O peptídeo liberador da gastrina (GRP), homólogo mamífero da bombesina (BN), é um neuropeptídeo com múltiplas ações biológicas, incluindo um importante papel na regulação da resposta imunológica e inflamatória. Está presente em altas concentrações no líquido sinovial de pacientes com artrite reumatóide (AR), paralelamente com os níveis de interleucina-6 (IL-6) e fator de necrose tumoral (TNF). RC-3095 é um antagonista sintético do receptor da BN/GRP que demonstrou modular a liberação de citocinas pró-inflamatórias (TNF e IL-1 ) e diminuir o infiltrado inflamatório em modelos experimentais de sepse. Este estudo avaliou os efeitos do RC-3095 nos parâmetros clínicos, histopatológicos e de mediadores inflamatórios na artrite induzida por adjuvante completo de Freund (CFA) em ratos. A artrite foi induzida por uma injeção de CFA junto a superfície subplantar da pata esquerda de ratos machos de Wistar. Os animais foram divididos 4 grupos: grupo controle, controle injetado com veículo, grupo placebo (administrado salina subcutaneamente 50ml/kg, uma vez ao dia por 8 dias após estabelecimento do modelo), grupo tratado (0.3 mg/kg de RC-3095 subcutaneamente, uma vez ao dia por 8 dias após a indução). A avaliação clínica foi acompanhada diariamente, de acordo com um escore do edema para as patas posteriores. O peptídeo liberador da gastrina (GRP), homólogo mamífero da bombesina (BN), é um neuropeptídeo com múltiplas ações biológicas, incluindo um importante papel na regulação da resposta imunológica e inflamatória. Está presente em altas concentrações no líquido sinovial de pacientes com artrite reumatóide (AR), paralelamente com os níveis de interleucina-6 (IL-6) e fator de necrose tumoral (TNF). RC-3095 é um antagonista sintético do receptor da BN/GRP que demonstrou modular a liberação de citocinas pró-inflamatórias (TNF e IL-1 ) e diminuir o infiltrado inflamatório em modelos experimentais de sepse. Este estudo avaliou os efeitos do RC-3095 nos parâmetros clínicos, histopatológicos e de mediadores inflamatórios na artrite induzida por adjuvante completo de Freund (CFA) em ratos. A artrite foi induzida por uma injeção de CFA junto a superfície subplantar da pata esquerda de ratos machos de Wistar. Os animais foram divididos 4 grupos: grupo controle, controle injetado com veículo, grupo placebo (administrado salina subcutaneamente 50ml/kg, uma vez ao dia por 8 dias após estabelecimento do modelo), grupo tratado (0.3 mg/kg de RC-3095 subcutaneamente, uma vez ao dia por 8 dias após a indução). A avaliação clínica foi acompanhada diariamente, de acordo com um escore do edema para as patas posteriores. / Background: Recently, targeting of neuropeptides has been suggested to have potential therapeutic effects in RA. The gastrin-releasing peptide (GRP) is the homologous mammalian of the bombesin (BN), and its receptor signaling is involved in several functions, including cancer growth, immune cell regulation and inflammatory conditions, and has been found in RA synovial fluid in concentrations that correlate with IL-6 and TNF. RC-3095 is the antagonist of the GRP receptor, and has been demonstrated to modulate the release of proinflammatory cytokines (TNF and IL-1 ) by activated macrophages, leading to decreased inflammatory infiltration. Objective: To determine the effects of RC-3095 in clinical and histopathologic parameters and inflammatory mediators on complete Freund´s adjuvant-induced arthritis. Methods: The arthritis was induced by injection of complete Freund´s adjuvant (CFA) into the left hind footpad in males of Wistar rats. The animals were divided into control, vehicle injected control, placebo group (saline subcutaneously 50ml/kg, once daily for 8 days after modeling), treatment group (0.3 mg/kg of RC-3095 subcutaneously, once daily for 8 days after induction). Clinical evaluation was accomplished daily, through scoring of the paw edema. The animals were sacrificed 15 days after induction for collection of hind foot joints for histology. We used a histological scoring system which was previously described, and interferon (INF)-g, Interleukin (IL)-1 , tumor necrosis factor (TNF), interleukin (IL)-6 and interleukin (IL)-10 were measured by ELISA. Statistical analyses were compared by Student t-test to determine the difference between placebo and treatment groups for histological scores, and cytokines levels were compared using Mann-Whitney test (p<0.05). Results: There was significant inhibition of joint histological findings in the RC-3095 treated group, including synovial inflammatory infiltration(p<0,001), synovial hyperplasia (p=0.004), extension of pannus (p<0.001), synovial fibrosis (p<0.001), angiogenesis (p=0.033), cartilage (p 0.001) and bone erosion (p<0.001). IFN-g (p<0.001), IL-1 (p<0.001), TNF (p=0.003), IL-6 (p=0.048) and IL-10 (p=0.015) serum levels were significantly lower in the treated group. Paw swelling and subcutaneous inflammation, evaluated clinically, were not different between CFAinduced groups. Conclusions: RC-3095 was able to improve experimental arthritis, attenuate joint damage and decrease serum levels of IFN-g, IL-1 , TNF, IL-6 and IL-10. These data indicate that interference with GRP pathway is a potential new strategy for the treatment of RA that needs further investigational studies.

