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Fatores associados à prevalência sorológica de Brucella ovis e Neospora caninum no rebanho ovino de Sergipe

Mendonça, Carlos Eduardo D’alencar 14 November 2014 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-05-14T17:06:11Z No. of bitstreams: 1 2014_CarlosEduardoD’AlencarMendonça_Parcial.pdf: 508315 bytes, checksum: 100ab02ca48f4be8b6055c85fc241c9a (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-05-19T21:15:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_CarlosEduardoD’AlencarMendonça_Parcial.pdf: 508315 bytes, checksum: 100ab02ca48f4be8b6055c85fc241c9a (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-19T21:15:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_CarlosEduardoD’AlencarMendonça_Parcial.pdf: 508315 bytes, checksum: 100ab02ca48f4be8b6055c85fc241c9a (MD5) / Objetivou-se determinar a prevalência sorológica de Neospora caninum e Brucella ovis, alem dos fatores de risco e proteção associados as suas infecções. Foram colhidas 932 amostras de soros de ovinos, oriundas de 54 propriedades de 19 municípios de Sergipe. Para pesquisa de anticorpos contra N. caninum foi utilizada reação de imunofluorescencia indireta (IFI), com ponto de corte de 1:50, enquanto que para pesquisa de anticorpos contra B. ovis os soros foram examinados pela Imunodifusao em Gel de Agar (IDGA). Observou-se que 12,45% (116/932) dos ovinos foram sororeagentes, e de acordo com a analise, obteve-se na regressão logística não condicional a presença de cães na propriedade (OR=0,36) e uso de aprisco como instalação (OR=0,53) como fatores associados a proteção e propriedades com área maior que 50 hectares como fator associado a infecção (OR=1,71). Analisando os resultados obtidos na IDGA, 46,30% (25/54) das propriedades apresentaram evidencia sorológica de infecção por B. ovis, com uma prevalência de 4,40% (41/932). Como fator associado a infecção observou-se o contato com bovinos (OR=5,50) e ter tratador de ovinos (OR=2,68), enquanto uso de aprisco como instalação apresentou-se como fator de proteção (OR=0,40). Foi verificada disseminação dos dois agentes nas distintas mesorregiões do estado e salienta-se a importância de adoção de medidas sanitárias especificas nos rebanhos para reduzir o risco das infecções. / The aim of this study was determine the seroprevalence of Neospora caninum and Brucella ovis as well risk and protective factors associated with their infections. A total of 932 serum samples from sheep originating from 54 properties in 19 municipalities of the Sergipe State were analyzed. Indirect Immunofluorescence (IFA) was used to screen antibodies against N. caninum with a dilution of 1:50 as cutoff. For antibodies against B. ovis, sera were examined by Agar Gel Immunodiffusion (AGID) and 12.45% (116/932) of sheep were Reactive. In analysis of associated factors, using unconditional logistic regression, the presence of dogs on the property (OR=0,36) and use of pen house (OR=0,53) was a factor associated with protection and properties with up to 50 hectares (OR=1,71) as a factor associated with infection of N. caninum. Analyzing the results obtained in AGID, 46.30% (25/54) of the farms had serologic evidence of infection for B. ovis, with a prevalence of 4.40% (41/932) of seropositive animals. Associated with infection, we observed the contact with bovines (OR=5,50) and to have ovine handler (2,68), while use of pen was a protective factor (OR=0.40). Both two agents were seen in the different regions of the state and this highlights the importance of adopting specific health measures in flocks to reduce the risk of infections.
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Propriedades termodinâmicas da Prolil Oligopeptidase de Trypanosoma brucei

Lima, Meire Maria de 07 November 2008 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Laboratório da Interação Parasito-Hospedeiro, 2008. / Submitted by wiliam de oliveira aguiar (wiliam@bce.unb.br) on 2011-06-30T18:33:48Z No. of bitstreams: 1 2008_MeireMariadeLima.pdf: 2224259 bytes, checksum: 392adeabf9cda08bfe409fb7327df412 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(tempestade_b@hotmail.com) on 2011-07-03T21:32:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_MeireMariadeLima.pdf: 2224259 bytes, checksum: 392adeabf9cda08bfe409fb7327df412 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-03T21:32:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_MeireMariadeLima.pdf: 2224259 bytes, checksum: 392adeabf9cda08bfe409fb7327df412 (MD5) / Trypanosoma brucei secreta uma prolil oligopeptidase (POPTb) que parece estar envolvida na patogênese da doença do sono. Essa enzima é capaz de hidrolizar hormônios peptídicos contendo resíduos de prolina e considerada um potencial alvo para o desenvolvimento de drogas contra a patologia. Como a estrutura tridimensional da POPTb ainda não foi resolvida, dicroísmo circular e espectroscopia de fluorescência foram utilizados para estudo da estrutura e estabilidade da enzima bem como para a identificação de aditivos que possam ser utilizados nos experimentos de cristalização e na estocagem da proteína. Parâmetros termodinâmicos e estruturais foram calculados a partir de experimentos de desnaturação térmica e química e de estudos de atenuação da fluorescência. Cloreto de guanidina (GuHCl) promoveu a desnaturação da proteína em concentrações quase 30% menores que uréia. Divergência encontrada nos valores de ΔG determinados a partir de experimentos de desnaturação química e térmica sugere a presença de intermediários no processo de desdobramento da proteína. Sugere, também, maior estabilidade estrutural. Sorbitol se mostrou capaz de estabilizar a POPTb enquanto brometo de hexadecil-trimetilamônia (CTAB), na concentração de 0,1 mM, provocou o efeito oposto levando à quase total inatividade da enzima. A ação do ditiotreitol (DTT) é pH-dependente, reduzindo a estabilidade da enzima em pH neutro e aumentando-a em pH alkalino. Experimetos de atenuação da fluorescência mostraram dependência do pH e heterogeneidade no ambiente dos triptofanos com pelo menos um resíduo desse aminoácido próximo ao sítio ativo. A enzima parece estar menos sujeita a alterações conformacionais em pH 7.5. A elevação da temperatura resultou na redução da concentração micelar crítica (cmc) do CTAB. