Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-02Bitstream added on 2014-06-13T18:39:10Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_jcv_me_botfmvz.pdf: 876846 bytes, checksum: 0964099d5611eb445b184c0c142d8ec3 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A cisticercose é uma das principais causas de perdas econômicas na pecuária de corte brasileira devido às condenações da carne para o controle do complexo teníase-cisticercose. O tratamento quimioterápico pode ser utilizado para o controle da infecção nos animais, mas sua eficácia deve ser monitorada por testes de diagnóstico que detectem parasitas vivos ou seus produtos. Na presente pesquisa, anticorpos monoclonais contra antígenos totais (TAEB) e de fluido vesicular (TAEF) de metacestóides de Taenia saginata foram produzidos através de fusão celular, utilizando-se células de baço de camundongos BALB/c imunizados. Cinco fusões TAEB e quatro TAEF foram realizadas e os sobrenadantes de cultura foram triados por teste ELISA indireto. Dez e nove híbridos pertencentes aos protocolos TAEB e TAEF, respectivamente, foram selecionados e clonados. As linhagens celulares clonadas foram mantidas em meio de cultura para a obtenção dos anticorpos monoclonais, resultando em 18 clones IgG1 e 32 IgM reativos para TAEB e 9 IgG1 e 9 IgM para TAEF. Dentre esses clones, 5 do protocolo TAEB e 5 TAEF foram selecionados para produção de líquido ascítico, através da injeção dos clones em camundongos BALB/c. A avaliação da identificação antigênica dos anticorpos produzidos aos antígenos homólogos foi realizada por meio de western blotting, resultando em reatividade com frações protéicas de baixo peso molecular (< 18kDa), 43, 55, 66 e 100kDa. A imunofluorescência indireta demonstrou que os anticorpos monoclonais avaliados reconhecem antígenos presentes tanto do escólex quanto da membrana vesicular de metacestóides de bovinos naturalmente infectados. Os anticorpos monoclonais produzidos poderão ser utilizados para detecção de antígenos circulantes na avaliação da eficácia do tratamento de bovinos infectados, evitando assim perdas econômicas e danos à saúde pública. / Cysticercosis is a major cause of economic losses in the Brazilian bovine chain production due to meat condemnation for the taeniasis-cysticercosis complex control. Chemotherapy can be used to control infection in cattle but treatment efficacy should be monitored by diagnostic tests that can detect live parasites or their products. Monoclonal antibodies against Taenia saginata metacestode crude (TAEB) and cyst fluid (TAEF) antigens were produced by cell fusion procedures using spleen cells from immunized BALB / c mice. Five TAEB and four TAEF fusions were performed and the culture supernatants from these cell cultures were screened by indirect ELISA assay. Ten TAEB and nine TAEF hybrids were selected and cloned. Cloned cell lines were grown in culture medium to collect the monoclonal antibodies, resulting in 18 IgG1 and 32 IgM clones reactive to TAEB and 9 IgG1 and 9 IgM clones reactive to TAEF. Five TAEB and five TAEB clones were selected for ascitic fluid production by injection in BALB/c mice and further harvesting. Western blotting was performed to test the antigenic identification by the antibodies produced resulting in reactivity to protein fractions of low molecular weight (<18kDa) and to 43, 55, 66 and 100kDa. The indirect immunofluorescence test showed that monoclonal antibodies recognize antigens from both the scolex and the bladder wall of metadestodes from naturally infected bovine. The monoclonal antibodies obtained can be useful for detection of circulant antigens in treatment efficacy evaluation preventing economic losses and public health injury.

