Com o crescimento do setor de lentes de contato houve também um aumento de casos de ceratite por Acanthamoeba spp. A falta de cuidados na limpeza e manutenção de lentes pode levar à ocorrência dessa doença. Nesse estudo avaliou-se o perfil de 196 usuários de lentes de contato de clínicas particulares e do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA), através de entrevistas, para conhecer os tipos de lentes usadas, soluções de limpeza, conhecimento da patologia, entre outros, no período de maio de 2015 a outubro de 2016. No HCPA, 112 usuários (57,1%) responderam ao questionário enquanto nas clínicas particulares 84 usuários (42,9%) participaram da pesquisa. A maioria dos entrevistados eram mulheres 116 (59,2%), brancas 173 (89,6%) e com ensino superior 91 (46,4%). O uso de lentes de contato gelatinosas foi mais frequente nas clínicas particulares (78,6%) enquanto no HCPA as lentes mais usadas eram Rígidas Gás Permeáveis (RGP) (60,7%). A maioria dos pacientes usava solução multiuso na limpeza de suas lentes 131 (66,8%). Desconheciam que uma ameba poderia ser causadora da patologia 143 entrevistados (73,0%). Além disso, paralelamente, foi pesquisada a ocorrência de 25 casos de ceratite por Acanthamoeba spp. (nos anos de 1994 a 2015) em uma clínica particular e no HCPA. Foram analisados dados encontrados nos prontuários médicos, como os citados acima entre outros. A maioria eram mulheres (68,0%), brancas (44,0%) e com curso superior (40,0%). Em relação ao uso de lentes de contato a maioria dos pacientes usava lentes gelatinosas (66,7%). Sobre a limpeza e desinfecção, 64,0% utilizavam solução multiuso, mas usavam também soro fisiológico (48,0%) e água (36,0%). A falta de suspeição e a corrente confusão devido aos achados biomicroscópicos leva a um diagnóstico errado quase sempre confundido com herpes simples (36,0%) como mostra o resultado encontrado. Ações que auxiliem os usuários de lentes de contato e a continuidade do levantamento de casos de ceratite por Acanthamoeba spp. seriam necessárias para um conhecimento maior da patologia e consequente sucesso no tratamento. / The growth of the contact lens sector is responsible by the increase Acanthamoeba spp. keratitis cases. The lack of care in cleaning and maintenance of lenses can lead to the occurrence of this disease. In this study, the profile of 196 users of contact lenses from private clinics and Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA) was evaluated through interviews, to know the kind of lenses used, cleaning solutions, knowledge of pathology, among others from May 2015 to October 2016. At the HCPA, 112 users (57.1%) answered the questionnaire while in the private clinics 84 users (42.9%) participated of the survey. Most of the interviewees were women 116 (59.2%), white 173 (89.6%) and higher education 91 (46.4%). Soft contact lenses were the most frequent in private clinics (78.6%) while in HCPA the most used lenses were Rigid Permeable Gas (RGP) (60.7%). Most patients wore a multipurpose lens cleaning solution (66.8%), 143 (73.0%) of the interviewees, did not know that an amoeba could be the causer of keratitis. In addition, a survey the occurrence of 25 cases of keratitis caused by Acanthamoeba spp. was investigated (from 1994 to 2015) in a private clinic and at the HCPA. We analyzed data found in medical records, such as those cited above, among others. The majority were women (68.0%), white (44.0%) and higher education (40.0%). Regarding to the use of contact lenses, most patients used gel lenses (66.7%). Regarding to the cleaning and disinfection, 64.0% used multipurpose solution, but they also used saline solution (48.0%) and water (36.0%). Lack of suspicion and the current confusion due to the biomicroscopic findings leads to a misdiagnosis ordinarily confused with herpes simplex (36.0%) we found. Actions that assist the wearers of contact lenses and the continuity of the survey of Acanthamoeba keratitis cases would be necessary for a better knowledge of the pathology and consequent success in the treatment.