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Trypanosoma brucei secrets a prolyl oligopeptidase (POPTb) which is possibly involved in the pathogenesis of sleeping sickness. It is able to hydrolyze prolinecontaining peptide hormones and is therefore considered a good target for the development of drugs to treat the disease. As the crystal structure of POPTb has not been solved yet, we used circular dichroism and fluorescence spectroscopy to gain some knowledge on the enzyme structure, stability and on additive effects for both crystallization assays and storage. Thermodynamic and structural parameters were calculated from thermal and chemical denaturation studies as well as from fluorescence quenching experiments, respectively. The concentration of guanidine hydrochloride (GuHCl) that led to protein denaturation was nearly 30% that of urea needed to reach the same effect. Divergence in the ΔG values derived from chemical and thermal unfolding assays suggests the presence of intermediate states in the process. It also suggests higher structural stability. Sorbitol increases enzyme stability and 0.1 mM cetyl trimethyl ammonium bromide (CTAB) decreases it almost halting enzyme activity. Ditiotreitol (DTT), however, has the former effect in alkaline pH and the latter effect in neutral pH. Fluorescence quenching experiments show dependence on pH and indicate heterogeneity in the environment of the surface-accessible tryptophan residues with at least one such residue near the enzyme active site. POPTb molecule seems to be less subjected to conformational changes at pH 7.5. The increase in temperature lowers CTAB critical micelle concentration (cmc).
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Caracterização molecular e ultraestrutural do estresse do retículo endoplasmático de Trypanosoma cruzi

SANDES, Jana Messias 26 February 2016 (has links)
Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-07-13T17:36:08Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Doutorado Jana Sandes.pdf: 7518474 bytes, checksum: ffe5eecd1e8f6f0f35f618607ab2e4c3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-13T17:36:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese Doutorado Jana Sandes.pdf: 7518474 bytes, checksum: ffe5eecd1e8f6f0f35f618607ab2e4c3 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / FACEPE / O retículo endoplasmático (RE) é uma organela vital para as células eucarióticas, envolvido na síntese, modificação e enovelamento de proteínas, homeostase do cálcio e metabolismo de lipídios. Variações no nível de cálcio, inibição da glicosilação, estresse oxidativo, entre outros, podem levar o RE a uma condição de estresse, a qual dispara vias de sinalização específicas incluindo a Unfolded Protein Response (UPR). A UPR promove aumento na expressão de chaperonas, inibe a tradução de novas proteínas e aumenta a degradação de proteínas mal enoveladas. No entanto, quando o estresse é severo ou persistente, a UPR induz mecanismos de morte celular, principalmente por apoptose. Embora o RE possua papel fundamental na sobrevivência das células de mamíferos, estudos sobre a fisiologia desta organela em Trypanosoma cruzi, agente etiológico da Doença de Chagas, ainda são escassos. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi caracterizar molecular e morfologicamente a resposta de formas epimastigotas de T. cruzi ao estresse do RE induzido por ditiotreitol (DTT) ou tunicamicina (TM). As células tratadas com DTT apresentaram inibição do crescimento de maneira dose-dependente, com recuperação do crescimento após a retirada da droga. O tratamento com DTT não alterou os níveis proteicos de BiP (binding protein) mas reduziu significativamente os níveis de RNAm de BiP e calreticulina (CRT), sugerindo que o T. cruzi tenha uma resposta diferente da UPR de eucariotos superiores. O estresse persistente do RE induzido pelo DTT causou drásticas alterações morfológicas e fisiológicas compatíveis com morte celular por apoptose tardia/necrose, como observado pela dupla marcação com anexina-V e iodeto de propídeo, além da redução do tamanho do corpo celular, inchaço e desorganização das cristas mitocondriais, despolarização do potencial de membrana mitocondrial (ψm) e aumento da produção (21 – 94%) de espécies reativas de oxigênio (ROS). No entanto, a presença de perfis do RE envolvendo porções do citoplasma sugere que a autofagia também esteja ocorrendo. Por outro lado, a TM apresentou um forte efeito tripanostático, sem crescimento celular independentemente da dose ou do tempo de incubação, inclusive após a retirada da droga. O tratamento com a TM também não foi capaz de alterar os níveis proteicos de BiP, porém induziu um aumento nos níveis de RNAm de BiP e CRT. A análise por citometria de fluxo demonstrou que o tratamento com TM induziu despolarização do ψm sem um aumento pronunciado na produção de ROS, e apenas cerca de 10% das células tratadas apresentaram fenótipos de apoptose. Alterações ultraestruturais também foram observadas nas células tratadas com TM, como o arredondamento do corpo celular, a presença de inclusões lipídicas e um grande número de perfis de RE ao redor de estruturas citoplasmáticas em processo de degradação. Dessa forma, nossos resultados sugerem que o tratamento com DTT compromete o funcionamento da célula de maneira geral