Orientador: Rafael Henrique Nóbrega / Banca: Rosicleire Veríssimo Silveira / Banca: Sérgio Ricardo Batlouni / Banca: Luís Antonio Justulin Junior / Banca: Maricy Apparício Ferreira / Resumo: Nos vertebrados, a espermatogênese é um processo de desenvolvimento celular altamente conservado e organizado, no qual uma pequena população de espermatogônias tronco produz continuamente milhões de espermatozóides, os quais são os responsáveis pela propagação do genótipo dos machos. Este processo é sustentado pelas espermatogônias tronco através da sua capacidade de auto-renovação e diferenciação. Vários aspectos relacionados com a regulação da atividade e fisiologia das espermatogônias tronco são ainda desconhecidos nos peixes teleósteos. Portanto, a técnica de transplante de células germinativas torna-se uma poderosa abordagem para melhorar o conhecimento da biologia das espermatogônias tronco e da espermatogênese. Resumidamente, a técnica envolve a transferência de células germinativas isoladas de um doador fértil para os testículos de um receptor estéril, e as células transplantadas são capazes de restaurar a gametogênese do receptor. Neste contexto, realizamos uma caracterização morfológica e estereológica dos diferentes tipos de células encontradas na espermatogênese da carpa comum (Cyprinus carpio). Também caracterizamos fenotipicamente as potenciais espermatogônias tronco. Portanto, descrevemos cinco tipos espermatogôniais na carpa comum: espermatogônias indiferenciadas do tipo A (Aund* - Aund), espermatogônias diferenciadas do tipo A (Adiff) e espermatogônias do tipo B (inicial e final). Nesta espécie, o processo espermatogênico durou aproximadamente uma semana. Nos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In vertebrates, spermatogenesis is a highly conserved and organized developmental process, in which a small population of spermatogonial stem cells (SSC) continuosly produce millions of spermatozoa, which are responsible for spreading the male genotype. Likewise other stem cells, SSC are capable of either self-renew or differentiate. Several aspects related to the regulation of SSC activity and physiology are still unknown in teleost fish. Thus, the germ cell transplantation technique becomes a powerful approach to improve the knowledge of SSC biology and spermatogenesis. Briefly, the technique involves the transfer of germ cells isolated from a fertile donor into the testes of a sterile recipient, and transplanted donor germ cells are able to restore the recipient gametogenesis. Taking advantage of this background, we performed morphological and stereological characterization of the different cell types found in the common carp (Cyprinus carpio) spermatogenesis. We also characterized the putative SSC candidates by morphology. Therefore, we described five spermatogonial types in common carp: type A undifferentiated spermatogonia (Aund* - Aund), type A differentiated spermatogonia (Adiff) and type B spermatogonia (early and late). In this species, the spermatogenic process lasted approximately one week. Our findings demonstrated that the spermatogonial population expressed the c-Kit, Gfrα1 and POU2 proteins. Donor germ cells isolated from goldfish were transplanted non-surgically through urogenital papilla into the sexually mature cytoablated common carp recipients. Donor transplanted germ cells were able to colonize and develop in recipients' testes. Overall, our results strengthens the knowledge of germ cell biology, focusing on stem cells. Finally, transplantation, standardized here, is an approach with significant implications for the conservation and management of endangered and valuable fish species. / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-05Bitstream added on 2014-06-13T20:10:21Z : No. of bitstreams: 1 000748420.pdf: 10455273 bytes, checksum: 5531ec5e20aa8e0ad2b7bd68b8dde10a (MD5) / O presente estudo teve como objetivo analisar os índices reprodutivos e definir os aspectos reprodutivos da espécie Astyanax fasciatus no Córrego Rico, São Paulo, Brasil e confirmar duas hipóteses - Esta espécie possui desova do tipo parcelada neste ambiente especificamente e uma amostra da população colocada em cativeiro pode desenvolver a maturação gonadal. Foram capturados 40 exemplares da espécie, por meio de coletas mensais padronizadas realizadas no período de outubro de 2012 a janeiro de 2013 por meio de rede espera. Além disso, mais 120 exemplares de A. fasciatus foram coletados e transferidos para um tanque no Centro de Aquicultura da UNESP, Jaboticabal, SP e mantidos em cativeiro. Coletas mensais também foram realizadas no mesmo período das coletas in situ para biometria e análise histológica das gônadas. A hipótese de desova parcelada foi corroborada pela análise concomitante da variação dos