No description available.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T19:19:46Z : No. of bitstreams: 1 lucheis_sb_dr_botfm.pdf: 1576086 bytes, checksum: ce79bc7cd55bca911560d23aa2f274fc (MD5) / Not available.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2015-04-08T17:06:36Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AspectosImunopatológicosInfecção.pdf: 3148066 bytes, checksum: b78dd8d04093c5ce1f075d22908e999c (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-04-09T10:57:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AspectosImunopatológicosInfecção.pdf: 3148066 bytes, checksum: b78dd8d04093c5ce1f075d22908e999c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-09T10:57:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AspectosImunopatológicosInfecção.pdf: 3148066 bytes, checksum: b78dd8d04093c5ce1f075d22908e999c (MD5) Previous issue date: 2013 / Mesmo apresentando um repertório de moléculas de superfície distinto, ambas as formas infectantes do Trypanosoma cruzi, tripomastigotas metacíclicas - TM - (transmissão vetorial) e sanguíneas - TS - (transmissão não vetorial), são funcionais na interação parasito-hospedeiro e/ou invasão de células-alvo. Entretanto, a interação inicial com o hospedeiro vertebrado pode desencadear uma resposta imune diferenciada possivelmente relacionada à evolução clínica distinta da doença de Chagas (DC) ao longo da fase crônica. Estudos do nosso grupo de pesquisa demonstraram que na fase aguda da DC a interação inicial entre formas TS e o hospedeiro vertebrado induz um perfil de resposta imunológica diferente daquele observado na infecção por formas TM. A infecção por TS é mais exuberante e, mesmo com o controle da parasitemia, não há o estabelecimento de uma resposta imunoreguladora eficaz, levando assim a uma inflamação persistente. A infecção por TM é mais silenciosa, promovendo uma resposta imune capaz não só de controlar o número de parasitos durante a fase inicial da infecção como também de estabelecer uma resposta imunoreguladora ao final da fase aguda. Dessa maneira, o estudo da infecção por diferentes formas infectantes do T. cruzi na fase crônica da infecção possibilitará uma melhor compreensão do efeito da fonte do inóculo sobre a interação T. cruzi x células do hospedeiro. Além disso, como as transmissões por via transfusional e congênita em países não endêmicos têm sido reconhecidas como um sério problema será importante saber o impacto da infecção por TS no curso da DC. Baseado nisso, o objetivo desse trabalho foi avaliar as alterações relacionadas aos parâmetros imunológicos celulares na fase crônica da infecção experimental de camundongos por formas TS ou TM da cepa Berenice-78 do T. cruzi. Os resultados mostraram no sangue periférico redução de leucócitos totais e linfócitos em ambos os grupos infectados e de monócitos apenas no grupo TS. Os animais infectados por formas TM apresentaram aumento de células NK e TCD4+ circulantes. A avaliação da produção de citocinas intracitoplasmáticas por esplenócitos demonstrou aumento do percentual de células TCD4+ produtoras de TNF- no grupo TS e de IL-10+ no grupo TMPor outro lado houve redução do percentual de células TCD8+ IFN-no grupo TM. Também foi verificado aumento significativo no percentual das citocinas TNF-, IFN- e IL-10 produzidas por linfócitos B no grupo TM. A avaliação da expressão de citocinas no coração mostrou redução da expressão do mRNA da citocina TNF-no grupo TM e aumento das citocinas IL-10 e TGF-no grupo TS. Qualitativamente foram observadas células inflamatórias no coração dos animais dos dois grupos, TS e TM. Porém, quantitativamente não houve diferença significativa entre eles, mesmo que no grupo TS seja observado um maior número de células inflamatórias. Por outro lado, observou-se aumento significativo da área de fibrose nos grupos TS e TM em relação ao controle e maior área de fibrose no TM quando comparado ao TS. Diante destes resultados, sugere-se que a infecção por TM já se resolveu aos 180 dias, com um perfil de citocinas anti-inflamatório e evolução para um quadro de resolução por fibrose mais expressivo. No grupo TS há um perfil de citocinas ainda pró-inflamatório, com um quadro de fibrose cardíaca em ascensão, como indicado pela presença de TGF-, sugerindo que provavelmente a infecção por TS evolui para um quadro resolutivo mais tardio e