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Purificação e caraterização de uma protease alcalina do resíduo de processamento da Carapeba prateada (Diapterus rhombeus)

SILVA, Janilson Felix da 03 August 2009 (has links)
Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-02-14T14:46:32Z No. of bitstreams: 1 Janilson Felix da Silva.pdf: 986185 bytes, checksum: 050d633ae1f790751916afcd3c6fb9bb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-14T14:46:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Janilson Felix da Silva.pdf: 986185 bytes, checksum: 050d633ae1f790751916afcd3c6fb9bb (MD5) Previous issue date: 2009-08-03 / The silver mojarra (Diapterus rhombeus) is specie of relevant representation among the fishing community in northeastern Brazil. Also in this region, the fishing is the most representative records despite growing carapeba in extensive systems. Among the parts of the fish are not consumed are the viscera which represent 5% of the total weight of the animals. Thus, to be discarded without treatment, these wastes pose serious environmental problem. However, because they are rich in digestive enzymes, viable for use in certain biotechnological processes these viscera represent an important alternative source of industrial enzymes. Based on this information, the purpose of this study was to purify and characterize an alkaline protease from the viscera of D. rhombeus. Therefore, viscera silver mojarra were used to obtain a crude extract and thereafter used for enzyme purification. The purification process was carried out in three steps: heat treatment (45°C for 30 minutes), precipitation with ammonium sulfate and molecular exclusion chromatography (Sephadex G-75). At the end of the purification process, achieved an increase of 86.80-fold in the specific activity and a yield of 22.34%. An aliquot of purified extract was applied to gel electrophoresis (SDS-PAGE) and its molecular weight was estimated at 24.5 kDa. The optimum pH and optimum temperature for enzyme activity were 8.5 and 55°C, respectively. The enzyme was shown to be sensitive to temperatures above 45°C, after incubation for 30 min, losing 100% of its activity. The values of Km and Kcat of the protease were 0.266 mM and 0.116 mM-1 s-1, respectively, using benzoyl-DL-arginine-p-nitroanilide (BAPNA) as substrate. Its activity was increased in the presence of ions K+, Li+, Ca2+, Mn2+ and Ba2+ ions and inhibited by Fe2+, Cd2+, Cu2+, Al3+, Hg2+, Zn2+ and Pb2+. Tests with protease inhibitors showed that the enzyme was strongly inhibited by TLCK and benzamidine, classic inhibitors of trypsin. The sequence of the first 15 amino acid N-terminal protease was IVGGYECTMHSEAHE and showed high homology with trypsins of various species of fish. The data show that the purified enzyme is one trypsin-like with characteristics compatible to be used in the biotechnology industry. / A Carapeba prateada (Diapterus rhombeus) é uma espécie de relevante representatividade dentre a comunidade pesqueira da região nordeste do Brasil. Ainda nessa região, a pesca artesanal é a mais representativa apesar de registros de cultivo da carapeba em sistemas extensivos. Dentre as partes do peixe não consumidas encontramse as vísceras que correspondem a 5% do peso total dos animais. Desta forma, ao serem descartadas, sem tratamento, esses resíduos representam grave problema ambiental. Entretanto, por serem ricas em enzimas digestivas, viáveis para utilização em determinados processos biotecnológicos essas vísceras representam uma importante fonte alternativa de enzimas industriais. Visando essas informações, o objetivo do presente trabalho foi purificar e caracterizar uma protease alcalina das vísceras de D. rhombeus. Para tanto, vísceras de carapeba prateada foram utilizadas para obtenção de um extrato bruto posteriormente utilizado para purificação enzimática. O processo de purificação foi realizado em três etapas: tratamento térmico (45oC por 30min), precipitação com sulfato de amônio e cromatografia de exclusão molecular (Sephadex G-75). Ao final do processo de purificação obteve-se um incremento de 86,80 vezes na atividade específica e um rendimento de 22,34%. Uma alíquota do extrato purificado foi aplicada em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e o seu peso foi estimado em 24,5 kDa. O pH ótimo e a temperatura ótima para a atividade enzimática foram 8,5 e 55 °C, respectivamente. A enzima demonstrou ser sensível a temperaturas superiores a 45 ºC, após incubação por 30 min, perdendo 100% de sua atividade. Os valores de Km e do Kcat da protease foram 0,266 mM e 0,116 s-1 μM -1, respectivamente, usando benzoil-DLarginina- p-nitroanilida (BAPNA) como substrato. Sua atividade foi aumentada na presença dos íons K+, Li+, Ca2+, Mn2+ e Ba2+ e inibidas pelos íons Fe2+, Cd2+, Cu2+, Al3+, Hg2+, Zn2+ e Pb2+. Testes com inibidores de proteases mostraram que a enzima foi fortemente inibida por TLCK e benzamidina, inibidores clássicos de tripsina. A sequência dos 15 primeiros aminoácidos do N-terminal da protease foi IVGGYECTMHSEAHE e mostrou alta homologia com tripsinas de diversas espécies de peixes. Os dados obtidos demonstram que enzima purificada é uma tripsina com características compatíveis para ser empregada na indústria biotecnológica.
