O mosquito Culex quinquefasciatus é considerado praga urbana e tem a capacidade de se desenvolver em águas altamente poluídas atingindo elevada densidade. Mosquitos desta espécie possuem importância vetorial na transmissão de parasitas e arboviroses. Medidas de controle químico têm se mostrado ineficazes, além de serem altamente prejudiciais ao meio ambiente. Desse modo, novas tecnologias de controle foram desenvolvidas, entre elas o SIT (Sterile Insect Technique) que utiliza radiação para esterilizar machos e liberá-los no ambiente para copular com fêmeas selvagens. Posteriormente métodos genéticos baseados nessa técnica têm sido propostos. O sistema RIDL (Liberação de Insetos Carregando Gene Letal Dominante), consiste na integração de um gene letal dominante associado a um promotor específico de fêmea, dispensando a etapa de esterilização por radiação. Nesse processo os insetos recebem dieta suplementada com um repressor químico. A expressão do gene letal dominante é mantida desligada enquanto este repressor é adicionado ao meio das larvas. Para as amostras que estariam sendo preparadas para liberação, o repressor é retirado, e o gene letal dominante é ativado, causando a morte de todas as fêmeas, restando apenas machos para liberação. Os machos homozigotos para o gene letal seriam liberados para copular com fêmeas selvagens. A progênie seria heterozigota para o gene letal, porém somente os machos sobreviveriam. Parte crucial para o sucesso deste projeto foi a adaptação do método de microinjeção de embriões para a espécie Culex quinquefasciatus tornando possível a injeção dos transgenes LA513, LA882 e LA3653 com o objetivo de obtermos linhagens transgênicas. A obtenção de linhagens transgênicas com estas construções se mostraram mais laboriosa do que o previsto, dificultando a transgenia. Porém, as aplicações práticas em controle de vetores utilizando a técnica do RIDL são imensas e pode se tornar uma importante ferramenta do Manejo Integrado de vetores. / The Culex quinquefasciatus mosquitoes are considered urban plague and are able to grown in polluted water achieving high density. This specie are important vectors in the transmission of parasites and arbovirus. Chemical control methods shown to be ineffective and highly hazards to the environment. In this way, new technologies of control have been developed, among them there is SIT (Sterile Insect Technique) that utilizes radiation to sterilize males and then release in the environment to mate with wild females. New genetic methods are been proposed based on the SIT technique, they relies on the integration of a dominant lethal gene associated to a specific promoter of female avoiding the need for radiation (RIDL). In this process the insects receive diet supplemented with a chemical repressor (tetracycline). The expression of the dominant lethal gene is kept off while this repressor is added to the larvae. For the samples that would be being prepared for release, the repressor is removed, and the dominant lethal gene is activated, causing the death of all the females, and consequently only leaving male for release. The homozygous males for the lethal gene would be set free to mate with the wild females. The lineages would be heterozygous for the lethal gene and only males would survive. Since that, the capacity of mating of the transgenic males produced by method RDIL is an important prerequisite for the success of the program. It was crucial to achieve the objectives of this project adapt the microinjection method to Culex quinquefasciatus, so it became possible inject the LA513, LA882 and LA3653 plasmids seeking for the transgenic transformation. The obtaining of the transgenic mosquito Culex quinquefasciatus seems to be more difficult then expected and its development was harmed. The practical applications using RIDL in vector control is huge and can become a useful tool in the Integrated Management of vectors.