Resumo: A cisticercose é uma das principais causas de perdas econômicas na pecuária de corte brasileira devido às condenações da carne para o controle do complexo teníase-cisticercose. O tratamento quimioterápico pode ser utilizado para o controle da infecção nos animais, mas sua eficácia deve ser monitorada por testes de diagnóstico que detectem parasitas vivos ou seus produtos. Na presente pesquisa, anticorpos monoclonais contra antígenos totais (TAEB) e de fluido vesicular (TAEF) de metacestóides de Taenia saginata foram produzidos através de fusão celular, utilizando-se células de baço de camundongos BALB/c imunizados. Cinco fusões TAEB e quatro TAEF foram realizadas e os sobrenadantes de cultura foram triados por teste ELISA indireto. Dez e nove híbridos pertencentes aos protocolos TAEB e TAEF, respectivamente, foram selecionados e clonados. As linhagens celulares clonadas foram mantidas em meio de cultura para a obtenção dos anticorpos monoclonais, resultando em 18 clones IgG1 e 32 IgM reativos para TAEB e 9 IgG1 e 9 IgM para TAEF. Dentre esses clones, 5 do protocolo TAEB e 5 TAEF foram selecionados para produção de líquido ascítico, através da injeção dos clones em camundongos BALB/c. A avaliação da identificação antigênica dos anticorpos produzidos aos antígenos homólogos foi realizada por meio de western blotting, resultando em reatividade com frações protéicas de baixo peso molecular (< 18kDa), 43, 55, 66 e 100kDa. A imunofluorescência indireta demonstrou que os anticorpos monoclonais avaliados reconhecem antígenos presentes tanto do escólex quanto da membrana vesicular de metacestóides de bovinos naturalmente infectados. Os anticorpos monoclonais produzidos poderão ser utilizados para detecção de antígenos circulantes na avaliação da eficácia do tratamento de bovinos infectados, evitando assim perdas econômicas e danos à saúde pública. / Abstract: Cysticercosis is a major cause of economic losses in the Brazilian bovine chain production due to meat condemnation for the taeniasis-cysticercosis complex control. Chemotherapy can be used to control infection in cattle but treatment efficacy should be monitored by diagnostic tests that can detect live parasites or their products. Monoclonal antibodies against Taenia saginata metacestode crude (TAEB) and cyst fluid (TAEF) antigens were produced by cell fusion procedures using spleen cells from immunized BALB / c mice. Five TAEB and four TAEF fusions were performed and the culture supernatants from these cell cultures were screened by indirect ELISA assay. Ten TAEB and nine TAEF hybrids were selected and cloned. Cloned cell lines were grown in culture medium to collect the monoclonal antibodies, resulting in 18 IgG1 and 32 IgM clones reactive to TAEB and 9 IgG1 and 9 IgM clones reactive to TAEF. Five TAEB and five TAEB clones were selected for ascitic fluid production by injection in BALB/c mice and further harvesting. Western blotting was performed to test the antigenic identification by the antibodies produced resulting in reactivity to protein fractions of low molecular weight (<18kDa) and to 43, 55, 66 and 100kDa. The indirect immunofluorescence test showed that monoclonal antibodies recognize antigens from both the scolex and the bladder wall of metadestodes from naturally infected bovine. The monoclonal antibodies obtained can be useful for detection of circulant antigens in treatment efficacy evaluation preventing economic losses and public health injury. / Orientador: Cáris Maroni Nunes / Coorientador: Elenice Deffune / Banca: Valéria Marçal Félix de Lima / Banca: Rosana Rossi Ferreira / Mestre

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1111599 bytes, checksum: 1d237896c865356f1238a4fc70aec751 (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The taeniasis-cysticercosis complex is a disease of great importance to public and animal health, and human beings play an important role as the only definitive hosts that develop taeniasis. Cysticercosis can affect pigs, which are infected by the larva of Taenia solium, cattle, which are infected by the larva of Taenia saginata and, accidentally, humans, who can act as an intermediate hosts (T. solium), developing cysticercosis in their tissues, with neurocysticercosis being the most severe form of the disease. Despite the importance of taeniasis and cysticercosis to public health, animal health and economy in Brazil, the epidemiological reality of the occurrence of zoonoses is poorly understood. In the state of Minas Gerais, most of the data is obtained from official sanitary inspection agencies in slaughterhouses, and little information is based on field data from live animals. In order to assess the epidemiological situation of the taeniasis-cysticercosis complex in small and medium-sized farms in the municipalities of Iraí de Minas, Romaria, Grupiara and Douradoquara, located in the microregion of Patrocínio, in the Triangulo Mineiro region, this study addressed the occurrence of human