Orientador: Jose Maurício Barbanti Duarte / Coorientador: Vanessa Veltrini Abril / Banca: Raquel Alves dos Santos / Banca: Marcelo de Bello Cioffi / Resumo: O processo de evolução cariotípica dos cervídeos a partir de um ancestral comum e hipotético, que possuía cariótipo com número diplóide e fundamental igual a 70, foi marcado por complexos rearranjos cromossômicos. Este cariótipo foi retido e pode ser encontrado na espécie Neotropical Mazama gouazoubira, que apresenta variação cromossômica e esta por sua vez, pode ser explicada pela fragilidade cromossômica. Este trabalho teve como finalidade identificar os cromossomos portadores de aberrações cromossômicas induzidas pela doxorrubicina, e localizar as regiões de quebras desses cromossomos. Foram analisados citogeneticamente 6 animais por meio da coloração convencional para a identificação e quantificação de 9 diferentes tipos de aberrações cromossômicas (anel, dicêntrico, gap cromatídico, gap cromossômico, quebra cromatídica, quebra cromossômica, forma trirradial, forma quadrirradial e rearranjo) e pelo bandamento G para a identificação precisa dos cromossomos portadores das aberrações e localização das regiões de quebras desses cromossomos. Os pares cromossômicos 1, 2, 4, 5, 6, 7, 15, 16 e o cromossomo sexual X apresentaram aberrações cromossômicas em todos os animais analisados. Entre os cromossomos que apresentaram aberrações cromossômicas, as regiões em que estas se concentraram com maior frequência foram as regiões mediana e distal em relação ao centrômero. Tais dados sugerem que estas regiões dos cromossomos podem estar mais suscetíveis à fragilidade cromossômica e consequentemente, poderiam estar envolvidas com a diferenciação cariotípica das espécies / Abstract: The process of karyotype evolution of deer from a hypothetical common ancestor with diploid and fundamental numbers equal to 70 was characterized by complex chromosomal rearrangements. This ancestral karyotype was retained and it is considered to be standard for the current Neotropical species, Mazama gouazoubira. Several animals of this species, analyzed in different studies, showed karyotype variation that can be explained by chromosomal fragility. This study aimed to identify the chromosomes carrying doxorubicin-induced aberrations and to locate the regions of chromosome breaks (proximal, middle or distal). Six animals were analyzed by conventional staining for the identification and quantification of nine different types of chromosomal aberrations (ring, dicentric, chromatid gap, chromosomal gap, chromatid break, chromosomal break, triradials form, quadriradials form and rearrangements) and by G-banding for the precise identification of the chromosomes that carry aberrations and the regions where the breaks occur. The 1, 2, 4, 5, 6, 7, 15 and 16 chromosome pairs and the X sex chromosome showed chromosomal aberrations in all analyzed animals. Among all chromosomes that presented chromosomal aberrations, most of them were located in the middle and distal regions. These data suggest that the middle and distal regions of the chromosome may be more susceptible to chromosomal fragility and, consequently, could be involved in the karyotype differentiation of Mazama species / Mestre

Orientador: Izolete Aparecida Thomazini Santos / Banca: Newton Key Hokama / Banca: Michele Janegitv Acorsi Valério / Resumo: A Citogenética humana é o estudo dos cromossomos, sua estrutura e sua herança, aplicado à prática da genética médica. Há quase 50 anos as anomalias cromossômicas, alterações microscopicamente visíveis no número e/ou na estrutura dos cromossomos, podem ser responsáveis por uma série de condições clínicas denominadas aberrações cromossômicas, que constituem uma categoria de doenças genéticas constitucionais ou adquiridas. Diversas alterações foram descritas em doenças genéticas e doenças neoplásicas de origem hematológica, auxiliando no diagnóstico, prognostico, classificação e monitoramento da doença. O objetivo do presente estudo foi padronizar a técnica clássica em citogenética através da avaliação do bandeamento G pela digestão enzimática com tripsina e pela desnaturação com tampão citratado em alta temperatura, auxiliando na visualização do cariótipo. Neste estudo utilizamos amostras de sangue periférico de indivíduos normais. A cultura celular foi realizada