O mosquito Culex quinquefasciatus é considerado praga urbana e tem a capacidade de se desenvolver em águas altamente poluídas atingindo elevada densidade. Mosquitos desta espécie possuem importância vetorial na transmissão de parasitas e arboviroses. Medidas de controle químico têm se mostrado ineficazes, além de serem altamente prejudiciais ao meio ambiente. Desse modo, novas tecnologias de controle foram desenvolvidas, entre elas o SIT (Sterile Insect Technique) que utiliza radiação para esterilizar machos e liberá-los no ambiente para copular com fêmeas selvagens. Posteriormente métodos genéticos baseados nessa técnica têm sido propostos. O sistema RIDL (Liberação de Insetos Carregando Gene Letal Dominante), consiste na integração de um gene letal dominante associado a um promotor específico de fêmea, dispensando a etapa de esterilização por radiação. Nesse processo os insetos recebem dieta suplementada com um repressor químico. A expressão do gene letal dominante é mantida desligada enquanto este repressor é adicionado ao meio das larvas. Para as amostras que estariam sendo preparadas para liberação, o repressor é retirado, e o gene letal dominante é ativado, causando a morte de todas as fêmeas, restando apenas machos para liberação. Os machos homozigotos para o gene letal seriam liberados para copular com fêmeas selvagens. A progênie seria heterozigota para o gene letal, porém somente os machos sobreviveriam. Parte crucial para o sucesso deste projeto foi a adaptação do método de microinjeção de embriões para a espécie Culex quinquefasciatus tornando possível a injeção dos transgenes LA513, LA882 e LA3653 com o objetivo de obtermos linhagens transgênicas. A obtenção de linhagens transgênicas com estas construções se mostraram mais laboriosa do que o previsto, dificultando a transgenia. Porém, as aplicações práticas em controle de vetores utilizando a técnica do RIDL são imensas e pode se tornar uma importante ferramenta do Manejo Integrado de vetores. / The Culex quinquefasciatus mosquitoes are considered urban plague and are able to grown in polluted water achieving high density. This specie are important vectors in the transmission of parasites and arbovirus. Chemical control methods shown to be ineffective and highly hazards to the environment. In this way, new technologies of control have been developed, among them there is SIT (Sterile Insect Technique) that utilizes radiation to sterilize males and then release in the environment to mate with wild females. New genetic methods are been proposed based on the SIT technique, they relies on the integration of a dominant lethal gene associated to a specific promoter of female avoiding the need for radiation (RIDL). In this process the insects receive diet supplemented with a chemical repressor (tetracycline). The expression of the dominant lethal gene is kept off while this repressor is added to the larvae. For the samples that would be being prepared for release, the repressor is removed, and the dominant lethal gene is activated, causing the death of all the females, and consequently only leaving male for release. The homozygous males for the lethal gene would be set free to mate with the wild females. The lineages would be heterozygous for the lethal gene and only males would survive. Since that, the capacity of mating of the transgenic males produced by method RDIL is an important prerequisite for the success of the program. It was crucial to achieve the objectives of this project adapt the microinjection method to Culex quinquefasciatus, so it became possible inject the LA513, LA882 and LA3653 plasmids seeking for the transgenic transformation. The obtaining of the transgenic mosquito Culex quinquefasciatus seems to be more difficult then expected and its development was harmed. The practical applications using RIDL in vector control is huge and can become a useful tool in the Integrated Management of vectors.