O câncer colorretal é um dos tumores humanos mais freqüentes e a terceira causa de morte relacionada ao câncer no mundo. Apesar de importantes progressos terapêuticos, os resultados na doença avançada ainda são muito modestos. Isto deve-se ao fato de que a droga mais utilizada nesta neoplasia, o antimetabólito 5-fluorouracil (5-FU), foi desenvolvido a mais de 40 anos produzindo taxas de respostas de somente 10-15%. Recentemente, o inibidor da topoisomerase I irinotecan (CPT-11) demonstrou, em carcinoma de cólon avançado, respostas comparáveis tanto em pacientes não tratados quanto naqueles que tiveram recaída após terapia com 5-FU. Estes resultados justificam a avaliação da combinação 5-FU/CPT-11 nesta doença. Apesar das respostas dos estudos clínicos serem promissoras, a melhor seqüência de administração destes agentes ainda não foi determinada. Neste estudo, avaliamos a combinação CPT-11/5-FU quanto ao aumento da inibição do crescimento celular quando comparada com os agentes sozinhos nas linhagens celulares de carcinoma de cólon humano SW620, HT-29 e SNU-C4. Para isto, as células foram expostas às drogas sozinhas ou a várias combinações e seqüências de dose baixa e fixa (IC20) de um dos agentes na presença de dose alta e seriada do outro. As células foram avaliadas imediatamente após os tratamentos e/ou cultivadas por mais 2 dias em meio de cultura sem drogas através de coloração com sulforodamina B. As interações entre CPT-11 e 5-FU foram avaliadas por um programa de computador que permite calcular os índices de combinação (CIs) das drogas indicando sinergismo, adição, ou antagonismo (CI < 1, = 1, ou > 1, respectivamente). As respostas celulares foram relacionadas com as atividades das enzimas timidilato sintase, topoisomerase I e carboxil esterase, que foram determinadas através de ensaio que mede os sítios de ligação e atividade catalítica da enzima, ensaio de decatenação do DNA e método espectrofotométrico, respectivamente. Estando a toxicidade no DNA envolvida no mecanismo de ação das duas drogas, também relacionamos as respostas celulares com a introdução de danos ao DNA por método fluorescente. Para melhor entendermos as interações entre as drogas, examinamos os efeitos da exposição à IC20, IC50 e/ou IC80 do CPT-11 ou 5-FU por 2 h ou 24 h em alvos celulares possivelmente relacionados com a citotoxicidade destes agentes. Estes incluem: capacidade de reparo por excisão do 10 DNA, distribuição das células nas fases do ciclo celular, integridade da membrana plasmática e formação de complexos DNA-topoisomerase I. Para isto, utilizamos método de incorporação de [3H-metil]timidina, citometria de fluxo, liberação de lactato desidrogenase (LDH) no meio de cultura e ensaio de precipitação com SDS, respectivamente. Os estudos de inibição do crescimento celular revelaram valores de IC50 do 5-FU nas linhagens SW620, HT-29 e SNU-C4 de aproximadamente 15, 8 e 2 µM, respectivamente, e do CPT-11 próximos a 2, 2 e 4 µM, respectivamente. As diferentes sensibilidades ao 5-FU nas três linhagens foram determinadas principalmente pela diferença na afinidade ao substrato. As respostas comparáveis obtidas pela exposição ao CPT-11 podem ser explicadas pelo equilíbrio entre as diferentes atividades das enzimas topoisomerase I e carboxil esterase, entre as linhagens. O programa de análise da combinação das drogas mostrou adição ou sinergismo após exposição a IC20 do CPT-11 seguido do 5-FU, nas três linhagens celulares. Por outro lado, o pré-tratamento com IC20 do 5-FU antagonizou a inibição do crescimento mediada pelo CPT-11. Nenhum dos tratamentos simultâneos determinou um aumento na inibição do crescimento nas linhagens SW620 e HT-29; mas mostraram adição ou antagonismo na linhagem SNU-C4. Observamos um significativo acréscimo na introdução de danos ao DNA nas linhagens celulares SW620 e HT-29 somente quando a IC20 do CPT-11 precedeu a IC50 do 5-FU. Já na linhagem SNU-C4, não somente este tratamento, mas também a utilização simultânea dos agentes introduziu mais dano ao DNA. Os tratamentos por 2 h ou 24 h com IC20, IC50, e/ou IC80 do 5-FU ou CPT-11 não causaram mudanças significativas na distribuição das células nas fases do ciclo celular, concentração de LDH no meio de cultura, ou formação de complexos DNA-topoisomerse I. Indicando que alterações nestes processos não estão envolvidas com os efeitos modulatórios dos pré-tratamentos na citotoxicidade das drogas. Entretanto, a incorporação de [3H-metil]timidina no DNA de células tratadas com CPT-11, aumentou em função da dose e tempo de exposição à droga. Este resultado sugere que o dano ao DNA introduzido pelo CPT-11 depende da dose e tempo de exposição podendo ser reparado por mecanismos de excisão. Somente foi observada significativa incorporação de [3H-metil]timidina em células tratadas com IC20 do 5-FU por 2 h, sugerindo que o reparo por excisão só ocorre após exposição por curto período e à doses baixas deste agente. Juntos, os resultados deste estudo mostraram que tanto os efeitos anti-proliferativos quanto a introdução de danos ao DNA pela combinação CPT-11/5-FU em dose baixa e fixa de um agente junto com dose alta do outro, nas linhagens celulares de carcinoma de cólon humano SW620, HT-29 e SNU-C4, dependem da seqüência de administração das drogas. Estes achados podem ter sido determinados pelos diferentes efeitos do tratamento com uma dose baixa dos agentes nos mecanismos de reparo por excisão do DNA.