grave. ___________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Despite presenting a distinct repertoire of surface molecules, both infective forms of Trypanosoma cruzi, metacyclic trypomastigotes - MT - (vectorial transmission) and blood trypomastigotes - BT - (no vectorial transmission), are functional in the host-parasite interaction and / or invasion of target cells. However, the initial interaction with the vertebrate host can trigger an immune response that is differentiated and possibly related to distinct clinical evolution of Chagas disease (CD) during the chronic phase. Studies of our research group showed that in the acute phase of CD the initial interaction between BT forms and vertebrate host induces an immune response profile different from that observed in infections with MT forms. The infection with BT forms is more striking and even with the control of parasitemia, there is no establishment of an effective immunoregulatory response, thus leading to persistent inflammation. MT infection is more silent, promoting an immune response capable of controlling not only the number of parasites during the initial phase of infection as well as to establish an immunoregulatory response in the end of acute phase. Therefore, the study of infection by different infective forms of T. cruzi in the chronic phase of infection will enable a better understanding of how the source of inoculum may interfere with the T. cruzi/host cells interaction. Moreover, due to the fact that the transfusion and congenital transmissions in non-endemic countries are recognized as a serious problem would be important to know what is the impact of infection with BT forms in the disease course. Based on this, the aim of this study was to evaluate changes related to cellular immunological parameters in chronic experimental infection of mice by BT and MT forms of Berenice-78 T. cruzi strain. The results showed that in peripheral blood, the infection caused a reduction in total leukocytes and lymphocytes in both infected groups and a decrease in the number of monocytes in the BT group. The animals infected with MT forms showed increased of NK and CD4+circulating cells. The evaluation of intracytoplasmatic cytokine production by splenocytes showed a significant increase in the percentage of TNF-, IFN-and IL-10 produced by B lymphocytes in MT group. It was observed an increase in the percentage of CD4+ cells producing TNF-a in the BT group and of CD4+IL-10+ cells in the MT group. On the other hand, there was a decrease in the percentage of CD8+IFN-+ cells in the MT group. The expression of cytokines in heart showed a reduction in mRNA expression of TNF-a in the MT group and an increase of IL-10 and TGF- in the BT group. The qualitatively analysis demonstrated the presence of inflammatory cells in the hearts of animals in both groups, BT and MT. However, quantitatively there was no significant difference between them, but in the BT group is observed a greater number of inflammatory cells. On the other hand, there was significant increase in the area of fibrosis in BT and MT groups compared to NI and increased fibrosis area in MT compared to BT. Given these results, it is suggested that the infection has resolved in MT at 180 days, with a profile of anti-inflammatory cytokines and evolution to a resolution profile followed by a fibrosis more expressive. In the BT group there is still a profile of proinflammatory cytokines, with a rising cardiac fibrosis, as indicated by the presence of TGF-, suggesting that probably infection by BT forms progresses to a later resolutive and severe process.

Orientador: Humberto de Araujo Rangel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T05:53:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Verinaud_LianaMariaCardoso_D.pdf: 10390596 bytes, checksum: 66a15d762e79aa27cddaf2c35dcd05d1 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: A manutenção de formas sanguícolas do Trypanosoma cruzi nos laboratórios que desenvolvem pesquisas com o parasita é realizada através de repiques de sangue do hospedeiro previamente infectado. Entretanto, até recentemente estes animais eram criados de modo convencional, ou seja, em condições favoráveis à infecção com diferentes patógenos naturais, inclusive vírus de difícil detecção e controle. Com a implantação do CEMIB-UNICAMP, capaz de fornecer