Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-02-14T14:46:32Z No. of bitstreams: 1 Janilson Felix da Silva.pdf: 986185 bytes, checksum: 050d633ae1f790751916afcd3c6fb9bb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-14T14:46:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Janilson Felix da Silva.pdf: 986185 bytes, checksum: 050d633ae1f790751916afcd3c6fb9bb (MD5) Previous issue date: 2009-08-03 / The silver mojarra (Diapterus rhombeus) is specie of relevant representation among the fishing community in northeastern Brazil. Also in this region, the fishing is the most representative records despite growing carapeba in extensive systems. Among the parts of the fish are not consumed are the viscera which represent 5% of the total weight of the animals. Thus, to be discarded without treatment, these wastes pose serious environmental problem. However, because they are rich in digestive enzymes, viable for use in certain biotechnological processes these viscera represent an important alternative source of industrial enzymes. Based on this information, the purpose of this study was to purify and characterize an alkaline protease from the viscera of D. rhombeus. Therefore, viscera silver mojarra were used to obtain a crude extract and thereafter used for enzyme purification. The purification process was carried out in three steps: heat treatment (45°C for 30 minutes), precipitation with ammonium sulfate and molecular exclusion chromatography (Sephadex G-75). At the end of the purification process, achieved an increase of 86.80-fold in the specific activity and a yield of 22.34%. An aliquot of purified extract was applied to gel electrophoresis (SDS-PAGE) and its molecular weight was estimated at 24.5 kDa. The optimum pH and optimum temperature for enzyme activity were 8.5 and 55°C, respectively. The enzyme was shown to be sensitive to temperatures above 45°C, after incubation for 30 min, losing 100% of its activity. The values of Km and Kcat of the protease were 0.266 mM and 0.116 mM-1 s-1, respectively, using benzoyl-DL-arginine-p-nitroanilide (BAPNA) as substrate. Its activity was increased in the presence of ions K+, Li+, Ca2+, Mn2+ and Ba2+ ions and inhibited by Fe2+, Cd2+, Cu2+, Al3+, Hg2+, Zn2+ and Pb2+. Tests with protease inhibitors showed that the enzyme was strongly inhibited by TLCK and benzamidine, classic inhibitors of trypsin. The sequence of the first 15 amino acid N-terminal protease was IVGGYECTMHSEAHE and showed high homology with trypsins of various species of fish. The data show that the purified enzyme is one trypsin-like with characteristics compatible to be used in the biotechnology industry. / A Carapeba prateada (Diapterus rhombeus) é uma espécie de relevante representatividade dentre a comunidade pesqueira da região nordeste do Brasil. Ainda nessa região, a pesca artesanal é a mais representativa apesar de registros de cultivo da carapeba em sistemas extensivos. Dentre as partes do peixe não consumidas encontramse as vísceras que correspondem a 5% do peso total dos animais. Desta forma, ao serem descartadas, sem tratamento, esses resíduos representam grave problema ambiental. Entretanto, por serem ricas em enzimas digestivas, viáveis para utilização em determinados processos biotecnológicos essas vísceras representam uma importante fonte alternativa de enzimas industriais. Visando essas informações, o objetivo do presente trabalho foi purificar e caracterizar uma protease alcalina das vísceras de D. rhombeus. Para tanto, vísceras de carapeba prateada foram utilizadas para obtenção de um extrato bruto posteriormente utilizado para purificação enzimática. O processo de purificação foi realizado em três etapas: tratamento térmico (45oC por 30min), precipitação com sulfato de amônio e cromatografia de exclusão molecular (Sephadex G-75). Ao final do processo de purificação obteve-se um incremento de 86,80 vezes na atividade específica e um rendimento de 22,34%. Uma alíquota do extrato purificado foi aplicada em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e o seu peso foi estimado em 24,5 kDa. O pH ótimo e a temperatura ótima para a atividade enzimática foram 8,5 e 55 °C, respectivamente. A enzima demonstrou ser sensível a temperaturas superiores a 45 ºC, após incubação por 30 min, perdendo 100% de sua atividade. Os valores de Km e do Kcat da protease foram 0,266 mM e 0,116 s-1 μM -1, respectivamente, usando benzoil-DLarginina- p-nitroanilida (BAPNA) como substrato. Sua atividade foi aumentada na presença dos íons K+, Li+, Ca2+, Mn2+ e Ba2+ e inibidas pelos íons Fe2+, Cd2+, Cu2+, Al3+, Hg2+, Zn2+ e Pb2+. Testes com inibidores de proteases mostraram que a enzima foi fortemente inibida por TLCK e benzamidina, inibidores clássicos de tripsina. A sequência dos 15 primeiros aminoácidos do N-terminal da protease foi IVGGYECTMHSEAHE e mostrou alta homologia com tripsinas de diversas espécies de peixes. Os dados obtidos demonstram que enzima purificada é uma tripsina com características compatíveis para ser empregada na indústria biotecnológica.

