Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Due to a raise in forest ecosystem alterations, either by anthropic or natural action, there has been a need for knowledge and conservation of Brazilian forest genetic resources, since environment preservation has a great social and economical interest. Eugenia involucrata DC. (Cerejeira-do-mato), a Brazilian forest fruit species which has been used in projects for the recovery of degraded areas and legal and permanent reservation areas can as well be an alternative income for family agriculture, through the use of its non-timber products. However, besides this species having recalcitrant seeds, which lose viability fast, there is a lack of scientific and technological information that subsidize its sustainable use. Because of this, the present paper aimed at selecting efficient methods of calogenesis induction from leaf explants, addressing indirect somatic embryogenesis and, simultaneously, the improvement of this species in vitro cultivation techniques. In regard to calogenesis in vitro, microbial contamination and callus induction on leaf discs of Eugenia involucrata were assessed and selected, about phenolic oxidation: the combinations of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) and Thidiazuron (TDZ) concentrations, the same way, the embryogenic potential of the calluses formed was assessed, through a histochemical test; sucrose concentrations; the combinations of sucrose and TDZ concentrations; and, also, the reduction of sucrose and 2,4-D and TDZ phytoregulators concentrations. All of them added to MS nutrient medium. As main results, the following stand out: the phenolic oxidation was higher in the presence of 2,4-D, and the combination of 2,4-D and TDZ was not significant in callus formation, only cytokinin, however the presence of auxin in the nutrient medium is essential for calogenesis. The same way, the calluses presented embryogenic potential with a friable aspect and nodular structures; TDZ has influenced the microbial contamination, once in its presence there is a smaller occurrence of bacterial colonies and fungal mycelia. Sucrose and TDZ, when applied in isolation, influenced the formation and quality of the calluses, however, the interaction between them was not significant. The decrease of sucrose and phytoregulators 2,4-D and TDZ did not affect the tested variables. The best combinations of 2,4-D and TDZ for calogenesis on leaf discs of Eugenia involucrata are 5 and 5 μM and 5 and 10 μM, respectively. The most indicated concentration of TDZ is 5 μM, for it being the concentration with which the calluses have an improved quality and, simultaneously, contributes for cost reduction. The most efficient sucrose concentrations for calogenesis are 30 or 90 gL-¹, being that the calluses quality is superior in the bigger one. The calogenic formation on leaf discs of Eugenia involucrata aiming at an indirect somatic embryogenesis is possible. / Em decorrência do aumento nas alterações dos ecossistemas florestais, por ação natural ou antrópica, tem havido uma demanda por conhecimento e conservação de recursos genéticos florestais do Brasil, haja vista que é de grande interesse social e econômico a preservação do ambiente. A Eugenia involucrata DC. (Cerejeira-do-mato) por ser uma espécie frutífera florestal, nativa do Brasil, que vem sendo utilizada em projetos de recuperação de áreas degradadas, em áreas de reserva legal e de preservação permanente, pode servir, também, como uma alternativa de renda para a agricultura familiar, por meio da utilização de seus produtos não madeireiros. Entretanto, além dessa espécie possuir sementes recalcitrantes, que perdem a viabilidade com rapidez, há carência de informações científicas e tecnológicas que subsidiem a sua utilização sustentável. Em virtude disso, o presente trabalho objetivou selecionar métodos eficientes de indução à calogênese a partir de explantes foliares, visando à embriogênese somática indireta, e, simultaneamente, o aperfeiçoamento de técnicas de cultivo in vitro dessa espécie. No que diz respeito à calogênese in vitro, foram avaliadas e selecionadas, sobre a oxidação fenólica, a contaminação microbiana e a indução de calos em discos foliares de Eugenia involucrata: as combinações de concentrações de ácido 2,4- diclorofenoxiacético (2,4-D) e Thidiazuron (TDZ), bem como foi avaliado o potencial