O peptídeo liberador da gastrina (GRP), homólogo mamífero da bombesina (BN), é um neuropeptídeo com múltiplas ações biológicas, incluindo um importante papel na regulação da resposta imunológica e inflamatória. Está presente em altas concentrações no líquido sinovial de pacientes com artrite reumatóide (AR), paralelamente com os níveis de interleucina-6 (IL-6) e fator de necrose tumoral (TNF). RC-3095 é um antagonista sintético do receptor da BN/GRP que demonstrou modular a liberação de citocinas pró-inflamatórias (TNF e IL-1 ) e diminuir o infiltrado inflamatório em modelos experimentais de sepse. Este estudo avaliou os efeitos do RC-3095 nos parâmetros clínicos, histopatológicos e de mediadores inflamatórios na artrite induzida por adjuvante completo de Freund (CFA) em ratos. A artrite foi induzida por uma injeção de CFA junto a superfície subplantar da pata esquerda de ratos machos de Wistar. Os animais foram divididos 4 grupos: grupo controle, controle injetado com veículo, grupo placebo (administrado salina subcutaneamente 50ml/kg, uma vez ao dia por 8 dias após estabelecimento do modelo), grupo tratado (0.3 mg/kg de RC-3095 subcutaneamente, uma vez ao dia por 8 dias após a indução). A avaliação clínica foi acompanhada diariamente, de acordo com um escore do edema para as patas posteriores. O peptídeo liberador da gastrina (GRP), homólogo mamífero da bombesina (BN), é um neuropeptídeo com múltiplas ações biológicas, incluindo um importante papel na regulação da resposta imunológica e inflamatória. Está presente em altas concentrações no líquido sinovial de pacientes com artrite reumatóide (AR), paralelamente com os níveis de interleucina-6 (IL-6) e fator de necrose tumoral (TNF). RC-3095 é um antagonista sintético do receptor da BN/GRP que demonstrou modular a liberação de citocinas pró-inflamatórias (TNF e IL-1 ) e diminuir o infiltrado inflamatório em modelos experimentais de sepse. Este estudo avaliou os efeitos do RC-3095 nos parâmetros clínicos, histopatológicos e de mediadores inflamatórios na artrite induzida por adjuvante completo de Freund (CFA) em ratos. A artrite foi induzida por uma injeção de CFA junto a superfície subplantar da pata esquerda de ratos machos de Wistar. Os animais foram divididos 4 grupos: grupo controle, controle injetado com veículo, grupo placebo (administrado salina subcutaneamente 50ml/kg, uma vez ao dia por 8 dias após estabelecimento do modelo), grupo tratado (0.3 mg/kg de RC-3095 subcutaneamente, uma vez ao dia por 8 dias após a indução). A avaliação clínica foi acompanhada diariamente, de acordo com um escore do edema para as patas posteriores. / Background: Recently, targeting of neuropeptides has been suggested to have potential therapeutic effects in RA. The gastrin-releasing peptide (GRP) is the homologous mammalian of the bombesin (BN), and its receptor signaling is involved in several functions, including cancer growth, immune cell regulation and inflammatory conditions, and has been found in RA synovial fluid in concentrations that correlate with IL-6 and TNF. RC-3095 is the antagonist of the GRP receptor, and has been demonstrated to modulate the release of proinflammatory cytokines (TNF and IL-1 ) by activated macrophages, leading to decreased inflammatory infiltration. Objective: To determine the effects of RC-3095 in clinical and histopathologic parameters and inflammatory mediators on complete Freund´s adjuvant-induced arthritis. Methods: The arthritis was induced by injection of complete Freund´s adjuvant (CFA) into the left hind footpad in males of Wistar rats. The animals were divided into control, vehicle injected