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-03-08T11:46:19Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 811660 bytes, checksum: 22a429ae96272122735337467c7e7599 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-08T11:46:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 811660 bytes, checksum: 22a429ae96272122735337467c7e7599 (MD5) Previous issue date: 2000-09-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente trabalho tem por objetivo verificar, nos parâmetros morfológicos e biológicos, após a exposição das larvas de Culex. quinquefasciatus à concentração de 1,5 ppb de ivermectina, o comportamento e a sobrevivência de C. quinquefasciatus, as possíveis alterações morfológicas no corpo gorduroso das larvas, as possíveis alterações no número de ínstares, número médio de ovos por postura da fêmea, duração do período larval e a assimetria flutuante nos adultos. Na sua execução foram utilizadas 601 larvas de 3o e 4o ínstar do mosquito como material biológico, que foram obtidas de criação semi natural. As larvas foram colocadas em recipientes plásticos num período de 30 minutos de exposição à droga. Após a exposição à solução do fármaco, foram lavadas em água desclorada e colocadas em gaiolas teladas para acompanhamento do desenvolvimento. Após a postura, os ovos foram separados e as larvas eclodidas, contadas. Algumas larvas submetidas a 1,5 ppb de ivermectina, foram utilizadas para o preparo de amostras para estudos em histologia. Para a análise de assimetria flutuante, 40 machos e 43 fêmeas adultas do grupo controle e 39 machos e 40 fêmeas adultas, sobreviventes das larvas expostas à concentração de 1,5 ppb de ivermectina, foram selecionados e destes, retiradas suas asas para posterior observação através do microscópio estereoscópico com câmera de vídeo acoplada. Foram realizadas medidas de comprimento das nervuras R3, R4+5, M1, M2, M3+4 e do perímetro das nervuras M1 e M2. Os resultados obtidos neste trabalho mostraram que a ivermectina na concentração de 1,5 ppb causou paralisia nas larvas com 73,38% de mortalidade, aumento das gotículas de lipídios no corpo gorduroso larval e uma diminuição do número de posturas. Foi verificado também, alteração na assimetria flutuante (AF), sendo maior no grupo controle e nas fêmeas. / The present work aims to investigate the behavior and the survival rate of Culex. quinquefasciatus, and to determine the lethal effect of ivermectin based on morphologic and biologic parameters of a 1.5 ppb concentration of C. quinquefasciatus larvae, and possible alterations of their fat body. Larvae of mosquito were obtained from semi-natural breeding as biologic material. Changes in the number of instars, average number of eggs per laying, length of the larval stage and fluctuating asymmetry (FA) were studied in adults. For this experiment, 601 larvae of 3rd and 4th instars of the mosquito were obtained and placed in plastic containers and exposed for 30 minutes. The laid eggs were separated and the hatched larvae were counted. Some larvae submitted to 1.5 ppb of ivermectin were used to prepare samples for histologic study. For asymmetry analyses, 40 floating males and 43 adult females of the control group which survived exposure to 1.5 ppb of ivermectin were selected and from them, the posterior observation through stereoscopic microscope with video camera mounting. R3, R4+5, M1, M2, M3+4 nervures and the perimeter of M1 and M2 nervures were measured. The results obtained show that ivermectin in a concentration of 1.5 ppb caused paralysis to the larvae with a mortality rate of 73.38%, an increase in the number of lipid droplets in the fat body and an reduction of the number of egg layings in the adult. It was also observed that the FA is larger in females than in males and also larger in the treated group than in the control one.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:06:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6316_1.pdf: 1519850 bytes, checksum: e4bd8e3bdb516150584f89ad5cae15a2 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / A atividade larvicida do Bacillus sphaericus depende da ligação da toxina binária (Bin) com um receptor específico presente no epitélio intestinal de larvas de culicídeos. Este trabalho descreve a clonagem e sequenciamento do gene deste receptor em larvas de Culex quinquefasciatus de uma colônia susceptível (CqSF) e de uma resistente (CqRL1/2362) ao Bs, para elucidar o mecanismo molecular da resistência. Ensaios de afinidade in vitro mostraram que uma proteína de 60 kDa é o receptor da toxina na colônia CqSF e nenhuma molécula funcional foi observada em preparações da colônia CqRL1/2362. O sequenciamento do gene obtido da colônia CqSF mostrou uma seqüência de 1925 pb composta por regiões 5 e 3´não traduzidas, sequência codificadora e íntron. A respectiva sequência do gene para a colônia CqRL1/2362 mostrou uma deleção de 19 nucleotídeos, geradora de uma mudança na fase de leitura de 28 aminoácidos e de um códon de terminação da tradução prematuro. A presença deste códon prematuro pode desestabilizar o respectivo mRNA, e impedir sua tradução, bem como leva a síntese de uma proteína truncada sem a âncora GPI necessária a sua localização na membrana epitelial. Em ambos os casos a ausência do receptor no epitélio intestinal seria a causa da resistência. Neste trabalho foi produzida ainda uma proteína recombinante do receptor de 45 kDa que mostrou funcionalidade, demonstrando que o sítio de ligação está localizado na porção N-terminal da molécula. Anticorpos obtidos contra esta proteína recombinante demonstraram ser uma ótima ferramenta de detecção do receptor nativo