taeniasis, bovine and porcine cysticercosis, and the main risk factors associated with transmission of parasitic forms of T. saginata and T. solium in the sampled farms. Thus, a cross-sectional epidemiological study was conducted with 68 farms located in rural areas of the four aforementioned municipalities, and these properties were georeferenced. Data collected consisted of 1002 bovine blood samples, 22 porcine blood samples, and stool samples from 119 members of the households and applied an epidemiological questionnaire. The serological diagnosis of animal cysticercosis was performed by screening using the indirect ELISA test, and the suspected cases underwent Immunoblot testing for confirmation purposes. Stool examination was performed by the simple sedimentation method (HPJ). This study found a prevalence of 4.5% of porcine cysticercosis and 4.69% of bovine cysticercosis in the farms of the rural area of the sampled municipalities between July and August 2013. No case of human taeniasis was disagnosed; however, other enteroparasitoses were diagnosed. This study evaluated the association between some risk factors and the prevalence of cases of bovine cysticercosis, in which the variables that were statistically significant were the profession of the person in charge of such farms, income and the water treatment in the farms. From the georeferencing of farms, which generated maps of the collected points and the points diagnosed with bovine cysticercosis. There was the possibility that the transmission of this parasite may occur from the rivers and tributaries that flow along the sampled municipalities from the hydrography of the region. This study identified the prevalence of taeniasis-cysticercosis complex in the sampled municipalities and the results will aid in the prevention and control of this zoonosis in the areas of occurrence. / O complexo teníase-cisticercose é uma doença de grande importância para a saúde pública e animal, no qual o ser humano desempenha importante papel como o único hospedeiro definitivo, desenvolvendo a teníase. A cisticercose pode acometer o suíno, que desenvolve a larva da Taenia solium, o bovino, que desenvolve a larva da Taenia saginata e, acidentalmente, o homem pode atuar como hospedeiro intermediário (T. solium), desenvolvendo a cisticercose em seus tecidos, sendo a neurocisticercose a forma mais grave. Apesar da importância da teníase e da cisticercose para a saúde pública, para a saúde animal e para economia, a realidade epidemiológica da ocorrência dessas zoonoses no Brasil é pouco conhecida. No estado de Minas Gerais a maioria dos dados é obtida dos serviços oficiais de Inspeção Sanitária nos matadouros- frigoríficos, sendo poucas as informações baseadas em dados de campo oriundos de animais vivos. Com o objetivo de avaliar a situação epidemiológica do complexo teníase-cisticercose em pequenas e médias propriedades rurais dos municípios de Iraí de Minas, Romaria, Grupiara e Douradoquara, situados na microrregião de Patrocínio, região do Triângulo Mineiro, se pesquisou a ocorrência da teníase humana, da cisticercose bovina e suína e os principais fatores de risco associados à transmissão das formas parasitárias T. saginata e T. solium nas propriedades amostradas. Dessa forma, foi realizado um estudo epidemiológico de corte transversal envolvendo as 68 propriedades localizadas nas zonas rurais dos quatro municípios, sendo essas propriedades georreferenciadas. Foram coletadas 1002 amostras de sangue bovino e 22 amostras de sangue suíno, 119 amostras de fezes dos integrantes das famílias residentes nas propriedades e aplicado um questionário epidemiológico. O diagnóstico sorológico da cisticercose animal foi realizado por triagem pelo teste ELISA indireto e os casos suspeitos foram submetidos ao Immunoblot para confirmação. O exame de fezes foi realizado pelo método de sedimentação simples. Este estudo revelou prevalência de 4,5% de cisticercose suína e de 4,69% de cisticercose bovina nas propriedades da zona rural dos municípios amostrados, no período de julho a agosto de 2013. Não foi diagnosticado nenhum caso de teníase humana, no entanto, outras enteroparasitoses foram diagnosticadas. Avaliou-se a associação entre alguns fatores de risco e a prevalência dos casos de cisticercose bovina, no qual as variáveis que se mostraram estatisticamente significantes foram profissão do responsável pela propriedade, renda familiar e tratamento da água da propriedade. A partir do georreferenciamento das propriedades, foram produzidos os mapas dos pontos coletados e dos pontos diagnosticados com cisticercose bovina. Observou-se a possibilidade da transmissão dessa parasitose ocorrer a partir dos rios e seus afluentes nos municípios amostrados a partir da hidrografia da região. O estudo permitiu a identificação da prevalência do complexo teníase-cisticercose nos municípios amostrados e os resultados permitirão auxiliar a prevenção e o controle dessa zoonose nas áreas de ocorrência.