animais controlados do ponto de vista genético e sanitário, resolvemos investigar se algum destes patógenos murinos, estaria sendo transmitido junto com o parasita e se algumas características da Doença de Chagas experimental estariam sendo alteradas por este(s) contaminante(s). MAP testes realizados com soro de animais infectados com Trypanosoma cruzi indicaram a presença de coronavírus em estoques do parasita mantidos exclusivamente por passagem de animal para animal. Estoques previamente mantidos em meios de cultura de células ou em meios axênicos não indicaram a presença de contaminantes. Os resultados obtidos mostraram que camundongos infectados com o estoque contaminado apresentavam níveis de parasitemia e taxa de mortalidade mais elevados que os animais infectados os estoques não contaminados. Além disso, o plasma filtrado de animais infectados com o estoque contaminado foi capaz de elevar os níveis de parasitemia e de mortalidade de animais infectados com os estoques não contaminados. O fator, presente no plasma dos animais infectados com o estoque contaminado era sem dúvida um vírus, denominado vírus X, uma vez que podia ser seriadamente transferido de animal para animal, era completamente inativado quando aquecido a 56° C por 45 minutos e tinha sua virulência aumentada provocando a morte de animais de quatro semanas de idade após a transferência seriada. Anticorpos anti-X, preparados com a décima passagem seriada do vírus, ou anticorpos anti-MHV3 (Murine Virus Hepatitis-3) foram capazes de proteger os animais jovens da morte, quando estes eram desafiados com o vírus X, e de diminuir a parasitemia quando os animais eram infectados com o estoque contaminado. Estes dados indicavam que cepas de Trypanosoma cruzi, mantidas apenas por transferência de animal para animal, poderiam estar contaminadas com um vírus capaz de aumentar a patogenicidade do parasita ou de alterar a resposta imune do hospedeiro. Animais infectados com o estoque contaminado ou com o vírus isolado, apresentaram uma marcada linfopenia, no segundo dia após a infecção, enquanto que nenhuma alteração foi observada nos animais infectados com os outros estoques do parasita. Experimentos de neutralização, utilizando anticorpos anti-X, mostraram que esta linfopenia podia ser completamente abolida. Alterações do peso e da celularidade de diferentes órgãos linfóides também foram observadas, sendo evidenciada perda da arquitetura tímica e alterações no processo de maturação de células da medula óssea quando os animais eram infectados com o estoque de parasitas contaminado ou com o vírus isolado. As populações de células, apresentando marcadores específicos para linfócitos B e T, mostraram alterações em diferentes tecidos linfóides. Observou-se uma profunda queda na porcentagem de células T e B, quando os animais eram infectados com o vírus isolado ou com o estoque do parasita contendo este contaminante. Estes resultados confirmam e estendem, também para a Doença de Chagas experimental, os dados obtidos na literatura de que este vírus é capaz de alterar as respostas do hospedeiro, através da imunomodulação, e indicam que alguns dados obtidos com a infecção experimental pelo Trypanosoma cruzi devem ser interpretados com cautela / Doutorado / Imunologia / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Jussara Marcondes-Machado / Resumo: Não disponível. / Abstract: Not available. / Doutor

Orientador: Nora Marcela Haun Quiros / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T23:09:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Melo_PatriciadaSilva_M.pdf: 29401299 bytes, checksum: 332e5428465f8888ffa7ea12b727bca7 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Chromobacterium violaceum é um microrganismo de larga distribuição podendo ser encontrado no solo, água e no Rio Negro (Amazônia). Esta bactéria Gram negativa produz um pigmento denominado violaceína, que apresenta alguma atividade tripanocida. Como a violaceína é produzida em pequena quantidade o propósito inicial desse estudo foi investigar cepas diferentes provenientes do Rio Negro que produzissem a violaceína em um maior rendimento. Um sedimento coletado do Rio Negro foi inoculado em caldo simples, 30°C/24 h e posteriormente inoculado através de estrias em ágar nutriente. Somente três tipos de colônias - branca, amarela e vermelha cresceram (todas bactérias Gram