Objetivo - Estabelecer um método para produção em massa do mosquito Culex (Culex) quinquefasciatus em laboratório, com o intuito de fornecer subsídio ao controle populacional desta espécie por meio da liberação de machos estéreis. Métodos Foi fundada uma colônia de Cx. quinquefasciatus a partir de imaturos coletados em janeiro de 2013 no rio Pinheiros, São Paulo/SP, Brasil. Os mosquitos adultos tiveram seus pesos secos mensurados e o desenvolvimento avaliado como o tempo para atingirem o estágio de pupa e a fase adulta. No primeiro experimento foram testadas quatro dietas diferentes (ração de peixe, ração canina, mistura de 50 por cento de ração de peixe e 50 por cento de ração canina ou uma mistura de 33,33 por cento de ração de peixe, 33,33 por cento de ração canina e 33,33 por cento de leite em pó) e três temperaturas (27 ± 2°C, 23 ± 2°C e 20 ± 2°C). No segundo experimento testaram-se diferentes quantidades de ração de peixe, densidades larvárias, volume e altura da coluna dágua Resultados - No primeiro experimento não houve diferença estatística significante entre as quatro dietas testadas e o tempo de formação até a fase de pupas e para o peso seco dos adultos. No entanto a ração de peixe proporcionou a menor mortalidade. A maior temperatura (27 ± 2°C) diminuiu o tempo do ciclo de vida dos imaturos, porém gerou adultos com pesos secos menores. No segundo experimento, a condição 0,5 mg/larva, 5 ml/larva em 2,1 cm de coluna dágua e a 27 ± 2°C ofereceu boa produção em massa e gerou maiores taxas de desenvolvimento, menor mortalidade de imaturos e maior peso seco em adultos. Conclusão - Não foi definida uma dieta ideal para uso na produção em massa, considerando os parâmetros analisados. A dieta menos custosa é a ração canina, porém deve ser moída manualmente ou em máquina, tornando a ração de peixe mais eficiente para ser diretamente aplicada nas bandejas de produção. O estudo sugere que a melhor condição para a produção massa do Cx. quinquefasciatus foi 0,5 mg de ração de peixe/dia por larva num volume de 5 ml/larva em 2,1 cm de coluna dágua e a 27 ± 2°C. O estudo sugere que esta técnica pode auxiliar no controle populacional dessa espécie / Objective To establish a method for mass rearing of Culex (Culex) quinquefasciatus mosquitoes in laboratory, in order to provide subsidy to the population control of this species through the release of sterile males. Methods - A colony of Cx. quinquefasciatus was founded from immature collected in January 2013 in the Pinheiros River, São Paulo/SP, Brazil. Adult mosquitoes had their dry weights measured and the development was evaluated as the time to reach pupae and adult phase. In the first experiment it was tested four different diets (fish food, dog food, a mix of 50 percent fish and 50 percent dog food or a mix of 33.33 percent fish 33.33 percent dog food and 33.33 percent milk powder) and three temperatures (27 ± 2°C, 23 ± 2°C and 20 ± 2°C). In the second experiment it was tested several conditions of food amounts (mg/day), larvae densities (ml of water/larva) and water column height that would generate high development rate, low immature mortality and high adult dry weight. Results - In the first experiment there was no statistically significant difference in the time for the development to pupae stage or in the total dry weight of adults among the four experimental diets. However, fish food provided less immature mortality. The highest temperature (27 ± 2°C) decreased the time of the immature life cycle, but generated adults with lower dry weights. In the second experiment, the condition 0.5 mg/larva, 5 ml/larva in 2.1 cm of water column and 27 ± 2°C offered good mass rearing and generated higher development rate, lower immature mortality and higher adult dry weights. Conclusion No ideal diet was defined for mass rearing in the parameters analyzed. The less expensive diet was the dog food, but this should be milled by hand or machine, which makes the fish food more practical in the production trays. This study suggested that the best condition for mass rearing of Cx. quinquefasciatus mosquitoes was 0.5 mg of daily fish food/larva, 5 ml/larva in 2.1 cm of water column and 27 ± 2°C. The study suggests that this technique can assist in population control of this species