control, placebo group (saline subcutaneously 50ml/kg, once daily for 8 days after modeling), treatment group (0.3 mg/kg of RC-3095 subcutaneously, once daily for 8 days after induction). Clinical evaluation was accomplished daily, through scoring of the paw edema. The animals were sacrificed 15 days after induction for collection of hind foot joints for histology. We used a histological scoring system which was previously described, and interferon (INF)-g, Interleukin (IL)-1 , tumor necrosis factor (TNF), interleukin (IL)-6 and interleukin (IL)-10 were measured by ELISA. Statistical analyses were compared by Student t-test to determine the difference between placebo and treatment groups for histological scores, and cytokines levels were compared using Mann-Whitney test (p<0.05). Results: There was significant inhibition of joint histological findings in the RC-3095 treated group, including synovial inflammatory infiltration(p<0,001), synovial hyperplasia (p=0.004), extension of pannus (p<0.001), synovial fibrosis (p<0.001), angiogenesis (p=0.033), cartilage (p 0.001) and bone erosion (p<0.001). IFN-g (p<0.001), IL-1 (p<0.001), TNF (p=0.003), IL-6 (p=0.048) and IL-10 (p=0.015) serum levels were significantly lower in the treated group. Paw swelling and subcutaneous inflammation, evaluated clinically, were not different between CFAinduced groups. Conclusions: RC-3095 was able to improve experimental arthritis, attenuate joint damage and decrease serum levels of IFN-g, IL-1 , TNF, IL-6 and IL-10. These data indicate that interference with GRP pathway is a potential new strategy for the treatment of RA that needs further investigational studies.

Made available in DSpace on 2016-12-06T17:07:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 raquel.pdf: 914060 bytes, checksum: a82d971c1700ac78e8cc69f342332599 (MD5) Previous issue date: 2008-03-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Physical activity is thought to be beneficial to arthritis, delaying disability and/or improving joint function. The aim of the present study was to evaluate the effects of exercise on nociception, edema and cell migration in two groups of rats with CFA-induced arthritis, as well as verify whether the possible endogenous liberation of corticoids while exercising can have an influence on the nociception and edema. Arthritis was induced in female Wistar rats (200 - 250 g, n=50) by subcutaneously injecting complete Freund's adjuvant (CFA; Mycobacterium butyricum, 0.5 mg/mL; 50 &#956;L) into the base of the tail and, after 21 days, into the right knee joint (TF) or right ankle joint (TT). Incapacitation was measured daily by the paw elevation time (TEP; s) in 1-min periods of observation on a revolving cylinder (3 r.p.m.). The variation of inflammatory edema of the knee and ankle joints was evaluated by the variation of the articular diameter (DA, cm) and by the paw volume variation (EA, mL), respectively. Both, incapacitation and edema were measured during 10 consecutive days. Two protocols of exercise were evaluated: (a) in the 1-minute exercise group, the animals performed 1 minute of daily exercise on the cylinder, this exercise being the incapacitation test itself; (b) for the progressive exercise group the duration of daily exercise increased by 1 minute per day (the additional exercise was always done just after the daily incapacitation test); (c) in the control groups (TF and TT), incapacitation was evaluated only on the 1st, 5th and 10th days after intra-articular CFA injection. After completion of the trials the animals were euthanized and the articular inflammatory exudates was sampled