Orientador: Bruno Coraucci Filho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Civil / Made available in DSpace on 2018-07-25T10:48:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guilherme_MartaSiviero_M.pdf: 2406119 bytes, checksum: cbb08d0f7079a1ce07fe7a06d0f1d000 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: : O lodo de esgoto doméstico é um resíduo gerado pelas ETE's (Estação de Tratamento de Esgoto) em grande quantidade e que necessita de disposição adequada. Existem algumas formas de disposição conhecidas, como por exemplo a incineração ou aterro sanitário. Porém, a forma de disposição que combina de modo mais eficiente reciclagem de matéria orgânica e qualidade ambiental é a sua utilização como condicionante em solos agrícolas ou parques e jardins. O lodo de esgoto possui elementos nutritivos importantes para as plantas, como P e N, no entanto, este resíduo pode conter patógenos que podem colocar em risco a saúde do homem e outros animais. Um grupo de patógenos que pode estar presente no lodo é o dos protozoários, como por exemplo cistos de Giardia e amebas, responsáveis por doenças entéricas de fácil disseminação. Uma forma de evitar que estes patógenos causem problemas é através do seu efetivo monitoramento, no lodo de esgoto e no solo. O objetivo deste trabalho foi selecionar métodos que permitissem recuperar estes patógenos que estivessem presentes no lodo. Os métodos são baseados na recuperação dos protozoários através de sua sedimentação ou suspensão. Neste trabalho foram testadas 4 metodologias para verificar qual obtinha maior recuperação dos protozoários. As metodologias testadas usavam sulfato de zinco (33%), sacarose (lM), formol/éter, ou simples decantação (Hoffinan). O método que apresentou melhor resultado foi o do sulfato de zinco. Após a seleção do método, foram feitas modificações na concentração da solução de sulfato e no tempo de análise, com o objetivo de procurar aumentar esta recuperação. Isto foi possível com a utilização de sulfato de zinco 50% e com a amostra deixada em repouso numa suspensão com água destilada por 24 horas antes da análise.Desta forma, a porcentagem de recuperação passou de 19,01% para 35,31%, o que significa um aumento da eficiência da taxa de recuperação, com a concentração do sulfato de zinco 50%. Este aumento de recuperação é importante na definição de uma metodologia simples e de baixo custo, para a recuperação de protozoários / Abstract: The sewage sludge, a residue generated in significant amounts by waste water treatment plants, requires suitable disposal. There are some well known ways for disposal of sludge, for instance incineration or landfills, however the disposal procedure that more efficiently combines recycling of the organic matter and environmental suitability is the use of the sludge as conditioning in agriculture and gardens. The sewage sludge contains important plant nourishing elements like P and N, however it can also contain human pathogens. Protozoan like Giardia cysts and amoebas that can cause enteric diseases easily disseminable, are among the pathogens that can be found in the sewage sludge. Monitoring these pathogens in the sludge and in the soil is an effective way to prevent the pathogens of causing problems. The aim of this work was to select a method for the recovery of these pathogens in the sewage sludge. The procedures are based in the recovery of the protozoan through sedimentation or flotation. Four different methodologies- zinc sulfate 33%, sucrose 1M, formaldehyde/ether and sedimentation (Hoffman)- were compared to assess the one that allows the higher protozoan recovery index. The best results were obtained with zinc sulfate. After have selected the methodology, differents concentrations of zinc sulfate and times were tested in order to try to increase the recovery index. The highest recovery index was found by using a 50% zinc sulfate solution and after the sample have been left in a distilled water suspension for 24 hours before the analysis. These conditions increased the recovery index from 19,01 to 35,31%, an efficient improvement of in the index. This result is important in establishing a simple and low cost methodology to recover the protozoan / Mestrado / Saneamento / Mestre em Engenharia Civil

Orientador: Lucia Helena O'Dwyer de Oliveira / Banca: Tadeu Gomes de Oliveira / Banca: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Banca: Alessandro Francisco Talamini do Amarante / Banca: Diego Peres Alonso / Resumo: O trabalho teve como objetivo investigar a ocorrência de Hepatozoon spp. em carnívoros neotropicais de vida livre no Brasil. Foram analisadas 158 amostras sanguíneas de Canidae, Procyonidae e Mephitidae presentes no Parque Nacional das Emas, em Goiás. Do total amostral, 75 foram obtidas de Chrysocyon brachyurus (lobo-guará), 65 de Cerdocyon thous (cachorro do mato), 10 de Conepatus semistriatus (jaratataca), 06 de Lycalopex vetulus (raposinha do campo) e dois de Nasua nasua (quati). O diagnóstico de Hepatozoon spp. foi feito através da Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) após a extração de DNA. Do total analisado, 63,92% das amostras estavam parasitadas