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Composição centesimal e perfil de ácidos graxos do músculo, ovários e fígado de fêmeas selvagens da carapeba listrada Eugerres brasilianus (Cuvier, 1830)

SANTOS, Leilane Bruna Gomes dos 13 February 2014 (has links)
Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-11-01T14:43:24Z No. of bitstreams: 1 Leilane Bruna Gomes dos Santos.pdf: 561824 bytes, checksum: 723a2e2f2fd7993dcf6f40fccbe1972b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-01T14:43:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leilane Bruna Gomes dos Santos.pdf: 561824 bytes, checksum: 723a2e2f2fd7993dcf6f40fccbe1972b (MD5) Previous issue date: 2014-02-13 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The objective of this study was to evaluate the proximate composition and fatty acid profile in the muscle, liver, and ovarian tissues of wild-caught striped mojarra Eugerres brasilianus females to elucidate the importance of these components during sexual maturation. Females were captured in the Santa Cruz Canal, Pernambuco, northeastern Brazil, from August 2012 to April 2013, and divided into four groups according to their ovarian development. Crude protein and total lipid levels in the ovary increased with maturation, and a concomitant decrease in liver protein and lipid levels was observed. Major saturated fatty acids in the muscle, liver and ovary were 14:0 and 16:0, but as no accumulation was observed in the ovaries, these fatty acids were probably oxidized to produce energy during gonadal development. The levels of arachidonic (ARA, 20:4n-6), eicosapentaenoic (EPA, 20:5n-3), docosapentaenoic (DPA, 22:5n-3) and docosahexaenoic (DHA, 22:6n-3) acids increased in the ovary as sexual maturation proceeded. These four highly unsaturated fatty acids (HUFA) accounted for approximately 96% of the total HUFA content of mature ovaries, suggesting a high dietary requirement for these fatty acids. / O objetivo do trabalho foi avaliar a composição centesimal e o perfil de ácidos graxos no músculo, fígado e ovário de fêmeas selvagens da carapeba listrada Eugerres brasilianus a fim de elucidar a importância desses nutrientes durante o desenvolvimento gonadal. As fêmeas foram capturadas no Canal de Santa Cruz, Pernambuco, Brasil, no período de agosto de 2012 a abril de 2013, e divididas em quatro grupos de acordo com seu desenvolvimento ovariano. As concentrações de proteína bruta e de lipídios totais no ovário aumentaram com o desenvolvimento gonadal, e uma diminuição simultânea nas concentrações de proteína e lipídios do fígado foi observada. Os principais ácidos graxos saturados nos três tecidos analisados foram o mirístico (14:0) e o palmítico (16:0), mas, como não foi observado acúmulo nos ovários, eles provavelmente foram oxidados para a produção de energia durante o desenvolvimento gonadal. Os níveis dos ácidos araquidônico (ARA, 20:4n-6), eicosapentaenóico (EPA, 20:5n-3), docosapentaenóico (DPA, 22:5n-3) e docosahexaenóico (DHA, 22:6n-3) aumentaram a medida que o ovário maturava. Estes quatro ácidos graxos altamente insaturados (HUFA) representaram cerca de 96% do total de HUFA nos ovários maduros, sugerindo uma elevada exigência dietética para estes ácidos graxos.