mais do que atua como estressor do RE, devido ao seu forte efeito oxidativo, levando à morte da célula. Já a TM atua mais especificamente sobre o RE, desencadeando um processo de autofagia/RE-fagia na tentativa de reverter o estresse de RE sem induzir morte celular por apoptose. / The endoplasmic reticulum (ER) is a vital organelle to eukaryotic cells, involved in the protein synthesis, folding and modification, calcium homeostasis and lipid metabolism. Changes in calcium levels, glycosylation inhibition, oxidative stress or others, can lead to an ER stress condition, which triggers specific signaling pathways including the Unfolded Protein Response (UPR). The UPR promotes an increase in the chaperone expression, inhibits the translation of new proteins and increases the degradation of unfolded proteins. However, when the stress is severe or persistent, the UPR induces cell death mechanisms, mainly by apoptosis. Although the ER has a pivotal role in the survival of mammalian cell, studies about the physiology of this organelle in Trypanosoma cruzi, the etiologic agent of Chagas disease, are still scarce. In this regard, the aim of this study was to characterize molecular and morphologically the response of epimastigote forms of T. cruzi to the ER stress induced by dithiothreitol (DTT) or tunicamycin (TM). DTT-treated cells showed a dose-dependent growth inhibition, with growth recovery after drug withdrawal. The DTT treatment did not alter the BiP (binding protein) protein levels but significantly reduced the mRNA levels of BiP and calreticulin (CRT), suggesting that T. cruzi has a different response from higher eukaryotes UPR. Persistent ER stress induced by DTT caused drastic morphological and physiological changes compatible with cell death by late apoptosis/necrosis, as observed by double staining with annexin-V and propidium iodide, reduction of cell body, swelling and disorganization of mitochondrial cristae, mitochondrial membrane potential (ψm) depolarization and increasing of reactive oxygen species (ROS) production (21-94%). However, the presence of ER profiles involving cytoplasmic portions suggests that autophagy may also be occurring. On the other hand, the TM showed strong trypanostatic effect, with no cell growth observed independent of the dose and the time of incubation, even after drug withdrawal. The TM treatment was also unable to change the BiP protein levels, but induced an increase in BiP and CRT mRNA levels. The flow cytometry analysis showed that TM-treatment induced ψm depolarization without a pronounced increase in the ROS production (10 - 15%) and only about 10% of the treated cells exhibited apoptotic phenotypes. Ultrastructural changes were also observed in TM-treated cells, such as rounding of the cell body, the presence of lipid inclusions and a large number of ER profiles surrounding cytoplasmic structures in degradation process. Therefore, our results suggest that the DTT treatment compromises the whole cell function rather than acts as a specific inductor of ER stress, due to its strong oxidative effect, leading to cell death. The TM treatment acts more specifically on the ER, triggering an autophagy/ER-phagy process in an attempt to reverse the ER stress, without inducing cell death by apoptosis.
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Caracterização do complexo de iniciação da tradução eIF3 e investigação de sua associação a complexos do tipo eIF4F em Leishmania infantum

ASSIS, Ludmila Arruda de 11 March 2015 (has links)
Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-04-26T17:20:59Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Ludmila Arruda de Assis.pdf: 13439374 bytes, checksum: dd4819668c7a765708f6e46f9e768946 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-26T17:20:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Ludmila Arruda de Assis.pdf: 13439374 bytes, checksum: dd4819668c7a765708f6e46f9e768946 (MD5) Previous issue date: 2015-03-11 / CNPQ / A iniciação da síntese protéica em eucariotos depende da ação dos chamados fatores de iniciação da tradução ou eIFs. Dentre esses, destacam-se dois complexos: eIF4F, formado pelos eIF4A, eIF4E e eIF4G; e eIF3, que em mamíferos compreende 13 subunidades (eIF3a até eIF3m). Suas ações permitem o reconhecimento dos mRNAs, via eIF4E, e o recrutamento do ribosomo, mediado pelo eIF3 que por sua vez interage com o eIF4F. Em espécies de Leishmania seis homólogos de eIF4E foram identificados (EIF4E1 a 6) que parecem divergir funcionalmente enquanto o complexo eIF3 ainda é pouco caracterizado. Este trabalho buscou avaliar a presença, composição e função do eIF3 em Leishmania. Um total de 11 subunidades do complexo foram confirmadas a partir de ensaios de imunoprecipitação (IP) e espectrometria de massa utilizando soro direcionado a subunidade EIF3E. Visando uma melhor caracterização, seis dessas subunidades tiveram seus genes clonados e foram expressas em L. infantum, fusionadas ao peptídeo HA. Quatro destas proteínas heterólogas foram utilizados em novas IPs, com soro anti-HA, onde se avaliou sua capacidade de copurificar com o EIF3E. Todas mostraram essa interação, confirmando sua presença em complexos eIF3 íntegros. Homólogos de eIF4E de L. infantum também foram expressos fusionados a HA e utilizados em IPs semelhantes. Dois destes, EIF4E2 e EIF4E3, mostraram uma associação, direta ou indireta, com a subunidade EIF3E do complexo eIF3, indicando um papel relevante na tradução. / The initiation of protein synthesis in eukaryotes depends on the action of the translation initiation factors or eIFs. Among these, two major complexes are: eIF4F, formed by eIF4A, eIF4E and eIF4G; and eIF3, which comprises 13 subunits in mammals (eIF3a to eIF3m). Their actions allow the recognition of mRNAs via eIF4E, and the recruitment of the