por Hepatozoon, sendo que deste total, 41,14% eram provenientes de C. brachyurus, 18,35% de C. thous, 3,79% de L. vetulus e 0,63% de N. nasua. A maioria da população de C. brachyurus (86,66%) apresentou-se infectada, assim como 44,61% dos exemplares de C. thous e 100% dos L. vetulus estudados. A caracterização molecular dos isolados obtidos foi feita após o sequenciamento e a análise filogenética. Essa última demonstrou que isolados sequenciados de C. thous e a maioria dos de C. Brachyurus apresentaram alta similaridade com Hepatozoon sp. isolado de C. thous no Espirito Santo e também com Hepatozoon americanum. O isolado de N. nasua apresentou similaridade com H. felis e os de L. vetulus com Hepatozoon canis em cão doméstico. A identificação molecular de Hepatozoon sp. em N. nasua e os relatos das infecções por este hematozoário em C. brachyurus e em L. vetulus de vida livre são inéditos no mundo / Abstract: The aim of this study was to investigate the occurrence of Hepatozoon spp. in free ranging neotropical carnivores from Brazil. 158 blood samples were analyzed from Canidae, Procyonidae and Mephitidae from Emas National Park, in the State of Goias, Brazil. From the sampling total, 75 were obtained from Chrysocyon brachyurus (maned wolf), 65 from Cerdocyon thous (crab-eating dog), 10 from Conepatus semistriatus (striped hog-nosed skunk), 06 from Lycalopex vetulus (hoary fox) and two from Nasua nasua (South American coati). Hepatozoon spp. were diagnosed by Polymerase Chain Reaction (PCR) after DNA was extracted. From the total analyzed, 63.92% samples were parasitized by Hepatozoon; and from the positive samples 41.14% were collected from C. brachyurus, 18.35% from C. thous, 3.79% from L. vetulus and 0.63% from N. nasua. The majority of C. brachyurus population (86.66%) was infected and also 44.61% of C. thous and 100% of L. vetulus studied. Molecular characterization of the isolates was performed after sequencing and phylogenetic analyses. These demonstrated that the isolates from C. thous and the majority of the ones from C. Brachyurus showed high similarity with Hepatozoon sp. from C. thous from the State of Espirito Santo and also with Hepatozoon americanum. The isolate of N. nasua showed similarity with H. felis; and the ones from L. vetulus with H. canis from domestic dog. The molecular identification of Hepatozoon sp. from N. nasua as well as the infection by this hematozoa in free ranging C. brachyurus and L. vetulus are novelties in the world / Doutor

Orientador: Karin Werther / Banca: Nádia Regina Pereira Almosny / Banca: Marcos Rogério André / Banca: Lúcia Helena O'Dwyer de Oliveira / Banca: Estevam Guilherme Lux Hoppe / Resumo: Testudines atuam como hospedeiros intermediários para hemogregarinas (Haemogregarina spp. e Hemolivia spp.) e hemosporídeos (Haemoproteus spp. e Haemocystidium spp.). Esses hemoprotozoários pertencentes ao Filo Apicomplexa são parasitas heteroxenos que afetam principalmente hemácias. Sua presença, intracitoplasmática, em extensões sanguíneas de répteis, pode ser eventualmente observada. A identificação morfológica não é suficiente para a classificação de espécie, sendo recomendada a utilização de métodos moleculares. Com o objetivo de pesquisar a presença de hemogregarinas e hemosporídeos em Phrynops geoffroanus (cágados-de-barbicha) e Podocnemis expansa (tartarugas-da-Amazônia) ambos de vida livre, foram utilizados métodos morfológicos e moleculares. Nas extensões sanguíneas coradas e em cortes histológicos (de fígado, pulmão, baço e coração de P. geoffroanus) foi investigada a presença de hemoparasitas. A partir de amostras de sangue e de tecidos foi realizada a pesquisa de material genômico de hemoparasitas por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (cPCR), com base nos genes 18S rRNA (hemogregarinas) e Citocromo b (hemosporídeos). Em extensões sanguíneas de 100% (7/7) de P. expansa foram observadas estruturas sugestivas para hemogregarinas. Observou-se amplificação de fragmentos baseados no gene 18S rRNA para 100% (7/7) de P. expansa. As análises filogenéticas de Máxima Verossimilhança (MV) e Bayesiana foram obtidas de sequências de amostras sanguíneas de P. expansa. Tais... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Testudines act as intermediate hosts for hemogregarines (Haemogregarina spp. and Hemolivia spp.) and hemosporidia (Haemoproteus spp. and Haemocystidium spp.). These haemoprotozoans belongs to the phylum Apicomplexa are heteroxenous parasites that affect erythrocytes. Their presence in reptiles' blood extensions can eventually be observed. Morphological identification is not enough for the classification, so molecular methods are recommended. In order to investigate the presence of hemogregarines and hemosporidia in free-living Phrynops geoffroanus (geoffroy's side-necked turtle) and Podocnemis expansa (giant Amazon turtle), morphological and molecular methods were used. The presence of hemoparasites was investigated at stained blood smears and histological slides (liver, lung, spleen and heart from P. geoffroanus). Genomic material of hemoparasites was detected by Polymerase Chain Reaction (cPCR), based on the 18S rRNA