for total (CT; cells/mm3) and differential leukocyte counts (mononuclear - MON, and polymorphonuclear - PMN, cells/mm3). The progressive exercise protocol inhibited incapacitation and edema for both the knee and ankle joints. However, cell migration was inhibited only in the knee joint. The daily 1-min exercise reduced edema in both knee and ankle joints, while cell migration was inhibited only in the ankle joint. The effect on incapacitation was not significant in this protocol. Aminoglutetimide (50 mg/kg; oral) 1 hour before exercise did not modify the antinociceptive and antiedematogenic effect of exercise in this model. By comparison, progressive exercise seemed to be more effective in reducing the inflammatory parameters than 1-min exercise. Although other exercise protocols need to be evaluated, this study suggests that regular physical activity can consistently contribute to improving joint function, as well as present an anti-inflammatory effect. / O exercício físico apresenta potenciais benefícios na artrite, retardando a incapacidade funcional e melhorando a função das articulações. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a influência da atividade física sobre a nocicepção, edema e migração celular em ratas com artrite induzida por adjuvante completo de Freund (CFA), como também verificar se a possível liberação endógena de corticóides durante o exercício podem influenciar na nocicepção e no edema. Ratos Wistar fêmeas (200 250 g; n=50) receberam injeção intradérmica de CFA (Mycobacterium butiricum; 0,5 mg/mL; 50 &#956;L) na base da cauda e, após 21 dias, os animais receberam injeção de CFA na articulação tíbio-femural (TF) ou tíbio-társica (TT). A incapacitação articular foi avaliada pelo tempo de elevação da pata (TEP, s) durante marcha forçada de 1 minuto sobre um cilindro em rotação (3 r.p.m.). A variação do edema inflamatório da articulação TF e TT foi avaliada pelo aumento do diâmetro articular (DA, cm) e pelo aumento do volume de pata (EA, mL), respectivamente. Ambos, incapacitação e edema foram avaliados durante 10 dias consecutivos. Dois protocolos de exercício foram avaliados: (a) exercício diário de 1 min, onde os animais realizaram 1 minuto de exercício no cilindro, sendo este o próprio teste de incapacitação; (b) exercício progressivo, onde os animais realizaram o exercício com aumento de 1 minuto por dia (realizado sempre após o teste de incapacitação); (c) Grupo controle (TF e TT), sem exercício, cuja incapacitação foi mensurada apenas no 1°, 5° e 10° dias após a injeção intraarticular de CFA. Finalizado os 10 dias de avaliação, os animais foram eutanasiados para a realização da contagem total (CT; células/mm3) e diferencial (mononucleares - MON e polimorfonucleares - PMN; células/mm3) de leucócitos do tecido inflamado. O exercício progressivo inibiu a incapacitação e o edema em ambas as articulações. Entretanto, houve redução da migração total de leucócitos apenas na articulação TF. O exercício de 1 min inibiu o edema para as duas articulações e reduziu a migração total de leucócitos da articulação TT. Porém, o efeito do exercício de 1 minuto na incapacitação não foi significativo. A administração de aminoglutetimida (50 mg/kg; oral) 1 hora antes do exercício mostrou não ter efeito sobre a redução da nocicepção e edema ocasionados pelo exercício. O exercício progressivo parece ser mais efetivo em reduzir os parâmetros inflamatórios em comparação ao exercício de 1 min. Este estudo demonstra que a atividade física regular pode contribuir consistentemente para melhorar a funcionalidade articular e também apresentar um efeito anti-inflamatório.