Objetivo. Culex (Culex) quinquefasciatus Say 1823 tem distribuição expansiva em aglomerados humanos e é vetor em ciclos de transmissão de agentes patogênicos, como filarídeos e arbovírus. Taxonomicamente, essa espécie está dentro do subgrupo pipiens, cuja principal característica é a similaridade morfológica dos seus integrantes. Este estudo objetivou caracterizar genética e morfologicamente espécies Cx. quinquefasciatus de dez localidades brasileiras e da região da bacia do Prata, na Argentina. Métodos. Para análises morfológicas foram utilizados valores morfométricos das veias alares de fêmeas e a razão DV/D do edeago, na genitália de machos adultos. Para testes genéticos foram sequenciados os genes mitocondriais cox1 e nd4, clonados fragmentos do segundo espaçador ribossomal ITS2 e analisado o padrão de bandas eletroforéticas do segundo intron do lócus da Acetilcolinesterase (ace2). Resultados. A forma das veias alares de fêmeas agrega dois principais grupos, um com mosquitos do Brasil e outro de La Plata, tendo este último maior variança interna. Esses dados estão relacionados à distribuição encontrada no fragmento ace2, que indica La Plata como área de hibridação entre Cx. quinquefasciatus e Cx. pipiens. Os valores de tamanho da asa apresentam três principais agrupamentos. Um deles em áreas ao norte do Brasil, outro no sudeste e sul, e outro na Argentina. O mesmo ocorre com a razão DV/D da genitália masculina. Os dados de sequências de bases do gene cox1 apresentam polimorfismos, com baixa diversidade e agrupamento populacional na região Sul do Brasil. Os SNPs encontrados são silenciosos, pois não apresentam modificação na estrutura da proteína produzida. O gene nd4 é idêntico em todas as amostras. Esses fragmentos sugerem características de homoplasmia em Cx. quinquefasciatus. O espaçador ITS2 mostrou variedade de polimorfismos, por eventos intra-genômicos de inserção, deleção, translocação e transição de bases. Porém, esses eventos são sincrônicos em populações de diferentes áreas geográficas; assim como, mostra pouca variação nas estruturas dos transcritos RNAr. Por outro lado, os dados ITS2 apontam a segregação de um trinucleotídeo GTC, em mosquitos de La Plata, caracterizando essa área como de isolamento geográfico de mosquitos do complexo pipiens. Conclusão. A espécie Cx. quinquefasciatus possui baixa diversidade genética e morfológica, duas linhagens mitocondriais no Brasil e mosquitos de origem híbrida com Cx. pipiens na Bacia do Prata, na Argentina / Objective. The Culex (Culex) quinquefasciatus Say 1823 is widely distributed in human settlements, and is a vector in the transmission cycles of pathogens such as arboviruses and filarids. This species belongs to Cx pipiens complex, whose main characteristic is the morphologic similarity of their species. This study aimed to characterize genetic and morphological Cx quinquefasciatus species from different regions of Brazil and La Plata, Argentina. Methods. Were used morphometric values of wing veins of females and the DV/D ratio of aedeagus in adult male genitalia. For genetic testing were sequenced mitochondrial cox1 and nd4 genes, cloned fragments of ribosomal ITS2 spacer and examined the pattern of electrophoretic bands of the second intron of Acetylcholinesterase (ace2) locus. Results. The shape of the wing veins of female aggregates two main groups, one with mosquitoes of the Brazil and one from La Plata, the latter having greater internal variance. These data are related to the distribution found in ace2 fragment, which indicates La Plata as hybridization area between Cx. pipiens and Cx. quinquefasciatus. The values of wing size form a geographical cline, with three main groupings. One of these areas in the north of Brazil other in the southeast and south, and another in Argentina. The same happens with reason DV/D of the male genitalia. Sequence data bases have cox1 gene polymorphisms with low diversity and clustering of population in southern Brazil. The cox1 SNPs found are trace, because it does not show modification in the structure of the protein produced. The nd4 gene is identical in all