genes (hemogregarines) and Cytochrome b genes (hemosporidia). Hemogregarines-like structures were observed in stained blood smears from 100% (7/7) P. expansa. Amplification of fragments based on 18S rRNA gene was observed at 100% (7/7) P. expansa samples. Maximum Likelihood and Bayesian phylogenetic analyzes were obtained from sequences from P. expansa blood samples. These sequences were grouped into a monophyletic clade and clustered close Haemogregarina genus sequences, obtained from fresh water turtles from North America, Asia, Europe and Africa. This situation put forward molecular investigation of more sequences of hemogregarines from freshwater turtles from geographically close South American countries, with the view to collaborate in a robust affirmation of the emergence of a new clade of the genus Hemogregarina. / Doutor

Made available in DSpace on 2016-04-07T13:21:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 nelson_filho_ioc_dout_2015.pdf: 18433990 bytes, checksum: 8dd6a2876cb547b6a2d7fe8493822e55 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A inferência de homologia entre organismos é uma atividade da genômica comparativa que possibilita compreender melhor a relação entre os mesmos e, por conseguinte, sua distância evolutiva. Especificamente, a identificação de genes ortólogos, ou seja, aqueles que têm sua origem em um ancestral comum, permite oferecer melhorias na anotação funcional de genes, uma vez que genes ortólogos tendem a ter sua função conservada. Com a crescente disponibilidade de genomas através de técnicas de NGS, a construção e atualização de bases de dados de ortólogos representam um desafio constante, pois demandam o estudo e identificação das relações entre os genes de tais organismos, em um volume de dados cada vez mais extenso e a um custo computacional cada vez mais elevado. Nesta tese propomos a solução para nuvem computacional elastic-OrthoSearch, um workflow científico de genômica comparativa inspirado no OrthoSearch, responsável pela inferência de homologia entre organismos com o uso de abordagem baseada em melhores hits recíprocos e perfis de Markov. Também propomos uma metodologia para criação de bases de ortólogos construída através do reuso do OrthoSearch. Esta metodologia mostrou-se capaz de alavancar a oferta de grupos ortólogos e assim auxiliar, por exemplo, na identificação de alvos de protozoários / Homology inference among organisms is a comparative genomics tasks which allows for a better understanding on how such organisms are related to each other and on their evolutionary distance. Specifically, the identification of orthologous genes – those who share a common ancestor – allows for functional gene annotation improvements, as orthologous genes tend to preserve their functions. The increasing amount of genomic data provided by the NGS techniques makes the orthologous databases’ building and update processes a challenging task. It requires the identification and study of the organisms’ genes relationships, in an extensive data volume and at an increasing computational cost. In this thesis we propose elastic-OrthoSearch, a cloud-enabled comparative genomics scientific workflow, derived from OrthoSearch. It aims at providing homology inference among organisms, in a reciprocal best hits and Markov profiles approach. We also propose an improved orthologous database creation methodology built on top of OrthoSearch. Such methodology has shown means to offer a broader orthologous groups dataset, which could in turn aid on Protozoa target identification.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2014. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-04-29T12:50:20Z No. of bitstreams: 1 2014_ThuanydeMouraCordeiro.pdf: 3960809 bytes, checksum: 4b394c3182d7b2be77db6f48e1225c6d (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-05-23T12:40:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_ThuanydeMouraCordeiro.pdf: 3960809 bytes, checksum: 4b394c3182d7b2be77db6f48e1225c6d (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-23T12:40:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_ThuanydeMouraCordeiro.pdf: 3960809 bytes, checksum: 4b394c3182d7b2be77db6f48e1225c6d (MD5) / A malária é uma doença infecciosa causada por protozoários Plasmodium spp. O P. falciparum é considerado o mais severo por ser o responsável pela maioria dos casos de morte causados pela doença. Devido ao rápido surgimento de cepas de P. falciparum resistentes às drogas antimalariais dá-se a importância de realizar um screening de compostos da biodiversidade, além de elucidar os mecanismos de ação de substâncias com comprovada ação antiplasmodial, como por exemplo, a rottlerin, um inibidor da proteína quinase C. As proteínas quinases desempenham um papel essencial em muitas funções celulares, o que as tornam alvos muito atraentes para o desenvolvimento de novas drogas. A metodologia considerada padrão ouro para avaliar a atividade antimalárica de drogas é o ensaio com incorporação de hipoxantina tritiada. No entanto, o alto custo, a adoção de medidas de segurança e a produção de lixo radioativo limitam a utilização desta técnica. Desta forma, os objetivos