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Aspectos da alimentação e nutrição de três espécies de interesse para a piscicultura marinha : beijupirá (Rachycentron canadum), robalo-flecha (Centropomus undecimalis) e carapeba listrada (Eugerres brasilianus)

SANTOS, Leilane Bruna Gomes dos 03 August 2017 (has links)
Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-10-06T13:35:52Z No. of bitstreams: 1 Leilane Bruna Gomes dos Santos.pdf: 1226458 bytes, checksum: 61fd240c07e666550649b8bf8545b6e6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-06T13:35:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leilane Bruna Gomes dos Santos.pdf: 1226458 bytes, checksum: 61fd240c07e666550649b8bf8545b6e6 (MD5) Previous issue date: 2017-08-03 / The present study evaluated the gastrointestinal transit time, the anatomical characterization of the digestive tract of the cobia (Rachycentron canadum), Brazilian mojarraa (Eugerres brasilianus) and Common snook (Centropomus undecimalis) and the apparent digestibility of different ingredients by Brazilian mojarra. Eight juveniles of each species were sacrificed for anatomical characterization. Gastrointestinal transit time was evaluated in ten individuals of each species that were kept in cylindrical tanks of 300 L. The fish were fed to apparent satiety once daily with an experimental feed containing 10 g.kg -1 of oxide Of titanium. After 3 days, a second diet was offered with a similar composition but containing 10 g.kg -1 of chromium oxide. Every two hours, the feces were collected by sedimentation. The stomagomatic index was higher in the cobia (1.96 ± 0.53). On the other hand, the intestinal coefficient was higher in the Brazilian mojarra (0.57 ± 0.06). The digestive traits of the different species analyzed presented distinct anatomical and histological characteristics, probably due to their different eating habits. However, these anatomical differences had no effect on gastrointestinal transit time, which did not differ between species and was estimated at 18 h. In the digestibility experiment, six rations were prepared. The fish with 43.27g (± 12.90) and 15.40 cm (± 1.33) of weight and total length were distributed in six cylindrical-fiberglass tanks (300L; 12 fish per tank) in a system Recirculation. The dry matter (DM), crude protein (CP), ethereal extract (EE), mineral matter (MM), crude energy (CE) and amino acids (AA) coefficients were estimated. The CDA of the different nutrients of the evaluated ingredients presented values above 62.08%. The CD of the AA reflected the high digestibility of PB. The results show the capacity of the Brazilian mojarra to take advantage of both the animal and vegetable ingredients. / O presente estudo avaliou o tempo de trânsito gastrointestinal, a caracterização anatômica do trato digestivo do beijupirá (Rachycentron canadum), carapeba listrada (Eugerres brasilianus) e robalo-flecha (Centropomus undecimalis) e a digestibilidade aparente de diferentes ingredientes pela carapeba listrada. Oito juvenis de cada espécie foram sacrificados para a caracterização anatômica. O tempo de trânsito gastrointestinal foi avaliado em dez indivíduos de cada espécie que foram mantidos em tanques cilíndricos de 300 L. Os peixes foram alimentados até a saciedade aparente, uma vez por dia, com uma alimentação experimental contendo 10 g.kg-1 de óxido de titânio. Após 3 dias, foi oferecida uma segunda dieta com uma composição similar, mas contendo 10 g.kg-1 de óxido de cromo. A cada duas horas, as fezes foram coletadas por sedimentação. O índice estomagossomático foi maior no beijupirá (1,96 ± 0,53). Por outro lado, o coeficiente intestinal foi maior na carapeba (0,57 ± 0,06). Os traços digestivos das diferentes espécies analisadas apresentaram características anatômicas e histológicas distintas, provavelmente devido a seus diferentes hábitos alimentares. No entanto, essas diferenças anatômicas não tiveram efeito no tempo de trânsito gastrointestinal, que não diferiu entre as espécies e foi estimado em 18 h. No experimento de digestibilidade foram elaboradas seis rações. Os peixes com 43,27g (± 12,90) e 15,40 cm (± 1,33) de peso e comprimento total foram distribuídos em seis tanques cilíndro-cônicos de fibra de vidro (300L; 12 peixes por tanque) em sistema de recirculação. Foram estimados os coeficientes de digestibilidade aparente (CDA) de matéria seca (MS), proteína bruta (PB), extrato etéreo (EE), matéria mineral (MM), energia bruta (EB) e aminoácidos (AA). Os CDA dos diferentes nutrientes dos ingredientes avaliados, apresentaram valores acima de 62,08%. Os CDA dos aminoácidos (AA) refletiram a alta digestibilidade da PB. Os resultados encontrados evidenciam a capacidade da carapeba listrada de aproveitar tanto o ingrediente de origem animal quanto vegetal.