índices gonadossomático, hepatossomático, fator de condição e volume gonadal além da análise histológica observando fêmeas parcialmente desovadas em mais de uma coleta. A hipótese de maturação gonadal em ambiente de cativeiro também foi corroborada por meio de análise histológica associada à análise dos índices reprodutivos. Nesse contexto, os resultados obtidos geram subsídios para estudos no tocante à biologia reprodutiva e sua aplicação na reprodução em ambiente de aquicultura / This study aim to study the reproductive biology of redtail tetra Astyanax fasciatus from a stream in Jaboticabal,SP and confirm two hypothesis - this specie have a fractional spawning in this place specifically and A. fasciatus can maturate gonads in capitivity environment. Adult males and females (n=40) were sampled monthly during the rainy season from October 2012 to January 2013 by gillnets. Besides, more 120 adult males and females were sampled and transferred to a pond in UNESP Aquaculture Center, Jaboticabal,SP. Monthly samples were realized in the same period that in situ samples for biometrics and histological analysis. The hypothesis of fractional spawning was corroborated by concurrent analysis of gonadosomatic index, hepatosomatic index, condition factor and gonadal volume in addition to histological analysis watching females partially spawned in more than one sample. The hypothesis of gonadal maturation in captivity environment also be corroborated by histological analysis in addition to reproductive indexes analyslis. In this context, the results generate data for studies regarding the reproductive biology and its application in breeding aquacultural environment

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-28Bitstream added on 2014-06-13T19:52:03Z : No. of bitstreams: 1 rodrigues_am_me_botfm.pdf: 593199 bytes, checksum: 3862ac32735e6b1acf2a9269bf6223f8 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Com a finalidade de avaliar a repercussão no prognóstico e na morbidade dos pacientes com TCG em função da adesão do cirurgião ao protocolo cirúrgico, foram analisados retrospectivamente, com ênfase nos aspectos cirúrgicos, 64 pacientes de 0 a 18 anos completos, durante o período de junho de 1996 a janeiro de 2009 em dois centros de referência para o tratamento do paciente oncológico pediátrico: Hospital Amaral Carvalho de Jaú e o Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu (UNESP). Os dados coletados eram referentes a variáveis qualitativas e, desse modo, foram obtidas frequências e porcentagens para cada variável. As associações entre as variáveis de interesse foram feitas obtendo-se tabelas de contingência e testes qui-quadrado ou exato de Fisher. Em todos os testes foi adotado o nível de significância de 5%. Dos 64 pacientes estudados, 22 do Hospital Amaral Carvalho e 42 do Hospital das Clínicas – UNESP, com relação ao local primário, houve predomínio do ovário, seguido de testículo, sacrococcígeo, retroperitoneal, mediastino, orofaringe e útero. O tipo histológico predominante foi o teratoma puro, e o estadio I foi o mais freqüente. Quarenta e quatro pacientes foram classificados como baixo risco, e todos os 64 pacientes receberam tratamento cirúrgico, sendo em 44 deles exclusivo. A cirurgia pediátrica foi quem mais encaminhou casos operados dos serviços de origem, enquanto a ginecologia foi a especialidade que mais operou nas instituições de estudo. Quinze casos foram encaminhados com algum tipo de cirurgia e 49 encaminhados sem cirurgia. A quantidade de casos encaminhados sem cirurgia prévia foi estatisticamente significante quando comparado aos casos encaminhados com algum tipo de cirurgia. Dos 15 pacientes encaminhados com algum tipo de cirurgia, 10 seguiram o protocolo... / In order to assess the impact on prognosis and morbidity of patients with GCT according to the surgeon's accession to the surgical protocol were analyzed retrospectively, with emphasis on surgery, 64 patients 0-18 years of age, during the period of June 1996 to January 2009 in two hospitals for the treatment of pediatric cancer patients: Hospital Amaral Carvalho de Jau and the Hospital of the Medical School of Botucatu (UNESP). Data were collected regarding the qualitative variables, and thus, frequencies and percentages were obtained for each variable. The associations between the variables of interest were made by obtaining contingency tables and chisquare or Fisher exact test. In all tests, we adopted the significance level of 5%. Of the 64 patients studied, 22 of 42 Amaral Carvalho Hospital and the Hospital das Clinicas - UNESP, with respect to the primary site, there was a predominance of the ovary, followed by testis, sacrococcygeal, retroperitoneal, mediastinal, oropharynx and uterus. The predominant histological type