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Estudo clínico, hematológico, bioquímico sérico, parasitológico, imunológico e patológico de bovinos experimentalmente infectados com Trypanosoma evansi Steel, 1885 (Sarcomastigophora: Trypanosomatidae)

Teixeira, Márcia Cristina Alves [UNESP] 23 February 2010 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-23Bitstream added on 2014-06-13T18:41:54Z : No. of bitstreams: 1 teixeira_mca_dr_jabo.pdf: 2885202 bytes, checksum: 80086a83bb46ca2cb05bc1ae5ea75a8d (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Trypanosoma evansi é patogênico para a maioria dos animais, acometendo bovinos, bubalinos, caprinos, ovinos, suínos, cães, quatis, capivaras, camelos e outras espécies animais em áreas tropicais e subtropicais do globo terrestre sendo, no Brasil, a doença endêmica no pantanal mato-grossense. O presente estudo teve como fito principal estudar a evolução clínica, as alterações hematológicas, bioquímicas sérica, imunológicas e anatomopatológicas de bovinos infectados experimentalmente com T. evansi. Para tal, foram utilizados oito bovinos, clinicamente sadios e sorologicamente negativos para T. evansi. Três foram mantidos como testemunhos e cinco inoculados com T. evansi. Exames físicos, parasitológicos, hematimétricos e bioquímicos séricos (proteínograma, índice ictérico e glicose) e do líquido cefalorraquidiano foram realizados. Nos exames físicos realizados nos bovinos até 525° DAI não foi notada nenhuma anormalidade clínica com relação à temperatura retal, batimentos cardíacos, frequência respiratória, movimentos ruminais, aspectos de membranas mucosas (nasal, conjuntival, oral, vaginal e/ou prepucial) e dos linfonodos externos (mandibulares, maxilares, parotídeos, cervicais superficiais, sublíacos e mamários). A presença de tripomastigotas foi demonstrada através da prova biológica nos bovinos 01, 06 e 08 no15° DAI, bovinos 06 e 07 no 30° DAI, bovinos 01 e 06 no 45° DAI, bovino 06 no 60° DAI, bovino 01 no 75° DAI. As contagens de hemácias, os teores de hemoglobina e os volumes globulares dos bovinos, experimentalmente infectados, variaram dentro dos limites de normalidade para a espécie bovina. O VGM, HGM e CHGM, apresentam alterações pontuais. / Trypanosoma evansi are pathogenic to most of animals, affecting cattle, buffaloes, goats, sheep, pigs, dogs, coatis, capybaras, camels and other animals in tropical and subtropical areas of the globe, and, in Brazil, it causes an endemic disease in the Pantanal Mato Grosso. This study primarily aimed to study the clinical, hematological, biochemical, immunological and pathological alterations in cattle experimentally infected with T. evansi. For this purpose, we used eight animals, clinically healthy and serologically negative for T. evansi. Three animas were kept as evidence and five were inoculated with T. evansi. Physical, parasitological, hematological and serum biochemical (proteins, icteric index and glucose) and cerebrospinal fluid examination were performed. In the physical examination conducted in cattle up to 525th DAI were not observated any clinical abnormality in concerning rectal temperature, heart rate, respiratory rate, ruminal movements, aspects of the mucous membranes (nasal, conjunctival, oral, vaginal and / or specimen) and external nodes (mandibular, maxillary, parotid, superficial cervical, breast and sublíacos). The presence of trypomastigotes was demonstrated by bioassay in cattle 01, 06 and 08 no 15th DAI, cattle 06 and 07 at 30° DAI, cattle 01 and 06 on the 45 th DAI, cattle 06 in 60 th DAI, cattle 01 in 75 th DAI. Red blood cells counts, hemoglobin content and volume cell of experimentally infected cattle were within normal limits for the bovine species. The MCV, MHC and MCHC, showed specific changes. Physical examination of the cerebrospinal fluid did not show alterations in appearance and coloration. Morever, using the Giensa-stained blood smears, buffy coat technique (BCT) and mouse inoculation procedure were negative for T. evansi tripomastigote. Serum protein concentrations, identified 26 proteins with molecular weights ranging from 20 to 245 KD.