Aproximadamente 3% das neoplasias malignas são originadas da cavidade bucal e representadas na maioria pelo carcinoma espinocelular (CEC). Estudos tem demostrado variações nas características clínico-epidemiológicas do CEC de boca de acordo com área geográfica da população estudada. A compreensão das características de uma população específica é importante por muitas razões, incluindo a compreensão da extensão do problema, fatores relacionados com seu desenvolvimento, seu diagnóstico e prognóstico. No entanto, poucos estudos têm sido relatados sobre essa lesão na população Uruguaia. O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil demográfico, os aspectos clínicos e terapêuticos, assim como, os fatores prognósticos dos carcinomas espinocelulares de boca (CECB) diagnosticados em serviços públicos no Uruguai. Foram selecionados todos os prontuários médicos de pacientes com diagnóstico histopatológico de carcinoma espinocelular de boca primário atendidos no período de Janeiro 2000 a Dezembro de 2010 em Hospitais Públicos de Uruguai. Os prontuários foram avaliados manualmente e foram coletadas informações quanto aos dados demográficos, fatores de risco, características clínicas do tumor, tratamento e evolução. Foi confeccionado um banco de dados com as informações coletadas nos prontuários. A análise descritiva de todas as variáveis foi realizada e a existência de associação entre as variáveis independentes e os desfechos (estadiamento clínico e evolução) foi avaliada através do teste Qui-quadrado de Pearson e o teste de Fisher, o nível de significância estabelecido foi de 5%. Dentre os 200 prontuários de pacientes analisados, 79.4% eram homens com distribuição homem:mulher de 3.8:1. A média de idade foi de 60,75 anos. A análise univariada mostrou que o estadiamento clínico tem associação significativa com o tabagismo (p = 0,04), quantidade de tabaco (p = 0,018), aspecto clínico (p = 0,009), tamanho do tumor (p = 0,001) e metástases regionais (p = 0,001). Os homens portadores de CEC foram associados com o consumo de tabaco e álcool. O prognóstico desfavorável dos CECB (óbito) foi significativamente relacionado com aspecto clínico (p = 0,02), tamanho (p = 0,001), metástases regionais (p = 0,016), estadiamento clínico (p = 0,002) e tratamento (p = 0,001). A maioria dos pacientes com CECB que evoluiram a óbito (pior prognóstico), exibiram úlcera (93,9%), tamanhos avançados - T3/T4 (90,2%), metástases regionais (66%), foram classificadas no estágio III/IV (94,1%) e receberam tratamento não cirúrgico ou paliativos. Conclui-se que no Uruguai o diagnóstico do CECB é tardio e associado a baixas taxas de sobrevida. Medidas educativas e preventivas para a população assim como, investimentos em estratégias para melhorar o diagnóstico precoce devem ser uma meta neste país. / Nearly 3% of malignant neoplasms originate from the oral cavity and are mostly represented by squamous cell carcinoma (SCC). Studies have demonstrated variations in clinical and epidemiological features of oral SCC according to geographical area of the study population. Understanding the characteristics of a specific population is important for many reasons, including the comprehension of the extent of the problem, factors associated with their development, diagnosis and prognosis. However, few studies have been developed in Uruguayan population about this lesion. The aims of the present study were to evaluate the demographic, clinical and therapeutic features, as well as, the predictive factors of poor prognosis in patients with primary OSCC evaluated during a period of 10-years in public health services in Uruguay. Medical records of patients with histological diagnosis of primary OSCC treated between January 2000 and December 2010 in Uruguayan Public Hospitals were selected. Information regarding demographics, risk factors, clinical features, treatment and outcome was collected. A descriptive analysis was performed, and the existence of association between independent variables and outcomes (clinical stage and evolution) was assessed using the Pearson Chi-Square test and Fisher's test. Out of a total of 200 patients with OSCC, 79.4% were men with 3.8:1 male:female ratio. The mean age was 60.75 years. Univariate analysis showed that clinical stage have significant association with smoking (p=0,04), amount of tobacco (p=0.018), clinical aspect (p=0.009), tumor size (p=0.001) and regional metastasis (p=0.001). OSCC male patients were associated with tobacco and alcohol comsumption. Worse overall survival (poor prognosis) was significant associated with clinical aspect (p=0.02), size (p=0.001), regional metastasis (p=0.016), clinical stage (p=0.002) and treatment (p=0.001). The majority of OSCC patients with worse overall survival presented oral ulcer (93.9%), T3/T4 tumor size (90.2%), regional metastasis (66%), were classified at stage III/IV (94.1%) and received nonsurgical or palliatives treatment. We conclude that in Uruguay the diagnosis of OSCC is late associated to low survival rate. Educational and preventive measures for the population and investment in strategies to improve early diagnosis should be a goal in this country.

Thyroid carcinoma is the most common endocrine malignant neoplasia. Differentiated thyroid carcinomas (DTC), represent more than 90% of all thyroid carcinomas and comprise the papillary (PTC) and follicular thyroid carcinomas (FTC) subtypes. Anaplastic thyroid carcinoma (ATC) corresponds to less than 5% of all thyroid tumors. The etiology of DTC is not fully understood. Several genetic events have been implicated on differentiated thyroid tumorigenesis. Point mutations in BRAF and RAS genes and RET/PTC rearrangements are observed in about 70% of PTC cases. Follicular carcinomas commonly harbor RAS mutations and PAX8-PPARJ rearrangements. Anaplastic carcinomas may harbor a wide set of genetic alterations, as in genes encoding effectors in the mitogen-activated protein kinase (MAPK), phosphatidylinositol 3-kinases (PI3K) and G-Catenin signaling pathways. These distinct genetic alterations are able to activate constitutively several signaling pathways as MAPK, PI3K and G-Catenin, which have been implicated on thyroid cancer development and progression. In this context, the evaluation of the specific oncogenes, as well as the knowledge of their effects on thyroid carcinomas can provide important information about the disease presentation, prognosis and therapy, through the development of specific tyrosine kinase targets. Particularly in this review, we explore the main genetic alterations observed in follicular cell-derived thyroid carcinomas as well as the molecular mechanisms involved in thyroid tumors development and progression.

