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Influência de grânulos citoplasmáticos em oócitos bovinos sobre o desenvolvimento embrionário e fetal /

Rosa, Paola Maria da Silva January 2019 (has links)
Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Resumo: Análises morfológicas para seleção de oócitos podem subestimar os gametas femininos em relação ao seu potencial de desenvolvimento, pela subjetividade da técnica por identificar apenas alterações aparentes em microscopia de luz. Este método pode não ser capaz de avaliar por exemplo, a competência a nível molecular, nuclear e citoplasmática do oócito, como perfil de transcritos acumulados, organização de organelas e vias de apoptose ativas. Portanto, sob a hipótese que grânulos citoplasmáticos em oócitos não alteram a capacidade de desenvolvimento, a qualidade dos embriões gerados e o desenvolvimento embrionário e fetal, o objetivo do nosso estudo foi avaliar os efeitos de grânulos citoplasmáticos na produção in vitro de embriões. Para testar esta hipótese, utilizamos o modelo bovino em dois experimentos para avaliar grupos de oócitos com citoplasma homogêneo (controle) e oócitos que apresentam granulações no citoplasma (granular). No experimento 1, através de amostras de ovários de abatedouro, observamos que: i. Nas análises de perfil funcional do oócito, estruturas que possuem grânulos citoplasmáticos apresentam maiores níveis de caspase 3 ativa (indicador da cascata de apoptose), no entanto não demonstram nenhuma diferença em relação a atividade de junções GAP (comunicação oócito-células do cumulus), ii: Nas análises de expressão de genes marcadores de qualidade realizadas em oócitos, blastocistos e células do cumulus, apenas o transcrito ZAR1 foi diferencialmente expresso,... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Morphological analysis for oocyte selection may underestimate female gametes in regarding their developmental potential, due to the technique subjectivity for only identifies apparent changes in light microscopy. This method may not be able to evaluate for example the molecular, nuclear and cellular oocyte competence, such as transcript profile accumulations, organelles organization and active apoptosis pathways. Therefore, under the hypothesis that oocytes cytoplasmic granules do not alter the development capacity, embryos quality and embryonic and fetal development, the study objective was to evaluate cytoplasmic granules effects on in vitro embryo production. To test this hypothesis we used bovine model in two experiments to evaluate groups of homogeneous cytoplasm oocytes (control) and granular cytoplasm oocytes (granular). In experiment 1, through slaughterhouse ovarian samples we observed: i. In the analysis of oocyte functional profile structures that have cytoplasmic granules have higher active caspase 3 levels (apoptosis cascade indicator), but do not show any difference in GAP junction activity (oocyte-cumulus cell communication). ii. In the analysis of quality marker gene expression performed in oocytes, blastocysts and cumulus cells, only the ZAR1 transcript was differentially expressed and poorly detected in granular group oocytes and iii. In embryonic development rates (cleavage, blastocyst) and kinetics analysis we did not detect differences between the groups.... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

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