deste trabalho foram à implementação do teste de atividade antiplasmodial baseado em fluorescência com SYBR Green I®, avaliação da atividade antimalárica das subfrações cromatográficas de sílica-gel do extrato de acetato de etila de Qualea grandiflora, uma planta típica do Cerrado brasileiro, e avaliação dos efeitos da rottlerin no ciclo intra-eritrocitário do P. falciparum por métodos bioquímicos e citofluorimétricos. Três subfrações de Q. grandiflora apresentaram atividade antiplasmodial moderada, sem atividade citotóxica e hemolítica aparentes. Foi demonstrado o efeito da rottlerin, um potencial efetor da autofagia, sobre o ciclo eritrocitário de P. falciparum por citometria de fluxo. De fato, a análise da população enriquecida de esquizonte de P. falciparum em cultura tratada por rottlerin comparada com a não tratada revelou que houve inibição da diferenciação dos merozoítos, acarretando na morte rápida do parasito. A fim de entender quais eram os alvos proteicos de ação desta molécula, foi realizada uma análise proteômica comparativa preliminar por eletroforese bidimensional. Três proteínas, Heat Shock Protein 90 (HSP90), 3-fosfoglicerato quinase (3-PGK) e lactato desidrogenase (LDH), superexpressas na população de esquizontes não tratada com a rottlerin foram identificadas. Estas proteínas pertencem à classe de proteínas quinases ou possuem um domínio de interação com quinase. A HSP90 está envolvida no processo de enovelamento proteico com um papel fundamental no crescimento e desenvolvimento do parasito e, consequentemente, estudada como potencial alvo de droga antiplasmodial. A LDH e a 3-PGK são enzimas do metabolismo da glicose, e assim, potenciais alvos bem conhecidos para compostos antimaláricos devido à dependência deste parasito à glicólise para produção de energia. O estudo da biodiversidade do Cerrado pode contribuir para a descoberta de compostos antimalariais e a conservação deste bioma ameaçado. A não detecção das proteínas identificadas na presença de rottlerin pode estar relacionada à indução da autofagia na esquizogonia eritrocitária e constituem potenciais alvos de drogas antimaláricas. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Malaria is an infectious disease caused by Plasmodium spp protozoa. The P. falciparum is considered the most severe, since it is responsible for the majority of deaths related to this disease. Due to the rapid emergence of resistant strains of P. falciparum against antimalarial drugs, a great importance can be given to the screening of biodiversity compounds in addition to elucidate the mechanisms of action of substances with demonstrated antiplasmodial action such as rottlerin, an inhibitor of protein kinase C. Protein kinases play a pivotal role in many cellular functions, which make them very attractive targets for the development of new drugs. The methodology considered the gold standard for assessing antimalarial drug activity is the [3H]hypoxanthine incorporation assay. However, the high cost, adoption of safety regulations and the production of radioactive waste limit the application of this technique. Therefore, the objectives of this study were to implement the antiplasmodial activity test based on SYBR® Green I fluorescence, assessment of antimalarial activity of silica gel chromatographic subfractions of Qualea grandiflora ethyl acetate extract, a typical plant of the Brazilian Cerrado, and assessment of the rottlerin‟s effects in erythrocytic cycle of P. falciparum by biochemical and cytofluorimetric methods. Three subfractions of Q.grandiflora showed moderate antiplasmodial activity without apparent cytotoxic and hemolytic activities. It was demonstrated the effect of rottlerin, a potencial autophagy effector, on P. falciparum erythrocytic cycle by flow cytometry. In fact, analysis of the schizont enriched population of P. falciparum in rottlerin-treated culture compared to untreated ones revealed that there was an inhibition of merozoites differentiation, resulting in the rapid death of the parasite. In order to elucidate which proteins were the targets of rottlerin action, a preliminary comparative proteomic analysis by two-dimensional electrophoresis was performed. Three proteins, heat shock protein 90 (HSP90), 3- phosphoglycerate kinase (PGK-3) and lactate dehydrogenase (LDH), upregulated in schizont population non treated with rottlerin were identified. These proteins belong to the class of protein kinases or possess domains that interact with them. The HSP90 is involved in the protein folding process with a critic role in parasite growth and development, thus being studied as a potential target for antiplasmodial drugs. The 3- PGK and LDH are enzymes of glucose metabolism, hence well known potential targets for antimalarial compounds due to parasite dependence on glycolysis to produce energy. The study of Cerrado biodiversity can contribute to the discovery of antimalarial compounds and to the conservation of this threatened biome. The not detection of these proteins identified in the presence of rottlerin may be related to autophagy induction in erythrocytic schizogony and constitute potential targets for antimalarial drugs.