O câncer colorretal é um dos tumores humanos mais freqüentes e a terceira causa de morte relacionada ao câncer no mundo. Apesar de importantes progressos terapêuticos, os resultados na doença avançada ainda são muito modestos. Isto deve-se ao fato de que a droga mais utilizada nesta neoplasia, o antimetabólito 5-fluorouracil (5-FU), foi desenvolvido a mais de 40 anos produzindo taxas de respostas de somente 10-15%. Recentemente, o inibidor da topoisomerase I irinotecan (CPT-11) demonstrou, em carcinoma de cólon avançado, respostas comparáveis tanto em pacientes não tratados quanto naqueles que tiveram recaída após terapia com 5-FU. Estes resultados justificam a avaliação da combinação 5-FU/CPT-11 nesta doença. Apesar das respostas dos estudos clínicos serem promissoras, a melhor seqüência de administração destes agentes ainda não foi determinada. Neste estudo, avaliamos a combinação CPT-11/5-FU quanto ao aumento da inibição do crescimento celular quando comparada com os agentes sozinhos nas linhagens celulares de carcinoma de cólon humano SW620, HT-29 e SNU-C4. Para isto, as células foram expostas às drogas sozinhas ou a várias combinações e seqüências de dose baixa e fixa (IC20) de um dos agentes na presença de dose alta e seriada do outro. As células foram avaliadas imediatamente após os tratamentos e/ou cultivadas por mais 2 dias em meio de cultura sem drogas através de coloração com sulforodamina B. As interações entre CPT-11 e 5-FU foram avaliadas por um programa de computador que permite calcular os índices de combinação (CIs) das drogas indicando sinergismo, adição, ou antagonismo (CI < 1, = 1, ou > 1, respectivamente). As respostas celulares foram relacionadas com as atividades das enzimas timidilato sintase, topoisomerase I e carboxil esterase, que foram determinadas através de ensaio que mede os sítios de ligação e atividade catalítica da enzima, ensaio de decatenação do DNA e método espectrofotométrico, respectivamente. Estando a toxicidade no DNA envolvida no mecanismo de ação das duas drogas, também relacionamos as respostas celulares com a introdução de danos ao DNA por método fluorescente. Para melhor entendermos as interações entre as drogas, examinamos os efeitos da exposição à IC20, IC50 e/ou IC80 do CPT-11 ou 5-FU por 2 h ou 24 h em alvos celulares possivelmente relacionados com a citotoxicidade destes agentes. Estes incluem: capacidade de reparo por excisão do 10 DNA, distribuição das células nas fases do ciclo celular, integridade da membrana plasmática e formação de complexos DNA-topoisomerase I. Para isto, utilizamos método de incorporação de [3H-metil]timidina, citometria de fluxo, liberação de lactato desidrogenase (LDH) no meio de cultura e ensaio de precipitação com SDS, respectivamente. Os estudos de inibição do crescimento celular revelaram valores de IC50 do 5-FU nas linhagens SW620, HT-29 e SNU-C4 de aproximadamente 15, 8 e 2 µM, respectivamente, e do CPT-11 próximos a 2, 2 e 4 µM, respectivamente. As diferentes sensibilidades ao 5-FU nas três linhagens foram determinadas principalmente pela diferença na afinidade ao substrato. As respostas comparáveis obtidas pela exposição ao CPT-11 podem ser explicadas pelo equilíbrio entre as diferentes atividades das enzimas topoisomerase I e carboxil esterase, entre as linhagens. O programa de análise da combinação das drogas mostrou adição ou sinergismo após exposição a IC20 do CPT-11 seguido do 5-FU, nas três linhagens celulares. Por outro lado, o pré-tratamento com IC20 do 5-FU antagonizou a inibição do crescimento mediada pelo CPT-11. Nenhum dos tratamentos simultâneos determinou um aumento na inibição do crescimento nas linhagens SW620 e HT-29; mas mostraram adição ou antagonismo na linhagem SNU-C4. Observamos um significativo acréscimo na introdução de danos ao DNA nas linhagens celulares SW620 e HT-29 somente quando a IC20 do CPT-11 precedeu a IC50 do 5-FU. Já na linhagem SNU-C4, não somente este tratamento, mas também a utilização simultânea dos agentes introduziu mais dano ao DNA. Os tratamentos por 2 h ou 24 h com IC20, IC50, e/ou IC80 do 5-FU ou CPT-11 não causaram mudanças significativas na distribuição das células nas fases do ciclo celular, concentração de LDH no meio de cultura, ou formação de complexos DNA-topoisomerse I. Indicando que alterações nestes processos não estão envolvidas com os efeitos modulatórios dos pré-tratamentos na citotoxicidade das drogas. Entretanto, a incorporação de [3H-metil]timidina no DNA de células tratadas com CPT-11, aumentou em função da dose e tempo de exposição à droga. Este resultado sugere que o dano ao DNA introduzido pelo CPT-11 depende da dose e tempo de exposição podendo ser reparado por mecanismos de excisão. Somente foi observada significativa incorporação de [3H-metil]timidina em células tratadas com IC20 do 5-FU por 2 h, sugerindo que o reparo por excisão só ocorre após exposição por curto período e à doses baixas deste agente. Juntos, os resultados deste estudo mostraram que tanto os efeitos anti-proliferativos quanto a introdução de danos ao DNA pela combinação CPT-11/5-FU em dose baixa e fixa de um agente junto com dose alta do outro, nas linhagens celulares de carcinoma de cólon humano SW620, HT-29 e SNU-C4, dependem da seqüência de administração das drogas. Estes achados podem ter sido determinados pelos diferentes efeitos do tratamento com uma dose baixa dos agentes nos mecanismos de reparo por excisão do DNA.