ribosome, mediated by eIF3 which interacts with eIF4F. In Leishmania species, six eIF4E homologues have been identified (EIF4E1 to 6) that seem to differ functionally, and the eIF3 complex is not well characterized. This study aimed to evaluate the presence, composition and function of eIF3 in Leishmania. A total of 11 subunits from the complex were confirmed through immunoprecipitation assays (IP) and mass spectrometry using serum directed to the EIF3E subunit. For a better characterization, six of these subunits had their genes cloned and expressed in L. infantum, fusioned to a HA peptide. Four of the resulting heterologous proteins have been used in new IPs with anti-HA serum, which were evaluated for their ability to copurify with EIF3E. All showed this interaction, confirming their presence in intact eIF3 complexes. L. infantum eIF4E homologues were also expressed fusioned to HA and used in similar IPs. Two of these, EIF4E2 and EIF4E3 showed an association, direct or indirect, with the EIF3E subunit of eIF3 complex, indicating a relevant role during translation initiation.
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Protzoarios apicomplexa (Haemoproteidae e Eimeriidae) em pombos silvestres da região oeste do Estado de São Paulo

Adriano, Edson Aparecido 21 July 1999 (has links)
Orientador: Nelson da Silva Cordeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T05:22:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Adriano_EdsonAparecido_M.pdf: 4529408 bytes, checksum: 15cb3c4cf8fdb72903e217116508c6b5 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Entre janeiro e dezembro de 1998 foram examinados 450 exemplares de três espécies de aves da família Columbidae capturados no município de Junqueirópolis, região oeste do estado de São Pal!lo, Brasil. O presente estudo avaliou nessas aves, a ocorrência de protozoários"Apicomplexa (Haemoproteidae e Eimeriidae), parasitos de sangue e de intestino, dando ênfase para os aspectos taxonômicos dos parasitos, bem como o estudo da prevalência. A determinação específica dos parasitos encontrados nas aves foi realizada mediante comparações morfológicas com as espécies descritas na literatura. As aves foram capturadas quinzenalmente com o auxílio de armadilha-telada, os esfregaços foram confeccionados com sangue obtido mediante picada na artéria braquial, fixados com álcool metílico, corados com Giemsa e examinados em microscópio óptico. Apenas Haemoproteus columbae Kruse, 1890 foi encontrado no sangue das aves: a prevalência do parasito e a intensidade do parasitismo apresentaram variações entre Zenaida auriculata Des Murs, 1847, Columbina talpacoti Temmink, 1810 e Scardafella squammata Lesson, 1831. Para obter as fezes visando o estudo dos coccídios, as aves foram isoladas em gaiolas por um período de 2 horas, posteriormente anilhadas e liberadas. Amostras fecais foram diluídas em solução aquosa de dicromato de potássio e após concentração foram examinadas ao microscópio óptico. Em 23,9% dos exemplares de Z auriculata foram encontrados oocistos de protozoários do gênero Eimeria Schneider, 1875, com características diferentes das espécies previamente descritas em Columbiformes. Ooocistos encontrados em 17,4% dos exemplares de C. talpacoti e em 12,8% dos exemplares de S. squammata foram diferentes daqueles registrados infectando outros columbídeos e daqueles encontrados em Z. auriculata. Os oocistos encontrados nos exemplares de Z. auriculata, e os encontrados simultaneamente em C. talpacoti e S. squammata foram considerados como duas novas espécies de Eimeria / Abstract: During the period between january and december of 1998, were examined 450 specimens of 3 species of birds from the Columbidae family captured in the minicipality of Junqueirópol_, West Regio"n of São Paulo State, Brazil. The present study evaluated in this doves, the occurrence of protozoan Apicomplexa (Haemoproteidae and Eimeriidae), parasites of blood and of intestine, emphasizing the aspects taxonomics of the parasite and the study of the prevalence. The specific determination of the parasites found in the doves was made by morphological camparation with those parasites reported in literature The doves were captured fortnighthy by gauze-trap, and the blood smears were made from blood obtained from the brachial artery, air-dried, fixed in 100% metanol, stained with Giemsa and examined in light microscope. Only Haemoproteus columbae kruse (1890), was reported in blood of the doves examined; the prevalence of the parasite and intensity of the parasitism, revealed variant among Zenaida auriculata Des Murs (1847),62 of Columbina talpacotiTemmink (1810) and 57 of Scardafella squammata Lesson (1831). For obtain the faecal samples, the doves were individually isoled in cage for a period of 2 hours, afterwards tagged and liberated. Individual faecal samples were placed in a solution of 2.5% potassium dicromate and examined microscopically after flotation, using Sheather's sugar solution. In 23.9% of the specimens of Z. auriculata, were found oocysts of protozoan of the genus Eimeria Schneider (1881), than appears aspects than distinguished its of the species of Eimeria previously described of Columbiformes. Oocysts found in 17.4% of the specimens of the C. talpacoti and 12.8% of the specimens of the S. squammata, were distinguished from those oocysts of the species of Eimeria reported infecting columbforms hosts, as well as from those found in Z. auriculata. Oocysts found in Z. a uriculata , and those found in both, C. talpacoti and S. squammata, were considered to be oocysts of two news species of Eimeria / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Ciências Biológicas
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Identificação e caracterização de modificações póstraducionais em homólogos de fatores de iniciação da tradução em Leishmania sp