negativas). Após dois dias de incubação a colônia branca adquiriu tonalidade violeta indicando a produção de violaceína. Análises espectrais, UV/Vis, IV (Infra Vermelho) e RMN (Ressonância Magnética Nuclear), confirmaram a presença da violaceína. Para determinar as características de C. violaceum e sua variante não pigmentada, testes laboratoriais foram realizados. A coloração pelo Gram, motilidade e estudos bioquímicos e de crescimento indicaram que as colônias branca/violeta e amarela eram C. violaceum. A colônia vermelha era Serratia marcescens (Chromobacterium prodigiosum) a qual produz o pigmento com ação antibiótica chamado prodigiosina. Os dados espectrais (UV/Vis, IV e RMN) reforçam essa conclusão. O pequeno número de bactérias isoladas na amostra confirma a alta atividade antibiótica dos pigmentos produzidos pela C. violaceum (violaceína) e S. marcescens (prodigiosina) na água do Rio Negro. A quimioterapia da doença de Chagas permanece um problema sem solução, e a pesquisa para drogas alternativas está em andamento. A terapia atual dessa doença é insatisfatória e somente o Nifurtimox está em uso, com diversas restrições na administração em pacientes crônicos, devido aos seus efeitos colaterais. Desse modo é de importância fundamental a pesquisa de novas drogas com mecanismos de ação diferentes do Nifurtimox com o objetivo de evitar esses problemas. A violaceína e a prodigiosina extraída da C. violaceum e da S. marcescens, respectivamente apresentam atividade tripanocida, a primeira possui um ID50. de 46 mM e a segunda, menos que 100 mM. A avaliação da titotoxicidade foi realizada através da inibição da síntese de DNA, redução do MTT e captação do Vermelho Neutro (VN), utilizada em células de hamster chinês V-79 (M8). No teste de viabilidade através da redução do MTT o ID50 foi de 6 mM para a prodigiosina, 7mM para a violaceína e 500 mM para o Nifurtimox, no teste do VN o ID50 para a prodigiosina foi de 1,0 mM, 12 mM para a violaceína e 250 mM para o Nifurtimox. A prodigiosina resultou em um valor de ID50 de 20 mM, o Nifurtimox de 100 mM e a violaceína de 5 mM obtidos através da inibição da síntese de DNA / Abstract: Chromobacterium violaceum is a widely distributed microorganism. It is in soil, water and in the Rio Negro (Amazon). This Gram negative rod shaped bacteria produces the pigment violacein, which has shown trypanocide activity. Since violacein is produced in small quantity, the inicial purpose of this study was to investigate differents strains of bacteria from Rio Negro which may produce violacein in highest yield. Sediment was collected from Rio Negro, inoculated in simple broth, 30°C /24 h and striated in simple agar. Only three kinds of colonies - white, yellow, and red grew (rod Gram negative bacteria). After two days the white strain changed to violet indicating violacein production. Spectral analysis, UV/Vis (UV/Visible), IR (Infra Red) and NMR (Nuclear Ressonance Magnetic), confirmed the presence of violacein. In order to determine of C. violaceum characteristics and its non pigmented variants, laboratories tests were undertaken. Gram'stainning, motility, morphological, growth and biochemical studies indicated that the white, yellow and violet colonies were C. Violaceum. The red one was Serratia marcescens (Chromobacterium prodigiosum) which produces the red pigment antibiotic prodigiosin. The spectral data (UV/Vis, IR and NMR) reinforce this conclusion. The low number of microorganisms isolated in the sample confirm the high antibiotic activity of the pigments produced by C. Violaceum (violacein) and Serratia marcescens (prodigiosin) in the Rio Negro water. The chemotherapy of Chagas' disease remains an unsolved problem, and the search for alternative drugs is in course. Current therapy of this disease is unsatisfactory and only Nifurtimox is in general used, with several restricted applicability for chronic patients, as well being deleterious effects. Thus, it is of fundamental importance to search for new drugs with different mechanism of action of Nifurtimox in order to avoid these problems. We have found a potential compounds for the treatment of Chagas' disease, the pigments extracted from S. marcescens and C. violaceum, respectively prodigiosin (ID50 of less 100 mM) and violacein (ID50 of 46 mM). Evaluation ID50 through DNA synthesis inhibition, soluble tetrazolium/formazan (MTT) and Neutral Red (NR) tests on V-79 Chinese hamster (M-8) cells were carried out. Using MTT viability test, ID50 was 6 mM for prodigiosin, 7 mM for violacein and 500 mM for Nifurtimox, and for NR test the ID50 was 1.0 mM, 12 mM and 250 mM for prodigiosin, violacein and Nifurtimox, respectively. Prodigiosin resulted in a ID50 value of 20 mM, for violacein of 5 mM and for Nifurtimox of 300 mM obtained through DNA synthesis inhibition / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Rosângela Gonçalves Peccinini / Resumo: Estudos precoces de ADME podem agilizar o processo de desenvolvimento de novos fármacos, selecionando os mais promissores para futuros estudos farmacocinéticos. Nesse sentido, e considerando a necessidade de novos tratamentos para a leishmaniose visceral e para a tripanossomíase americana, as moléculas LINS03006, LINS03011 e LINS03013 com ação sobre o Trypanosoma cruzi e a Leishmania infantum foram desenvolvidas por pesquisadores da UNIFESP/Diadema. O presente trabalho teve como objetivo realizar estudos físico-químicos e de ADME para a seleção das moléculas LINS mais promissoras para futuros estudos in vivo. Métodos analíticos e bioanalíticos por UHPLC/UV foram desenvolvidos para a quantificação dos compostos nos ensaios realizados. Foram realizados estudos de estabilidade química em diferentes pHs (1,2; 7,4 e 8,8), estabilidade metabólica em microssomos de rato e humano, estabilidade ex vivo, coeficientes de partição (log P) e permeabilidade em células Caco-2. Os compostos apresentaram estabilidade de até 24 horas em todos os pHs avaliados, levando à expectativa de que na administração oral não ocorrerá degradação decorrente do pH estomacal, sanguíneo e duodenal. O estudo em plasma de rato resultou, para todos os compostos, estabilidade em tempo suficiente – ao menos 6 horas – com expectativa de que ocorra efeito in vivo. Nos estudos de logP, os compostos apresentam características lipofílicas, favorecendo a permeabilidade e o clearance hepático. No ensaio de permeabilidade... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Early studies of ADME can speed up the development of new drugs, selecting the most promising for future pharmacokinetic studies. In this sense, and considering the need for new treatments for visceral leishmaniasis and american trypanosomiasis, the molecules LINS03006, LINS03011 and LINS03013 with action on Trypanosoma cruzi and Leishmania infantum were developed by researchers from UNIFESP/Diadema. The present work aimed to perform physical-chemical and ADME studies to select the most promising LINS molecules for future in vivo studies. Analytical and bioanalytical methods by UHPLC/UV were developed for the quantification of compounds in the assays performed. Chemical stability studies were performed at different pHs (1.2, 7.4 and 8.8), metabolic stability in rat and human microsomes, ex vivo stability, partition coefficients (log P) and permeability in Caco-2 cells. The compounds exhibited stability of up to 24 hours in all evaluated pHs, leading to the expectation that oral degradation will not occur due to stomach, blood and duodenal pH. The study in rat plasma resulted, for all compounds, stability in sufficient time - at least 6 hours - with the expectation that in vivo effect would occur. In logP studies, the compounds presented lipophilic characteristics, favoring permeability and hepatic clearance. In the permeability assay, the LINS compounds presented Papp > 5.0xE-06 cm/s, which can be classified as medium or high permeability, thus, there is an expectation of abs... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2012-09-06T01:12:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 843.pdf: 1443649 bytes, checksum: f6278c376f285b8d4b94a0381e1cb6da (MD5) Previous issue date: 2005 / As tripanossomíases americana (doença de Chagas) e africana (doença do sono) são causadas por protozoários do gênero Trypanosoma, têm como vetores insetos hematófagos e exibem alta morbidade. As duas tripanossomíases estão entre as doenças humanas mais negligenciadas porque, em que pese a relevância de ambas em termos de saúde pública, não foi feito esforço importante para desenvolver medicamentos eficazes e seguros, principalmente para os estágios mais tardios quando os protozoários atingem e comprometem órgãos vitais como o coração e o SNC. O