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EFICÁCIA DE TRÊS MEDICAMENTOS NO CONTROLE DA INFECÇÃO EXPERIMENTAL POR TRYPANOSOMA EVANSI EM RATOS (RATTUS NORVEGICUS) LINHAGEM WISTAR / EFFECTIVENESS OF THREE MEDICATIONS IN THE CONTROL OF THE EXPERIMENTAL INFECTION FOR TRYPANOSOMA EVANSI IN RATS (RATTUS NORVEGICUS) WISTAR STRAIN

Doyle, Rovaina Laureano 15 March 2006 (has links)
This paper aimed to describe some lab and histological findings from an experimental infection of Trypanosoma (Trypanozoon) evansi Steel, 1885 (Balbiani, 1888) in rats (Rattus novergicus) belonging to the Wistar strain, testing the effectiveness of three medications. These animals were divided in 4 groups of 10 each and treated to three different chemical treatments after the detection of more than eight tripomastigotes for visual side of the blood smears at the light microscope with 1000 increase. Was tested injectable oxytetracycline 10%, benzonidazol per oss and injectable diminazene 7% while one infected and untreated group remained as control. Evaluation of treatment efficacy was performed through daily blood smears stained by Panotico Rápido® for 60 days. The rats were necropsied aiming histological examination. Treatment with diminazene was the most efficient since no parasites having significant difference (p < 0.05) between males and females of that group, which presented survive after the treatment of 14,4 days more than the males. Histological alterations findings were not specific. / Este trabalho objetivou verificar os achados laboratoriais e histológicos da infecção experimental por Trypanosoma (Trypanozoon) evansi (Steel, 1885) Balbiani, 1888, em ratos (Rattus norvegicus) da linhagem Wistar, testando a eficácia de três medicamentos. Foram utilizados 40 ratos, divididos em quatro grupos de 10 cada, sendo cada grupo composto por 5 machos e cinco fêmeas, os quais foram tratados com três quimioterápicos distintos após a detecção de parasitemia superior a oito tripomastigotas por campo visual do esfregaço sangüíneo ao microscópio de luz (1000 vezes). Testou-se oxitetraciclina 10% injetável, benzonidazol comprimidos de 100mg e aceturato de diminazeno 7% injetável comparados com um grupo controle, experimentalmente infectado, mas não tratado. As avaliações foram feitas por contagens diárias da presença de hemoparasitas em esfregaço sangüíneo, corado por Panótico Rápido®, por 60 dias. Os ratos foram necropsiados e avaliados histologicamente à procura de alterações microscópicas dos órgãos afetados. O tratamento feito com aceturato de diminazeno foi o mais eficaz no controle da parasitemia, havendo diferença significativa (p < 0.05) entre machos e fêmeas desse grupo, as quais apresentaram período de sobrevida após o tratamento de 14,4 dias superior aos machos. Histologicamente as alterações encontradas nos órgãos afetados foram inespecíficas.
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Estudo clínico, hematológico, bioquímico sérico, parasitológico, imunológico e patológico de bovinos experimentalmente infectados com Trypanosoma evansi Steel, 1885 (Sarcomastigophora: Trypanosomatidae) /

Teixeira, Márcia Cristina Alves. January 2010 (has links)
Orientador: Luiz Carlos Marques / Banca: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Fabiano Antonio Cadioli / Banca: Percílio Brasil dos Passos / Banca: Thais Helena Constantino Patelli / Resumo: Trypanosoma evansi é patogênico para a maioria dos animais, acometendo bovinos, bubalinos, caprinos, ovinos, suínos, cães, quatis, capivaras, camelos e outras espécies animais em áreas tropicais e subtropicais do globo terrestre sendo, no Brasil, a doença endêmica no pantanal mato-grossense. O presente estudo teve como fito principal estudar a evolução clínica, as alterações hematológicas, bioquímicas sérica, imunológicas e anatomopatológicas de bovinos infectados experimentalmente com T. evansi. Para tal, foram utilizados oito bovinos, clinicamente sadios e sorologicamente negativos para T. evansi. Três foram mantidos como testemunhos e cinco inoculados com T. evansi. Exames físicos, parasitológicos, hematimétricos e bioquímicos séricos (proteínograma, índice ictérico e glicose) e do líquido cefalorraquidiano foram realizados. Nos exames físicos realizados nos bovinos até 525° DAI não foi notada nenhuma anormalidade clínica com relação à temperatura retal, batimentos cardíacos, frequência respiratória, movimentos ruminais, aspectos de membranas mucosas (nasal, conjuntival, oral, vaginal e/ou prepucial) e dos linfonodos externos (mandibulares, maxilares, parotídeos, cervicais superficiais, sublíacos e mamários). A presença de tripomastigotas foi demonstrada através da prova biológica nos bovinos 01, 06 e 08 no15° DAI, bovinos 06 e 07 no 30° DAI, bovinos 01 e 06 no 45° DAI, bovino 06 no 60° DAI, bovino 01 no 75° DAI. As contagens de hemácias, os teores de hemoglobina e os volumes globulares dos bovinos, experimentalmente infectados, variaram dentro dos limites de normalidade para a espécie bovina. O VGM, HGM e CHGM, apresentam alterações pontuais. / Abstract: Trypanosoma evansi are pathogenic to most of animals, affecting cattle, buffaloes, goats, sheep, pigs, dogs, coatis, capybaras, camels and other animals in tropical and subtropical areas of the globe, and, in Brazil, it causes an endemic disease in the Pantanal Mato Grosso. This study primarily aimed to study the clinical, hematological, biochemical, immunological and pathological alterations in cattle experimentally infected with T. evansi. For this purpose, we used eight animals, clinically healthy and serologically