embriogênico, por meio de teste histoquímico, dos calos formados; as concentrações de sacarose; as combinações de concentrações de sacarose e TDZ; e, ainda, a diminuição de concentrações de sacarose e dos fitorreguladores 2,4-D e TDZ. Todos adicionados ao meio nutritivo MS. Como principais resultados destacam-se: a oxidação fenólica foi maior na presença do 2,4-D, e a combinação de 2,4-D e TDZ não foi significativa na formação de calos, somente a citocinina, entretanto a presença da auxina no meio nutritivo é essencial para a calogênese. Igualmente, os calos apresentaram potencial embriogênico com aspecto friável e estruturas nodulares; o TDZ influenciou a contaminação microbiana, já que na sua presença há menor incidência de colônias bacterianas e micélios fúngicos. A sacarose e o TDZ, quando empregados isoladamente, influenciaram a formação e a qualidade dos calos, entretanto, a interação entre eles não foi significativa. A diminuição da sacarose e dos fitorreguladores 2,4-D e TDZ não afetaram as variáveis testadas. As melhores combinações de 2,4-D e TDZ para a calogênese em discos foliares de Eugenia involucrata são 5 e 5 μM ou 5 e 10 μM respectivamente. A concentração de TDZ mais indicada é de 5 μM, por ser a concentração em que os calos têm a qualidade incrementada, e, simultaneamente, contribui para a redução de custos. As concentrações de sacarose mais eficientes para a calogênese são 30 ou 90 gL-1, sendo que na maior, a qualidade dos calos é superior. É possível a formação calogênica em discos foliares de Eugenia involucrata visando à embriogênese somática indireta.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Eugenia involucrata DC. is a native forest species in Brazil, and other countries in South America such as Argentina, Uruguay and Paraguay, with important economic, ecological and silvicultural. The species has edible fruit is widely used in cookery and has medicinal properties. Its seeds are recalcitrant, losing the viability and germination after collecting fruit, not supporting, thus avoiding long periods of storage. Because of this, we need studies to know the characteristics of the species, aiming at the production of quality seedlings. Thus, the overall objective of this study was to evaluate methodologies that can contribute to the propagation of Eugenia involucrata. They were evaluated the health quality, physical and physiological two lots of seeds, and different agents disinfectants for aseptic in vitro germination of seeds and different substrates, in order to ex vitro germination of the species. For in vitro establishment of nodal segments Eugenia involucrata were exposed to different disinfectants agents for the control of microbial contamination. Moreover, they also tested different pH values, sucrose and agar. The results indicated that Eugenia involucrata seeds present variations regarding the biometric features, high humidity and association with fungi. The filter paper substrate was not efficient for the germination of seeds of both lots evaluated. The vermiculite and grit:vermiculite in the ratio 1:1, gave the highest average of emerged seedlings. However, the seedlings did not develop appropriately if the vermiculite was disposed on the seeds, suggesting additional studies in this regard. For the in vitro establishment of nodal segments, tested disinfectants agents significantly decreased the fungal contamination in the explants, recommending the use of disinfectants agents Ca(ClO)2 3,0% (v/v) combined with NaClO 2,0% (v/v), however, these concentrations have not managed satisfactorily bacterial contamination. The pH was adjusted to 6,0 proved most efficient establishment of the explants in vitro. One can use 10g L-1 sucrose and 4g L-1 agar for the in vitro establishment phase nodal segments of Eugenia involucrata. / Eugenia involucrata DC. é uma espécie florestal nativa do Brasil, além de outros países da América do Sul, como Argentina, Uruguai e Paraguai, apresentando importância econômica, silvicultural e ecológica. A espécie possui frutos comestíveis sendo muito utilizados na culinária e apresenta propriedades medicinais. Suas sementes são recalcitrantes, perdendo a viabilidade e o poder germinativo após a coleta dos frutos, não suportando, assim, longos períodos de armazenamento. Por conta disso, são necessários estudos que permitam conhecer as características da espécie, visando