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Estudo de testes in vitro para predição de fertilidade de machos mamíferos / Study of in vitro assays to predict mammalian male fertilityCorcini, Carine Dahl 25 June 2010 (has links)
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Previous issue date: 2010-06-25 / The knowledge of the reproductive potential of a male has economical and
reproductive importance, especially if he is used in artificial insemination programs.
The conventional assays for evaluating seminal quality do not have the capacity of
measuring the fertilizing potential of a sample, they only indicate if it is within the
acceptable parameters for insemination, according to the Brazilian College of Animal
Reproduction. Into this context, the in vitro sperm penetration assay presents itself as
an alternative laboratorial test to categorize fertile males regarding their fecundation
capacity, since they mimic in vitro what happens in vivo. However, this assay has its
use limited by the difficulty of execution and by the utilization of high cost equipment.
The present work aimed to find a new biological model to study male reproductive
aspects and to evaluate alternatives to simplify and to decrease costs of the assay
execution: use of the chicken egg inner perivitelline layer (IPVL) penetration assay
and its association with in vitro and in vivo parameters; use of BTS as incubation
media for the in vitro penetration assay, and female gametes cryopreservation using
different methods. It was concluded that: 1) Calomys laucha can be used as a
biological model; 2) it is possible to use the inner perivitelline layer as a substrate in
assays to predict fertility of Calomys laucha males; 3) the IPVL has receptors that
allow swine sperm binding, therefore presents potential for use in male fertility
diagnostic tests; 4) it is possible to use BTS as incubation media for the in vitro
penetration assay, in oocytes or in IPVL, and in water-bath without CO2, and 5) the
cryopreservation of ovaries at -20ºC or the refrigeration of oocytes in PBS at 5ºC
before the execution of the in vitro oocyte penetration assay, using mTBM media, is
an alternative to the use of fresh oocytes in tests to predict swine semen fertility. / O conhecimento do potencial reprodutivo de um macho é de importância econômica
e reprodutiva, principalmente se ele é utilizado em programa de inseminação
artificial. Os testes convencionais que avaliam a qualidade seminal não possuem a
capacidade de medir o potencial fertilizante de uma amostra e, apenas indicam se a
mesma se encontra dentro dos parâmetros aceitáveis para a inseminação segundo
o Colégio Brasileiro de Reprodução Animal. O teste de penetração espermática in
vitro, aparece neste contexto como um teste laboratorial alternativo para categorizar
os machos férteis, quanto a sua capacidade de fecundação, pois mimetizam in vitro
o que acontece in vivo. No entanto, este teste tem seu uso limitado por ser de difícil
execução e por utilizar equipamentos de alto custo. O presente trabalho objetivou
encontrar um novo modelo biológico para estudos sobre aspectos reprodutivos de
machos e avaliar alternativas para simplificar e diminuir custos para execução do
teste: utilização do teste de penetração na membrana perivitelina interna do ovo da
galinha (IPVL) e sua associação com parâmetros in vitro e in vivo; utiilização do BTS
como meio de incubação do teste de penetração in vitro e utilização de diferentes
maneiras de criopreservação de gametas femininos. Foi concluído que: 1) Calomys
laucha pode ser utilizado como modelo biológico; 2) é possível utilizar a membrana
perivitelina interna como substrato de teste para predizer a fertilidade de machos
Calomys laucha; 3) a IPVL possui receptores que permitiram a ligação do
espermatozóide suíno, apresentando potencial para ser utilizada em diagnóstico de
fertilidade de machos; 4) é viável utilizar BTS como meio para realização do teste de
penetração in vitro em ovócito ou IPVL, em banho-maria sem a presença de CO2 e
5) o congelamento de ovários a -20ºC ou o acondicionamento a 5º C dos ovócitos
em PBS para realizar o teste de penetração ovocitária in vitro, utilizando o meio
mTBM, é uma alternativa para predizer a fertilidade de sêmen suíno.
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