PEREIRA, Mariana Marques Coutelo 28 June 2013 (has links)
Submitted by Rafael Santana (rafael.silvasantana@ufpe.br) on 2018-03-07T18:39:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Tese Completa Mari Marques Final.pdf: 4240571 bytes, checksum: b948f5d1f90614e5f2096e402ebecbf8 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-07T18:39:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Tese Completa Mari Marques Final.pdf: 4240571 bytes, checksum: b948f5d1f90614e5f2096e402ebecbf8 (MD5) Previous issue date: 2013-06-28 / FACEPE, CNPQ / A iniciação da tradução em eucariotos é um ponto crucial no processo de síntese protéica e de sua regulação. Nesta etapa atua o complexo heterotrimérico eIF4F (formado pelas subunidades eIF4E, eIF4G e eIF4A), que atua recrutando a subunidade ribossomal 40S para o mRNA, para iniciar a tradução. O reconhecimento dos mRNAs se dá pela ligação da subunidade eIF4E no cap presente na sua extremidade 5’, junto com a ligação da proteína de ligação ao poli-A (PABP), que interage diretamente com o eIF4G, na extremidade 3’ destes mesmos mRNAs. Vários homólogos destes fatores foram encontrados nos tripanosomatídeos, indicando uma complexidade na iniciação da tradução que pode estar associada aos ciclos de vida únicos destes parasitas. Destes, dois complexos eIF4F típicos foram caracterizados, baseados em dois homólogos de eIF4E denominados de EIF4E3 e EIF4E4. Neste trabalho, a análise da expressão destas duas proteínas em Leishmania amazonensis mostrou que ambas são alvos de modificações pós-traducionais, identificadas como fosforilação, gerando múltiplas isoformas. O padrão de expressão dos dois conjuntos de isoformas é alterado com a inibição do processamento de mRNAs e a inibição da tradução interfere especificamente com as isoformas do EIF4E3. Curvas de sincronização celular sugerem uma associação de isoformas específicas com o ciclo celular do parasita. Múltiplos eventos de fosforilação parecem agir, porém de forma diferenciada, sobre os dois homólogos eIF4E. Diferentemente do EIF4E4, o EIF4E3 possui diferenças de expressão entre espécies de Leishmania, com uma banda de maior peso molecular, típica de células estressadas, encontrada apenas em L. amazonensis. A análise da seqüência do gene EIF4E3 de três espécies de Leishmania mostrou que poucas mudanças de aminoácidos levam a diferenças marcantes de migração das respectivas proteínas em gel desnaturante. Ensaios de mutagênese, associados a expressão ectópica do EIF4E3 contendo um epítopo HA em células de Leishmania transfectadas, identificou a serina 75, exclusiva de L. amazonensis, como sítio responsável pela geração da isoforma específica desta espécie. Análises em gel bidimensional mostraram que esta isoforma não está associada a alterações no ponto isoelétrico, indicando que outro tipo de modificação, além das fosforilação, deve ter como alvo o EIF4E3. Experimentos de interação in vitro e in vivo demonstraram que os EIF4E3 e 4 interagem diferencialmente com homólogos de PABP e realizam outras interações conservadas em espécies de tripanosomatídeos. Os resultados obtidos neste trabalho indicam uma complexa regulação destes fatores, através de múltiplos sítios de fosforilação, provavelmente relacionada com o ciclo celular do parasita. / Translation initiation in eukaryotes is a critical stage within the process of protein synthesis and its regulation. A major player is the heterotrimeric eIF4F complex (formed by the eIF4E, eIF4G and eIF4A subunits) which acts by recruiting the 40S ribosomal subunit to the mRNA to initiate translation. mRNA recognition occurs through the binding of the eIF4E subunit to its 5 'end cap as well as the binding of the poly-A binding protein (PABP), which interacts directly with eIF4G, to its 3' end poly-A tail. Various homologues for the eIF4F subunits were found in trypanosomatids, indicating a greater complexity within translation initiation which can be associated with the parasites unique life cycle. Two typical eIF4F complexes were characterized based on two eIF4E homologues, named EIF4E3 and EIF4E4. In this study, expression analysis of both proteins in Leishmania amazonensis showed that both are targets for post-translational modifications, identified as phosphorylation, leading to multiple isoforms. The expression pattern of the two sets of isoforms is altered with inhibition of mRNA processing but translation inhibition specifically interferes with the EIF4E3 isoforms. Cell synchronization curves suggest an association of specific isoforms with the parasite cell cycle. Multiple phosphorylation events appear to differentially target the two eIF4E homologues. Unlike EIF4E4, expression of EIF4E3 differs between Leishmania species, with a higher molecular weight band, typical of stressed cells, found only in L. amazonensis. Sequence analysis of the EIF4E3 gene from three Leishmania species showed that few amino acid changes lead to marked differences in migration of the respective proteins in denaturing gel. Mutagenesis assays associated with ectopic expression of an HA-tagged EIF4E3 in transfected Leishmania identified serine 75, exclusive of L. amazonensis, as a site responsible for generating the isoform specific to this species. Two-dimensional gel analysis showed that this isoform is not associated with changes in isoelectric point, indicating that other modifications, in addition to phosphorylation, must target EIF4E3. In vitro and in vivo interaction studies demonstrated that EIF4E3 and 4 differentially bind to PABP homologues as well as performing other interactions conserved in various trypanosomatid species. The results produced in this study indicate a complex regulation of these factors through multiple phosphorylation sites, probably related to the cell cycle of the parasite.