Com o crescimento do setor de lentes de contato houve também um aumento de casos de ceratite por Acanthamoeba spp. A falta de cuidados na limpeza e manutenção de lentes pode levar à ocorrência dessa doença. Nesse estudo avaliou-se o perfil de 196 usuários de lentes de contato de clínicas particulares e do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA), através de entrevistas, para conhecer os tipos de lentes usadas, soluções de limpeza, conhecimento da patologia, entre outros, no período de maio de 2015 a outubro de 2016. No HCPA, 112 usuários (57,1%) responderam ao questionário enquanto nas clínicas particulares 84 usuários (42,9%) participaram da pesquisa. A maioria dos entrevistados eram mulheres 116 (59,2%), brancas 173 (89,6%) e com ensino superior 91 (46,4%). O uso de lentes de contato gelatinosas foi mais frequente nas clínicas particulares (78,6%) enquanto no HCPA as lentes mais usadas eram Rígidas Gás Permeáveis (RGP) (60,7%). A maioria dos pacientes usava solução multiuso na limpeza de suas lentes 131 (66,8%). Desconheciam que uma ameba poderia ser causadora da patologia 143 entrevistados (73,0%). Além disso, paralelamente, foi pesquisada a ocorrência de 25 casos de ceratite por Acanthamoeba spp. (nos anos de 1994 a 2015) em uma clínica particular e no HCPA. Foram analisados dados encontrados nos prontuários médicos, como os citados acima entre outros. A maioria eram mulheres (68,0%), brancas (44,0%) e com curso superior (40,0%). Em relação ao uso de lentes de contato a maioria dos pacientes usava lentes gelatinosas (66,7%). Sobre a limpeza e desinfecção, 64,0% utilizavam solução multiuso, mas usavam também soro fisiológico (48,0%) e água (36,0%). A falta de suspeição e a corrente confusão devido aos achados biomicroscópicos leva a um diagnóstico errado quase sempre confundido com herpes simples (36,0%) como mostra o resultado encontrado. Ações que auxiliem os usuários de lentes de contato e a continuidade do levantamento de casos de ceratite por Acanthamoeba spp. seriam necessárias para um conhecimento maior da patologia e consequente sucesso no tratamento. / The growth of the contact lens sector is responsible by the increase Acanthamoeba spp. keratitis cases. The lack of care in cleaning and maintenance of lenses can lead to the occurrence of this disease. In this study, the profile of 196 users of contact lenses from private clinics and Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA) was evaluated through interviews, to know the kind of lenses used, cleaning solutions, knowledge of pathology, among others from May 2015 to October 2016. At the HCPA, 112 users (57.1%) answered the questionnaire while in the private clinics 84 users (42.9%) participated of the survey. Most of the interviewees were women 116 (59.2%), white 173 (89.6%) and higher education 91 (46.4%). Soft contact lenses were the most frequent in private clinics (78.6%) while in HCPA the most used lenses were Rigid Permeable Gas (RGP) (60.7%). Most patients wore a multipurpose lens cleaning solution (66.8%), 143 (73.0%) of the interviewees, did not know that an amoeba could be the causer of keratitis. In addition, a survey the occurrence of 25 cases of keratitis caused by Acanthamoeba spp. was investigated (from 1994 to 2015) in a private clinic and at the HCPA. We analyzed data found in medical records, such as those cited above, among others. The majority were women (68.0%), white (44.0%) and higher education (40.0%). Regarding to the use of contact lenses, most patients used gel lenses (66.7%). Regarding to the cleaning and disinfection, 64.0% used multipurpose solution, but they also used saline solution (48.0%) and water (36.0%). Lack of suspicion and the current confusion due to the biomicroscopic findings leads to a misdiagnosis ordinarily confused with herpes simplex (36.0%) we found. Actions that assist the wearers of contact lenses and the continuity of the survey of Acanthamoeba keratitis cases would be necessary for a better knowledge of the pathology and consequent success in the treatment.