a produção de mudas de qualidade. Desta maneira, o objetivo geral do presente trabalho foi avaliar metodologias que possam contribuir para a propagação vegetativa de Eugenia involucrata. Foram avaliados aspectos da qualidade sanitária, física e fisiológica de dois lotes de sementes, além de diferentes agentes desinfestantes para a germinação asséptica in vitro de sementes e diferentes substratos, visando à germinação ex vitro da espécie. Para o estabelecimento in vitro, segmentos nodais de Eugenia involucrata foram expostos a diferentes agentes desinfestantes, visando o controle da contaminação microbiana. Além disso, foram testados, também, diferentes valores de pH, sacarose e ágar. Os resultados obtidos indicaram que as sementes de Eugenia involucrata apresentam variações quanto aos aspectos biométricos, alto grau de umidade e associação com fungos. O substrato papel filtro não se mostrou eficiente para a germinação das sementes de ambos os lotes avaliados. Os substratos vermiculita e areia:vermiculita na proporção 1:1, proporcionaram as maiores médias de plântulas emergidas. No entanto, as plântulas não se desenvolveram de maneira adequada quando a vermiculita estava disposta sobre as sementes, sugerindo estudos adicionais a esse respeito. Para o estabelecimento in vitro de segmentos nodais, os agentes desinfestantes testados diminuíram significativamente a contaminação fúngica nos explantes, recomendando-se a utilização dos agentes desinfestantes Ca(ClO)2 a 3,0% (v/v) combinado a NaClO a 2,0% (v/v), entretanto, essas concentrações não controlaram de maneira satisfatória a contaminação bacteriana. O pH ajustado para 6,0 mostrou-se mais eficiente ao estabelecimento in vitro dos explantes. Pode-se utilizar 10g L-1 de sacarose e 4g L-1 de ágar durante a fase de estabelecimento in vitro de segmentos nodais de Eugenia involucrata.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study aimed to obtain scientific information about the species Eugenia involucrata DC (wild cherry), through analysis of ecological and silvicultural parameters. Initially, in a remnant of Decidual Seasonal Forest, at the Army Instruction Center of Santa Maria (53 ° 52'O and 29 ° 46'S), the trees with ≥ 30 cm were measured in 14 plots of 20 x 100 m, in four parallel tracks. These plots were subdivided to observe too the population with <30 cm and seed rain. In the strips with 20 m wide and varied length (total of 8.8 ha), 23 matrix trees ≥ 30 cm were selected in which the reproductive phenology was monitored between August and December 2007. In November, the seeds were collected and beneficiated, and one sample was used in seed analysis, for germination test in substrates (paper roll and vermiculite), moisture content, thousand kernel weight, tetrazolium test and electric conductivity. The other sample of the seeds was used to assess the development of the seedlings which were produced in containers of four sizes (tubes 53, 115, 180 and 280 cm3), in the nursery and field. In the remnant, the species was presented with a stable population, with entrance fee and no mortality was found, despite the reproductive season. In the population ≥ 30 cm, it was observed an average increase of 0.5 cm yr-1 and cluster distribution. In this class, the species showed six individuals per hectare, with 53 individuals with potential for selection in 8.8 ha. The flowering stage was in the months of September to October, and the fruiting process from October to November. According to the effective number (Ne), in order to represent the population, at least 60 fruits from the 23 trees should participate in the collection; however, only ten individuals produced fruit with varied intensity, forming the plot used in the study. In the laboratory, no significant difference between substrates (41.9% of germination) was found, in the tetrazolium test, in the 24 hours of preparation, cross-sectional and 3 hours in a solution 0.05%, the tissues were visible; the electric conductivity found was 3.54 for 25 mL, 1.93 for 50 mL and 1.48 for 75 mL. There were no significant differences in the emergence and seedling size for the containers of different sizes, reaching average height (h), stem diameter (dc) and ratio of height to diameter ratio (h/d): 6.91 cm, 2.27 mm and 3.06, respectively, after 330 days in the nursery. In the field, the indifference in size remained, resulting after 