megazol (MGZ) é um derivado nitroimidazólico com potente atividade contra os tripanossomas. O MGZ poderia ser considerado uma alternativa promissora aos fármacos atualmente empregados, não fossem os indícios de efeito genotóxico, problema freqüente entre os derivados nitroimidazólicos. Situado neste contexto, o objetivo deste trabalho foi reavaliar o potencial genotóxico do MGZ, e iniciar uma série de estudos para verificar se é possível bloqueá-lo com substâncias antimutagênicas, sem comprometer a eficácia tripanossomicida. A avaliação da genotoxicidade do MGZ foi realizada com ensaios in vitro, i.e., indução de aberrações cromossômicas em linfócitos humanos em cultura, e também in vivo, i.e., indução de micronúcleos em células da medula óssea de camundongos. (...) Os resultados obtidos neste trabalho confirmaram que o MGZ é genotóxico. Os resultados do ensaio in vivo sugerem porém que a biodisponibilidade do fármaco administrado por via oral é reduzida. A investigação in vitro do antagonismo da genotoxicidade do MGZ pela vitamina E foi até certo ponto prejudicada pela acentuada citotoxicidade das concentrações de vitamina E (VTE) empregadas (2,5∙10-6M e 5,0∙10-6M). Apesar da pronunciada redução do índice mitótico dos linfócitos humanos em cultura, os resultados sugeriram que o efeito clastogênico induzido pelo MGZ 2,81∙10-4M foi discretamente atenuado. Os efeitos da VTE, e de outras substâncias com atividade antioxidante, sobre a genotoxicidade do MGZ precisa ser melhor estudados antes de conclusões possam ser alcançadas a este respeito.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2015-10-22T19:39:09Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_BenznidazolCombinaçãoAlopurinol.pdf: 1210676 bytes, checksum: b86fb203a1ae60b811ad4d83b65ea6ff (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-10-26T13:01:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_BenznidazolCombinaçãoAlopurinol.pdf: 1210676 bytes, checksum: b86fb203a1ae60b811ad4d83b65ea6ff (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-26T13:01:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_BenznidazolCombinaçãoAlopurinol.pdf: 1210676 bytes, checksum: b86fb203a1ae60b811ad4d83b65ea6ff (MD5) Previous issue date: 2014 / O tratamento da doença de Chagas apresenta limitações relacionadas à sua eficácia variável, particularmente na fase crônica, e aos efeitos adversos frequentes, que podem levar à interrupção do tratamento. A terapia de combinação de fármaco parece ser uma estratégia ideal, já que pode contribuir para o aumento da eficácia do tratamento, diminuição da toxicidade e da probabilidade de desenvolvimento de resistência. No presente estudo foi avaliada a atividade do alopurinol (Al) em combinação com o benznidazol (Bz) na infecção experimental por T. cruzi. Inicialmente, foi verificada a atividade da combinação Bz/Al sobre a infecção de células H9c2 infectadas pela cepa Y de T. cruzi, incubando-as com diferentes concentrações de cada composto isoladamente ou em combinação. Foi utilizado, in vitro, o método de diluição “tabuleiro de dama” (checkerboard) e os resultados foram analisados utilizando índice de combinação (CI) calculado pelo software Calcusyn. A avaliação global dos resultados demonstrou que os CI variaram no intervalo de 0,62 a 1,76, o que sugeriu um efeito aditivo resultante da associação in vitro dos compostos avaliados. Posteriormente, foi realizada a avaliação in vivo da combinação Bz/Al. Para isso, camundongos Swiss fêmeas foram inoculados com 5000 formas tripomastigotas sanguíneos da cepa Y de T. cruzi. O tratamento foi administrado por via oral durante 20 dias consecutivos, iniciado quatro dias após a inoculação. Os animais foram tratados com Bz (100, 75, 50 e 25 mg/kg) ou Al (90, 60 e 30 mg/kg) isoladamente ou em combinação (Bz/Al: 75/90 75/60 75/30, 50/90 , 50/60, 50/30, 25/90 , 25/60 e 25/30 mg/kg ). Os seguintes parâmetros foram utilizados para determinação da cura parasitológica: exame de sangue a fresco durante e até 60 dias após o tratamento e ensaio de PCR em tempo real de amostras de sangue (30 e 180 dias após o tratamento). A análise dos níveis de parasitemia após o tratamento com Bz mostrou um efeito tripanocida dose-dependente. Entretanto, mesmo havendo uma redução significativa do nível de parasitemia após o tratamento, a cura parasitológica foi identificada apenas nos