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-25 / A heparanase-1 (HPA1) é uma endo-β-glucuronidase que degrada ligações glicosídicas intrassacarídicas entre a hexosamina e ácido glucurônico de cadeias de heparam sulfato, constituintes dos proteoglicanos de matriz extracelular e superfície celular. Seu gene encontra-se localizado no cromossomo 4 humano (4q21,3). A HPA1 gera oligossacarídeos que estão envolvidos na proliferação celular, angiogênese e diferenciação celular relacionados com o desenvolvimento de tumores e metástases. A heparanase-2 (HPA2) é codificada pelo cromossomo 10q23-24. Existem três isoformas da HPA2 de 480, 534 e 592 aminoácidos. As análises dessas proteínas evidenciam que todas essas isoformas são proteínas intracelulares, associadas à membrana, contendo a porção C-terminal voltada para o citoplasma e não apresentam atividade enzimática. O presente estudo tem por objetivo identificar e quantificar a expressão de HPA1 (isoformas 50kDa e 65 kDa), e isoformas da HPA2 no plasma de pacientes com carcinoma gastrointestinal, comparando-se com a expressão em indivíduos não acometidos por neoplasia (grupo controle). As proteínas plasmáticas foram identificadas por eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE 10%) e transferidas para membrana Hybond-CE, que foi incubada com anticorpo primário anti-HPA1 H-80 ou anti-HPA2 C-17 e revelada com anticorpo secundário conjugado com HRP IgG peroxidase. Isoformas das heparanases foram quantificadas por densitometria (Scion Image) e confirmada por RT-PCR em tempo real. Análises estatística foram realizadas utilizando o programa SPSS 13.0 Windows (SPSS, Chicago, IL). Os resultados demosntraram que ambas isoformas da HPA1 (HPA1 50 kDa e HPA1 65 kDa) e isoformas de HPA2 encontram-se significativamente aumentadas no plasma de pacientes com carcinoma gastrointestinal, comparando-se com o grupo controle. As análises em tempo real da expressão de HPA1 e HPA2 na fração mononuclear do sangue evidenciaram aumento de expressão de HPA1 e HPA2 em pacientes com carcinoma gastrointestinal corroborando com as análises do plasma. Os resultados obtidos demonstram que tanto HPA1 como HPA2 desempenham papel fundamental na carcinogênese gastrointestinal e, portanto, entender o papel fisiológico que desempenham possa fornecer informações para desenvolvimento de possivel terapia anti-tumoral. / Heparanase-1 (HPA1) is an endo-β-glucuronidase that degrades intradisaccharides glycosidic linkage between hexosamine and glucuronic acid into heparan sulfate chains, present on extracellular matrix and surface proteoglycans. HPA1 gene is located at 4q21.3 chromossome. Oligosaccharides generated by HPA1 are involved in cell proliferation, angiogenesis and cell diferentiation related with tumor development and metastasis. Heparanase-2 (HPA2) is encoded by 10q23-24 chromossome. There are three HPA2 isoforms containing 480, 534 and 592 aminoacids. All HPA2 isoforms have shown that they are intracellular, membrane associated proteins, containing C-terminal domain to the cytoplasm and do not present enzymatic activity. The objective of the present study is to identify and quantify HPA1 (isoforms 50 kDa and 65 kDa), and HPA2 isoforms expression in the plasma of gastrointestinal carcinoma patients, compared with individuals that do not present neoplasia (control group). Plasmatic proteins were identified by polyacrilamide gel electrophoresis (10% SDS-PAGE) and transferred to Hybond-CE membrane, incubated with primary anti-HPA1 H-80 or anti-HPA2 C-17 and developed using secondary antibody conjugated with HRP IgG peroxidase. Heparanases isoforms were quantified by densitometry (Scion Image) and confirmed by real time RT-PCR. Statistic analysis were performed using SPSS 13.0 program (SPSS, Chicago, IL). The results have shown that both HPA1 isoforms (HPA1 50 kDa and HPA1 65 kDa) and HPA2 isoforms were significantly increased in gastrointestinal carcinoma patients plasma, compared with control group. Real time analysis of HPA1 and HPA2 expression in the mononuclear fraction of blood demonstrated an increase HPA1 and HPA2 expression in gastrointestinal carcinoma patients that corroborates with plasma analysis. The obtained results demonstrated that both HPA1 and HPA2 have a fundamental role in gastrointestinal carcinogenesis and, therefore, to understand their physiological function it could help the development of possible new antitumor therapies. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-03-26T19:18:11Z No. of bitstreams: 1 Caroline Brandi_S Sales Identificação....pdf: 2182912 bytes, checksum: 259ec8612d135428b26583b6a9303dcc (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-03-26T19:18:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Caroline Brandi_S Sales Identificação....pdf: 2182912 bytes, checksum: 259ec8612d135428b26583b6a9303dcc (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-26T19:18:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Caroline Brandi_S Sales Identificação....pdf: 2182912 bytes, checksum: 259ec8612d135428b26583b6a9303dcc (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / INTRODUÇÃO: A Via Hedgehog (HH) está ativada em algumas neoplasias humanas, incluindo o Carcinoma Escamocelular de Boca (CEB), o qual corresponde a mais de 95% dos casos diagnosticados na cavidade bucal. Os glipicans (GPC) participam como reguladores desta cascata, atenuando (GPC1 e GPC3) ou regulando positivamente (GPC5) a via HH. OBJETIVO: O objetivo deste trabalho foi avaliar o perfil de expressão dos genes GPC1, 3 e 5, associando-os com genes da via HH (SHH, PTCH1 e SMO) e VEGFA, bem como caracterizar a imunoexpressão das proteínas GPC, em CEB. MATERIAL E MÉTODOS: Trinta e um casos de CEB foram submetidas a reações de qPCR para os genes SHH, PTCH1, SMO, VEGFA, GPC1, 3 e 5. O RNA total foi extraído