samples. These fragments suggest homoplasmic features in Cx. quinquefasciatus. ITS2 showed polymorphisms and intragenomic events by insertion, deletion, translocation and transition bases. However, these events are synchronous in populations from different geographic areas and shows little variation in the structures of rRNA transcripts. Moreover, the data indicate ITS2 segregation of a trinucleotide GTC in mosquitoes from La Plata, featuring this area as the geographic isolation of the subgroup pipiens mosquitoes. Conclusion. Cx quinquefasciatus species has low genetic and morphological diversity, two mitochondrial lineages in Brazil and mosquitoes of hybrid origin with Cx pipiens in La Plata, Argentina

Objetivo. Culex (Culex) quinquefasciatus Say 1823 tem distribuição expansiva em aglomerados humanos e é vetor em ciclos de transmissão de agentes patogênicos, como filarídeos e arbovírus. Taxonomicamente, essa espécie está dentro do subgrupo pipiens, cuja principal característica é a similaridade morfológica dos seus integrantes. Este estudo objetivou caracterizar genética e morfologicamente espécies Cx. quinquefasciatus de dez localidades brasileiras e da região da bacia do Prata, na Argentina. Métodos. Para análises morfológicas foram utilizados valores morfométricos das veias alares de fêmeas e a razão DV/D do edeago, na genitália de machos adultos. Para testes genéticos foram sequenciados os genes mitocondriais cox1 e nd4, clonados fragmentos do segundo espaçador ribossomal ITS2 e analisado o padrão de bandas eletroforéticas do segundo intron do lócus da Acetilcolinesterase (ace2). Resultados. A forma das veias alares de fêmeas agrega dois principais grupos, um com mosquitos do Brasil e outro de La Plata, tendo este último maior variança interna. Esses dados estão relacionados à distribuição encontrada no fragmento ace2, que indica La Plata como área de hibridação entre Cx. quinquefasciatus e Cx. pipiens. Os valores de tamanho da asa apresentam três principais agrupamentos. Um deles em áreas ao norte do Brasil, outro no sudeste e sul, e outro na Argentina. O mesmo ocorre com a razão DV/D da genitália masculina. Os dados de sequências de bases do gene cox1 apresentam polimorfismos, com baixa diversidade e agrupamento populacional na região Sul do Brasil. Os SNPs encontrados são silenciosos, pois não apresentam modificação na estrutura da proteína produzida. O gene nd4 é idêntico em todas as amostras. Esses fragmentos sugerem características de homoplasmia em Cx. quinquefasciatus. O espaçador ITS2 mostrou variedade de polimorfismos, por eventos intra-genômicos de inserção, deleção, translocação e transição de bases. Porém, esses eventos são sincrônicos em populações de diferentes áreas geográficas; assim como, mostra pouca variação nas estruturas dos transcritos RNAr. Por outro lado, os dados ITS2 apontam a segregação de um trinucleotídeo GTC, em mosquitos de La Plata, caracterizando essa área como de isolamento geográfico de mosquitos do complexo pipiens. Conclusão. A espécie Cx. quinquefasciatus possui baixa diversidade genética e morfológica, duas linhagens mitocondriais no Brasil e mosquitos de origem híbrida com Cx. pipiens na Bacia do Prata, na Argentina / Objective. The Culex (Culex) quinquefasciatus Say 1823 is widely distributed in human settlements, and is a vector in the transmission cycles of pathogens such as arboviruses and filarids. This species belongs to Cx pipiens complex, whose main characteristic is the morphologic similarity of their species. This study aimed to characterize genetic and morphological Cx quinquefasciatus species from different regions of Brazil and La Plata, Argentina. Methods. Were used morphometric values of wing veins of females and the DV/D ratio of aedeagus in adult male genitalia. For genetic testing were sequenced mitochondrial cox1 and nd4 genes, cloned fragments of ribosomal ITS2 spacer and examined the pattern of electrophoretic bands of the second intron of Acetylcholinesterase (ace2) locus. Results. The shape of the wing veins of female aggregates two main groups, one with mosquitoes of the Brazil and one from La Plata, the latter having greater internal variance. These data are related to the distribution found in ace2 fragment, which indicates La Plata as hybridization area between Cx. pipiens and Cx. quinquefasciatus. The values of wing size form a geographical cline, with three main groupings. One of these areas in the north of Brazil other in the southeast and south, and another