pelo método de cultura in situ, seguindo a metodologia de Moorhead et al. modificada (1960). Em todos os casos foram obtidas metáfases adequadas para análise e o índice mitótico foi satisfatório. Os resultados obtidos pelo emprego de diferentes técnicas de bandeamento cromossômico revelaram que o bandeamento G pela ação enzimática da tripsina embora considerado padrão-ouro é mais sensível, trabalhoso e ocorre com um número maior de tentativas devido a variabilidade do tempo para que ocorra a degradação das proteínas, sendo necessário o retrabalho tornando-se ineficiente em amostras com baixo índice mitótico e aumentando consequentemente o custo do exame. Enquanto o bandeamento pela técnica utilizando tampão citratado em alta temperatura é simples, produtivo, ágil e de menor custo / Abstract: Human Cytogenetics is the study of chromosomes, their structure and their inheritance, applied to the practice of medical genetics. For nearly fifty years the chromosomal abnormalities, microscopically visible changes in the number and / or structure of chromosomes, may be responsible for a number of clinical conditions known as chromosomal aberrations, which are a category of constitutional or acquired genetic diseases. Several amendments were described in genetic diseases and neoplastic diseases of hematologic origin, aiding in the diagnosis, prognosis, classification and monitoring of the disease. The aim of this study was to standardize the classical technique in cytogenetics by evaluating the banding G by enzymatic digestion with trypsin and by denaturation with citrate buffer at high temperature, assisting in the karyotype view. In this study we used peripheral blood samples of normal individuals. Cell culture was performed by culturing in situ method, following the method of Moorhead et al. modified (1960). In all cases appropriate metaphases were obtained for analysis and the mitotic index was satisfactory. The results obtained by using different chromosome banding techniques revealed that the G banding by the enzymatic action of the trypsin although considered the gold standard it is more sensitive, cumbersome and it occurs with a larger number of retries due to a variability of the time for degradation of the proteins, requiring rework, this way becoming inefficient in samples with low mitotic index and consequently increasing the cost of the exam. While the banding technique using citrate buffer in high temperature is simple, productive, agile and less expensive / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-10-18Bitstream added on 2014-06-13T18:29:25Z : No. of bitstreams: 1 tomazella_im_me_jabo.pdf: 1956408 bytes, checksum: e74110eecf03b6849e3577dfb0d203f0 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O processo de evolução cariotípica dos cervídeos a partir de um ancestral comum e hipotético, que possuía cariótipo com número diplóide e fundamental igual a 70, foi marcado por complexos rearranjos cromossômicos. Este cariótipo foi retido e pode ser encontrado na espécie Neotropical Mazama gouazoubira, que apresenta variação cromossômica e esta por sua vez, pode ser explicada pela fragilidade cromossômica. Este trabalho teve como finalidade identificar os cromossomos portadores de aberrações cromossômicas induzidas pela doxorrubicina, e localizar as regiões de quebras desses cromossomos. Foram analisados citogeneticamente 6 animais por meio da coloração convencional para a identificação e quantificação de 9 diferentes tipos de aberrações cromossômicas (anel, dicêntrico, gap cromatídico, gap cromossômico, quebra cromatídica, quebra cromossômica, forma trirradial, forma quadrirradial e rearranjo) e pelo bandamento G para a identificação precisa dos cromossomos portadores das aberrações e localização das regiões de quebras desses cromossomos. Os pares cromossômicos 1, 2, 4, 5, 6, 7, 15, 16 e o cromossomo sexual X apresentaram aberrações cromossômicas em todos os animais analisados. Entre os cromossomos que apresentaram aberrações cromossômicas, as regiões em que estas se concentraram com maior frequência foram as regiões mediana e distal em relação ao centrômero. Tais dados sugerem que estas regiões dos cromossomos podem estar mais suscetíveis à fragilidade cromossômica e consequentemente, poderiam estar envolvidas com a diferenciação cariotípica das espécies / The process