was pure teratoma, and the stage I was the most frequent. Forty-four patients were classified as low risk, and all 64 patients received surgical treatment in 44 of them being unique. The pediatric surgery was the most referred cases operated source of services, while gynecology was the specialty that most institutions operated in the study. Fifteen cases were referred to some type of surgery and 49 conveyed without surgery. The number of cases referred without previous surgery was statistically significant when compared to cases presenting with some type of surgery. Of the 15 patients referred with type of surgery, 10 followed the protocol and not 5, while the 49 patients referred without surgery, 24 were operated on following the protocol and not 25. Although there was no statistically significant differences... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:40:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002-04-12. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:23Z : No. of bitstreams: 1 000178132.pdf: 1208797 bytes, checksum: 13414d12b43a559456935af3c18cd62e (MD5) / A literatura foi revisada em relação à célula de Sertoli de peixes teleósteos, levando em conta seus aspectos morfofuncionais, sua importância, a terminologia e a interação entre ela e outras células do testículo. No universo de 76 trabalhos pesquisados, foi notado que as células de Sertoli têm função de fagocitose, nutrição das células germinativas, esteroidogênese, participa na formação do cisto de células germinativas, e na formação da barreira hemotesticular. Além dessas funções, nos peixes teleósteos com fertilização interna a célula de Sertoli participa na formação dos dúctulos eferentes e das estruturas especializadas para levar grupos de espermatozóides para dentro do oviduto. A despeito da diferença entre a morfologia e a localização das células de Sertoli de mamíferos, a célula encontrada nos teleósteos foi considerada homóloga à mesma, devido à similaridade de funções / The literature was reviewed around the Sertoli cells in teleost fish, regarding their morphological and functional aspects, importance, terminology and interaction with other testis cells. In the 76 reports searched, it was observed that the Sertoli cells have these functions: phagocytose, nutrition of germinative cells, take part in development of germinative cists, development of the hemotesticular barrier and efferent ducts, and formation of the specialized structures to carry the cluster of sperm in the female oviduct of teleost species that have internal fertilization. In spite of the morphological differences and localization of the Sertoli cells of mammals, the cell found in the teleost was considered homologs to this one, because its similarity in functions

Orientador: Laura Satiko Okada Nakaghi / Coorientador: George Shigueki Yasui / Banca: Sérgio Fonseca Zaiden / Banca: Rafael Henrique Nóbrega / Banca: Flávio Vieira Meirelles / Banca: Luciano Andrade Silva / Resumo: O transplante de células germinativas primordiais (CGPs) é uma abordagem promissora para área da Aquicultura, mas para isso é necessária à compreensão dos estágios de desenvolvimento embrionário e larval como também a padronização de técnicas relacionadas à micromanipulação do embrião e de células germinativas a fim de obter com sucesso quimeras germinativas. Assim, os objetivos desta pesquisa foram avaliar o efeito de três temperaturas (22ºC, 26ºC e 30ºC) sob o desenvolvimento inicial de B. amazonicus (espécie doadora); desenvolver protocolos para micromanipulação de ovos, de células embrionárias e de criopreservação de blastômeros em Astyanax altiparanae (espécie receptora); identificar as CGPs e a rota de migração dessas células em ambas as espécies, além da produção de quimeras germinativas através do transplante de células embrionárias a fim de que a espécie receptora estéril (3n) produza gametas da espécie doadora. Para isso, os reprodutores das espécies envolvidas foram induzidos hormonalmente à reprodução, os gametas foram extrusados e fertilizados pelo método a seco. Para avaliar o desenvolvimento inicial, ovos recém-fertilizados foram distribuídos em aquários com oxigenação e temperatura controlada, coletados em momentos pré-estabelecidos e analisados sob estereomicroscópio. Para o desenvolvimento do protocolo de micromanipulação de ovos de Astyanax altiparanae, inicialmente avaliou-se a eficácia na remoção do córion em alíquotas de ovos recém-fertilizados distribuí... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Primordial germ cell (PGCs) transplantation is a promising approach for aquaculture area, but it is necessary the understanding of the embryonic and larval development stages as well as the standardization of techniques related to embryo micromanipulation and germ cells in order to get germ chimeras successfully. Thus, the aims of this research were to evaluate the effect of three temperatures (22°C, 26°C and 30°C) on the early development of Brycon amazonicus (donor species); develop protocols for micromanipulation of egg, embryonic cells and blastomeres cryopreservation in Astyanax altiparanae (host species); identify the PGCs and their migration route in both species, also producing germ chimeras through transplantation of embryonic cells to host sterile species (3n) in order to produce gametes from the donor species. For this, broodstock of the involved species were hormonally induced to reproduction, and the gametes were stripped and fertilized by dry method. To evaluate the early development, newly fertilized eggs were distributed into aquarium with controlled oxygenation and temperature, collected at pre-established times and analyzed under a stereomicroscope. For the development of micromanipulation protocol of eggs from Astyanax altiparanae, it was initially evaluated the effectiveness of removing the chorion, in aliquots of newly fertilized eggs distributed on Petri dishes containing pronase (0.05%) or trypsin (0.15%) diluted in saline solutions (Holtfreter; Characin; Ringer; Hanks, D-PBS or MEM) and it was observed the most efficient enzymatic solution without affecting the viability of the embryo. After dechorionation, the eggs were submerged the same saline solutions tested for removing the chorion, free of enzymes. To determine the best incubation saline solution, morphology and quantification of the eggs were ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientadora: Laura Satiko Okada Nakaghi / Banca: Carlos Alberto Vicentini / Banca: Sérgio Fonseca Zaiden / Resumo: A literatura foi revisada em relação à célula de Sertoli de peixes teleósteos, levando em conta seus aspectos morfofuncionais, sua importância, a terminologia e a interação entre ela e outras células do testículo. No universo de 76 trabalhos pesquisados, foi notado que as células de Sertoli têm função de fagocitose, nutrição das células germinativas, esteroidogênese, participa na formação do cisto de células germinativas, e na formação da barreira hemotesticular. Além dessas funções, nos peixes teleósteos com fertilização interna a célula de Sertoli participa na formação dos dúctulos eferentes e das estruturas especializadas para levar grupos de espermatozóides para dentro do oviduto. A despeito da diferença entre a morfologia e a localização das células de Sertoli de mamíferos, a célula encontrada nos teleósteos foi considerada homóloga à mesma, devido à similaridade de funções / Abstract: The literature was reviewed around the Sertoli cells in teleost fish, regarding their morphological and functional aspects, importance, terminology and interaction with other testis cells. In the 76 reports searched, it was observed that the Sertoli cells have these functions: phagocytose, nutrition of germinative cells, take part in development of germinative cists, development of the hemotesticular barrier and efferent ducts, and formation of the specialized structures to carry the cluster of sperm in the female oviduct of teleost species that have internal fertilization. In spite of the morphological differences and localization of the Sertoli cells of mammals, the cell found in the teleost was considered homologs to this one, because its similarity in functions / Mestre

Orientador: Érika Veruska Paiva Ortolan / Banca: Bonifácio Katsumori Takegawa / Banca: José Roberto de Souza Baratella / Resumo: Com a finalidade de avaliar a repercussão no prognóstico e na morbidade dos pacientes com TCG em função da adesão do cirurgião ao protocolo cirúrgico, foram analisados retrospectivamente, com ênfase nos aspectos cirúrgicos, 64 pacientes de 0 a 18 anos completos, durante o período de junho de 1996 a janeiro de 2009 em dois centros de referência para o tratamento do paciente oncológico pediátrico: Hospital Amaral Carvalho de Jaú e o Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu (UNESP). Os dados coletados eram referentes a variáveis qualitativas e, desse modo, foram obtidas frequências e porcentagens para cada variável. As associações entre as variáveis de interesse foram feitas obtendo-se tabelas de contingência e testes qui-quadrado ou exato de Fisher. Em todos os testes foi adotado o nível de significância de 5%. Dos 64 pacientes estudados, 22 do Hospital Amaral Carvalho e 42 do Hospital das Clínicas - UNESP, com relação ao local primário, houve predomínio do ovário, seguido de testículo, sacrococcígeo, retroperitoneal, mediastino, orofaringe e útero. O tipo histológico predominante foi o teratoma puro, e o estadio I foi o mais freqüente. Quarenta e quatro pacientes foram classificados como