Com o crescimento do setor de lentes de contato houve também um aumento de casos de ceratite por Acanthamoeba spp. A falta de cuidados na limpeza e manutenção de lentes pode levar à ocorrência dessa doença. Nesse estudo avaliou-se o perfil de 196 usuários de lentes de contato de clínicas particulares e do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA), através de entrevistas, para conhecer os tipos de lentes usadas, soluções de limpeza, conhecimento da patologia, entre outros, no período de maio de 2015 a outubro de 2016. No HCPA, 112 usuários (57,1%) responderam ao questionário enquanto nas clínicas particulares 84 usuários (42,9%) participaram da pesquisa. A maioria dos entrevistados eram mulheres 116 (59,2%), brancas 173 (89,6%) e com ensino superior 91 (46,4%). O uso de lentes de contato gelatinosas foi mais frequente nas clínicas particulares (78,6%) enquanto no HCPA as lentes mais usadas eram Rígidas Gás Permeáveis (RGP) (60,7%). A maioria dos pacientes usava solução multiuso na limpeza de suas lentes 131 (66,8%). Desconheciam que uma ameba poderia ser causadora da patologia 143 entrevistados (73,0%). Além disso, paralelamente, foi pesquisada a ocorrência de 25 casos de ceratite por Acanthamoeba spp. (nos anos de 1994 a 2015) em uma clínica particular e no HCPA. Foram analisados dados encontrados nos prontuários médicos, como os citados acima entre outros. A maioria eram mulheres (68,0%), brancas (44,0%) e com curso superior (40,0%). Em relação ao uso de lentes de contato a maioria dos pacientes usava lentes gelatinosas (66,7%). Sobre a limpeza e desinfecção, 64,0% utilizavam solução multiuso, mas usavam também soro fisiológico (48,0%) e água (36,0%). A falta de suspeição e a corrente confusão devido aos achados biomicroscópicos leva a um diagnóstico errado quase sempre confundido com herpes simples (36,0%) como mostra o resultado encontrado. Ações que auxiliem os usuários de lentes de contato e a continuidade do levantamento de casos de ceratite por Acanthamoeba spp. seriam necessárias para um conhecimento maior da patologia e consequente sucesso no tratamento. / The growth of the contact lens sector is responsible by the increase Acanthamoeba spp. keratitis cases. The lack of care in cleaning and maintenance of lenses can lead to the occurrence of this disease. In this study, the profile of 196 users of contact lenses from private clinics and Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA) was evaluated through interviews, to know the kind of lenses used, cleaning solutions, knowledge of pathology, among others from May 2015 to October 2016. At the HCPA, 112 users (57.1%) answered the questionnaire while in the private clinics 84 users (42.9%) participated of the survey. Most of the interviewees were women 116 (59.2%), white 173 (89.6%) and higher education 91 (46.4%). Soft contact lenses were the most frequent in private clinics (78.6%) while in HCPA the most used lenses were Rigid Permeable Gas (RGP) (60.7%). Most patients wore a multipurpose lens cleaning solution (66.8%), 143 (73.0%) of the interviewees, did not know that an amoeba could be the causer of keratitis. In addition, a survey the occurrence of 25 cases of keratitis caused by Acanthamoeba spp. was investigated (from 1994 to 2015) in a private clinic and at the HCPA. We analyzed data found in medical records, such as those cited above, among others. The majority were women (68.0%), white (44.0%) and higher education (40.0%). Regarding to the use of contact lenses, most patients used gel lenses (66.7%). Regarding to the cleaning and disinfection, 64.0% used multipurpose solution, but they also used saline solution (48.0%) and water (36.0%). Lack of suspicion and the current confusion due to the biomicroscopic findings leads to a misdiagnosis ordinarily confused with herpes simplex (36.0%) we found. Actions that assist the wearers of contact lenses and the continuity of the survey of Acanthamoeba keratitis cases would be necessary for a better knowledge of the pathology and consequent success in the treatment.

Espécies de Acanthamoeba pertencem ao grupo das amebas de vida livre e constituem um agente etiológico da ceratite amebiana, doença que pode causar inflamação ocular grave e até mesmo cegueira. Plantas do gênero Pterocaulon (Asteraceae) são utilizadas na medicina popular como agente anti-séptico e antifúngico. Neste trabalho, foi investigada a composição química do óleo essencial de P. polystachyum e avaliada a sua atividade amebicida contra A. polyphaga. As folhas da planta fresca foram submetidas à hidrodestilação, fornecendo um rendimento de 0,15% (w/v) de óleo essencial. O óleo foi analisado por Cromatografia a Gás acoplada a Espectrômetro de Massas (CG/MS), sendo o acetato de E-sesquilavandulil o principal componente, representando 43,8% da amostra. Para avaliar a atividade amebicida do óleo, foram testadas as concentrações de 20, 10, 5, 2,5 e 1,25 mg/mL contra trofozoítos de duas cepas ATCC de A. polyphaga (uma de origem clínica e outra ambiental). O óleo essencial nas concentrações de 10 e 20 mg/mL foi letal para 100% dos trofozoítos das duas cepas tanto em 24 quanto em 48 horas. O mesmo resultado foi mostrado na concentração de 5 mg/mL de óleo essencial contra os trofozoítos da cepa de origem ambiental de A. polyphaga. O óleo essencial não induziu o encistamento de Acanthamoeba. O efeito citotóxico do óleo essencial