animais tratados com 75 e 100mg de Bz por kg de peso corporal (20 e 70 % de cura, respectivamente). De forma diferente, não foi verificada efeito dose-dependente resultante do tratamento com Al. Além disso, não foi observada redução da parasitemia nem cura entre os animais que receberam diferentes doses desse fármaco. Posteriormente, foi avaliado o efeito das combinações entre Bz/Al, in vivo. O efeito benéfico das combinações dos fármacos foi demonstrado pela redução significativa da parasitemia detectada em todos os animais que receberam a terapia de combinação. Além disso, foi observado um aumento no índice de cura entre os animais tratados com os fármacos em combinação, uma vez que a administração de Bz-75 mg/kg + Al-90 mg/kg ou Bz-75 mg/kg + Al-60 mg/kg induziu 100 % de cura, e a combinação de Bz-75 mg/kg + Al-30 mg/kg ou Bz-50 mg/kg + Al-60 mg/kg induziu, respectivamente, 80 e 20 % de cura. Em conclusão, a combinação de Bz e Al apresentou um efeito benéfico, uma vez que foi identificada cura parasitológica em uma proporção maior de animais tratados com os medicamentos em associação do que naqueles que receberam as mesmas doses de cada fármaco em monoterapia. Nossos resultados reforçam a importância da identificação de combinações de compostos já comercializados que apresentem uma interação positiva no tratamento da infecção por T. cruzi. Esta abordagem pode contribuir para otimizar os custos e tempo investidas na pesquisa relacionada à toxicidade e a biodisponibilidade de novas drogas para o consumo humano. ___________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Current chemotherapy for Chagas disease is unsatisfactory due to its limited and variable efficacy, particularly in chronic phase, and frequent side effects that can lead to treatment discontinuation. Combined therapy is envisioned as an ideal approach since it may improve treatment efficacy and decrease toxicity and resistance likelihood. In this work, we evaluated the activity of the alopurinol (Al) in combination with the benznidazole (Bz) upon T. cruzi infection. First, we investigated the activity of the Bz/Al combination on intracellular parasites of Y stain by incubating T. cruzi-infected H9c2 cells with different concentrations of each compound alone or in combination. In vitro drug interactions were assessed using a “checkerboard method” and the results were analyzed by calculating of the combination index (CI) using Calcusyn software.The overall assessment of the results demonstrated CI (0,62 a 1,76) suggesting an in vitro additive effect between the evaluated drug combination. Subsequently, the in vivo evaluation of the Bz/Al combination was performed in mice infected with 5000 blood tripomastigotes of Y stain. Treatment was administered orally for 20 consecutive days, beginning at 4 days after inoculation. Animals were treated with Bz (100, 75, 50 e 25 mg/kg) or All (90, 60 e 30 mg/kg) alone or in combination (Bz/Al: 75/90, 75/60, 75/30, 50/90, 50/60, 50/30, 25/90, 25/60 e 25/30 mg/kg). The parameters chosen to determine parasitological cure were parasitaemia during and up to 60 days after treatment and blood real time PCR assay (30 and 180 days post treatment). First, the effects of several doses of each drug alone on the evolution of the infection in mice were evaluated. The analysis of parasitemia levels after Bz-treatment showed a dosedependent trypanocidal effect. Although there was significant reduction in the level of parasitemia after treatment, parasitological cure was documented only in animals treated with 75 and100 mg of Bz per kg of body weight (20 and 70 % of cure, respectively). Differently, a dose-dependent effect was not observed among treated animal and the parasitemia reduction or cure was not verified among animals that received different doses of Al. In a second series of data analyses, the activities of the combinations of the Bz/Al were compared. Here the beneficial effect of the drug combinations was demonstrated by a significant reduction of parasitemia detected in all animals that received the combination therapy. Besides increase in rate of cure among animals treated with combination therapy was observed, since the combination of the Bz-75 mg/kg + Al-90 mg/kg or Bz-75 mg/kg + Al-60 mg/kg induced 100% of cure, and the combination of 75 mg/kg + Al-30 mg/kg or Bz-50 mg/kg + Al-60 mg/kg induced, respectively, 80 and 20% of cure. In conclusion, the combination of Bz and Al suggest a beneficial effect, as parasitological cure was observed in a higher proportion of animals treated with the drugs in association than in animals receiving the same dose of each of the drugs in monotherapy. Our results reinforce the importance of identifying alreadymarketed compounds with synergistic effects. This approach may help avoid expensive and time-consuming research on the toxicity and biological availability of drugs for human consumption.