330 days, h, dc and h/d, equal to 23.86 cm, 4.26 mm and 5.68, respectively. The remnant has the potential for collection, however, it will depend on the selection of a large number of trees (considering the individual s variability production); in the germination tests, the paper roll allows a greater precision in the analysis, with the first count at 25 days; for the production of seedlings, the 53 cm³ container can be used. / O objetivo deste trabalho foi obter informações científicas sobre a espécie Eugenia involucrata DC. (cerejeira-do-mato), por meio de análise dos parâmetros ecológicos e silviculturais. Inicialmente, em remanescente de Floresta Estacional Decidual, no Centro de Instruções de Santa Maria (53°52 O e 29°46 S), os indivíduos com CAP ≥ 30 cm foram quantificados em 14 parcelas de 20 x 100 m, dentro de quatro faixas paralelas. Essas parcelas foram subdivididas, para observar a também a população com CAP < 30 cm e chuva de sementes. Nas faixas com 20 m de largura e comprimento variado (total de 8,8 ha) foram selecionadas 23 árvores matrizes (CAP ≥ 30 cm), onde a fenologia reprodutiva foi monitorada de agosto a dezembro de 2007. Em novembro do mesmo ano, as sementes foram coletadas e beneficiadas, sendo que, parte foi utilizada na análise de sementes, testando a germinação em (41,9% de germinação); no teste de tetrazólio em 24 horas de pré-condicionamento, corte transversal e 3 horas em solução 0,05% os tecidos foram visíveis; a condutividade elétrica encontrada foi de 3,54 para 25 mL, 1,93 para 50 mL e 1,48 para 75 mL. Não houve diferenças significativas na emergência e do tamanho das mudas para os diferentes tamanhos de recipiente, atingindo médias de altura (h), diâmetro do colo (dc) e relação altura/ diâmetro do colo (h/d): 6,91 cm, 2,27 mm e 3,06, respectivamente, após 330 dias em viveiro. No campo a indiferença no tamanho manteve-se, resultando após 330 dias, h, dc e h/d, igual a 23,86 cm, 4,26 mm e 5,68, respectivamente. O remanescente possui potencialidade para coleta, entretanto, dependerá da seleção de maior número de árvores (considerando a produção variável entre indivíduos); nos testes de germinação o rolo de papel permite maior precisão na análise, com primeira contagem aos 25 dias; para a produção de mudas, o recipiente de 53 cm³ pode ser utilizado. substratos (rolo de papel e vermiculita), grau de umidade, peso de mil sementes, teste de tetrazólio e condutividade elétrica. A outra parte das sementes foi utilizada para a avaliação do desenvolvimento das mudas, produzidas em quatro tamanhos de recipientes (tubetes 53, 115, 180 e 280 cm3), no viveiro e campo. No remanescente, a espécie apresentou estabilidade da população, com taxa de ingresso e mortalidade nula, apesar da sazonalidade reprodutiva. Na população com CAP ≥ 30 cm observou-se incremento médio de 0,5 cm ano-1 e distribuição agrupada. Nessa classe, a espécie apresentou seis indivíduos por hectare, com 53 indivíduos potenciais para seleção nos 8,8 ha. A fase de floração foi no período de setembro a outubro e a frutificação de outubro a novembro. De acordo com o número efetivo (Ne), para representar a população, no mínimo 60 frutos das 23 árvores deveriam participar da coleta, entretanto somente dez indivíduos produziram frutos com intensidade variada, formando o lote utilizado no estudo. No laboratório, não houve diferença significativa entre substratos (41,9% de germinação); no teste de tetrazólio em 24 horas de pré-condicionamento, corte transversal e 3 horas em solução 0,05% os tecidos foram visíveis; a condutividade elétrica encontrada foi de 3,54 para 25 mL, 1,93 para 50 mL e 1,48 para 75 mL. Não houve diferenças significativas na emergência e do tamanho das mudas para os diferentes tamanhos de recipiente, atingindo médias de altura (h), diâmetro do colo (dc) e relação altura/ diâmetro do colo (h/d): 6,91 cm, 2,27 mm e 3,06, respectivamente, após 330 dias em viveiro. No campo a indiferença no tamanho manteve-se, resultando após 330 dias, h, dc e h/d, igual a 23,86 cm, 4,26 mm e 5,68, respectivamente. O remanescente possui potencialidade para coleta, entretanto, dependerá da seleção de maior número de árvores (considerando a produção variável entre indivíduos); nos testes de germinação o rolo de papel permite maior precisão na análise, com primeira contagem aos 25 dias; para a produção de mudas, o recipiente de 53 cm³ pode ser utilizado.