também foi avaliado em células de mamíferos, sendo determinado pelo ensaio de Brometo de 3-[4,5-dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazólio (MTT). Os resultados da atividade amebicida encontrada no óleo estão em conformidade com relato anterior em que os compostos lipofílicos obtidos desta planta foram ativos contra trofozoítos de A. castellanii. A utilização do óleo como componente de soluções de limpeza de lentes de contato e de superfícies, não deve ser descartada, entretanto maiores estudos com seus componentes majoritários precisam ser feitos. / Acanthamoeba species are free-living amoebae that constitute an etiological agent of Acanthamoeba keratitis, an illness that may cause severe ocular inflammation and induce blindness. Plants of the genus Pterocaulon (Asteraceae) are used in folk medicine as antiseptic and antifungal agent. In this work, the activity of P. polystachyum essential oil against A. polyphaga was assessed. The leaves of the fresh plant submitted to hydrodistillation yielded 0.15% (w/v) of essential oil that was analyzed by GC/MS being E-sesquilavandulyl acetate the major component, representing 43.8% of the oil. For assessment of the amoebicidal activity concentrations of 20, 10, 5, 2.5 and 1.25 mg/mL were tested against two A. polyphaga ATCC strains (environmental and clinical strains). The essential oil at the concentrations of 10 and 20 mg/mL was lethal to 100% of the trophozoites of both strains in 24h and 48h. The same effect was observed when the essential oil at the concentration of 5 mg/mL was assayed against the environmental strain of A. polyphaga trophozoítes. Essential oil cytotoxic effect in mammalian cells was determined by MTT assay. The amoebicidal effect (activity) obtained in this work is in accordance with previous report in which the lipophilic compounds from this plant were active against A. castellanii. Essential oil utilization as a component of contact lenses cleaning and surface disinfectant solutions should not be discarded, however further studies with its major component should be performed.

O gênero Acanthamoeba compreende protozoários que pertencem ao grupo das amebas de vida livre e estão amplamente dispersos na natureza. São conhecidos por causarem duas graves doenças, a Encefalite Amebiana Granulomatosa, em pacientes imunodeprimidos e a Ceratite Amebiana, principalmente em usuários de lentes de contatos imunocompetentes. A própolis verde é uma substância resinosa e balsâmica, conhecida na medicina alternativa por apresentar diversas atividades biológicas. Neste trabalho foi avaliada a atividade amebicida de um extrato aquoso de própolis verde contra trofozoítos e cistos de A. castellanii . Nas concentrações de 10 e 20 mg/mL, o extrato foi capaz de inativar 100% dos trofozoítos em 24 e 48 horas. A dose de 5 mg/mL inativou 100% dos trofozoítos em 72 horas. Os cistos foram inativados na concentração de 40 mg/mL após 24 horas de exposição ao extrato. O efeito citotóxico do extrato foi avaliado sobre células VERO e HCE através do ensaio MTT. O extrato não causou efeito citotóxico significativo nas concentrações 0,312, 0,625, 1,25 e 2,5 mg/mL sobre as células HCE e nas concentrações 2,5 e 5 sobre as células VERO. O ensaio de adesão realizado mostrou que a ligação de Acanthamoeba às células HCE possui comportamento dose-dependente em relação ao extrato de própolis verde. Assim, o presente estudo demonstrou a atividade antiparasitária da própolis verde frente a ambas às formas de Acanthamoeba, mostrando-se uma substância promissora para o desenvolvimento de fármaco alternativo, bem como para utilização na composição de soluções de limpeza de lentes de contato ou superfícies. Entretanto, mais estudos são necessários para compreender seus mecanismos de ação. / The genus Acanthamoeba comprises protozoa belonging to the group of free-living amoebas and it is widely scattered in nature. These protozoa are known to cause two serious diseases, Granulomatous Amebic Encephalitis in immunocompromised patients and amebic keratitis, especially in immunocompetent contact lens wearers. Green Propolis is a resinous and balsamic substance, known in alternative medicine because of its several biological activities. In this study we evaluated the amoebicide activity of an aqueous extract of propolis against trophozoites and cysts of A. castellanii. At concentrations of 10 and 20 mg/mL, the extract was able to inactivate 100% of trophozoites within 24 and 48 hours. The dose of 5 mg/mL inactivated 100% of trophozoites within 72 hours. The cysts were inactivated at a concentration of 40 mg/mL after 24 hours of exposure to the extract. The cytotoxic effect of the extract was evaluated on VERO and HCE cells by MTT assay. The extract had no significant cytotoxic effect at concentrations of 0.312, 0.625, 1.25 and 2.5 mg/ml about HCE cells and at concentrations of 2.5 and 5 on VERO cells. The adhesion test performed showed that the attachment of Acanthamoeba to HCE cells have dose-dependent behavior in relation to the propolis extract. Thus, this study demonstrated the antiparasitic activity of propolis against both forms of Acanthamoeba and proved to be a promising substance for the development of an alternative drug, as well as its use in the formulation of cleaning solutions for contact lenses or surfaces. However, more studies are needed to understand their mechanisms of action.