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Detecção e avaliação da remoção de cistos de Giardia spp., oocistos de Cryptosporidium spp. e ovos de Ascaris spp. na ETE Garcia, em Blumenau/SC

Miglioli, Mauro Giovanni, 1990-, Goulart, Juliane Araújo Greinert, 1977-, Silva, Joel Dias da, 1976-, Universidade Regional de Blumenau. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Ambiental. January 2016 (has links) (PDF)
Orientador: Juliane Araújo Greinert Goulart. / Coorientador: Joel Dias da Silva. / Dissertação (Mestrado em Engenharia Ambiental) - Programa de Pós-Graduação em Engenharia Ambiental, Centro de Ciências Tecnológicas, Universidade Regional de Blumenau, Blumenau.
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Estudo sobre a ecologia e origem da virulência de Paracoccidioides brasiliensis - caracterização de sua interação com Acanthamoeba castellanii

Gomes, Diogo Magnabosco de Almeida 29 April 2014 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências Biológicas, 2014. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2014-08-13T13:24:07Z No. of bitstreams: 1 2014_DiogoMagnaboscodeAlmeidaGomes_Parcial.pdf: 2936989 bytes, checksum: efbdbdb843f99d312bd84a42e9123e7f (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2014-08-14T12:45:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_DiogoMagnaboscodeAlmeidaGomes_Parcial.pdf: 2936989 bytes, checksum: efbdbdb843f99d312bd84a42e9123e7f (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-14T12:45:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_DiogoMagnaboscodeAlmeidaGomes_Parcial.pdf: 2936989 bytes, checksum: efbdbdb843f99d312bd84a42e9123e7f (MD5) / Paracoccidioides brasiliensis é um parasita intracelular facultativo que apresenta-se sob a forma de micélio à temperatura ambiente e se diferencia para forma de levedura quando submetido à temperatura de 37°C ou durante a invasão aos tecidos de hospedeiros. P. brasiliensis não necessita do hospedeiro mamífero para completar seu ciclo biológico. Apesar disso, o fungo é capaz de sobreviver e se replicar nos tecidos do hospedeiro com o estabelecimento da doença. Em face desse paradoxo, questiona-se porque tais estratégias de sobrevivência se originaram e foram mantidas pela evolução nesse organismo. A hipótese proposta para vários fungos patogênicos é que fatores de virulência possam ter se desenvolvido como uma resposta à interação com predadores presentes no ambiente. Tais estudos utilizaram a ameba de solo Acanthamoeba castellanii, e mostraram quão expressivas são as similaridades nas estratégias fagocitárias de amebas e macrófagos. O objetivo geral desse trabalho é analisar a interação entre P. brasiliensis e A. castellanii, identificando os principais efeitos dessa interação na viabilidade dos organismos e na virulência desse fungo. Avaliando a interação entre P. brasiliensis e A. castellanii podemos constatar que a ameba é capaz de internalizar células do fungo. A cinética de fagocitose nos mostra que a porcentagem de amebas com fungos internalizados aumenta até 2 h após o início da coincubação e se mantem até 6 h. Analisando resultados da mortalidade de A. castellanii e P. brasiliensis quando coincubados por 24h observamos que a ameba é capaz de sobreviver e eliminar o fungo. Porém acreditamos que o fungo possa aumentar sua virulência quando recuperado após a coincubação com ameba, o que corrobora com resultados de testes similares feitos em macrófagos e nos dão fortes indícios de que esses protozoários estão intimamente ligados com o aparecimento de fatores de virulência em P. brasiliensis. / Paracoccidioides brasiliensis is a facultative intracellular parasite and presents itself in the form of mycelium at room temperature and as yeast at 37°C or during invasion of host tissues. P. brasiliensis does not require a mammalian host to complete its life cycle. Nonetheless, the fungus is able to survive and replicate in the host tissues with the development of the disease. In view of this paradox, it is questioned why such survival strategies were originated and maintained in that organism. To try to answer this question Steenbergen et al (2001) and Casadevall et al (2003) created a hypothesis that virulence factors may have developed in some virulent fungi in response to interaction with predators in the environment. Such studies used the soil amoeba Acanthamoeba castellanii, and showed how significant are the similarities in the phagocytic strategies from amoebae and macrophages. The aim of this study is to analyze the interaction between P. brasiliensis and A. castellanii, identifying the main effects of this interaction in the viability of these two organisms and virulence of this fungus. Evaluating the interaction between P. brasiliensis and A. castellanii we observed that amoeba is capable of internalizing fungal cells. The kinetics of phagocytosis shows that the percentage of amoeba with internalized fungi increases within 2h after the start of coincubation and keeps up to 6h. Analyzing mortality results of A. castellanii and P. brasiliensis after coincubation for 24h we observed that amoeba is capable of surviving and kill the fungus. However, we believe that the fungus can increase its virulence when recovered after coincubation with amoebae, in agreement with results of similar tests on macrophages and gives us strong evidence that this protozoa is closely related with the emergence of virulence factors in P. brasiliensis.