negative for T. evansi. Three animas were kept as evidence and five were inoculated with T. evansi. Physical, parasitological, hematological and serum biochemical (proteins, icteric index and glucose) and cerebrospinal fluid examination were performed. In the physical examination conducted in cattle up to 525th DAI were not observated any clinical abnormality in concerning rectal temperature, heart rate, respiratory rate, ruminal movements, aspects of the mucous membranes (nasal, conjunctival, oral, vaginal and / or specimen) and external nodes (mandibular, maxillary, parotid, superficial cervical, breast and sublíacos). The presence of trypomastigotes was demonstrated by bioassay in cattle 01, 06 and 08 no 15th DAI, cattle 06 and 07 at 30° DAI, cattle 01 and 06 on the 45 th DAI, cattle 06 in 60 th DAI, cattle 01 in 75 th DAI. Red blood cells counts, hemoglobin content and volume cell of experimentally infected cattle were within normal limits for the bovine species. The MCV, MHC and MCHC, showed specific changes. Physical examination of the cerebrospinal fluid did not show alterations in appearance and coloration. Morever, using the Giensa-stained blood smears, buffy coat technique (BCT) and mouse inoculation procedure were negative for T. evansi tripomastigote. Serum protein concentrations, identified 26 proteins with molecular weights ranging from 20 to 245 KD. / Doutor
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Infecção experimental em caprinos infectados com Trypanosoma evansi Steel, 1885 (Sarcomastigophora: Trypanosomatidae)

Patelli, Thais Helena Constantino [UNESP] 01 December 2006 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-01Bitstream added on 2014-06-13T20:22:02Z : No. of bitstreams: 1 patelli_thc_dr_jabo.pdf: 885814 bytes, checksum: 8a0a41ff00e3f643f8421b9bd752445e (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As tripanossomíases estão entre as doenças parasitárias mais importantes na África, na Ásia e na América do Sul. Trypanossoma evansi tem ampla variedade de hospedeiro e é patogênico para a maioria dos animais domésticos, causando a doença conhecida como “surra”. O presente trabalho teve como objetivo estudar a evolução clínica, as aletracões hematológicas, bioquímicas séricas, parasitológicas e anatomopatológicas em caprinos experimentalmenteinoculados com T. evansi. Foram utlizadas dez fêmeas caprinas, sendo seis inoculadas com 2,38 x 106 tripomastigotas sangüícolas de T. evansi e as quatro outras foram mantidas como testemunhas. Exames clínicos foram realizados duas vezes ao dia durante sessenta dias consecutivos, posteriormente a cada dois dias até o 73° DAI (dias após a inocualção) e quinzenalmente até o final do período experimental (365 dias). Exames hematológicos e bioquímicos foram realizados diariamente até o 14° DAI, posteriormente a intervalos semanais até o 98° DAI e quinzenalmente até o 365 ° DAI. Pesquisa de T. evansi no sangue periférico das cabras foram realizadas em exame de gota espessa, lâminas coradas pelo método de May-Gruenwald e Giemsa, método de concentração de Strout e através da prova biológica (inoculação em ratos). Pelo exame de gota espessa, a presença de T. evansi foi detectada do 21° ao 95° DAI. Todas as cabras albergaram o parasita durante todo o período experimental. A temperatura retal, os movimentos rumenais e as freqüências cardíaca e respiratória não apresentaram variações significativas. Aumento de volume dos linfonodos foi observado em três animais inoculados. A resposta imune humoral foi detectada através da reação de imunofluorescência indireta (RIFI) a partir do 14° DAI, alcançando títulos máximos (1:1280) entre o 28° e 168° DAI. Achados histopatológicos incluem hiperplasia... / Tripanosomiases are among the most serious parasitic diseases in man and other animais in Africa, Asia and South America. Trypanosoma evansi has a wide range of hosts and is pathogenic to most domestic animais causing surra disease. The goal of this study was to observe the clinical evulation, the changes hematiological, biochemical, parasitological and anatomopathology in 90ats experimentally infected with T evansi. Six goats were inoculated with 2,38 x 106 trypanosomes and four were kept as non-infected control. Clinical exams were made twice a day for 60 consecutive days, later even two days until the 73th DAI (days postinoculation) and every other week until the end of the observation period. Hematological and biochemical analysis were performed daily until 14th DAI and weekly until 98th DAI and every other week until the end of the observation period. Detection of the T evansi in goats peripherical blood was made by direct blood, by reparing blood smears satined with May-Gruenwald and Giemsa's stain, by Strout concentration method and througth biological test (rat inoculation). The presence of the parasites was detected between 21th and 95th DAI by direct blood. The biological test showed thet ali inoculated goats were infected until the end of the study period. Rectal temperature, rumenal movements and cardiac and respiratory frequencies did not present significant differences, three inoculated animais present increasing of the external Iymph nodes volumes. Changes hematological and biochemical were observed. Antibodies were detected, through the IFAT by the 14th DAI, reaching maximal titers of 1 :1280 between 28th and 168th DAI. Changes histopathological include hyperplasia of Iymph nodes and fatty degeneration of hepatocytes. This result indicates thet the goats can be reservoir hosts with the Trypanosoma evansi satin used in this work.