O gênero Acanthamoeba compreende protozoários que pertencem ao grupo das amebas de vida livre e estão amplamente dispersos na natureza. São conhecidos por causarem duas graves doenças, a Encefalite Amebiana Granulomatosa, em pacientes imunodeprimidos e a Ceratite Amebiana, principalmente em usuários de lentes de contatos imunocompetentes. A própolis verde é uma substância resinosa e balsâmica, conhecida na medicina alternativa por apresentar diversas atividades biológicas. Neste trabalho foi avaliada a atividade amebicida de um extrato aquoso de própolis verde contra trofozoítos e cistos de A. castellanii . Nas concentrações de 10 e 20 mg/mL, o extrato foi capaz de inativar 100% dos trofozoítos em 24 e 48 horas. A dose de 5 mg/mL inativou 100% dos trofozoítos em 72 horas. Os cistos foram inativados na concentração de 40 mg/mL após 24 horas de exposição ao extrato. O efeito citotóxico do extrato foi avaliado sobre células VERO e HCE através do ensaio MTT. O extrato não causou efeito citotóxico significativo nas concentrações 0,312, 0,625, 1,25 e 2,5 mg/mL sobre as células HCE e nas concentrações 2,5 e 5 sobre as células VERO. O ensaio de adesão realizado mostrou que a ligação de Acanthamoeba às células HCE possui comportamento dose-dependente em relação ao extrato de própolis verde. Assim, o presente estudo demonstrou a atividade antiparasitária da própolis verde frente a ambas às formas de Acanthamoeba, mostrando-se uma substância promissora para o desenvolvimento de fármaco alternativo, bem como para utilização na composição de soluções de limpeza de lentes de contato ou superfícies. Entretanto, mais estudos são necessários para compreender seus mecanismos de ação. / The genus Acanthamoeba comprises protozoa belonging to the group of free-living amoebas and it is widely scattered in nature. These protozoa are known to cause two serious diseases, Granulomatous Amebic Encephalitis in immunocompromised patients and amebic keratitis, especially in immunocompetent contact lens wearers. Green Propolis is a resinous and balsamic substance, known in alternative medicine because of its several biological activities. In this study we evaluated the amoebicide activity of an aqueous extract of propolis against trophozoites and cysts of A. castellanii. At concentrations of 10 and 20 mg/mL, the extract was able to inactivate 100% of trophozoites within 24 and 48 hours. The dose of 5 mg/mL inactivated 100% of trophozoites within 72 hours. The cysts were inactivated at a concentration of 40 mg/mL after 24 hours of exposure to the extract. The cytotoxic effect of the extract was evaluated on VERO and HCE cells by MTT assay. The extract had no significant cytotoxic effect at concentrations of 0.312, 0.625, 1.25 and 2.5 mg/ml about HCE cells and at concentrations of 2.5 and 5 on VERO cells. The adhesion test performed showed that the attachment of Acanthamoeba to HCE cells have dose-dependent behavior in relation to the propolis extract. Thus, this study demonstrated the antiparasitic activity of propolis against both forms of Acanthamoeba and proved to be a promising substance for the development of an alternative drug, as well as its use in the formulation of cleaning solutions for contact lenses or surfaces. However, more studies are needed to understand their mechanisms of action.