Orientador: Ana Maria Aparecida Guaraldo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:18:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alves_DelmaPegolo_D.pdf: 14273336 bytes, checksum: cb38808a46cc15c8f94cd7571412f840 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Cryptosporidium é um protozoário oportunista que causa diarréia em indivíduos imunocompetentes e imunodeficientes. A duração e severidade dos sintomas clínicos dependem do sistema imunológico do hospedeiro. Nas pessoas imunocompetentes, a infecção pode ser as sintomática ou induzir uma diarréia autolimitante, enquanto nos indivíduos imunodeficientes, resulta em doença acentuada ou diarréia que pode ser fatal. O objetivo deste estudo foi avaliar a evolução da infecção experimental pela linhagem MMC, de Cryptosporidium sp de origem humana, nas linhagens de camundongos imunodeficientes C57BL/6 KO para IFN-y, C.B-17/Uni scid,' C57BL/Uni bg, C3H/Uni nu e imunocompetentes BALB/c/Uni e C57BL/6/Uni. Para tanto, a manutenção do cultivo "in vivo" da linhagem MMC de Cryptosporidium sp foi realizada mediante várias passagens em camundongos neonatos imunocompetentes e camundongos adultos KO para IFN-y. Foram utilizadas remeas SPF com 04 a 06 semanas de vida das linhagens imunodeficientes e imunocompetentes, inoculadas com 105 oocistos de Cryptosporidium sp por tubagem esofágica. Para a avaliação da dinâmica da eliminação de oocistos de Cryptosporidium sp, as fezes dos animais foram colhidas diariamente, durante 15 dias e armazenadas em dicromato de potássio 2,5% a 4°C. Para o estudo da patologia intestinal, os animais foram sacrificados no 15° ou 44° dias após a infecção, e retirados segmentos do jejuno, íleo, ceco e colon para posterior avaliação histológica. A análise conjunta da mortalidade dos camundongos infectados pelo Cryptosporidium sp e da eliminação de oocistos indica que o perfil da resistência à infecção nas linhagens em estudo apresentou o seguinte padrão: C57BL/6/Uni> BALB/c/Uni > scid> bg> nude > KO. As alterações histológicas no intestino das linhagens estudadas apresentaram um perfil de severidade das lesões na seguinte ordem: KO > bg> nude > scid> BALB/c/Uni = C57BL/6/Uni. Dentre as linhagens avaliadas, os camundongos KO foram os mais susceptíveis a infecção pelo Cryptosporidium sp, quanto a mortalidade, eliminação de oocistos e alterações histológicas no intestino. A linhagem C57BL/6 KO para IFN-y pode ser considerada o melhor modelo para o estudo da criptosporidiose experimental. Estes resultados também ressaltam a importância do IFN-y no controle da criptosporidiose na fase aguda da infecção, assim como a importância das células NK e linfócitos T no controle da criptosporidiose. A comparação da análise histopatológica do scid, nude e bg sugerem que a resposta humoral tem pequena participação no controle da criptosporidiose / Abstract: Cryptosporidium is a protozoan parasite that can cause chronic life-threatening diarrhea in immunocompromised persons. In immunocompetent hosts, C. parvum causes a self-limiting diarrheal illness that can persist until 3 weeks. Cryptosporidium sp isolated ttom a HIV - positive patient in Campinas (Brazil) has been maintained by repeated oocyst passage through S.P.F. suckling mice. Differences in susceptibility to cryptosporidial infections were investigated among four immunodeticient adult mice strains: C57BL/6 gamma-interferon-knockout (KO), C57BL/6/Uni bg, C3H1Uni nu and C.B-17/Uni scid. The mice were infected via oral inoculation with 105 Cryptosporidium sp MMC oocysts and monitored for infection intensity by collection of fecal pellets ttom individual mice. After 15 or 44 days, the mice were sacriticed in order to evaluate the damage at distaljejunun, ileum, caecum and colono There was differences highly signiticant in the fecal oocyst shedding among KO, bg, scid, nu and adult immunocompetent controls (C57BL/6/Uni and BALB/c/Uni). The resistance pattem conceming the mortality and oocysts shedding among the mice strains, was: C 57BL/6>BALB/c>scid>bg>nude>KO. Histological intestinal evaluation 15 days after infection, showed that KO mice showed pronounced histological changes and scid mice were less infected. The response of the epithelium to cryptosporidial infection after 44 days showed signals of recovery and it was possible to suggest the following panel conceming the recovery capacity : scid>bg>nude>KO. The results of this study demonstrated that there is correlation between resistance pattem and histological alterations. These findings support theview that IFN-y, T and NK cells are very important for the control of infection meanly during the early recovery phase against Cryptosporidium sp infection. The results also suggest that the role of B cells in the resolution of murine infection against Cryptosporidium is minore / Doutorado / Doutor em Parasitologia