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Infecção experimental em caprinos infectados com Trypanosoma evansi Steel, 1885 (Sarcomastigophora: Trypanosomatidae) /

Patelli, Thais Helena Constantino. January 2006 (has links)
Orientador: Luiz Carlos Marques / Banca: José Jurandir Fagliari / Banca: Eduardo Harry Birgel Junior / Banca: Mario Roberto Hatayde / Banca: Pedro Carlos Lucas de Oliveira / Resumo: As tripanossomíases estão entre as doenças parasitárias mais importantes na África, na Ásia e na América do Sul. Trypanossoma evansi tem ampla variedade de hospedeiro e é patogênico para a maioria dos animais domésticos, causando a doença conhecida como "surra". O presente trabalho teve como objetivo estudar a evolução clínica, as aletracões hematológicas, bioquímicas séricas, parasitológicas e anatomopatológicas em caprinos experimentalmenteinoculados com T. evansi. Foram utlizadas dez fêmeas caprinas, sendo seis inoculadas com 2,38 x 106 tripomastigotas sangüícolas de T. evansi e as quatro outras foram mantidas como testemunhas. Exames clínicos foram realizados duas vezes ao dia durante sessenta dias consecutivos, posteriormente a cada dois dias até o 73° DAI (dias após a inocualção) e quinzenalmente até o final do período experimental (365 dias). Exames hematológicos e bioquímicos foram realizados diariamente até o 14° DAI, posteriormente a intervalos semanais até o 98° DAI e quinzenalmente até o 365 ° DAI. Pesquisa de T. evansi no sangue periférico das cabras foram realizadas em exame de gota espessa, lâminas coradas pelo método de May-Gruenwald e Giemsa, método de concentração de Strout e através da prova biológica (inoculação em ratos). Pelo exame de gota espessa, a presença de T. evansi foi detectada do 21° ao 95° DAI. Todas as cabras albergaram o parasita durante todo o período experimental. A temperatura retal, os movimentos rumenais e as freqüências cardíaca e respiratória não apresentaram variações significativas. Aumento de volume dos linfonodos foi observado em três animais inoculados. A resposta imune humoral foi detectada através da reação de imunofluorescência indireta (RIFI) a partir do 14° DAI, alcançando títulos máximos (1:1280) entre o 28° e 168° DAI. Achados histopatológicos incluem hiperplasia... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Tripanosomiases are among the most serious parasitic diseases in man and other animais in Africa, Asia and South America. Trypanosoma evansi has a wide range of hosts and is pathogenic to most domestic animais causing "surra" disease. The goal of this study was to observe the clinical evulation, the changes hematiological, biochemical, parasitological and anatomopathology in 90ats experimentally infected with T evansi. Six goats were inoculated with 2,38 x 106 trypanosomes and four were kept as non-infected control. Clinical exams were made twice a day for 60 consecutive days, later even two days until the 73th DAI (days postinoculation) and every other week until the end of the observation period. Hematological and biochemical analysis were performed daily until 14th DAI and weekly until 98th DAI and every other week until the end of the observation period. Detection of the T evansi in goats peripherical blood was made by direct blood, by reparing blood smears satined with May-Gruenwald and Giemsa's stain, by Strout concentration method and througth biological test (rat inoculation). The presence of the parasites was detected between 21th and 95th DAI by direct blood. The biological test showed thet ali inoculated goats were infected until the end of the study period. Rectal temperature, rumenal movements and cardiac and respiratory frequencies did not present significant differences, three inoculated animais present increasing of the external Iymph nodes volumes. Changes hematological and biochemical were observed. Antibodies were detected, through the IFAT by the 14th DAI, reaching maximal titers of 1 :1280 between 28th and 168th DAI. Changes histopathological include hyperplasia of Iymph nodes and fatty degeneration of hepatocytes. This result indicates thet the goats can be reservoir hosts with the Trypanosoma evansi satin used in this work. / Doutor
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ACETURATO DE DIMINAZENO ASSOCIADO AO SELENITO DE SÓDIO E A VITAMINA E: TESTES IN VITRO E EM RATOS EXPERIMENTALMENTE INFECTADOS COM Trypanosoma evansi / DIMINAZENE ACETURATE ASSOCIATED TO SODIUM SELENITE AND VITAMIN E: TESTS IN VITRO AND IN RATS EXPERIMENTALLY INFECTED WITH Trypanosoma evansi

Tonin, Alexandre Alberto 27 January 2012 (has links)
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The aim of this study was to evaluate the utilization of a standard treatment with diminazene aceturate against the infection caused by T. evansi, associated to sodium selenite and vitamin E. In vitro tests showed trypanocidal effect related to the treatment with diminazene aceturate and sodium selenite, but vitamin E had no harmful effect on the trypanosomes. In vivo experiments utilized a total of 72 adult outbreed females rats, separated into 9 groups (A, B, C, D, E, F, G, H and I), 8 animals each. Group A was the uninfected group; groups B to I were infected with 0.2 mL of blood containing 106 trypanosomes. Parasitemia was estimated daily by microscopic examination of blood smears. Group B served as positive control; group C was treated with diminazene aceturate; group D with sodium selenite; group E with vitamin E; group F received an association of diminazene aceturate and sodium selenite; group G received