a mortalidade, eliminação de oocistos e alterações histológicas no intestino. A linhagem C57BL/6 KO para IFN-y pode ser considerada o melhor modelo para o estudo da criptosporidiose experimental. Estes resultados também ressaltam a importância do IFN-y no controle da criptosporidiose na fase aguda da infecção, assim como a importância das células NK e linfócitos T no controle da criptosporidiose. A comparação da análise histopatológica do scid, nude e bg sugerem que a resposta humoral tem pequena participação no controle da criptosporidiose / Abstract: Cryptosporidium is a protozoan parasite that can cause chronic life-threatening diarrhea in immunocompromised persons. In immunocompetent hosts, C. parvum causes a self-limiting diarrheal illness that can persist until 3 weeks. Cryptosporidium sp isolated ttom a HIV - positive patient in Campinas (Brazil) has been maintained by repeated oocyst passage through S.P.F. suckling mice. Differences in susceptibility to cryptosporidial infections were investigated among four immunodeticient adult mice strains: C57BL/6 gamma-interferon-knockout (KO), C57BL/6/Uni bg, C3H1Uni nu and C.B-17/Uni scid. The mice were infected via oral inoculation with 105 Cryptosporidium sp MMC oocysts and monitored for infection intensity by collection of fecal pellets ttom individual mice. After 15 or 44 days, the mice were sacriticed in order to evaluate the damage at distaljejunun, ileum, caecum and colono There was differences highly signiticant in the fecal oocyst shedding among KO, bg, scid, nu and adult immunocompetent controls (C57BL/6/Uni and BALB/c/Uni). The resistance pattem conceming the mortality and oocysts shedding among the mice strains, was: C 57BL/6>BALB/c>scid>bg>nude>KO. Histological intestinal evaluation 15 days after infection, showed that KO mice showed pronounced histological changes and scid mice were less infected. The response of the epithelium to cryptosporidial infection after 44 days showed signals of recovery and it was possible to suggest the following panel conceming the recovery capacity : scid>bg>nude>KO. The results of this study demonstrated that there is correlation between resistance pattem and histological alterations. These findings support theview that IFN-y, T and NK cells are very important for the control of infection meanly during the early recovery phase against Cryptosporidium sp infection. The results also suggest that the role of B cells in the resolution of murine infection against Cryptosporidium is minore / Doutorado / Doutor em Parasitologia

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2012-08-17T13:31:43Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Fernanda Trindade Madeira Araujo.pdf: 853168 bytes, checksum: c511cd0ade336e4ad59b3e3dd2cf020e (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-17T13:31:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Fernanda Trindade Madeira Araujo.pdf: 853168 bytes, checksum: c511cd0ade336e4ad59b3e3dd2cf020e (MD5) / A sensibilidade e a precisão dos resultados em pesquisas dependem do uso de animais padronizados para diversos parâmetros como pré-requisito importante para a reprodutibilidade em experimentação animal. Assim, a determinação destes parâmetros em valores de referência em uma população de espécimes mantidas em cativeiro é uma ferramenta de diagnóstico essencial para estimar suas condições de saúde e diagnosticar doenças mesmo antes do aparecimento dos sintomas. Neste estudo foram estabelecidos valores de referência para parâmetros hematológicos e bioquímicos e avaliado o perfil imunológico de linhagens de camundongos produzidas nos biotérios do Centro de Pesquisas René Rachou / FIOCRUZMinas e Centro de Criação de Animais de Laboratório / FIOCRUZ. Foram utilizados 332 camundongos, com idade entre 6 e 8 semanas, das linhagens Swiss webster, BALB/c, C57BL/6 e Ifn-γ(-/-) knockout. Após a anestesia dos animais foi realizado o procedimento de punção cardíaca para determinação de parâmetros hematológicos (hemoglobina, eritrócitos, hematócrito, volume corpuscular médio, hemoglobina corpuscular média, concentração da hemoglobina corpuscular média, global e diferencial de leucócitos e plaquetas), bioquímicos (uréia, creatinina, aspartato transaminase, alanina transaminase, fosfatase alcalina e proteínas totais) e imunológicos (linfócitos T e subpopulações CD4+ e CD8+ e linfócitos B). A determinação dos parâmetros hematológicos e bioquímicos e a avaliação dos perfis imunológicos foram realizadas por meio do cálculo da mediana, média global e dos valores mínimos e máximos obtidos. Os testes Mann-Whitney e Kruskal-Wallis foram utilizados para comparações entre os grupos e as diferenças foram consideradas estatisticamente significativas para um valor de p<0,05. Os resultados deste trabalho demonstraram existir diferenças estatisticamente significativas no que diz respeito ao sexo, biotério e linhagem na maioria dos parâmetros analisados. Contudo, foi possível perceber uma grande similaridade dos perfis imunológicos, com exceção da comparação feita entre as linhagens. De uma forma geral, os machos apresentaram valores superiores aos das fêmeas em todas as linhagens. Além disso, a linhagem Swiss webster apresentou os maiores valores de referência, evidenciando assim a variabilidade genética destes animais, enquanto que C57BL/6 apresentou as maiores diferenças quando comparada com as outras linhagens. Neste contexto, os resultados obtidos fortalecem a necessidade de estabelecimento de valores de referência para cada biotério instituição, pois está evidenciado que o padrão sanitário dos animais interfere diretamente na caracterização de diferentes