Orientador: João Aristeu da Rosa / Banca: Vera Lucy de Santi Alvarenga / Banca: Vera Lucia Pagliusi Castilho / Resumo: Blastocystis hominis é protozoário causador da infecção intestinal denominada blastocistose humana, cujo diagnóstico é realizado pelo exame coproparasitológico e por meio de técnicas de colorações permanentes que foram utilizadas neste estudo para avaliar a prevalência de Blastocystis hominis nos espécimes fecais de habitantes na região de Araraquara-SP. Foram estudadas 503 amostras de fezes submetidas às técnicas de exame direto a fresco, de Faust e cols., de Lutz e de Rugai, Mattos e Brisola, além das colorações pela hematoxilina férrica, tricrômio e de Kinyoun modificada. Do total das amostras analisadas 174 (34,6%) apresentaram-se positivas para a presença de parasitas intestinais. O protozoário e helminto mais freqüentes foram respectivamente: Entamoeba coli (14,6%) e Strongyloides stercoralis (6,7%). Blastocystis hominis foi observado em 23 (4,6%) amostras fecais com consistência predominantemente pastosa, não caracterizando quadro diarréico. Apesar da baixa prevalência de Blastocystis hominis encontrada na região de Araraquara, comparativamente a outras regiões brasileiras, é importante a realização do diagnóstico laboratorial desse protozoário. O encontro de Blastocystis hominis em material fecal é indicativo de contaminação de alimentos e água de consumo, desde que se admita a rota de transmissão oral-fecal deste parasita, o que implica na orientação da população sobre as medidas de saneamento básico e higiene como meio para se controlar problemas de saúde ocasionados pelos enteroparasitas. / Abstract: Blastocystis hominis is a protozoan which causes an intestinal infection called human blasticistosis. Its diganosis is perfomed by stool examination and permanent staining techniques. Such methodologies were carried out on the present study in order to evaluate the prevalence of Blastocystis hominis in faecal specimens from the Araraquara region inhabitants. A total of 503 faecal samples were evaluated by the following techniques: examination fo fresh specimens, Lutz, Faust et al. and Rugai et al. besides the iron hemotoxylin, trichrome and modified Kinyon staining. Out of 503 stool samples examined 174 (34,6) were found to be positive for intestinal parasites. The most prevalent protozoan and helminth parasites were Entamoeba coli (14,6%) and Strongyloides stercoralis (6,7%) respectively. Balstocystis hominis was present in 23 (4,6%) stool samples, most of all of soft consistence and without diarrheic reports. Blastocystis hominis laboratorial diagnosis is important althought its prevalence has been low in Araraquara region. Blastocystis hominis findings is faecal specimens indicates the food and water contamination and since the transmission of this parasite is iral-faecal it implies that the population needs orientation about hygiene and basic sanitation conditions in order to control health problems caused by enteroparasites. / Mestre

Orientador : Teresa Cristina G. Oliveira-Sequeira / Banca: Lucia Helena O'Dwyer de Oliveira / Banca: Mara Regina Stip Balarin / Resumo: As técnicas coproparasitológicas de concentração por sedimentação e por flutuação e o kit TF-Test® foram utilizadas na investigação da epidemiologia dos parasitas gastrintestinais de cães no Estado de São Paulo. Amostras de fezes de 129 cães errantes e de 125 domiciliados foram colhidas de outubro de 2004 a setembro de 2005 e processadas de acordo com os protocolos do kit TF Test® e dos métodos de centrífugo-sedimentação e centrífugo-flutuação. Os seguintes parasitas e suas respectivas freqüências foram detectados: Ancylostoma spp. (38,2%), Giardia sp. (16,9%), Toxocara canis (8,7%), Tnchuns vulpis (7,1%), Isospora spp. (3,5%), Sarcocystís spp. (2,7%) e Dipy!idium caninum (2,4%). Dos 132 animais parasitados, 79 apresentaram parasitismo único e 53 estavam parasitados por dois ou mais gêneros e/ou espécies. Em cães errantes a prevalência de Ancylostoma spp., T. canis e Giardia sp. e a ocorrência de poliparasitismo foi maior (P < 0,01) que em animais domiciliados. Não houve diferença na freqüência de parasitas intestinais relacionada ao sexo, raça ou ao tratamento anti-helmíntico dos animais (P > 0,05), no entanto a freqüência de T. canis foi maior (P < 0,05) em cães jovens. Com relação à sazonalidade, a detecção de cistos de Giardia sp. foi mais freqüente nos meses de outubro a março. A sensibilidade diagnóstica do método de centrífugo-flutuação foi maior para todos os parasitas intestinais diagnosticados, porém somente no caso de Ancylostoma spp. essa diferença (P <0,05) se expressou em termos de uma maior freqüência de detecção de cães infectados. O elenco de parasitas diagnosticados na região estudada faz com que a técnica de centrifugo-flutuação com sulfato de zinco seja a mais apropriada tanto para os estudos epidemiológicos como para o diagnóstico