Espécies de Acanthamoeba pertencem ao grupo das amebas de vida livre e constituem um agente etiológico da ceratite amebiana, doença que pode causar inflamação ocular grave e até mesmo cegueira. Plantas do gênero Pterocaulon (Asteraceae) são utilizadas na medicina popular como agente anti-séptico e antifúngico. Neste trabalho, foi investigada a composição química do óleo essencial de P. polystachyum e avaliada a sua atividade amebicida contra A. polyphaga. As folhas da planta fresca foram submetidas à hidrodestilação, fornecendo um rendimento de 0,15% (w/v) de óleo essencial. O óleo foi analisado por Cromatografia a Gás acoplada a Espectrômetro de Massas (CG/MS), sendo o acetato de E-sesquilavandulil o principal componente, representando 43,8% da amostra. Para avaliar a atividade amebicida do óleo, foram testadas as concentrações de 20, 10, 5, 2,5 e 1,25 mg/mL contra trofozoítos de duas cepas ATCC de A. polyphaga (uma de origem clínica e outra ambiental). O óleo essencial nas concentrações de 10 e 20 mg/mL foi letal para 100% dos trofozoítos das duas cepas tanto em 24 quanto em 48 horas. O mesmo resultado foi mostrado na concentração de 5 mg/mL de óleo essencial contra os trofozoítos da cepa de origem ambiental de A. polyphaga. O óleo essencial não induziu o encistamento de Acanthamoeba. O efeito citotóxico do óleo essencial também foi avaliado em células de mamíferos, sendo determinado pelo ensaio de Brometo de 3-[4,5-dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazólio (MTT). Os resultados da atividade amebicida encontrada no óleo estão em conformidade com relato anterior em que os compostos lipofílicos obtidos desta planta foram ativos contra trofozoítos de A. castellanii. A utilização do óleo como componente de soluções de limpeza de lentes de contato e de superfícies, não deve ser descartada, entretanto maiores estudos com seus componentes majoritários precisam ser feitos. / Acanthamoeba species are free-living amoebae that constitute an etiological agent of Acanthamoeba keratitis, an illness that may cause severe ocular inflammation and induce blindness. Plants of the genus Pterocaulon (Asteraceae) are used in folk medicine as antiseptic and antifungal agent. In this work, the activity of P. polystachyum essential oil against A. polyphaga was assessed. The leaves of the fresh plant submitted to hydrodistillation yielded 0.15% (w/v) of essential oil that was analyzed by GC/MS being E-sesquilavandulyl acetate the major component, representing 43.8% of the oil. For assessment of the amoebicidal activity concentrations of 20, 10, 5, 2.5 and 1.25 mg/mL were tested against two A. polyphaga ATCC strains (environmental and clinical strains). The essential oil at the concentrations of 10 and 20 mg/mL was lethal to 100% of the trophozoites of both strains in 24h and 48h. The same effect was observed when the essential oil at the concentration of 5 mg/mL was assayed against the environmental strain of A. polyphaga trophozoítes. Essential oil cytotoxic effect in mammalian cells was determined by MTT assay. The amoebicidal effect (activity) obtained in this work is in accordance with previous report in which the lipophilic compounds from this plant were active against A. castellanii. Essential oil utilization as a component of contact lenses cleaning and surface disinfectant solutions should not be discarded, however further studies with its major component should be performed.

Espécies de Acanthamoeba pertencem ao grupo das amebas de vida livre e constituem um agente etiológico da ceratite amebiana, doença que pode causar inflamação ocular grave e até mesmo cegueira. Plantas do gênero Pterocaulon (Asteraceae) são utilizadas na medicina popular como agente anti-séptico e antifúngico. Neste trabalho, foi investigada a composição química do óleo essencial de P. polystachyum e avaliada a sua atividade amebicida contra A. polyphaga. As folhas da planta fresca foram submetidas à hidrodestilação, fornecendo um rendimento de 0,15% (w/v) de óleo essencial. O óleo foi analisado por Cromatografia a Gás acoplada a Espectrômetro de Massas (CG/MS), sendo o acetato de E-sesquilavandulil o principal componente, representando 43,8% da amostra. Para avaliar a atividade amebicida do óleo, foram testadas as concentrações de 20, 10, 5, 2,5 e 1,25 mg/mL contra trofozoítos de duas cepas ATCC de A. polyphaga (uma de origem clínica e outra ambiental). O óleo essencial nas concentrações de 10 e 20 mg/mL foi letal para 100% dos trofozoítos das duas cepas tanto em 24 quanto em 48 horas. O mesmo resultado foi mostrado na concentração de 5 mg/mL de óleo essencial contra os trofozoítos da cepa de origem ambiental de A. polyphaga. O óleo essencial não induziu o encistamento de Acanthamoeba. O efeito citotóxico do óleo essencial também foi avaliado em células de mamíferos, sendo determinado pelo ensaio de Brometo de 3-[4,5-dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazólio (MTT). Os resultados da atividade amebicida encontrada no óleo estão em conformidade com relato anterior em que os compostos lipofílicos obtidos desta planta