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-23Bitstream added on 2014-06-13T18:41:54Z : No. of bitstreams: 1 teixeira_mca_dr_jabo.pdf: 2885202 bytes, checksum: 80086a83bb46ca2cb05bc1ae5ea75a8d (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Trypanosoma evansi é patogênico para a maioria dos animais, acometendo bovinos, bubalinos, caprinos, ovinos, suínos, cães, quatis, capivaras, camelos e outras espécies animais em áreas tropicais e subtropicais do globo terrestre sendo, no Brasil, a doença endêmica no pantanal mato-grossense. O presente estudo teve como fito principal estudar a evolução clínica, as alterações hematológicas, bioquímicas sérica, imunológicas e anatomopatológicas de bovinos infectados experimentalmente com T. evansi. Para tal, foram utilizados oito bovinos, clinicamente sadios e sorologicamente negativos para T. evansi. Três foram mantidos como testemunhos e cinco inoculados com T. evansi. Exames físicos, parasitológicos, hematimétricos e bioquímicos séricos (proteínograma, índice ictérico e glicose) e do líquido cefalorraquidiano foram realizados. Nos exames físicos realizados nos bovinos até 525° DAI não foi notada nenhuma anormalidade clínica com relação à temperatura retal, batimentos cardíacos, frequência respiratória, movimentos ruminais, aspectos de membranas mucosas (nasal, conjuntival, oral, vaginal e/ou prepucial) e dos linfonodos externos (mandibulares, maxilares, parotídeos, cervicais superficiais, sublíacos e mamários). A presença de tripomastigotas foi demonstrada através da prova biológica nos bovinos 01, 06 e 08 no15° DAI, bovinos 06 e 07 no 30° DAI, bovinos 01 e 06 no 45° DAI, bovino 06 no 60° DAI, bovino 01 no 75° DAI. As contagens de hemácias, os teores de hemoglobina e os volumes globulares dos bovinos, experimentalmente infectados, variaram dentro dos limites de normalidade para a espécie bovina. O VGM, HGM e CHGM, apresentam alterações pontuais. / Trypanosoma evansi are pathogenic to most of animals, affecting cattle, buffaloes, goats, sheep, pigs, dogs, coatis, capybaras, camels and other animals in tropical and subtropical areas of the globe, and, in Brazil, it causes an endemic disease in the Pantanal Mato Grosso. This study primarily aimed to study the clinical, hematological, biochemical, immunological and pathological alterations in cattle experimentally infected with T. evansi. For this purpose, we used eight animals, clinically healthy and serologically negative for T. evansi. Three animas were kept as evidence and five were inoculated with T. evansi. Physical, parasitological, hematological and serum biochemical (proteins, icteric index and glucose) and cerebrospinal fluid examination were performed. In the physical examination conducted in cattle up to 525th DAI were not observated any clinical abnormality in concerning rectal temperature, heart rate, respiratory rate, ruminal movements, aspects of the mucous membranes (nasal, conjunctival, oral, vaginal and / or specimen) and external nodes (mandibular, maxillary, parotid, superficial cervical, breast and sublíacos). The presence of trypomastigotes was demonstrated by bioassay in cattle 01, 06 and 08 no 15th DAI, cattle 06 and 07 at 30° DAI, cattle 01 and 06 on the 45 th DAI, cattle 06 in 60 th DAI, cattle 01 in 75 th DAI. Red blood cells counts, hemoglobin content and volume cell of experimentally infected cattle were within normal limits for the bovine species. The MCV, MHC and MCHC, showed specific changes. Physical examination of the cerebrospinal fluid did not show alterations in appearance and coloration. Morever, using the Giensa-stained blood smears, buffy coat technique (BCT) and mouse inoculation procedure were negative for T. evansi tripomastigote. Serum protein concentrations, identified 26 proteins with molecular weights ranging from 20 to 245 KD.