of karyotype evolution of deer from a hypothetical common ancestor with diploid and fundamental numbers equal to 70 was characterized by complex chromosomal rearrangements. This ancestral karyotype was retained and it is considered to be standard for the current Neotropical species, Mazama gouazoubira. Several animals of this species, analyzed in different studies, showed karyotype variation that can be explained by chromosomal fragility. This study aimed to identify the chromosomes carrying doxorubicin-induced aberrations and to locate the regions of chromosome breaks (proximal, middle or distal). Six animals were analyzed by conventional staining for the identification and quantification of nine different types of chromosomal aberrations (ring, dicentric, chromatid gap, chromosomal gap, chromatid break, chromosomal break, triradials form, quadriradials form and rearrangements) and by G-banding for the precise identification of the chromosomes that carry aberrations and the regions where the breaks occur. The 1, 2, 4, 5, 6, 7, 15 and 16 chromosome pairs and the X sex chromosome showed chromosomal aberrations in all analyzed animals. Among all chromosomes that presented chromosomal aberrations, most of them were located in the middle and distal regions. These data suggest that the middle and distal regions of the chromosome may be more susceptible to chromosomal fragility and, consequently, could be involved in the karyotype differentiation of Mazama species

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:09:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:22Z : No. of bitstreams: 1 000839743.pdf: 1325053 bytes, checksum: 7f7ef6fc911604d218b6c604c45c4d61 (MD5) / A Citogenética humana é o estudo dos cromossomos, sua estrutura e sua herança, aplicado à prática da genética médica. Há quase 50 anos as anomalias cromossômicas, alterações microscopicamente visíveis no número e/ou na estrutura dos cromossomos, podem ser responsáveis por uma série de condições clínicas denominadas aberrações cromossômicas, que constituem uma categoria de doenças genéticas constitucionais ou adquiridas. Diversas alterações foram descritas em doenças genéticas e doenças neoplásicas de origem hematológica, auxiliando no diagnóstico, prognostico, classificação e monitoramento da doença. O objetivo do presente estudo foi padronizar a técnica clássica em citogenética através da avaliação do bandeamento G pela digestão enzimática com tripsina e pela desnaturação com tampão citratado em alta temperatura, auxiliando na visualização do cariótipo. Neste estudo utilizamos amostras de sangue periférico de indivíduos normais. A cultura celular foi realizada pelo método de cultura in situ, seguindo a metodologia de Moorhead et al. modificada (1960). Em todos os casos foram obtidas metáfases adequadas para análise e o índice mitótico foi satisfatório. Os resultados obtidos pelo emprego de diferentes técnicas de bandeamento cromossômico revelaram que o bandeamento G pela ação enzimática da tripsina embora considerado padrão-ouro é mais sensível, trabalhoso e ocorre com um número maior de tentativas devido a variabilidade do tempo para que ocorra a degradação das proteínas, sendo necessário o retrabalho tornando-se ineficiente em amostras com baixo índice mitótico e aumentando consequentemente o custo do exame. Enquanto o bandeamento pela técnica utilizando tampão citratado em alta temperatura é simples, produtivo, ágil e de menor custo / Human Cytogenetics is the study of chromosomes, their structure and their inheritance, applied to the practice of medical genetics. For nearly fifty years the chromosomal abnormalities, microscopically visible changes in the number and / or structure of chromosomes, may be responsible for a number of clinical conditions known as chromosomal aberrations, which are a category of constitutional or acquired genetic diseases. Several amendments were described in genetic diseases and neoplastic diseases of hematologic origin, aiding in the diagnosis, prognosis, classification and monitoring of the disease. The aim of this study was to standardize the classical technique in cytogenetics by evaluating the banding G by enzymatic digestion with trypsin and by denaturation with citrate buffer at high temperature, assisting in the karyotype view. In this study we used peripheral blood