baixo risco, e todos os 64 pacientes receberam tratamento cirúrgico, sendo em 44 deles exclusivo. A cirurgia pediátrica foi quem mais encaminhou casos operados dos serviços de origem, enquanto a ginecologia foi a especialidade que mais operou nas instituições de estudo. Quinze casos foram encaminhados com algum tipo de cirurgia e 49 encaminhados sem cirurgia. A quantidade de casos encaminhados sem cirurgia prévia foi estatisticamente significante quando comparado aos casos encaminhados com algum tipo de cirurgia. Dos 15 pacientes encaminhados com algum tipo de cirurgia, 10 seguiram o protocolo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In order to assess the impact on prognosis and morbidity of patients with GCT according to the surgeon's accession to the surgical protocol were analyzed retrospectively, with emphasis on surgery, 64 patients 0-18 years of age, during the period of June 1996 to January 2009 in two hospitals for the treatment of pediatric cancer patients: Hospital Amaral Carvalho de Jau and the Hospital of the Medical School of Botucatu (UNESP). Data were collected regarding the qualitative variables, and thus, frequencies and percentages were obtained for each variable. The associations between the variables of interest were made by obtaining contingency tables and chisquare or Fisher exact test. In all tests, we adopted the significance level of 5%. Of the 64 patients studied, 22 of 42 Amaral Carvalho Hospital and the Hospital das Clinicas - UNESP, with respect to the primary site, there was a predominance of the ovary, followed by testis, sacrococcygeal, retroperitoneal, mediastinal, oropharynx and uterus. The predominant histological type was pure teratoma, and the stage I was the most frequent. Forty-four patients were classified as low risk, and all 64 patients received surgical treatment in 44 of them being unique. The pediatric surgery was the most referred cases operated source of services, while gynecology was the specialty that most institutions operated in the study. Fifteen cases were referred to some type of surgery and 49 conveyed without surgery. The number of cases referred without previous surgery was statistically significant when compared to cases presenting with some type of surgery. Of the 15 patients referred with type of surgery, 10 followed the protocol and not 5, while the 49 patients referred without surgery, 24 were operated on following the protocol and not 25. Although there was no statistically significant differences... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Classius de Oliveira / Banca: Rosicleire Verissimo Silveira / Banca: Sebastião Roberto Taboga / Resumo: O declínio das populações de anfíbios é um problema global com causas complexas. Atualmente há uma grande preocupação sobre os efeitos provocados por compostos que atuam como desreguladores endócrinos nos sistemas naturais. Os estrogênios são os principais contaminantes encontrados em corpos d'água e são responsáveis por causar uma série de distúrbios, principalmente ligados aos aspectos reprodutivos. O hormônio feminino 17β-estradiol é um potente contaminante que prevalece em águas superficiais, provenientes principalmente de efluentes municipais e industriais. É o hormônio responsável pela formação das características femininas, comportamento sexual e ovulação. Este estudo mostra o efeito do 17β-estradiol na gametogênese dos órgãos de Bidder e testículos e na resposta hepática de machos de Rhinella schneideri. Foram utilizados 40 machos adultos e analisada a gametogênese dos testículos e órgão de Bidder, além da avaliação da pigmentação hepática. Os animais foram tratados com 17β-estradiol durante 3, 7, (efeito de curto prazo) 15 e 30 (efeito de exposição prolongada) dias, utilizando injeções subcutâneas de 2mg/kg em dias alternados. Análises histoquímicas também foram realizadas para os três órgãos. Os resultados mostraram que o 17β-estradiol promoveu alterações tanto na espermatogênese, quanto na ovogênese bidderiana. Os tratamentos de curto prazo acarretaram em uma diminuição na quantidade de espermatozoides liberados no lume e um desequilíbrio na ocorrência de células iniciais da espermatogênese. Os tratamentos de exposição prolongada acarretaram principalmente na diminuição dos lóculos seminíferos e aumento na região intersticial, além da alteração de alguns tipos celulares como espermatogônias, espermatócitos e espermátides alongadas. Para o órgão de Bidder... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Amphibian's populations decline is a global problem with complex causes. Currently, it is known that this decline is related to endocrine disruptors compounds in natural systems. Estrogens are the main compounds found in water bodies and are responsible for causing a number of disturbances, mainly linked to reproductive aspects. The female hormone 17β-estradiol is a potent organic contaminant that prevails in surface waters, mainly disposed by municipal and industrial effluents. This hormone induces the formation of feminine characteristics, sexual behavior and ovulation. In this study, we describe the effect of 17β-estradiol in the gametogenesis of the Bidder's organ and testes, beyond the liver response in males of Rhinella schneideri. We collected 40 adult males and analyzed the testis and the Bidder's organ gametogenesis and the liver pigmentation. The animals were treated with 17β-estradiol for 3, 7, (short effect) 15 and 30 (extended effect) days, by subcutaneous injection of 2mg/kg on alternate days. Histochemical analyzes were also performed for the three organs. The results showed that 17β-estradiol promoted changes in spermatogenesis and in bidderian oogenesis. Short-treatments resulted in a decrease in the quantity of spermatozoa in the lume and an imbalance in the occurrence of initial cells of spermatogenesis. Long-treatments resulted in a decreased of the seminiferous locules and increased of the interstitial area, besides the alteration of some cell types, such as spermatogonias, spermatocytes and elongated spermatids. In the Bidder's organ, the short-treatment resulted in increased of the young follicles and degeneration oocytes, establishing a possible renewal of female cells. The treatment of 15 days decreased the amount of degenerating oocytes and increased late follicles. After 30 days of treatment were... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Alexandre Ninhaus Silveira / Banca: George Shigueki Yasui / Banca: Maria Angélica Spadella / Banca: Rafael Henrique Nóbrega / Banca: Carlos Alberto Vicentini / Resumo: O transplante de células germinativas é uma recente abordagem experimental que envolve a remoção de células germinativas indiferenciadas das gônadas de um animal doador, e transplante nas gônadas de um receptor originando espermatozoides com características genéticas do doador. Apesar de ser promissora em estudos que envolvem a biologia das células germinativas iniciais, preservação de espécies ameaçadas, biologia da reprodução e muitas outras abordagens biotecnológicas, a aplicação desta metodologia em peixes ainda é limitada. Deste modo, o transplante de células espermatogoniais de duas espécies filogeneticamente relacionadas, a piracanjuba Brycon orbignyanus em lambaris Astyanax altiparanae foi estudada. Para isto, a espermatogênese e a papila urogenital (via do transplante) da espécie receptora foram histologicamente analisadas, evidenciando a presença de nove gerações espermatogoniais e que a cada célula de Sertoli suporta o desenvolvimento de cerca de 140 espermátides. Além disso, a papila urogenital difere entre os sexos. Para o transplante, os testículos das piracanjuba foram enzimaticamente digeridos e as espermatogônias foram purificadas por um gradiente de densidade (Percoll), marcadas com PKH26, e injetadas, via papila urogenital, nos testículos dos lambaris, cuja espermatogênese endógena foi previamente suprimida por administração de busulfan (Myleran) associado com água quente (35°C) ou por sua manutenção nesta temperatura por um período maior. Cerca de 66,7% e 84,6% dos receptores tratados com busulfan + temperatura e somente temperatura, respectivamente, apresentaram cistos de células germinativas doadoras em seu epitélio. O transplante espermatogonial envolvendo B. orbignyanus e A. altiparanae foi realizado com sucesso e pode ser aplicado em pisciculturas auxiliando no aumento da produção e preservação da piracanjuba (criticamente ameaçada... / Abstract: Germ cell transplantation is a recent approach which involves removal of undifferentiated germ cells from the donor gonads and transplantation into the gonads of a host, giving origin to sperm with genetic characteristics from the donor. Despite this methodology promising in studies involving initial germ cell biology, preservation of threatened species, reproductive biology and many other biotechnological approaches, the application of such a methodology in fish is still limited. Thus, the transplantation of spermatogonial cells from two phylogenetically related species "piracanjuba" Brycon orbignyanus into "lambaris" Astyanax altiparanae testis was histologically studied. Host spermatogenesis and urogenital papilla (transplantation via) were analyzed, highlighting nine spermatogonial generations and that each Sertoli cell supports the development of about 140 spermatids. Moreover, urogenital papilla is different between the sexes. For transplantation, piracanjuba's testes were enzymatic digested and spermatogonia were purified by a density gradient (Percoll), labeled with PKH26 