in Argentina. The same happens with reason DV/D of the male genitalia. Sequence data bases have cox1 gene polymorphisms with low diversity and clustering of population in southern Brazil. The cox1 SNPs found are trace, because it does not show modification in the structure of the protein produced. The nd4 gene is identical in all samples. These fragments suggest homoplasmic features in Cx. quinquefasciatus. ITS2 showed polymorphisms and intragenomic events by insertion, deletion, translocation and transition bases. However, these events are synchronous in populations from different geographic areas and shows little variation in the structures of rRNA transcripts. Moreover, the data indicate ITS2 segregation of a trinucleotide GTC in mosquitoes from La Plata, featuring this area as the geographic isolation of the subgroup pipiens mosquitoes. Conclusion. Cx quinquefasciatus species has low genetic and morphological diversity, two mitochondrial lineages in Brazil and mosquitoes of hybrid origin with Cx pipiens in La Plata, Argentina

Objetivo - Estabelecer um método para produção em massa do mosquito Culex (Culex) quinquefasciatus em laboratório, com o intuito de fornecer subsídio ao controle populacional desta espécie por meio da liberação de machos estéreis. Métodos Foi fundada uma colônia de Cx. quinquefasciatus a partir de imaturos coletados em janeiro de 2013 no rio Pinheiros, São Paulo/SP, Brasil. Os mosquitos adultos tiveram seus pesos secos mensurados e o desenvolvimento avaliado como o tempo para atingirem o estágio de pupa e a fase adulta. No primeiro experimento foram testadas quatro dietas diferentes (ração de peixe, ração canina, mistura de 50 por cento de ração de peixe e 50 por cento de ração canina ou uma mistura de 33,33 por cento de ração de peixe, 33,33 por cento de ração canina e 33,33 por cento de leite em pó) e três temperaturas (27 ± 2°C, 23 ± 2°C e 20 ± 2°C). No segundo experimento testaram-se diferentes quantidades de ração de peixe, densidades larvárias, volume e altura da coluna dágua Resultados - No primeiro experimento não houve diferença estatística significante entre as quatro dietas testadas e o tempo de formação até a fase de pupas e para o peso seco dos adultos. No entanto a ração de peixe proporcionou a menor mortalidade. A maior temperatura (27 ± 2°C) diminuiu o tempo do ciclo de vida dos imaturos, porém gerou adultos com pesos secos menores. No segundo experimento, a condição 0,5 mg/larva, 5 ml/larva em 2,1 cm de coluna dágua e a 27 ± 2°C ofereceu boa produção em massa e gerou maiores taxas de desenvolvimento, menor mortalidade de imaturos e maior peso seco em adultos. Conclusão - Não foi definida uma dieta ideal para uso na produção em massa, considerando os parâmetros analisados. A dieta menos custosa é a ração canina, porém deve ser moída manualmente ou em máquina, tornando a ração de peixe mais eficiente para ser diretamente aplicada nas bandejas de produção. O estudo sugere que a melhor condição para a produção massa do Cx. quinquefasciatus foi 0,5 mg de ração de peixe/dia por larva num volume de 5 ml/larva em 2,1 cm de coluna dágua e a 27 ± 2°C. O estudo sugere que esta técnica pode auxiliar no controle populacional dessa espécie / Objective To establish a method for mass rearing of Culex (Culex) quinquefasciatus mosquitoes in laboratory, in order to provide subsidy to the population control of this species through the release of sterile males. Methods - A colony of Cx. quinquefasciatus was founded from immature collected in January 2013 in the Pinheiros River, São Paulo/SP, Brazil. Adult mosquitoes had their dry weights measured and the development was evaluated as the time to reach pupae and adult phase. In the first experiment it was tested four different diets (fish food, dog food, a mix of 50 percent fish and 50 percent dog food or a mix of 33.33 percent fish 33.33 percent dog food and 33.33 percent milk powder) and three temperatures (27 ± 2°C, 23 ± 2°C and 20 ± 2°C). In the second experiment it was tested several conditions of food amounts (mg/day), larvae densities (ml of water/larva) and water column height that would generate high development rate, low immature mortality and high adult dry weight. Results - In the first experiment there was no statistically significant difference in the time for the development to pupae stage or in the total dry weight of adults among the four experimental diets. However, fish food provided less immature mortality. The highest temperature (27 ± 