samples of normal individuals. Cell culture was performed by culturing in situ method, following the method of Moorhead et al. modified (1960). In all cases appropriate metaphases were obtained for analysis and the mitotic index was satisfactory. The results obtained by using different chromosome banding techniques revealed that the G banding by the enzymatic action of the trypsin although considered the gold standard it is more sensitive, cumbersome and it occurs with a larger number of retries due to a variability of the time for degradation of the proteins, requiring rework, this way becoming inefficient in samples with low mitotic index and consequently increasing the cost of the exam. While the banding technique using citrate buffer in high temperature is simple, productive, agile and less expensive

Orientador: Agnes Cristina Fett Conte / Banca: Cláudia Regina Bonini Domingos / Banca: Flávio Naoum / Resumo: As Síndromes Mielodisplásicas (SMD) definem um grupo de doenças clonais das células hematopoéticas caracterizadas por citopenias, displasia em uma ou mais linhagens celulares mielóides, hematopoese ineficaz e aumento do risco de evolução para leucemia mielóide aguda. A frequência de doentes que progridem para o câncer varia com o subtipo de SMD, de acordo com a classificação da Organização Mundial da Saúde. As SMD são consideradas doenças pré-malignas e, ao contrário de outras doenças hematológicas, como as leucemias, estão geralmente associadas a anomalias cromossômicas desequilibradas. Estas consistem principalmente em deleções, translocações e alterações numéricas. Também são frequentemente observadas perdas de material genético, com consequente inativação de genes supressores tumorais. Estes genes controlam mecanismos biológicos vitais, como reparo do DNA, crescimento e morte celular programada. Um exemplo é o supressor de tumor RASSF1A (Ras-association domain family 1, isoform A), mapeado em 3p21.3. A falta de expressão deste gene e taxas elevadas de mutações, especialmente envolvendo os exons 3, 4 e 5, foram descritas em diversos tipos de cancêr, mas nunca foram investigadas em SMD. Neste contexto, este projeto teve como proposta investigar a presença de alterações cromossômicas e de mutações nos exons 3, 4 e 5 do gene RASSF1A em indivíduos com SMD ao diagnóstico e em controles normais. Foram estudados 50 casos dos quais foram realizadas culturas de curta duração (24 horas) de células de medula óssea sem estimulação mitogênica e sequenciamento direto dos exons de interesse. Quatro casos (8%) apresentaram alterações cromossômicas, caracterizadas como hipodiploidia em dois casos, monossomia do cromossomo 7 em um e um cariótipo complexo envolvendo os cromossomos 3, 5 e 11 em outro. A análise molecular dos exons 3, 4 e 5 dos 50 casos revelou dois (4%) casos com o polimorfismo ... / Abstract: The myelodysplastic syndromes (MDS) are characterized by cytopenias, dysplasia in one or more myeloid cell lines, ineffective hematopoiesis and an increased risk of acute myeloid leukemia (AML) transformation. The rate of patients who progress to AML varies by subtype of disease, according to the World Health Organization classification. The MDS are considered premalignant diseases and unlike of other hematological diseases, such as leukemia, are mostly associated with unbalanced chromosomal abnormalities, as deletions, translocations and numerical changes, beyond loss of genetic material with consequent tumor suppressor genes inactivation, which can control biological mechanisms such as DNA repair, growth and programmed cell death. An example is the tumor suppressor RASSF1A (Ras-association domain family 1, isoform A) mapped in 3p21.3. The high mutation rates and no expression of this gene, mainly exons 3, 4 and 5, have been described in several types of cancer but have never been investigated in MDS. Thereby chromosomal changes and mutations in exons 3, 4 and 5 from RASSF1A of the bone marrow cells from 50 cases the diagnosis of MDS were investigated. The assays were accomplished for 24 hours applying bone marrow cells without mitogenic stimulation and the exons were straight sequenced, where four samples (8%) had chromosomal abnormalities, characterized for hypodyploidy (two cases), monosomy 7 and complex karyotype involving chromosomes 3, 5 and 11. Molecular analysis revealed two (4%) other cases with Ala133Ser polymorphism (A133S) in exon 3. The cytogenetic changes observed are related to the MDS developed, while the polymorphism has been proposed to be involved in some types of cancers predisposition. The results can support other studies which are searching for genetic factors involved in the pathogenesis of MDS / Mestre