utilizando uma coluna composta por membrana de silica (Rneasy Mini Kit). O DNA complementar foi obtido com auxílio da enzima Superscript Vilo™. As reações de qPCR foram conduzidas no aparelho ViiA™ 7 Real-Time PCR System utilizando o sistema Taqman, sendo a quantificação relativa avaliada pelo método comparativo de Cq (ΔΔCQ). Vinte e seis CEBs, 9 casos de margens tumorais (MAT) e 4 casos de mucosa bucal não neoplásica (MNN) foram submetidos à reação imuno-histoquímica para as proteínas GPC1, GPC3, GPC5, CD105 e MCM3 utilizando o sistema polimérico AdvanceTM ou LSABTM. As análises das proteínas GPC1, 3 e 5 foram realizadas de acordo com os parâmetros semi-quantitativos descritos por Gurgel et al. (2008). O número de células MCM3 positivas e de vasos/mm² (microdensidade vascular- MDV) foram avaliados em 5 campos, sendo a mediana de e intervalo de confiança utilizados para agrupar os CEBs em alto e baixo perfil proliferativo (AP e BP) e alta e baixa MDV, respectivamente. A análise estatística foi realizada utilizando GraphPad Prism versão 6.03. RESULTADOS: Transcritos do gene GPC1 (26; 83,87%); GPC3 (n=22; 70,97%) e GPC5 (n=15; 48,38%) foram observados em CEBs. SHH RNAm foi detectado em 5 CEBs (16,13%). A maioria dos CEBS apresentou expressão gênica de PTCH1 (n=25; 80.6%), SMO (n=26; 83,87%) e VEGFA (n=28; 90,32%). Correlação positiva forte e estatisticamente significante foi demonstrada para GPC5 e PTCH1 (rs=0,60; p=0,02) e entre PTCH1 e VEGFA (rs=0,69; p=0,0003). Imunomarcação citoplasmática e membranar de GPC1 foi observada principalmente em epitélio de MNN (n=4;100%) e MAT (n=9; 100%), enquanto que uma perda de imunomarcação desta proteína foi detectada no parênquima do CEB. A imunoexpressão da proteína GPC3 estava ausente em MNN (n= 4; 100%) e MAT (n=9; 100%). O GPC3 ocorreu na membrana e citoplasma de células do parênquima, observadas principalmente na periferia das ilhas tumorais, predominando o escore 3+ (n=5; 19.23%) entre os CEBs positivos (n=23; 88,46%). Ausência de imunomarcação de GPC5 foi observada em MNN (n=4; 0%) e apenas 2 espécimes de MAT (n=2; 22,22%) apresentaram baixa imunoexpressão, escore 1+. GPC5 citoplasmático em células tumorais positivas predominou o escore 1+ (n=5; 38.46%). Ao mesmo tempo, GPC5 foi detectado em estroma de 13 (50%) CEBs, especialmente em células endoteliais e semelhantes a fibroblastos. A expressão dos genes avaliados foi similar em tumores com AP e BP, assim como foi independente da MDV. CONCLUSÕES: A correlação entre os transcritos GPC5 e PTCH1, bem como a superexpressão das proteínas GPC5 e GPC3 e perda de imunopositividade de GPC1 são consistentes com a participação destas proteoglicanas como reguladoras da via HH em CEB. O perfil de expressão do gene e proteína GPC1 sugere que este glipican pode participa da biologia tumoral como uma proteína supressora tumoral, enquanto GPC3 e GPC5 participariam oncoproteínas. A presença de GPC5 em estroma tumoral (células endoteliais e fibroblastos) pode estar associada a regulação da via HH neste compartimento do microambiente tumoral. / INTRODUCTION: The Hedgehog pathway is activated in some human neoplasms, including Oral Squamous Cell Carcinoma (OSCC), which account for more than 95% of all oral cancers diagnosed. Glypicans are involved in the regulation of HH pathway through GPC3 e GPC1 downregulation or/and GPC5 upregulation. AIM: The aim of this study was to evaluate the expression profile of GPC1, 3 and 5 genes, correlating to HH and VEGFA gene, even as to characterize the immunoexpression of these proteins at OSCC. MATERIAL AND METHODS: A total of 31 cases of OSCC were assessed by qPCR for the SHH, PTCH1, SMO, VEGFA, GPC1, GPC3 and GPC5 genes. The total RNA were extracted using silica membrane column (Rneasy Mini Kit). Complementary DNA was obtained using of Superscript ™ Vilo enzyme. The qPCR reactions were performed in VIIA™ 7 Real-Time PCR System using the Taqman enzime, and relative quantification (RQ) was evaluated by the comparative method of Cq (ΔΔCQ). Immunohistochemical reactions for GPC1, GPC3, GPC5, MCM3 and CD105 proteins was performed on twenty-six OSCC, 9 cases of tumor margins (TM) and 4 cases of non-neoplastic oral mucosa (NNM) using AdvanceTM or LSABTM system. The analysis of GPC1, 3 and 5 proteins were conducted according to the semi-quantitative parameters described by Gurgel et al. (2008). The number of MCM3 positive cells and vessels//mm² (microvessel density -MVD) were evaluated in 5-matching areas, and the median and confidence interval being used to group the OSCC in high and low proliferative profile (HP and LP) and high and low MDV, respectively. Statistical analysis were carried out with GraphPad Prism v.6.03. RESULTS: Transcripts of GPC1 (26; 83.87%), GPC3 (n=22; 70.97%) and GPC5 (n=15; 48.38%) genes were observed in OSCC. SHH mRNA was detected in 5 OSCC (16:13%), PTCH1 gene in 25 CEBs (80.6%), SMO in 26 (83.87%) and VEGFA in 28 (90.32%). Strong and statistically significant positive correlation was demonstrated for GPC5 and PTCH1 genes (rs=0.60; p= 0.02) and PTCH1 and VEGFA transcripts (rs = 0.69; p = 0.0003). Cytoplasmic and membrane immunostaining of GPC1 was mainly observed in epithelial MNN (n = 5; 100%) and MAT (n=9; 100%), while a reduction of this protein was detected in parenchymal cells. GPC3 protein were absent in MNN (n = 4; 0%) and MAT (n=9; 0%). The GPC3 occurred in the membrane and cytoplasm of parenchymal cells, mainly observed in the periphery of the tumor islands and the 3+ score was predominat (n=3; 11:56%) in positive OSCC. GPC5 positive tumor cells occurred in the cytoplasm, scored 1+ (n = 5; 38.46%). In addition, GPC5 was detected in the stroma of 13 (50%) OSCC, especially in endothelial and fibroblast cells. The gene expression was similar in tumors with HP and LP, and was independent of MDV. CONCLUSIONS: The correlation between the GPC5 and PTCH1 transcripts, as well the overexpression of GPC5 and GPC3 protein and the loss of GPC1 positive cells are consistent with the participation of these proteoglycans as regulators of HH pathway in OSCC. The gene and protein expression profile of GPC3 indicate that this proteins participates in tumor biology as a tumor suppressor protein, while GPC5 and GPC3 function as oncoproteins. The presence of GPC5 in tumor stroma (endothelial cells and fibroblasts) could be associated with the regulation of the HH pathway in this compartment of the tumor microenvironment.