foram ativos contra trofozoítos de A. castellanii. A utilização do óleo como componente de soluções de limpeza de lentes de contato e de superfícies, não deve ser descartada, entretanto maiores estudos com seus componentes majoritários precisam ser feitos. / Acanthamoeba species are free-living amoebae that constitute an etiological agent of Acanthamoeba keratitis, an illness that may cause severe ocular inflammation and induce blindness. Plants of the genus Pterocaulon (Asteraceae) are used in folk medicine as antiseptic and antifungal agent. In this work, the activity of P. polystachyum essential oil against A. polyphaga was assessed. The leaves of the fresh plant submitted to hydrodistillation yielded 0.15% (w/v) of essential oil that was analyzed by GC/MS being E-sesquilavandulyl acetate the major component, representing 43.8% of the oil. For assessment of the amoebicidal activity concentrations of 20, 10, 5, 2.5 and 1.25 mg/mL were tested against two A. polyphaga ATCC strains (environmental and clinical strains). The essential oil at the concentrations of 10 and 20 mg/mL was lethal to 100% of the trophozoites of both strains in 24h and 48h. The same effect was observed when the essential oil at the concentration of 5 mg/mL was assayed against the environmental strain of A. polyphaga trophozoítes. Essential oil cytotoxic effect in mammalian cells was determined by MTT assay. The amoebicidal effect (activity) obtained in this work is in accordance with previous report in which the lipophilic compounds from this plant were active against A. castellanii. Essential oil utilization as a component of contact lenses cleaning and surface disinfectant solutions should not be discarded, however further studies with its major component should be performed.

O gênero Acanthamoeba compreende protozoários que pertencem ao grupo das amebas de vida livre e estão amplamente dispersos na natureza. São conhecidos por causarem duas graves doenças, a Encefalite Amebiana Granulomatosa, em pacientes imunodeprimidos e a Ceratite Amebiana, principalmente em usuários de lentes de contatos imunocompetentes. A própolis verde é uma substância resinosa e balsâmica, conhecida na medicina alternativa por apresentar diversas atividades biológicas. Neste trabalho foi avaliada a atividade amebicida de um extrato aquoso de própolis verde contra trofozoítos e cistos de A. castellanii . Nas concentrações de 10 e 20 mg/mL, o extrato foi capaz de inativar 100% dos trofozoítos em 24 e 48 horas. A dose de 5 mg/mL inativou 100% dos trofozoítos em 72 horas. Os cistos foram inativados na concentração de 40 mg/mL após 24 horas de exposição ao extrato. O efeito citotóxico do extrato foi avaliado sobre células VERO e HCE através do ensaio MTT. O extrato não causou efeito citotóxico significativo nas concentrações 0,312, 0,625, 1,25 e 2,5 mg/mL sobre as células HCE e nas concentrações 2,5 e 5 sobre as células VERO. O ensaio de adesão realizado mostrou que a ligação de Acanthamoeba às células HCE possui comportamento dose-dependente em relação ao extrato de própolis verde. Assim, o presente estudo demonstrou a atividade antiparasitária da própolis verde frente a ambas às formas de Acanthamoeba, mostrando-se uma substância promissora para o desenvolvimento de fármaco alternativo, bem como para utilização na composição de soluções de limpeza de lentes de contato ou superfícies. Entretanto, mais estudos são necessários para compreender seus mecanismos de ação. / The genus Acanthamoeba comprises protozoa belonging to the group of free-living amoebas and it is widely scattered in nature. These protozoa are known to cause two serious diseases, Granulomatous Amebic Encephalitis in immunocompromised patients and amebic keratitis, especially in immunocompetent contact lens wearers. Green Propolis is a resinous and balsamic substance, known in alternative medicine because of its several biological activities. In this study we evaluated the amoebicide activity of an aqueous extract of propolis against trophozoites and cysts of A. castellanii. At concentrations of 10 and 20 mg/mL, the extract was able to inactivate 100% of trophozoites within 24 and 48 hours. The dose of 5 mg/mL inactivated 100% of trophozoites within 72 hours. The cysts were inactivated at a concentration of 40 mg/mL after 24 hours of exposure to the extract. The cytotoxic effect of the extract was evaluated on VERO and HCE cells by MTT assay. The extract had no significant cytotoxic effect at concentrations of 0.312, 0.625, 1.25 and 2.5 mg/ml about HCE cells and at concentrations of 2.5 and 5 on VERO cells. The adhesion test performed showed that the attachment of Acanthamoeba to HCE cells have dose-dependent behavior in relation to the propolis extract. Thus, this study demonstrated the antiparasitic activity of propolis against both forms of Acanthamoeba and proved to be a promising substance for the development of an alternative drug, as well as its use in the formulation of cleaning solutions for contact lenses or surfaces. However, more studies are needed to understand their mechanisms of action.