Made available in DSpace on 2014-06-12T22:59:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo282_1.pdf: 1614360 bytes, checksum: 8890d8b4ca39de26cd40c307d4b2aaf0 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Neste estudo foi descrita a ecologia alimentar das diferentes fases ontogenéticas (juvenil, sub-adulto e adulto) de três espécies de Gerreidae (Eugerres brasilianus, Eucinostomus melanopterus e Diapterus rhombeus), as taxas de crescimento das variáveis morfológicas relacionadas coma obtenção de alimento e as características físico-químicas dos habitats utilizados foram correlacionadas com a presença de cada fase ontogenética dessas espécies. Os indivíduos foram coletados no canal principal do estuário do Rio Goiana (NE/Brasil) no período de dezembro de 2005 a dezembro de 2008, com o uso de uma rede de arrasto com porta e em canais de maré da porção inferior do estuário, com o uso de uma rede do tipo Fyke entre os meses de abril a maio de 2008. As três espécies apresentaram um hábito alimentar exclusivamente zoobentivoro, sendo micros crustáceos (copépodas e ostracodas), poliquetas e moluscos (Gastropoda e Bivalve) os principais itens alimentares. Mudanças na dieta foram detectadas ao longo das fases ontogenéticas das espécies, além de interações para o número e peso de itens entre as fases ontogenéticas das espécies, indicando competição pelos recursos. Durante a fase juvenil, E. brasilianus apresentou uma preferência por tentáculos de terebellidae e ostracoda, na fase sub-adulta os itens mais importantes foram poliquetas (Nereididae) e ostracoda, ao atingir a fase adulta a dieta foi composta principalmente por gastropodas. E. melanopterus ingeriu copépodas principalmente durante a fase juvenil, sendo gradualmente substituídos por Nereididae a medida que os indivíduos atingem a fase adulta. D. rhombeus foi considerada a espécie mais especializada, durante a fase juvenil ingeriu basicamente tentáculos de Terebellidae, na fase sub-adulta esse item foi alternado com o de calanoida e quando adulto passou a ser principalmente de Harpacticoida. Diferenças para a diversidade (N1) e equitatividade xii (E2) foram detectadas em relação ao número e peso de presas ingeridas entre as espécies. Entre fases ontogenéticas, houve diferenças no E2 em número para E. brasilianus e em número e peso para D. rhombeus. Todas as medidas morfométricas apresentaram forte relação com o comprimento total. A abertura e largura da boca e o comprimento do focinho, apresentaram um crescimento mais acelerado (β1 > 1) durante a fase juvenil das espécies, principalmente para E. melanopterus e D. rhombeus, o que favoreceu um melhor desempenho para consumir itens menores e mais abundantes. A salinidade foi um dos principais fatores na determinação do uso de cada habitat pelas diferentes fases ontogenéticas das espécies. A ingestão de fios de nylon pelas três espécies indica uma contaminação por materiais plásticos no estuário do Rio Goiana

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-02-20T13:11:23Z No. of bitstreams: 1 Robson Tavares Barbosa.pdf: 4522145 bytes, checksum: 55ba3289221c88cade2ebcf2ee0896bc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-20T13:11:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Robson Tavares Barbosa.pdf: 4522145 bytes, checksum: 55ba3289221c88cade2ebcf2ee0896bc (MD5) Previous issue date: 2012-02-28 / This study evaluated the profiles of seasonal diets of Eugerres brasilianus and Diapterus rhombeus, and food overlap between these species caught in the channel of Santa Cruz, located on the northern coast of the Pernambuco state, from June 2010 to May 2011. The goal was to provide input as a basis for studies aimed at the sustainable use and cultivation of these species. To understand their eating habits, we analyzed 837 individuals of both species, 567 species of E. brasilianus and 270 species of D. rhombeus, which, through its degree of fullness, frequency of occurrence, frequency number and index of food importance, we could verify their diets. As for the evaluation of overlapping niches, we used the Morisita-Horn index and multivariate analysis (Euclidean Distance). The two species have a very diverse food spectrum with high niche overlap (0.97). The most consumed item by both was Polychaeta, item with more than 75% of important food for both species. Bivalvia and Decapoda, were the most consumed by E. brasilianus item after the Polychaeta, with peak consumption during the year. While, for D. rhombeus, the most consumed items after the item Polychaeta were Amphipoda and Stomatopoda. The two species, as well as most individuals Gerreidae family, can be considered generalists because they present a wide food spectrum, opportunistic taking advantage of food in abundance in the environment, and omnivores with a preference for benthic invertebrates, especially polychaetes. / Neste trabalho foram avaliados os perfis sazonais das dietas de Eugerres brasilianus e Diapterus rhombeus, e, a sobreposição alimentar entre estas espécies capturadas no canal de Santa Cruz, localizado no litoral norte do estado de Pernambuco, no período de junho de 2010 a maio de 2011. Teve como objetivo fornecer subsídios que sirvam de base para estudos voltados para o cultivo e uso sustentável destas espécies. Para entender seus hábitos alimentares, foram analisados 837 indivíduos das duas espécies, 567 da espécie E. brasilianus e 270 da espécies D. rhombeus, dos quais, através do seu grau de repleção, freqüência de ocorrência, freqüência numérica e índice de importância alimentar, pôde-se verificar suas dietas. Já para a avaliação da sobreposição de nichos, utilizou-se o índice de Morisita-Horn e análise multivariada (Distância Euclidiana). As duas espécies apresentaram um espectro alimentar bastante variado com alta sobreposição de nichos (0,97). O item mais consumido por ambas foi o item Polychaeta, com mais de 75% de importância alimentar para ambas as espécies. Decapoda e Bivalvia, foram os itens mais consumidos por E. brasilianus depois do item Polychaeta, apresentando picos de consumo durante o ano. Enquanto que, para D. rhombeus, os itens mais consumidos após o item Polychaeta, foram Amphipoda e Stomatopoda. As duas espécies, assim como a maioria dos indivíduos da família Gerreidae, podem ser consideradas generalistas, por apresentarem um variado espectro alimentar, oportunistas por se aproveitarem do alimento em abundância no ambiente, e, onívoras com preferência para invertebrados bentônicos, especialmente para poliquetas.