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-11-28Bitstream added on 2014-06-13T18:42:58Z : No. of bitstreams: 1 demathe_a_dr_araca.pdf: 333527 bytes, checksum: 481be7a0ed0bfcb0e04dcdc9c8824129 (MD5) / O papilomavirus humano (HPV) tem sido relacionado com a etiologia dos carcinomas epidermóides de cabeça e pescoço, em análise de tecidos cerca de 60% destes carcinomas podem ser HPV positivos. O objetivo deste trabalho foi analisar a presença do HPV em material genético obtidos de tecidos, secreção salivar e sangue de pacientes portadores de carcinoma epidermóide (CEC) de orofaringe e controles e a correlação da presença viral com as váriáveis sexo, idade, tabagismo, etilismo e perfil anatomopatologico do tumor. Foi realizada uma análise do material genético de 46 pacientes com diagnóstico de CEC de orofaringe e 40 pacientes sem carcinoma. A extração do DNA dos espécimes foi realizada utilizando o kit de extração de DNA QuiAMP. O DNA isolado foi submetido a PCR para beta-globina para confirmar a presença e integridade do DNA, em seguida, foram realizadas novas reações para detecção do DNA do HPV. Para análise estatística foram empregados o teste Qui-quadrado e teste exato de Fisher. A idade média de idade foi de 60 anos para os casos e 58,2 anos para os controles e a mediana foi de 59 e 56 anos, respectivamente. Os resultados obtidos com a metodologia descrita permitiram concluir que não houve diferenças estatisticamente significativas na análise das variáveis em relação à presença do papilomavírus humano nas amostras de tecidos biológicos dos pacientes estudados / Human papillomavirus (HPV) it has been related with head and neck SCC etiology, about 60% of these carcinomas tissues can be HPV positive. The aim of this study was to analyze the HPV presence in genetic material obtained from tissues, salivary secretion and blood of oropharyngeal SCC patients and controls and correlate the virus presence with variables: sex, age, smoking, alcoholism and pathological profile of the tumours.It was made molecular and statistical analysis of genetic material of 46 oral and oropharyngeal SCC patients and 40 controls patients without carcinoma. The DNA extraction of all specimens was accomplished using the DNA extraction kit QuiAMP. The isolated DNA was submitted PCR for beta-globin to confirm the DNA presence and integrity, after new reactions it was accomplished for HPV DNA detection. Chi-square test and Fisher exact test were used for statistical analysis. The average age was 60 years for cases and 58.2 years for controls and the median age was 59 and 56 years respectively. The results obtained with the described methodology shows there was no statistically significant differences between HPV presence in samples of biological tissues and the analyzed variables

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-25Bitstream added on 2014-06-13T19:23:17Z : No. of bitstreams: 1 sousa_fscg_dr_sjc.pdf: 590497 bytes, checksum: 402da6099907d4db4a4b39c13731e3c6 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo deste trabalho foi analisar possíveis alterações dos mecanismos de proliferação celular e apoptose no líquen plano bucal, comparando-as com as observadas na displasia epitelial e no carcinoma epidermóide, visando avaliar o seu potencial de transformação maligna. Foram selecionados 24 casos de cada lesão e a partir deles, novos cortes histológicos foram obtidos, sendo parte submetidos à técnica de AgNOR e parte à técnica imunoistoquímica da estreptoavidina-biotina-peroxidase para análise da expressão das proteínas PCNA, p53, bax e bcl-2. A média de NORs/núcleo no líquen plano bucal, na displasia epitelial e no carcinoma epidermóide bucal foram, respectivamente, 1,74±0,32, 2,42±0,62 e 2,41±0,61. A análise de variância revelou haver diferença estatisticamente significante entre o líquen plano bucal e as demais lesões (p<0,05). Quanto à PCNA, p53, bax e bcl-2, o teste de qui-quadrado não revelou haver diferença significante entre a expressão da p53 e da bcl-2. Contudo, a expressão da PCNA foi significativamente menor no líquen plano bucal do que nas demais lesões. Não houve diferença estaticamente significante entre a expressão da PCNA e da bax na displasia epitelial e no carcinoma epidermóide bucal. Conclui-se que alterações na expressão destas proteínas podem ser observadas tanto no líquen plano bucal quanto na displasia epitelial e no carcinoma epidermóide bucal, sugerindo o potencial de transformação maligna desta lesão e enfatizando a importância do acompanhamento em longo prazo dos pacientes. Neste contexto, a análise das NORs se mostrou ferramenta útil em avaliar os casos de líquen plano bucal que apresentem maior risco de transformação maligna. / The purpose of this study was to analyze possible alterations in the mechanisms of cell proliferation and