Acanthamoeba spp. são patógenos protistas de vida livre, capazes de causar ceratite grave e encefalite granulomatosa fatal. Trofozoíto é a forma infectiva de Acanthamoeba spp. e pode provocar infecções em uma variedade de hospedeiros mamíferos e seres humanos, como resultado da complexa interação patógeno-hospedeiro. O dano causado por trofozoítos em infecções da córnea ou do cérebro é o resultado de vários mecanismos patogênicos diferentes não elucidados a nível molecular até agora. Neste trabalho, descrevemos os resultados da caracterização genotípica de isolados ambientais de Acanthamoeba spp. e a identificão por análises proteômicas do repertório de proteínas expressas por trofozoítos de Acanthamoeba polyphaga. Nossos resultados permitiram a caracterização de 13 isolados ambientais de Acanthamoeba spp. obtidos da água de piscinas, que foram classificados em nível de genótipo com base na análise da sequência do gene da subunidade menor do rDNA. Nove dos 13 isolados foram identificados como pertencentes ao genótipo T5, três ao genótipo T4 e um ao genótipo T3. Vários genótipos têm sido relatados em todo o mundo como agentes causadores de ceratite amebiana, incluindo os genótipos T3, T4 e T5. O presente estudo indica que o genótipo T5 é um contaminante comum na água de piscinas. Este trabalho também estabeleceu uma ampla análise do repertório de proteínas expressas por trofozoítos de A. polyphaga, baseado no conjunto de estratégias por 2-DE MS/MS e LC-MS/MS. Foram identificadas 192 proteínas não redundantes. Um mapa proteômico de referência de A. polyphaga na faixa de pH 3-10 foi produzido e de 370 spots resolvidos, 136 proteínas foram identificadas. A classificação funcional das proteínas revelou diversas proteínas com relevância potencial para a sobrevivência do parasita e infecção de hospedeiros mamíferos, incluindo proteínas de superfície e proteínas relacionadas aos mecanismos de defesa. Este estudo descreveu a primeira análise proteômica abrangente do estágio de trofozoíto de Acanthamoeba spp. e fornece bases para estudos prospectivos, comparativos e funcionais de proteínas envolvidas nos mecanismos moleculares de sobrevivência, desenvolvimento e patogenicidade de Acanthamoeba spp. / Acanthamoeba spp. are free-living protist pathogen, capable of causing a blinding keratitis and fatal granulomatous encephalitis. Trophozoite is the form infective of Acanthamoeba spp. and can provoke infections in a variety of mammalian hosts and humans, as result of complex interaction host-pathogen. The damage caused by trophozoites in human corneal or brain infections is the result of several different pathogenic mechanisms not elucidated at the molecular level so far. Here, we describe the results of the characterization genotypic of environment isolates of Acanthamoeba spp. and we performed proteomic analysis to identify the repertoire of proteins expressed by trophozoites of an environmental strain of Acanthamoeba polyphaga. Our results allowed the characterization of 13 Acanthamoeba isolates from swimming pools water that were classified at the genotype level based on the sequence analysis of the small-subunit rDNA gene. Nine of the 13 isolates were genotype T5, three were genotype T4, and one was T3. Several genotypes have been reported worldwide as causative agents of keratitis, including genotypes T3, T4, and T5. The present study indicates that genotype T5 is a common contaminant in swimming-pool water. This work also established a comprehensive analysis of the proteins expressed by A. polyphaga trophozoites based on complementary 2-DE MS/MS and gel-free LC-MS/MS approaches. Overall, 192 nonredundant proteins were identified. An A. polyphaga proteomic map in pH range 3-10 was produced, with protein identification for 136 out of 370 resolved spots. Functional classification of identified proteins revealed several proteins with potential relevance for parasite survival and infection of mammal hosts, including surface proteins and proteins related to defense mechanisms. This study describes the first comprehensive proteomic survey of the trophozoite infective stage of an Acanthamoeba species, and provides foundations to prospective, comparative and functional studies of Acanthamoeba proteins involved in molecular mechanisms of survival, development, and pathogenicity.