and injected, through urogenital papilla, into "lambaris" testes, whose endogenous spermatogenesis had been previously suppressed by administration ofbusulfan (Myleran) associated with warm water (35°C) or by their maintenance at this temperature for longer time. About 66.67% and 84.6% of the host animals treated with busulfan + temperature and only temperature, respectively, presented cysts of donor germ cells into their epithelium. Spermatogonial transplantation involving B. orbignyanus and A. altiparanae was successfully performed and it can be applied in fish farms helping production increase and preservation of donor species "piracanjuba" (critically endangered), since donor spermatozoon can be obtained up to three weeks after transplantation process / Doutor

Made available in DSpace on 2016-03-07T19:20:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-16. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T19:24:36Z : No. of bitstreams: 1 000855447_20170716.pdf: 923470 bytes, checksum: 64cae1b5d12a5a1a9f32bdebf26d71a1 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-07-24T11:34:14Z: 000855447_20170716.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-07-24T11:35:19Z : No. of bitstreams: 1 000855447.pdf: 2348425 bytes, checksum: 43653b8cc49553da465fb52374eab833 (MD5) / Diversos estados fisiológicos têm sido descritos para células de levedura durante o cultivo, como células lesionadas, células mortas e células viáveis, mas não cultiváveis (VBNC). No entanto, pouca atenção ainda é dada à formação de células viáveis, mas não cultiváveis em leveduras e seus impactos sobre o processo de fermentação. O estado VBNC, também conhecido como estado de dormência celular pode ser definido como um estado fisiológico em que os micro-organismos não são capazes de crescer em meios bacteriológicos, mas apresentam características de células vivas. Fatores químicos e ambientais têm sido relatados para induzir um estado VBNC, incluindo a falta de nutrientes, temperaturas extremas, concentrações osmóticas e oxigênio. As células de levedura no estado VBNC podem exercer influencias sobre o rendimento de biocombustível gerado no final do processo. As leveduras industriais utilizadas neste estudo foram coletadas em uma usina sucroalcooleira localizada na cidade de Américo Brasiliense-SP-Brasil. Para fornecer evidências da existência de um estado VBNC em leveduras investigou-se a capacidade das células ao entrarem no estado VBNC, aplicando estresse térmico (40°C) e osmótico (30% de sacarose). Populações viáveis foram monitoradas utilizando o corante azul de metileno, e as populações cultiváveis foram identificadas por semeadura em meio de cultura. Todos os procedimentos foram realizados em triplicata, para todas as amostras e os dados amostrais foram submetidos à análise de variância (ANOVA). Após 48 horas no período de tempo em estresse, a comparação entre as células viáveis e as células cultiváveis demonstrou a presença de células viáveis, mas não cultiváveis. Além disso, a remoção do estresse permitiu que as células fossem novamente capazes de crescer, fornecendo evidências da existência de um estado VBNC em leveduras. / Several physiological conditions have been described for yeast cells during cultivation, such as injured cells, dead cells and viable cells, but not culturable (VBNC). However, little attention is still given to the formation of viable cells, but not cultivable in yeast and its impact on the fermentation process. The VBNC state, also known as state of numbness cell can be defined as a physiological condition in which the microorganisms are not able to grow on bacteriological media, but that present characteristics of living cells. Chemical and environmental factors have been reported to induce VBNC state, including a lack of nutrients, temperature extremes, osmotic concentration and oxygen. The yeast cells in the VBNC state may influence the yield of biofuel generated at the end of the process. The yeasts used in this study were collected in a sugarcane mill located in Américo Brasiliense-SP-Brazil. To provide evidence of the existence of a state in yeast VBNC investigated the ability of cells to enter the VBNC state, applying heat stress (40°C) and osmotic (30% sucrose). Viable populations were monitored using the methylene blue dye, and cultivated populations were identified by inoculation in culture. All procedures were performed in triplicate for all samples and sample data were submitted to analysis of variance (ANOVA). After 48 hours the time of stress, the comparison between viable cells and culturable cells showed the presence of viable cells, but not culturable. Moreover, removal of stress the cells were allowed to grow again able, providing evidence for the existence of a VBNC state in yeast.