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Proteômica de Trypanosoma cruzi : variações em subproteomas durante a amastigogênese

Queiroz, Rayner Myr Lauterjung 03 1900 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-Graduação em Patologia Molecular, Laboratório de Bioquímica e Química de Proteínas, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-10-30T12:35:16Z No. of bitstreams: 1 2013_RaynerMyrLauterjungQueiroz.pdf: 2749536 bytes, checksum: 919b0cd19524ed0a125aae72c5a61ed3 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-10-30T12:49:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_RaynerMyrLauterjungQueiroz.pdf: 2749536 bytes, checksum: 919b0cd19524ed0a125aae72c5a61ed3 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-30T12:49:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_RaynerMyrLauterjungQueiroz.pdf: 2749536 bytes, checksum: 919b0cd19524ed0a125aae72c5a61ed3 (MD5) / O Trypanosoma cruzi é o protozoário causador da doença de Chagas, uma enfermidade que afeta milhões de pessoas especialmente na América latina onde é endêmica. O parasito passa por diversos processos de diferenciação para adaptar-se a diferentes condições dentro dos seus hospedeiros mamíferos e triatomíneos. A respeito especialmente do hospedeiro mamífero, os tripomastigotas, a forma sanguínea infectiva do T. cruzi, diferencia-se intracelularmente em amastigotas replicativos após um período de incubação dentro de fagolisossomos ácidos, em um processo denominado amastigogênese. Aqui buscamos encontrar novas informações concernentes a esse processo através da análise do subproteoma de superfície celular dos estágios de vida presentes no homem e do repertório protéico secretado/excretado por tripomastigotas em pH fisiológico e também nas primeiras 3 horas de amastigogênese axênica. Também realizamos uma análise quantitativa do proteoma total e do fosfoproteoma durante a amastigogênese. Todos os subproteomas foram aqui analisados por LC-MS/MS com um espectrômetro de massas Orbitrap Velos. Primeiro utilizamos epimastigotas, o estágio do parasito encontrado no inseto vetor, para padronizar e avaliar o enriquecimento de proteínas da superfície celular por duas técnicas distintas: uma baseada na tripsinização da superfície de células intactas e a outra baseada na biotinilação de proteínas expostas na superfície e seu enriquecimento por cromatografia de afinidade a estreptoavidina. Os resultados mostraram que essas abordagens ofereceram informações abrangentes e complementares sobre o subproteoma da membrana plasmática do parasito e, então, foram aplicadas na análise desse subproteoma nas formas amastigota e tripomastigota. A análise quantitativa do proteoma e fosfoproteoma usou parasitos diferenciados de forma axênica em quatro pontos do processo (0 min, 30 min, 2 h e 9 h) e os fosfopeptídeos foram enriquecidos com resina de TiO2. Finalmente, o secretoma de tripomastigotas foi obtido de uma maneira similar ao protocolo de aquisição de antígenos secretados/excretados, mas com cuidados adicionais para evitarmos lise mecânica das células. As análises renderam milhares de proteínas identificadas que eram comprovadamente ou preditas como associadas à membrana plasmática ou secretadas e são envolvidas na interação parasito-hospedeiro. Da mesma forma, várias proteínas e fosfopeptídeos relevantes possuíram expressão regulada durante a amastigogênese. / Trypanosoma cruzi is a protozoan that causes Chagas' disease, a neglected infectious illness that affects millions of people, mostly in the Latin America. The parasite undergoes several differentiation processes in order to adapt to different conditions inside both mammalian and triatomine hosts. Specially regarding mammalian hosts, the trypomastigote, an infective bloodstream life-form of the T. cruzi, differentiates intracellularly to the replicative amastigote stage after a period of incubation inside acidic phagolisossomes, in a process called amastigogenesis. Here we aim to bring further light to this process by analysing the cell surface subproteome of the mammalian hosted life-forms of the parasite and the secreted/excreted protein repertoire from trypomastigotes in physiological pH and also at the first 3 hours of the acidic pH induced amastigogenesis. Finally, we performed the quantitative proteome and phosphoproteome analysis of the amastigogenesis by iTRAQ labeling. All T. cruzi subproteomes were analysed by LC-MS/MS with Orbitrap Velos mass spectrometer. First we used T. cruzi epimastigotes, the insect hosted life-form, in order to prepare samples enriched in cell surface proteins by two distinct methodologies, which were optimized and evaluated. The first methodology was based on cell surface trypsinization (Shave) of intact living cells while the second approach used biotinylation of cell surface proteins followed by streptavidin affinity chromatography isolation of the labeled proteins. The results showed that the methodologies offered comprehensive and complementary information about the parasite's plasma membrane subproteome, which were applied afterwards in the trypomastigote and amastigote cells. The quantitative proteome and phosphoproteome analysis used the axenicaly differentiated parasites in four time points (0 min, 30 min, 2 h and 9 h) and the phosphopeptides were enriched using TiO2 beads. Finally, the trypomastigote secretome were obtained in a similar way to the protocols of acquisition of secreted/excreted antigens, but with further care to avoid mechanical lysis. The results yielded thousands of protein identifications which were either proved or expected to be associated to the plasma membrane or secreted and are involved in host-parasite interection and, in the same way, we found several proteins and phosphopeptides that have regulated expression during amastigogenesis.