apoptosis in oral lichen planus, comparing them with those observed in epithelial dysplasia and squamous cell carcinoma, aiming to establish its malignant transformation potential. Twenty-four cases of each lesion were selected and new histological cuts were obtained, being part of the cuts submitted to the AgNOR and part to the immunohistochemical technique of streptoavidine-biotin technique for analysis of the expression of the PCNA, bax and bcl-2 proteins. The NORs/nucleous mean for oral lichen planus, epithelial dysplasia and squamous cell carcinoma was respectively 1.74±0.32, 2.42±0.62 and 2.41±0.61. Analysis of variance showed statistically significant difference between the oral lichen planus and the others lesions (p<0.05). Regarding PCNA, p53, bax and bcl-2, chi-squared test showed no significant differences between the expression of p53 and bcl-2. However, the expression of PCNA was significantly lower in oral lichen planus than in epithelial dysplasia and oral squamous cell carcinoma. No significant differences between the expression of PCNA and bax in epithelial dysplasia and oral squamous cell carcinoma were observed. It was concluded that alterations in the expression of these proteins can be observed in oral lichen planus, suggesting the potential of malignant transformation of this lesion and emphasizing the importance of follow-up of patients. Within this context, the NORs analysis is a useful tool to evaluate the oral lichen planus cases with high risk of malignant transformation.

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:24:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-10-29. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:47:43Z : No. of bitstreams: 1 000843177.pdf: 1763432 bytes, checksum: 291b0892764ce24c3be5dc2041094bfc (MD5) / O carcinoma de células escamosas de boca (CCE) acomete principalmente fumantes e etilistas crônicos entre a 5a e 6a décadas de vida, sendo relativamente raro em pacientes jovens ( 40 anos de idade). Na literatura, não há relato a respeito da expressão proteica das enzimas metabolizadoras de drogas em CCE de boca neste grupo etário. A indução da expressão destas enzimas resulta na aceleração da detoxificação de substâncias tóxicas como também no aumento de metabólitos xenobióticos, e consequentemente maior risco de dano ao DNA. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão proteica das enzimas envolvidas no processo de biotransformação do tabaco (CYP1A1 e CYP1B1) e do álcool (ALDH1 e ALDH2), entre os grupos teste (jovens ≤ 40 anos) e controle (≥ 50 anos), através da técnica de imuno-histoqímica em microarranjo de tecido (Tissue Microarray), e correlacionar estes resultados com as características clínicopatológicas e com o prognóstico dos pacientes. Foram avaliados 41 CCE primários de boca em pacientes jovens, coletados no período de 1970 a 2007, no Departamento de Cirurgia de Cabeça e Pescoço e Otorrinolaringologia do Hospital A.C. Camargo de São Paulo. Estes casos foram comparados com 59 controles que apresentam tumores em estádios clínicos e topografias similares. As variáveis entre os grupos foram comparadas através do teste x2. A expressão dos marcadores foi comparada entre os grupos por meio do teste de Mann-Whitney. Nas análises de sobrevida global, doença específica e livre de doença, as expressões dos marcadores foram dicotomizadas de acordo com a mediana. Gráficos de Kaplan-Meier foram construídos e o teste de logrank foi utilizado. O nível de confiança adotado foi de 5%. Os resultados revelaram que houve uma predominância de pacientes do gênero masculino, leucoderma, tabagista e etilista, com tumores localizados em língua, bem diferenciados e em estádio clínico avançado, sem... / The oral squamous cell carcinoma (SCC) mainly affects smokers and chronic alcoholics between the fifth and sixth decades of life and it's relatively rare in young patients (≤ 40 years old). In the literature, there is no report regarding the protein expression of drug metabolizing enzymes in oral SCC in this age group. The induction of expression of these enzymes results in the acceleration of detoxification of toxic substances as well as in the increase of metabolites of xenobiotics and more risk of damage to AND consequently. The aim of this study was to evaluate the protein expression of enzymes involved in the biotransformation of tobacco (CYP1A1 and CYP1B1) and alcohol (ALDH1 and ALDH2) between test group (young ≤ 40 years) and control group(≥ 50 years) by the immunohistochemistry technique on tissue microarray and to correlate the results with the clinicopathologic features and prognosis of patients. Forty-one primary oral SCC were evaluated in young patients, collected in the period 1970-2007, in the Department of Head and Neck Surgery and Otorhinolaryngology, AC Camargo Hospital, Sao Paulo. These cases were compared with 59 controls with tumors in clinical stages and similar topographies. Variables between groups were compared using the x2 test. The expression of the markers was compared between groups by the Mann-Whitney test. In the analysis of overall survival, disease-specific and disease-free, the expressions of the markers were dichotomized according to the median. Kaplan-Meier graphs were constructed and the log rank test was used. The confidence level adopted was 5%. The results revealed that there was a predominance of male patients, leucoderma, smoker and drinker, with tumors located in the tongue, rather differentiated and advanced stage, without difference between the groups. In immunohistochemical analysis it was found that there was a statistical difference...