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Dieta e sobreposição de nichos de duas espécies de gerreídeos, Eugerres brasilianus (Cuvier, 1830) e Diapterus rhombeus (Cuvier, 1829) capturadas no canal de Santa Cruz, Itamaracá, Pernambuco

BARBOSA, Robson Tavares 28 February 2012 (has links)
Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-02-20T13:11:23Z No. of bitstreams: 1 Robson Tavares Barbosa.pdf: 4522145 bytes, checksum: 55ba3289221c88cade2ebcf2ee0896bc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-20T13:11:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Robson Tavares Barbosa.pdf: 4522145 bytes, checksum: 55ba3289221c88cade2ebcf2ee0896bc (MD5) Previous issue date: 2012-02-28 / This study evaluated the profiles of seasonal diets of Eugerres brasilianus and Diapterus rhombeus, and food overlap between these species caught in the channel of Santa Cruz, located on the northern coast of the Pernambuco state, from June 2010 to May 2011. The goal was to provide input as a basis for studies aimed at the sustainable use and cultivation of these species. To understand their eating habits, we analyzed 837 individuals of both species, 567 species of E. brasilianus and 270 species of D. rhombeus, which, through its degree of fullness, frequency of occurrence, frequency number and index of food importance, we could verify their diets. As for the evaluation of overlapping niches, we used the Morisita-Horn index and multivariate analysis (Euclidean Distance). The two species have a very diverse food spectrum with high niche overlap (0.97). The most consumed item by both was Polychaeta, item with more than 75% of important food for both species. Bivalvia and Decapoda, were the most consumed by E. brasilianus item after the Polychaeta, with peak consumption during the year. While, for D. rhombeus, the most consumed items after the item Polychaeta were Amphipoda and Stomatopoda. The two species, as well as most individuals Gerreidae family, can be considered generalists because they present a wide food spectrum, opportunistic taking advantage of food in abundance in the environment, and omnivores with a preference for benthic invertebrates, especially polychaetes. / Neste trabalho foram avaliados os perfis sazonais das dietas de Eugerres brasilianus e Diapterus rhombeus, e, a sobreposição alimentar entre estas espécies capturadas no canal de Santa Cruz, localizado no litoral norte do estado de Pernambuco, no período de junho de 2010 a maio de 2011. Teve como objetivo fornecer subsídios que sirvam de base para estudos voltados para o cultivo e uso sustentável destas espécies. Para entender seus hábitos alimentares, foram analisados 837 indivíduos das duas espécies, 567 da espécie E. brasilianus e 270 da espécies D. rhombeus, dos quais, através do seu grau de repleção, freqüência de ocorrência, freqüência numérica e índice de importância alimentar, pôde-se verificar suas dietas. Já para a avaliação da sobreposição de nichos, utilizou-se o índice de Morisita-Horn e análise multivariada (Distância Euclidiana). As duas espécies apresentaram um espectro alimentar bastante variado com alta sobreposição de nichos (0,97). O item mais consumido por ambas foi o item Polychaeta, com mais de 75% de importância alimentar para ambas as espécies. Decapoda e Bivalvia, foram os itens mais consumidos por E. brasilianus depois do item Polychaeta, apresentando picos de consumo durante o ano. Enquanto que, para D. rhombeus, os itens mais consumidos após o item Polychaeta, foram Amphipoda e Stomatopoda. As duas espécies, assim como a maioria dos indivíduos da família Gerreidae, podem ser consideradas generalistas, por apresentarem um variado espectro alimentar, oportunistas por se aproveitarem do alimento em abundância no ambiente, e, onívoras com preferência para invertebrados bentônicos, especialmente para poliquetas.

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