an association of diminazene aceturate and vitamin E; group H received an association of diminazene aceturate, sodium selenite and vitamin E, and group I received an association of sodium selenite and vitamin E. Diminazene aceturate was administrated in a single dose on the 3rd day post infection (PI). Sodium selenite and vitamin E were administered at the 3rd and 23rd day PI. In vivo tests showed increase of longevity in groups treated with diminazene aceturate associated with sodium selenite (groups F and H). No difference was found between groups C and E, thus the vitamin E did not increase the efficacy of treatment against T. evansi when associated to diminazene aceturate. The curative efficacy of treatments was 37.5, 87.7, 37.7 and 75% to the groups C, F, G and H, respectively. Other treatments showed no efficacy. The sodium selenite when combined with chemotherapy may represent an alternative in the treatment of trypanosomosis. / O objetivo deste estudo foi avaliar a utilização de um tratamento padrão contra a infecção causada pelo T. evansi, baseado na utilização do aceturato de diminazeno associado ao selenito de sódio e a vitamina E. Os testes in vitro mostraram um efeito tripanocida relacionados ao tratamento com aceturato de diminazeno e selenito de sódio; contudo a vitamina E não gerou nenhum efeito nocivo sobre o tripanossomas. Experimentos in vivo utilizaram um total de 72 fêmeas adultas de ratos, separados em 9 grupos (A, B, C, D, E, F, G, H e I), com 8 animais cada grupo. O grupo A serviu como grupo não infectado; grupos de B a I foram infectados com 0,2 mL de sangue contendo 106 tripanossomas. A parasitemia foi estimada diariamente por exame microscópico de esfregaços sanguíneo. O grupo B serviu como controle positivo; grupo C, tratado com aceturato de diminazeno; grupo D, com selenito de sódio; grupo E, com vitamina E; grupo F, recebeu uma associação de aceturato de diminazeno e selenito de sódio; grupo G, associação de aceturato de diminazeno e vitamina E; grupo H, associação de aceturato de diminazeno, selenito de sódio e vitamina E; e por fim o grupo I o qual recebeu uma associação de selenito de sódio e vitamina E. O aceturato de diminazeno foi administrado em dose única no 3º dia pós-infecção (PI). Selenito de sódio e vitamina E foram administradas no 3º e 23º dias PI. Os testes in vivo mostraram aumento da longevidade nos grupos tratados com aceturato de diminazeno associado ao selenito de sódio (grupos F e H). Não foi encontrada diferença entre os grupos C e E, portanto, a vitamina E não aumentou a eficácia do tratamento contra T. evansi quando associado ao aceturato de diminazeno. A eficácia curativa dos tratamentos foi de 37.5, 87.7, 37.7 e 75% para os grupos C, F, G e H, respectivamente. Os demais tratamentos não mostraram eficácia. Assim, podemos sugerir que o selenito de sódio, quando combinado com a quimioterapia pode representar uma alternativa no tratamento da tripanossomose.
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Amplificação do gene da Chaperonina HSP10 do Trypanosoma evansi / Gene amplification of chaperonin HSP10 of Trypanosoma evansi

Christen, Susan Ehlert 20 October 2010 (has links)
Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA10MA080.pdf: 1326677 bytes, checksum: 58057ce0c8eb68eed4a42da002d7ab29 (MD5) Previous issue date: 2010-10-20 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The trypanosomiasis is enzootic caused by several species of the genus Trypanosoma. It is a hemoflagellate widely distributed and of great veterinary importance, because infects a wide variety of mammals. Trypanosoma evansi is the causative agent of disease popularly known as surra , which has great economic importance in Africa, Asia and South America. These protozoa possess digenetic life cycles. When the parasites move from vector to host they suffer a heat shock. The HSPs are found in several pathogens, where the heat shock is a natural event of their biology. The heat shock response is a homeostatic mechanism that protects cells from the deleterious effects of environmental stress. The HSPs have a key role in intracellular work such as DNA replication, cell division, transcription, translation, functions in membrane transport proteins as well as providing assistance to correct protein folding nascent and unfolded by stress accumulation. This work aimed to amplify the HSP10 gene, to be able, afterwards, to observe its expression in trypanosomatids. Rats Wistar were infected with T. evansi, the parasites were purified, the DNA and RNA extraction was made, beyond the reverse transcriptase, PCR, transformation into E. coli DH5&#945; and sequencing of clones. The bands that corresponded to the size of HSP10 gene were selected for clone. The constructions of the inserts selected were subjected to sequencing to verify the correct construction of the clones. The sequencing analysis showed that the sequence obtained has a homology of 40% corresponding to HSP10 hypothetical T. brucei. This is one of the first papers that attempted to identify a gene family of HSPs in T. evansi, that should be used as a chemotherapeutic target / A tripanossomíase é uma enzootia ocasionada por diversas espécies do gênero Trypanosoma. Este é um hemoflagelado amplamente distribuído e de grande importância veterinária, pois infecta uma grande variedade de mamíferos. O Trypanosoma evansi é o agente causador da doença denominada popularmente como surra, que possui grande importância econômica na África, Ásia e América do Sul. Estes protozoários possuem ciclos de vida