2°C) decreased the time of the immature life cycle, but generated adults with lower dry weights. In the second experiment, the condition 0.5 mg/larva, 5 ml/larva in 2.1 cm of water column and 27 ± 2°C offered good mass rearing and generated higher development rate, lower immature mortality and higher adult dry weights. Conclusion No ideal diet was defined for mass rearing in the parameters analyzed. The less expensive diet was the dog food, but this should be milled by hand or machine, which makes the fish food more practical in the production trays. This study suggested that the best condition for mass rearing of Cx. quinquefasciatus mosquitoes was 0.5 mg of daily fish food/larva, 5 ml/larva in 2.1 cm of water column and 27 ± 2°C. The study suggests that this technique can assist in population control of this species

Identifying the molecular interactions of pathogens in different mosquito species is critical for understanding how mosquitoes transmit diseases. In this study, the role of the Jak-STAT immune signalling pathway in two different mosquito species, (Aedes aegypti L.) and (Culex quinquefasciatus L.) was assessed. Using in silico analysis tools, cell culture, and molecular techniques, changes in gene expression were assessed during lipopolysaccharide (LPS) challenge and West Nile virus (WNV) infection in the two species. It was found that activation of the Jak-STAT pathway occurred more quickly in Ae. aegypti cells compared to Cx. quinquefasciatus cells during LPS exposure. During WNV infections, no significant differences were observed, although preliminary evidence suggests that differential activation of the Jak-STAT pathway may exist between the two species. This research extends our understanding of the mosquito immune system while demonstrating the critical importance of vector-virus interactions across different mosquito species.

Insecticide-treated nets (ITN) are an effective tool to reduce the burden of malaria in Africa. To address questions concerning the sustained impact of ITN in the face of changing transmission intensity and spreading insecticide resistance a series of four entomological investigations was undertaken in Tanzania. / First, a longitudinal survey of vector populations at different altitudes was conducted in the Hai District, Kilimanjaro Region, Tanzania. Entomological parameters relevant to malaria transmission were measured. Vector densities and entomological inoculation rates decreased dramatically with increasing altitude. Seasonal variations in the host preference and resting behaviour of Anopheles arabiensismay influence malaria transmission and control. / Second, the insecticide susceptibility status of vector populations from agricultural sites in the Kilimanjaro Region was evaluated. Malaria vectors from six sites were highly susceptible to diagnostic concentrations of pyrethroid insecticides and DDT in susceptibility tests. Permethrin tolerance in populations of An. arabiensis from an irrigated rice-growing area was not directly related to agricultural use of insecticides. Synergist bioassays indicated the contribution of a metabolic oxidase-based mechanism to the observed resistance while the knockdown resistance (kdr) mechanism was not detected. Close monitoring of resistance development in this area is needed. / Third, the biological efficacy of ITN and the insecticide susceptibility status of mosquito populations from areas with long-term use of ITN were investigated. Data were compiled from national surveys and long-term ITN projects to examine trends in resistance development in Tanzania. Anopheles species were highly susceptible to ITN and diagnostic concentrations of pyrethroid insecticides, while 'nuisance-biting' Culex quinquefasciatus displayed low susceptibility to these compounds. Low efficacy of ITN against C. quinquefasciatus has implications for user acceptance of ITN. / Finally, a novel method for kdr genotyping was developed and evaluated. Sequence specific oligonucleotide probes (SSOP) were used to identify kdr mutations in Anopheles gambiae s.l. in a high-throughput enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) format. Evaluation of the method on field-collected specimens detected the leucine-phenylalanine kdr mutation in two individual An. arabiensis, raising implications for the geographic spread of kdr-based resistance. The novel SSOP-ELISA method is a useful tool for high-throughput screening allowing sensitive detection of insecticide resistance.