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-21Bitstream added on 2015-04-09T12:47:34Z : No. of bitstreams: 1 000811842.pdf: 747851 bytes, checksum: 12d5b852f7d8f1956044b6f1de50c444 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As Síndromes Mielodisplásicas (SMD) definem um grupo de doenças clonais das células hematopoéticas caracterizadas por citopenias, displasia em uma ou mais linhagens celulares mielóides, hematopoese ineficaz e aumento do risco de evolução para leucemia mielóide aguda. A frequência de doentes que progridem para o câncer varia com o subtipo de SMD, de acordo com a classificação da Organização Mundial da Saúde. As SMD são consideradas doenças pré-malignas e, ao contrário de outras doenças hematológicas, como as leucemias, estão geralmente associadas a anomalias cromossômicas desequilibradas. Estas consistem principalmente em deleções, translocações e alterações numéricas. Também são frequentemente observadas perdas de material genético, com consequente inativação de genes supressores tumorais. Estes genes controlam mecanismos biológicos vitais, como reparo do DNA, crescimento e morte celular programada. Um exemplo é o supressor de tumor RASSF1A (Ras-association domain family 1, isoform A), mapeado em 3p21.3. A falta de expressão deste gene e taxas elevadas de mutações, especialmente envolvendo os exons 3, 4 e 5, foram descritas em diversos tipos de cancêr, mas nunca foram investigadas em SMD. Neste contexto, este projeto teve como proposta investigar a presença de alterações cromossômicas e de mutações nos exons 3, 4 e 5 do gene RASSF1A em indivíduos com SMD ao diagnóstico e em controles normais. Foram estudados 50 casos dos quais foram realizadas culturas de curta duração (24 horas) de células de medula óssea sem estimulação mitogênica e sequenciamento direto dos exons de interesse. Quatro casos (8%) apresentaram alterações cromossômicas, caracterizadas como hipodiploidia em dois casos, monossomia do cromossomo 7 em um e um cariótipo complexo envolvendo os cromossomos 3, 5 e 11 em outro. A análise molecular dos exons 3, 4 e 5 dos 50 casos revelou dois (4%) casos com o polimorfismo ... / The myelodysplastic syndromes (MDS) are characterized by cytopenias, dysplasia in one or more myeloid cell lines, ineffective hematopoiesis and an increased risk of acute myeloid leukemia (AML) transformation. The rate of patients who progress to AML varies by subtype of disease, according to the World Health Organization classification. The MDS are considered premalignant diseases and unlike of other hematological diseases, such as leukemia, are mostly associated with unbalanced chromosomal abnormalities, as deletions, translocations and numerical changes, beyond loss of genetic material with consequent tumor suppressor genes inactivation, which can control biological mechanisms such as DNA repair, growth and programmed cell death. An example is the tumor suppressor RASSF1A (Ras-association domain family 1, isoform A) mapped in 3p21.3. The high mutation rates and no expression of this gene, mainly exons 3, 4 and 5, have been described in several types of cancer but have never been investigated in MDS. Thereby chromosomal changes and mutations in exons 3, 4 and 5 from RASSF1A of the bone marrow cells from 50 cases the diagnosis of MDS were investigated. The assays were accomplished for 24 hours applying bone marrow cells without mitogenic stimulation and the exons were straight sequenced, where four samples (8%) had chromosomal abnormalities, characterized for hypodyploidy (two cases), monosomy 7 and complex karyotype involving chromosomes 3, 5 and 11. Molecular analysis revealed two (4%) other cases with Ala133Ser polymorphism (A133S) in exon 3. The cytogenetic changes observed are related to the MDS developed, while the polymorphism has been proposed to be involved in some types of cancers predisposition. The results can support other studies which are searching for genetic factors involved in the pathogenesis of MDS