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Analise do lodo de esgoto : seleção de metodos de recuperação de (oo) cistos de protozoarios patogenicos

Guilherme, Marta Siviero 15 December 1998 (has links)
Orientador: Bruno Coraucci Filho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Civil / Made available in DSpace on 2018-07-25T10:48:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guilherme_MartaSiviero_M.pdf: 2406119 bytes, checksum: cbb08d0f7079a1ce07fe7a06d0f1d000 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: : O lodo de esgoto doméstico é um resíduo gerado pelas ETE's (Estação de Tratamento de Esgoto) em grande quantidade e que necessita de disposição adequada. Existem algumas formas de disposição conhecidas, como por exemplo a incineração ou aterro sanitário. Porém, a forma de disposição que combina de modo mais eficiente reciclagem de matéria orgânica e qualidade ambiental é a sua utilização como condicionante em solos agrícolas ou parques e jardins. O lodo de esgoto possui elementos nutritivos importantes para as plantas, como P e N, no entanto, este resíduo pode conter patógenos que podem colocar em risco a saúde do homem e outros animais. Um grupo de patógenos que pode estar presente no lodo é o dos protozoários, como por exemplo cistos de Giardia e amebas, responsáveis por doenças entéricas de fácil disseminação. Uma forma de evitar que estes patógenos causem problemas é através do seu efetivo monitoramento, no lodo de esgoto e no solo. O objetivo deste trabalho foi selecionar métodos que permitissem recuperar estes patógenos que estivessem presentes no lodo. Os métodos são baseados na recuperação dos protozoários através de sua sedimentação ou suspensão. Neste trabalho foram testadas 4 metodologias para verificar qual obtinha maior recuperação dos protozoários. As metodologias testadas usavam sulfato de zinco (33%), sacarose (lM), formol/éter, ou simples decantação (Hoffinan). O método que apresentou melhor resultado foi o do sulfato de zinco. Após a seleção do método, foram feitas modificações na concentração da solução de sulfato e no tempo de análise, com o objetivo de procurar aumentar esta recuperação. Isto foi possível com a utilização de sulfato de zinco 50% e com a amostra deixada em repouso numa suspensão com água destilada por 24 horas antes da análise.Desta forma, a porcentagem de recuperação passou de 19,01% para 35,31%, o que significa um aumento da eficiência da taxa de recuperação, com a concentração do sulfato de zinco 50%. Este aumento de recuperação é importante na definição de uma metodologia simples e de baixo custo, para a recuperação de protozoários / Abstract: The sewage sludge, a residue generated in significant amounts by waste water treatment plants, requires suitable disposal. There are some well known ways for disposal of sludge, for instance incineration or landfills, however the disposal procedure that more efficiently combines recycling of the organic matter and environmental suitability is the use of the sludge as conditioning in agriculture and gardens. The sewage sludge contains important plant nourishing elements like P and N, however it can also contain human pathogens. Protozoan like Giardia cysts and amoebas that can cause enteric diseases easily disseminable, are among the pathogens that can be found in the sewage sludge. Monitoring these pathogens in the sludge and in the soil is an effective way to prevent the pathogens of causing problems. The aim of this work was to select a method for the recovery of these pathogens in the sewage sludge. The procedures are based in the recovery of the protozoan through sedimentation or flotation. Four different methodologies- zinc sulfate 33%, sucrose 1M, formaldehyde/ether and sedimentation (Hoffman)- were compared to assess the one that allows the higher protozoan recovery index. The best results were obtained with zinc sulfate. After have selected the methodology, differents concentrations of zinc sulfate and times were tested in order to try to increase the recovery index. The highest recovery index was found by using a 50% zinc sulfate solution and after the sample have been left in a distilled water suspension for 24 hours before the analysis. These conditions increased the recovery index from 19,01 to 35,31%, an efficient improvement of in the index. This result is important in establishing a simple and low cost methodology to recover the protozoan / Mestrado / Saneamento / Mestre em Engenharia Civil

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