digenéticos. Quando os parasitos passam do vetor para o hospedeiro estes acabam sofrendo um choque térmico. As HSPs são encontradas em uma variedade de patógenos, onde o choque térmico é um evento natural de sua biologia. A resposta de choque térmico é um mecanismo homeostático que protege as células dos efeitos deletérios do estresse ambiental. As HSPs possuem um papel fundamental no trabalho intracelular como replicação de DNA, divisão celular, transcrição, tradução, funções nas membranas, transporte de proteínas, além de darem assistência correta ao enovelamento de proteínas nascentes e desenoveladas pelo acúmulo de estresse. Este trabalho teve como intuito amplificar o gene da HSP10, para que seja possível futuramente observar sua expressão nos tripanosomatídeos. Ratos Wistar foram infectados com T. evansi, os parasitos foram purificados, efetuou-se a extração de DNA e RNA, além da transcrição reversa, PCR, transformação em E. coli DH5&#945; e o seqüenciamento dos clones. As bandas que corresponderam ao tamanho do gene HSP10 foram selecionadas para clonagem. As construções dos insertos selecionados foram submetidos ao sequenciamento a fim de verificar a construção correta dos clones. A análise do seqüenciamento demonstrou que a sequência obtida possui uma homologia de 40% correspondente a HSP10 hipotética de T. brucei. Este é um dos primeiros trabalhos que buscam identificar um gene da família das HSPs em T. evansi, que poderá ser usado como alvo quimioterápico
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Atividade da adenosina desaminase, concentração de nucleotideos e nucleosideo de adenina em ratos Infectados com Trypanosoma evansi / Activity of adenosine deaminase, concentration of adenine nucleotides and nucleoside in rats infected with Trypanosoma evansi

Silva, Aleksandro Schafer da 09 December 2011 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The purinergic system is known to be an important signaling pathway in different tissues. Among the components of this system have adenosine, a modulator of central nervous, circulatory and immune systems. The concentration of adenosine in the host is controlled by the enzyme adenosine deaminase (ADA), present in tissues, cells and fluids. As a result, the objectives of this study were (1) to determine the ADA activity in Trypanosoma evansi, (2) evaluate the activity of ADA in serum, erythrocytes, lymphocytes and brain of infected rats, and (3) determine the concentration of nucleotides and nucleosides in serum and cerebral cortex of rats infected with T. evansi. In the first study two mice were infected with T. evansi. When these animals showed high parasitemia (±108 parasites/uL) was performed with blood collection and separation of trypomastigotes by DEAE-cellulose column for performing the assays. Spectrometry was performed by the biochemical detection of ADA in the form trypomastigotes of T. evansi. In a second study, we used 39 rats divided into three groups: group A and B (infected) and group C (C1 and C2 control group) Samples of blood and brain samples were collected on day 4 PI (A and C1) and 20 PI (B and C2). From the blood (with anticoagulant) were separated lymphocytes and erythrocytes for measurement of ADA activity, since the serum was obtained from blood samples stored in tubes without anticoagulant. The brain was separated into cerebellum, cerebral cortex, hippocampus and striatum to evaluate the ADA activity in each structure. Decrease of ADA activity in serum and erythrocytes in rats infected with T. evansi when compared not-infected (P<0.05). ADA activity in lymphocytes was decreased at day 4 PI and increased in day 20 PI. There was no difference in ADA activity in the cerebellum. In the cerebral cortex caused a reduction of ADA activity on days 4 and 20 PI. Decrease of ADA activity in hippocampus and striatum in the day 4 and day 20 PI, respectively. In a third study, 24 rats were used, 12 used as a negative control and 12 infected with T. evansi. On day 4 (n = 6 per group) and 20 PI (n = 6 per group) were performed to obtain blood samples of serum and cerebral cortex for analysis. The samples were prepared for quantification of ATP, ADP, AMP and adenosine. This study found increased concentrations of ATP, AMP and adenosine in the brain and serum of rats infected with T. evansi in both periods, except that the levels of adenosine decreased on day 4 PI. The ADP concentration did not change in this study. Therefore, the infection by T. evansi purinergic system components can be changed, may be involved in immune response, in anemia and neurological signs. / O sistema purinérgico é conhecido por ser uma via de sinalização importante em diversos tecidos. Entre os componentes desse sistema destacamos a adenosina, um modulador do sistema nervoso central, circulatório e imunológico. A concentração de adenosina no hospedeiro é controlada pela enzima adenosina deaminase (ADA), presentes em tecidos, células e fluidos. Em virtude disso, os objetivos deste estudo foram (1) determinar a atividade da ADA no Trypanosoma evansi; (2) avaliar a atividade da ADA no soro, eritrócitos, linfócitos e encéfalo e (3) determinar a concentração de nucleotídeos e nucleosideos no soro e córtex cerebral de ratos infectados com T. evansi. Para um primeiro estudo foram infectados dois camundongos com T. evansi. Quando estes animais apresentavam elevada parasitemia (±108 parasito/μL) foi realizada a coleta de sangue e separação dos flagelados por coluna de DEAE-celulose, a fim realização dos ensaios enzimáticos no