individual, especialmente nas infecções subclínicas. / Abstract: The sedimentation and flotation procedures for concentration of fecal specimens and the commercial device TF were used, in an epidemiological investigation of gastrointestinal parasites of dogs in São Paulo state. Fecal samples from 129 stray dogs and 125 dogs with an owner were collected from October 2004 to September 2005. AlI samples were concentrated by the sedimentation and flotation methods and by TF-Test® device. The following parasites, and their respective frequency were diagnosed in fecal samples : Ancylostoma spp. (38,2%), Giardia sp. (16,9%), Toxocara canis (8,7%), Tnchuris vulpis (7,1%), Isospora spp. (3,5%), Sarcocystis spp. (2,7%) and Dipylidium caninum (2,4%). Fifty-three out of 132 infected animais had mixed infection with two or more parasite genera. The prevalence of Ancy!ostoma spp., 1 canis and Giardia sp. as well as the occurrence of mixed infections were significantly higher in stray dogs (P <0,01) than in dogs with an owner. No effect of gender, breed and anti-helminthic treatment (P> 0,05) on the parasite frequency was observed, but the frequency of T. canis was higher (P < 0,05) in young animais. Giardia sp. cysts were more frequently detected from October to March. The centrifugation-flotation method was generally more accurate in the diagnosis of ali intestinal parasites of dogs, but only for Ancylostoma spp. this difference was observed in terms of prevalence. The species of parasites found in the studied region make the zinc sulfate flotation the most appropriate method not only to epidemiological studies, but also to individual diagnosis, speciaily in subciinical infections. / Mestre

Orientador: Fabiano Antonio Cadioli / Coorientador: Luiz Carlos Marques / Banca: Willian Marinho Dourado Coêlho / Banca: Marcos Rogério André / Resumo: Em bovinos o protozoário Trypanosoma vivax causa enfermidade que pode levar à redução dos índices produtivos ou a morte do animal. O diagnóstico deste protozoário pode ser realizado por testes parasitológicos, sorológicos e moleculares. Entretanto estes testes não são capazes de fornecer prognóstico, indicar a fase da infecção e a responsividade ao tratamento instituído. Por outro lado, o proteinograma sérico pode fornecer tais informações. O objetivo do estudo foi determinar o perfil eletroforético de proteínas de fase aguda de bovinos Girolando naturalmente infectados com T. vivax (NIF), utilizando-se como matriz gel de acrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). Foram estudados dois grupos de animais, NIF (n=507) e grupo de bovinos não infectados (NI; n=50). Amostras de soros de ambos os grupos foram submetidas à reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e Ensaio de Imunoadsorção Enzimática (ELISA) para detecção de anticorpos anti-T. vivax e realização do fracionamento eletroforético. A porcentagem de soros positivos pela RIFI foi de 89,74% e pelo ELISA 93,09%, sendo que este método mostrou-se capaz de detectar mais amostras positivas do que a RIFI para detecção de anticorpos anti-T. vivax em fases iniciais da infecção. No fracionamento proteico foram consideradas 12 proteínas; sendo elas IgA, ceruloplasmina, proteínas de 95 KDa, 88 KDa, transferrina, albumina, antitripsina, IgG, haptoglobina, glicoproteína ácida e proteínas de 23 KDa e 20,5 KDa. No grupo NIF observou-se aumento de proteína total, IgA, proteína de 88 KDa, albumina, antitripsina, IgG, haptoglobina, 20,5 KDa e diminuição de ceruloplasmina, proteína de 95 KDa e 23 KDa e transferrina. Glicoproteina ácida não apresentou diferença significativa entre os grupos NIF e NI. A antitripsina pode ser utilizada como indicador da... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The protozoan T. vivax can cause an important disease in cattle, which is responsible for death or low index productive. The diagnosis is based on parasitologic, molecular and sorological tests. However, these tests are not able to provide prognostic, infection phase and response of treatment. On the other hand, serum proteinograms can accomplish these features. The present work aimed to assess the acute phase proteins eletrophoretic profile in Girolando cattle naturally infected by T. vivax (NIF) by SDS-Page. For this purpose, two groups of animals were utilized: one naturally infected by T. vivax (NIF; n=507) and another one by noninfected cattle (NI; n=50). Serum samples were submitted to IFA and ELISA for detecting IgG antibody to T. vivax. SDS-Page was only performed in samples which showed positive results in serological testes. The percentage of positive samples by IFA and ELISA were 89,74% and 93,09%, respectively. ELISA showed a higher number of seropositive samples when compared to IFA. In eletrophoretic fractioning 12 proteins were evaluated, including IgA, ceruloplasmin, 95 KDa and 88 KDa proteins, transferrin, albumin, antitrypsin, IgG, haptoglobin, acidic glycoprotein, and 23 KDa and 20,5 KDa proteins. NIF animals showed an increase of serum concentration of IgA, 88 KDa, albumin, antitrypsin, IgG, haptoglobin, 20,5 KDa when compared to NI animals; on the other hand, serum concentration of ceruloplasmin, 95 KDa and 23 KDa proteins, and transferrin were lower in NIF animals when compared to NI animals. Acidic glycoprotein serum concentration did not shown differences when both groups of sampled animais were compared. Since Antitrypsin was only detected in NIF animals, this protein may be used as a marker of T. vivaxinfection in cattle. More studies should be performed aiming to clarify the identity of 95, 88, 23, 20,5 KDa... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Semíramis Guimarães Ferraz Viana / Coorientador: Teresa Cristina Goulart de Oliveira-Sequeira / Banca: Marcelo Vasconcelos Meireles / Banca: Rodrigo Martins Soares / Banca: Pedro Luís Silva Pinto / Banca: Simone Baldini Lucheis / Resumo: Muitas espécies de protozoários podem causar gastroenterite aguda ou crônica em seres humanos e são altamente prevalentes nas populações residentes nos países em desenvolvimento, onde a transmissão é favorecida devido a condições precárias de higiene e escassa disponibilidade de água potável. No entanto, a infecção assintomática e o poliparasitismo também são comumente observados nessas populações. Neste trabalho, investigou-se a prevalência de protozoários intestinais em duas colônias de pescadores, Porto Said (PS) e Santa Maria da Serra (SM), situadas ao longo do rio Tietê, no Estado de São Paulo. As colônias não dispõem de serviços públicos básicos como: vias públicas, fornecimento de água e luz e saneamento básico. Todos os colonos (n = 88 em PS, e n = 38 em SM) coletaram três amostras de fezes, e todos eram assintomáticos no momento da coleta. Para obter informações sobre as possíveis vias de transmissão, amostras fecais de 49 cães (38 de PS e 11 de SM) e 28 amostras de água do rio foram coletadas (16 de PS e 12 de SM). As amostras fecais humanas e caninas foram analisadas por microscopia e PCR para detectar e caracterizar os protozoários Giardia duodenalis, Blastocystis spp., Dientamoeba fragilis e Cryptosporidium spp. Diante dos resultados obtidos, Blastocystis spp. foi o parasita mais prevalente nas amostras humanas (45,4% em PS e 71% em SM), seguido por D. fragilis (13,6% em PS e 18,4% em SM) e G. duodenalis (18,2% em PS e 7,9% em SM), já Cryptosporidium spp. não foi detectado na população humana. Além disso, G. duodenalis foi detectado em quatro cães (10,5%) em PS e dois cães (18,2%) em SM, enquanto que um único cão foi detectado com Cryptosporidium canis. Nas 28 amostras de água previamente processadas pelos métodos de filtração e separação imunomagnética e examinadas por microscopia de fluorescência, oocistos de Cryptosporidium e cistos de Giardia não foram... / Abstract: Several species of protozoa cause acute or chronic gastroenteritis in humans, worldwide. The burden of disease is particularly high among children living in developing areas of the world, where transmission is favored by lower hygienic standards and scarce availability of safe water. However, asymptomatic infection and polyparasitism are also commonly observed in poor settings. Here, we investigated the prevalence of intestinal protozoa in two small fishermen villages, Porto Said (PS) and Santa Maria da Serra (SM), situated along the river Tietê in the State of São Paulo, Brazil. The villages lack basic public infrastructures and services, such as roads, public water supply, electricity and public health services. Multiple fecal samples were collected from 88 individuals in PS and from 38 individuals in SM, who were asymptomatic at the time of sampling and had no recent history of diarrheal disease. To gain insights into potential transmission routes, 49 dog fecal samples (38 from PS and 11 from SM) and 28 river water samples were also collected. All samples were tested by microscopy and PCR was used to genotype isolates of Giardia duodenalis, Blastocystis spp., Dientamoeba fragilis and Cryptosporidium spp. By molecular methods, the most common human parasite was Blastocystis spp. (prevalence, 45% in PS and 71% in SM), followed by D. fragilis (13.6% in PS, and 18.4% in SM) and G. duodenalis (18.2% in PS and 7.9% in SM); Cryptosporidium spp. were not detected. Further, G. duodenalis was found in 4 dogs (10.5%) in PS and 2 dogs (18.2%) in SM, whereas a single dog was found infected with Cryptosporidium canis. River water samples processed by filtration and immunomagnetic separation and examined by fluorescent microscopy, were negative for Cryptosporidium oocysts and Giardia cysts. Sequencing of the barcoding region of the small subunit ribosomal gene revealed large genetic variation among Blastocystis isolates, with subtypes (STs) that ... / Doutor