O peptídeo liberador da gastrina (GRP), homólogo mamífero da bombesina (BN), é um neuropeptídeo com múltiplas ações biológicas, incluindo um importante papel na regulação da resposta imunológica e inflamatória. Está presente em altas concentrações no líquido sinovial de pacientes com artrite reumatóide (AR), paralelamente com os níveis de interleucina-6 (IL-6) e fator de necrose tumoral (TNF). RC-3095 é um antagonista sintético do receptor da BN/GRP que demonstrou modular a liberação de citocinas pró-inflamatórias (TNF e IL-1 ) e diminuir o infiltrado inflamatório em modelos experimentais de sepse. Este estudo avaliou os efeitos do RC-3095 nos parâmetros clínicos, histopatológicos e de mediadores inflamatórios na artrite induzida por adjuvante completo de Freund (CFA) em ratos. A artrite foi induzida por uma injeção de CFA junto a superfície subplantar da pata esquerda de ratos machos de Wistar. Os animais foram divididos 4 grupos: grupo controle, controle injetado com veículo, grupo placebo (administrado salina subcutaneamente 50ml/kg, uma vez ao dia por 8 dias após estabelecimento do modelo), grupo tratado (0.3 mg/kg de RC-3095 subcutaneamente, uma vez ao dia por 8 dias após a indução). A avaliação clínica foi acompanhada diariamente, de acordo com um escore do edema para as patas posteriores. O peptídeo liberador da gastrina (GRP), homólogo mamífero da bombesina (BN), é um neuropeptídeo com múltiplas ações biológicas, incluindo um importante papel na regulação da resposta imunológica e inflamatória. Está presente em altas concentrações no líquido sinovial de pacientes com artrite reumatóide (AR), paralelamente com os níveis de interleucina-6 (IL-6) e fator de necrose tumoral (TNF). RC-3095 é um antagonista sintético do receptor da BN/GRP que demonstrou modular a liberação de citocinas pró-inflamatórias (TNF e IL-1 ) e diminuir o infiltrado inflamatório em modelos experimentais de sepse. Este estudo avaliou os efeitos do RC-3095 nos parâmetros clínicos, histopatológicos e de mediadores inflamatórios na artrite induzida por adjuvante completo de Freund (CFA) em ratos. A artrite foi induzida por uma injeção de CFA junto a superfície subplantar da pata esquerda de ratos machos de Wistar. Os animais foram divididos 4 grupos: grupo controle, controle injetado com veículo, grupo placebo (administrado salina subcutaneamente 50ml/kg, uma vez ao dia por 8 dias após estabelecimento do modelo), grupo tratado (0.3 mg/kg de RC-3095 subcutaneamente, uma vez ao dia por 8 dias após a indução). A avaliação clínica foi acompanhada diariamente, de acordo com um escore do edema para as patas posteriores. / Background: Recently, targeting of neuropeptides has been suggested to have potential therapeutic effects in RA. The gastrin-releasing peptide (GRP) is the homologous mammalian of the bombesin (BN), and its receptor signaling is involved in several functions, including cancer growth, immune cell regulation and inflammatory conditions, and has been found in RA synovial fluid in concentrations that correlate with IL-6 and TNF. RC-3095 is the antagonist of the GRP receptor, and has been demonstrated to modulate the release of proinflammatory cytokines (TNF and IL-1 ) by activated macrophages, leading to decreased inflammatory infiltration. Objective: To determine the effects of RC-3095 in clinical and histopathologic parameters and inflammatory mediators on complete Freund´s adjuvant-induced arthritis. Methods: The arthritis was induced by injection of complete Freund´s adjuvant (CFA) into the left hind footpad in males of Wistar rats. The animals were divided into control, vehicle injected control, placebo group (saline subcutaneously 50ml/kg, once daily for 8 days after modeling), treatment group (0.3 mg/kg of RC-3095 subcutaneously, once daily for 8 days after induction). Clinical evaluation was accomplished daily, through scoring of the paw edema. The animals were sacrificed 15 days after induction for collection of hind foot joints for histology. We used a histological scoring system which was previously described, and interferon (INF)-g, Interleukin (IL)-1 , tumor necrosis factor (TNF), interleukin (IL)-6 and interleukin (IL)-10 were measured by ELISA. Statistical analyses were compared by Student t-test to determine the difference between placebo and treatment groups for histological scores, and cytokines levels were compared using Mann-Whitney test (p<0.05). Results: There was significant inhibition of joint histological findings in the RC-3095 treated group, including synovial inflammatory infiltration(p<0,001), synovial hyperplasia (p=0.004), extension of pannus (p<0.001), synovial fibrosis (p<0.001), angiogenesis (p=0.033), cartilage (p 0.001) and bone erosion (p<0.001). IFN-g (p<0.001), IL-1 (p<0.001), TNF (p=0.003), IL-6 (p=0.048) and IL-10 (p=0.015) serum levels were significantly lower in the treated group. Paw swelling and subcutaneous inflammation, evaluated clinically, were not different between CFAinduced groups. Conclusions: RC-3095 was able to improve experimental arthritis, attenuate joint damage and decrease serum levels of IFN-g, IL-1 , TNF, IL-6 and IL-10. These data indicate that interference with GRP pathway is a potential new strategy for the treatment of RA that needs further investigational studies.