parasito. Atividade da ADA nas formas trypomastigotas de T. evansi foi determinada por espectofotometria. Em um segundo estudo foi utilizado 39 ratos, divididos em três grupos: grupo A e B (infectado) e grupo C (C1 e C2/controle). Amostras de sangue e encéfalo foram colhidas nos dias 4 pós-infecção (PI) (grupos A e C1) e 20 PI (grupos B e C2). A partir do sangue total colhido com anticoagulante foram separados os linfócitos e eritrócitos para mensuração da atividade da ADA, já o soro foi obtido de amostras de sangue armazenadas em tubos sem anticoagulante. O encéfalo foi separado em cerebelo, córtex cerebral, hipocampo e estriado para avaliar a atividade da ADA em cada estrutura. Então, observou-se redução da atividade de ADA no soro e eritrócitos em ratos infectados com T. evansi em comparação com não-infectados (P <0,05). A atividade de ADA em linfócitos estava diminuída no dia 4 PI e aumentou no dia 20 PI. Não houve diferença da ADA no cerebelo. No córtex cerebral, no hipocampo e estriado ocorreu redução da atividade da ADA nos dia 4 e 20 PI, respectivamente. Em todas as estruturas do encéfalo foi detectada a presença do parasito por PCR. Em um terceiro estudo foram utilizados 24 ratos, sendo 12 controles negativos e outros 12 infectados com T. evansi. Nos dias 4 (n=6 por grupo) e 20 (n=6 por grupo) foram realizadas as coletas de sangue para obtenção do soro e amostras do córtex cerebral para mensuração dos níveis de ATP, ADP, AMP e adenosina. Neste estudo, foi constatado aumento das concentrações de ATP, AMP e adenosina no encéfalo e soro de ratos infectados com T. evansi nos dois períodos avaliados, com exceção dos níveis de adenosina que reduziram no dia 4 PI. Não houve alteração na concentração de ADP. Portanto, na infecção por T. evansi os componentes do sistema purinérgico pode ser alterados, podendo estar envolvido na resposta imunológica, na anemia e nos sinais neurológicos.
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Biossíntese de selenocisteína em Trypanosoma evansi / Biosynthesis of Selenocysteine in Trypanosoma evansi

Tavares, Kaio Cesar Simiano 25 February 2011 (has links)
Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA11MA081.pdf: 22717 bytes, checksum: 41112e9e69fe9ceac2afe9b11e56e60f (MD5) Previous issue date: 2011-02-25 / Trypanosoma evansi is the pathogenic trypanosomatid with the worldwidest distribution, generating economic losses in Africa, South America, Europe, Asia and Oceania. This protozoan is the etiologic agent of the disease know as Surra or Mal das Cadeiras, wich affects almost all species of mammals, with a recent case in humans. An important metabolic pathway described in all the three kingdoms of life is the incorporation of selenium into proteins, wich mainly has an antioxidant function. Selenium is used in the form of the amino acid selenocysteine, which is incorporated into the nascent polypeptide co-translationally through the stop codon "UGA". Some elements plays a key role into this pathway: a signaling nucleotide structure in the messenger RNA (SECIS), a specifc tRNA (tRNASec) and an enzyme complex that allows the conversion of selenium in its active form monoselenophosphate (SPS), its aminoacylation in tRNASec (SerRS, PSTK, SepSecS) and the coupling of nucleotidic and proteic structures (SECIS, EF-Sec, SBP2) in the UGA codon to translation and insertion of selenocysteine into the protein. This work demonstrated that T. evansi express the genes selB (EF-Sec), selC (tRNASec), selD (SPS) and pstk in its mRNA. The domains analysis of T. evansi selB, selD and PSTK genes found regions that are consistent with the predicted proteins functions. The predicted secondary structure of T. evansi tRNASec shares the most of the characteristics of eukaryotic tRNASec. Using Southern Blot, we showed that selB, selD and pstk are single copie genes in T. evansi genomic DNA. The SPS proteis was correctly localized in the total protein extract of the parasite, with a 43 kDa band. The same protein has a cytoplasmatic localization in T. evansi, as showed by indirect immunofluorescence. The gene of a trypanosomatid exclusive selenoprotein, selTRYP, was amplified of the cDNA and sequenced. Through these results, we suggest that T. evansi is capable of using selenium for the formation of selenoproteins, and the presence of the selTRYP, selb, selc, seld and pstk genes may indicate a potential future therapeutic target, since recent data show an increase in the parasite resistance to the commercial available drugs in different continents / O Trypanosoma evansi é o tripanossomatídeo patogênico de maior distribuição mundial, causador de prejuízos econômicos na África, América do Sul, Europa, Ásia e Oceania. Este protozoário é o agente etiológico da doença conhecida como Surra ou Mal das Cadeiras, que afeta praticamente todas as espécies de mamíferos, com um recente caso em humanos. Uma importante via metabólica descrita em todos os reinos da vida é a incorporação de selênio em proteínas, com função, principalmente, antioxidante. O selênio é utilizado na forma do aminoácido selenocisteína, que é incorporada ao polipeptídeo nascente co-traducionalmente através do códon de parada UGA . Para que isto ocorra, são necessárias uma estrutura nucleotídica sinalizadora no RNA mensageiro (SECIS), um RNA transportador específico (tRNASec) e um complexo de enzimas que permitem a conversão do selênio em sua forma ativa, monoselenofosfato (SPS), sua aminoacilação no tRNASec (SerRS, PSTK, SepSecS) e o acoplamento de estruturas nucleotídicas e protéicas (SECIS, EF-Sec, SBP2) para