parâmetros. Adicionalmente, a caracterização desses parâmetros por sexo, idade e linhagem permite uma correta validação dos experimentos ao mesmo tempo em que auxilia na promoção do sucesso da criação destes animais em cativeiro. / The sensitivity and accuracy of experimental results in research projects involving murine models rely on the use of animals that exhibiting standardized laboratorial parameters as important prerequisites for the data reproducibility in animal experimentation. Thus, the determination of each parameters and its use as reference values in a population of specimens kept in captivity is an essential tool to assess their health status as well as to detect potential diseases even before any symptoms manifest. The current study has established reference values for hematological and biochemical parameters and has still evaluated immunological profile of mice strains produced in the animal houses at Research Center René Rachou /FIOCRUZ-Minas and Breeding Center of Laboratory Animals / FIOCRUZ. We studied 332 mice belong to the Swiss webster, BALB/c, C57BL/6 and Ifn-γ knockout strains, aged from 6 to 8 weeks. After the cardiac puncture of the animals, hematological parameters (hemoglobin, erythrocytes, hematocrit, mean corpuscular volume, mean corpuscular hemoglobin, mean corpuscular hemoglobin concentration, platelets, global and differential leukocyte count, biochemical (urea, creatinine, aspartate transaminase, alanine transaminase, alkaline phosphatase and total protein) and immunological (T lymphocyte and subpopulations CD4+ and CD8+ and B lymphocytes) were determined. The assessment of these features were performed by evaluating the median, global mean and minimum and maximum values for each analyte. Comparisons among distinct groups were performed by Kruskal-Wallis and Mann-Whitney Tests and the values were considered significant when p < 0,05. These significance differences were found according to animal gender, animal house and strain in most parameters. However, regarding the immunological profile, in most cases, it was possible to observe a great similarity between the groups with exception presented when this profile was compared among strains. In general, for all the strains, males showed higher values than females. In addition, the Swiss Webster strain showed a higher range for the reference values, revealing the genetic variability of these animals. The C57BL/6 strain showed the greatest differences when compared with the additional strains. In this context, the results obtained support the need to establish reference values for each animal house /institution, since it has been evidenced that the health standard of the animals directly interferes in the characterization of different parameters. Additionally, the characterization of hematological, biochemical and immunological features by sex, age and strain might allow us to a correct validation of the experiments as well as help us in promoting the successful creation of these animals in captivity.

Orientador: José Maurício Sforcin / Resumo: A relação entre estresse e imunidade tem sido amplamente investigada, envolvendo o sistema neuroendócrino e vários outros órgãos. A natureza fisiológica do estresse, a grande diversidade de condições estressantes e sua complexa relação com o sistema imune e doenças têm recebido especial atenção. A própolis tem sido motivo de intensa investigação científica e sua ação imunomoduladora vem sendo mencionada. O objetivo deste projeto foi avaliar a ação imunomoduladora da própolis em camundongos BALB/c submetidos a estresse por imobilização, através da análise morfológica do timo, baço, medula óssea e adrenal, avaliação do estado de ativação de macrófagos e indicadores de estresse (glicose e corticosterona). Animais estressados apresentaram produção mais elevada de peróxido de hidrogênio (H2O2) e, quando tratados com própolis, apresentaram potencialização na geração de H2O2 e inibição na liberação de óxido nítrico (NO). A análise histológica revelou aumento no número de centros germinativos no baço de animais estressados. Não foram observadas alterações no timo, medula óssea e adrenal dos animais estressados ou tratados com própolis. O tratamento com própolis impediu o aparecimento de alterações encontradas no baço de animais submetidos a estresse. Futuras investigações fornecerão maiores contribuições quanto à possibilidade de utilização da própolis durante o estresse. / Abstract: Stress is a generic term that summarizes the effects of psychosocial and environmental factors on physical and mental well-being. The interaction between stress and immunity has been widely investigated, involving the neuroendocrine system and several organs. Assays using natural products in stress models deserve further investigation. Propolis immunomodulatory action has been mentioned and it has been the reason of scientific investigation in our laboratory. The aim of this study was to evaluate propolis effect on macrophage activation in BALB/c mice submitted to immobilization stress, as well as the histopathological analysis of the thymus, bone marrow, spleen and adrenal glands. Stressed mice showed a higher hydrogen peroxide (H2O2) generation, and propolis treatment potentiated H2O2 generation and inhibited nitric oxide (NO) production. Histopathological analysis showed no alterations in the thymus, bone marrow and adrenal glands, but increased germinative centers in the spleen. Propolis treatment counteracted the alterations found in the spleen of stressed mice. Further investigation will provide a better comprehension of propolis immunomodulatory action during stress. / Mestre