O câncer colorretal é um dos tumores humanos mais freqüentes e a terceira causa de morte relacionada ao câncer no mundo. Apesar de importantes progressos terapêuticos, os resultados na doença avançada ainda são muito modestos. Isto deve-se ao fato de que a droga mais utilizada nesta neoplasia, o antimetabólito 5-fluorouracil (5-FU), foi desenvolvido a mais de 40 anos produzindo taxas de respostas de somente 10-15%. Recentemente, o inibidor da topoisomerase I irinotecan (CPT-11) demonstrou, em carcinoma de cólon avançado, respostas comparáveis tanto em pacientes não tratados quanto naqueles que tiveram recaída após terapia com 5-FU. Estes resultados justificam a avaliação da combinação 5-FU/CPT-11 nesta doença. Apesar das respostas dos estudos clínicos serem promissoras, a melhor seqüência de administração destes agentes ainda não foi determinada. Neste estudo, avaliamos a combinação CPT-11/5-FU quanto ao aumento da inibição do crescimento celular quando comparada com os agentes sozinhos nas linhagens celulares de carcinoma de cólon humano SW620, HT-29 e SNU-C4. Para isto, as células foram expostas às drogas sozinhas ou a várias combinações e seqüências de dose baixa e fixa (IC20) de um dos agentes na presença de dose alta e seriada do outro. As células foram avaliadas imediatamente após os tratamentos e/ou cultivadas por mais 2 dias em meio de cultura sem drogas através de coloração com sulforodamina B. As interações entre CPT-11 e 5-FU foram avaliadas por um programa de computador que permite calcular os índices de combinação (CIs) das drogas indicando sinergismo, adição, ou antagonismo (CI < 1, = 1, ou > 1, respectivamente). As respostas celulares foram relacionadas com as atividades das enzimas timidilato sintase, topoisomerase I e carboxil esterase, que foram determinadas através de ensaio que mede os sítios de ligação e atividade catalítica da enzima, ensaio de decatenação do DNA e método espectrofotométrico, respectivamente. Estando a toxicidade no DNA envolvida no mecanismo de ação das duas drogas, também relacionamos as respostas celulares com a introdução de danos ao DNA por método fluorescente. Para melhor entendermos as interações entre as drogas, examinamos os efeitos da exposição à IC20, IC50 e/ou IC80 do CPT-11 ou 5-FU por 2 h ou 24 h em alvos celulares possivelmente relacionados com a citotoxicidade destes agentes. Estes incluem: capacidade de reparo por excisão do 10 DNA, distribuição das células nas fases do ciclo celular, integridade da membrana plasmática e formação de complexos DNA-topoisomerase I. Para isto, utilizamos método de incorporação de [3H-metil]timidina, citometria de fluxo, liberação de lactato desidrogenase (LDH) no meio de cultura e ensaio de precipitação com SDS, respectivamente. Os estudos de inibição do crescimento celular revelaram valores de IC50 do 5-FU nas linhagens SW620, HT-29 e SNU-C4 de aproximadamente 15, 8 e 2 µM, respectivamente, e do CPT-11 próximos a 2, 2 e 4 µM, respectivamente. As diferentes sensibilidades ao 5-FU nas três linhagens foram determinadas principalmente pela diferença na afinidade ao substrato. As respostas comparáveis obtidas pela exposição ao CPT-11 podem ser explicadas pelo equilíbrio entre as diferentes atividades das enzimas topoisomerase I e carboxil esterase, entre as linhagens. O programa de análise da combinação das drogas mostrou adição ou sinergismo após exposição a IC20 do CPT-11 seguido do 5-FU, nas três linhagens celulares. Por outro lado, o pré-tratamento com IC20 do 5-FU antagonizou a inibição do crescimento mediada pelo CPT-11. Nenhum dos tratamentos simultâneos determinou um aumento na inibição do crescimento nas linhagens SW620 e HT-29; mas mostraram adição ou antagonismo na linhagem SNU-C4. Observamos um significativo acréscimo na introdução de danos ao DNA nas linhagens celulares SW620 e HT-29 somente quando a IC20 do CPT-11 precedeu a IC50 do 5-FU. Já na linhagem SNU-C4, não somente este tratamento, mas também a utilização simultânea dos agentes introduziu mais dano ao DNA. Os tratamentos por 2 h ou 24 h com IC20, IC50, e/ou IC80 do 5-FU ou CPT-11 não causaram mudanças significativas na distribuição das células nas fases do ciclo celular, concentração de LDH no meio de cultura, ou formação de complexos DNA-topoisomerse I. Indicando que alterações nestes processos não estão envolvidas com os efeitos modulatórios dos pré-tratamentos na citotoxicidade das drogas. Entretanto, a incorporação de [3H-metil]timidina no DNA de células tratadas com CPT-11, aumentou em função da dose e tempo de exposição à droga. Este resultado sugere que o dano ao DNA introduzido pelo CPT-11 depende da dose e tempo de exposição podendo ser reparado por mecanismos de excisão. Somente foi observada significativa incorporação de [3H-metil]timidina em células tratadas com IC20 do 5-FU por 2 h, sugerindo que o reparo por excisão só ocorre após exposição por curto período e à doses baixas deste agente. Juntos, os resultados deste estudo mostraram que tanto os efeitos anti-proliferativos quanto a introdução de danos ao DNA pela combinação CPT-11/5-FU em dose baixa e fixa de um agente junto com dose alta do outro, nas linhagens celulares de carcinoma de cólon humano SW620, HT-29 e SNU-C4, dependem da seqüência de administração das drogas. Estes achados podem ter sido determinados pelos diferentes efeitos do tratamento com uma dose baixa dos agentes nos mecanismos de reparo por excisão do DNA.