que o códon UGA seja traduzido em selenocisteína e a mesma seja inserida na proteína. Neste trabalho foi demonstrado que o T. evansi expressa os genes selB (EF-Sec), selC (tRNASec), selD (SPS) e PSTK. A análise de domínios dos genes selB, selD e PSTK de T. evansi encontrou regiões condizentes com as características funcionais das proteínas formadas. A estrutura secundária predita do tRNASec de T. evansi compartilha a maioria das características dos tRNASec de eucariotos. Através da técnica de Southern Blot, demonstrou-se que os genes selB, selD e PSTK possuem cópia única no DNA genômico de T. evansi. Utilizando-se Western Blot, a proteína SPS foi localizada corretamente no extrato protéico do protozoário, formando uma banda de 43 kDa. Foi realizada também uma imunolocalização da SPS, sendo que a mesma possui localização citoplasmática neste protozoário. O gene de uma selenoproteína exclusiva de tripanossomatídeos, a selTRYP, foi amplificado do cDNA e parcialmente sequenciado. Através desses resultados, sugere-se que o T. evansi é capaz de utilizar selênio para a formação de selenoproteínas, e a presença dos genes da via de inserção de selenocisteína pode indicar um potencial futuro alvo terapêutico, visto que recentes dados demonstram um crescimento de cepas resistentes aos medicamentos disponíveis no mercado em vários continentes
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Development of diagnostic tools to improve the detection of Trypanosoma evansi in Australia

c.smuts@murdoch.edu.au, Celia Smuts January 2009 (has links)
The aim of this study was to evaluate new methods to improve detection and investigation of the effects of chronic or subclinical infection with Trypanosoma evansi in various mammalian species. Some of the more resistant host species, including pigs and buffaloes, are present in large feral populations in the northern parts of Australia, the area where T. evansi is most likely to gain entry to the country. Existing tests are not sufficiently reliable to detect all cases of disease and they cannot distinguish acute from chronic infections. Furthermore, the tests have different sensitivities in different host species. Surveillance for trypanosomiasis in Australia is problematic because of the need to work in remote parts of northern Australia where provision of a cold-chain for traditional blood and serum storage is difficult. An existing dried blood storage system was modified by treating cotton lint filter paper (Whatman #903) with a commercial post coating buffer (TropBio, Queensland). This treatment increased the longevity of antibodies to T. evansi in serum and blood stored on the paper (detected using an antibody-detection ELISA) compared to samples stored on plain paper, especially when the papers were stored under humid conditions and at high ambient temperatures. Attempts were made to improve the diagnostic utility and repeatability of antibody-ELISAs through the use of 2 recombinant T. brucei antigens (PFRA and GM6) and to optimize a competitive ELISA using RoTat 1.2 variable surface antigen and its monoclonal antibody. Antibody-detection using the two recombinant proteins was not sufficiently specific to enable their use for the detection of T. evansi. The RoTat 1.2 cELISA had good sensitivity and specificity (75% and 98% respectively) when used to test serum from cattle and buffaloes experimentally infected with T. evansi and uninfected animals. However, the test was not able to detect anti-T. evansi antibodies in serum from wallabies, pigs, a dog or a horse that were experimentally infected with T. evansi. The inability of the cELISA to detect anti-T. evansi antibodies may be due to the small number of samples tested or the lack of RoTat 1.2 specific antibodies in the animals tested. The feasibility of using an enzymatic test to detect trypanosome aminotransferase or antibodies to this enzyme was evaluated. Prior publications suggested that the detection of TAT was an appropriate diagnostic tool for the detection of T. evansi infection in camels. However, the results from this study did not support the use of this test for the detection of T. evansi infection in cattle or buffaloes with low to moderate parasitaemia. Trypanosomiasis is an immunological disease that affects most of the body’s organs, with more severe disease developing over time. Attempts were made to determine key cytokine and biochemical patterns that would distinguish infected from uninfected animals and acute from chronic infections. The results from this study showed that there was no specific pattern in serum cytokines or serum biochemistry that could be used to distinguish infected from uninfected animals, or different stages of disease. Immunohistochemistry was used on tissues from buffaloes and mice experimentally infected with T. evansi and T. brucei gambiense respectively to characterise the cellular immune response that was present. The immune response was predominantly cell mediated, with CD3+ T lymphocyte and macrophage infiltration occurring in most tissues. In end stage disease there was often suppression of the immune system with disruption of the architecture of the spleen and a decrease in B lymphocytes in the circulation. Trypanosomes were rarely visible in the tissues and were only seen in those animals with high parasitaemia. Lesions generally became more severe over time, but there was a large variation between animals, which suggests that immunohistochemistry is unsuitable as a diagnostic tool.

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