Made available in DSpace on 2016-06-02T20:20:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseEMC.pdf: 2324718 bytes, checksum: 03bf0e57dab75b9f8e1c149ff3e678cd (MD5) Previous issue date: 2004-01-27 / Down syndrome is the most frequent cause of mental retardation affecting millions of people worldwide and results from full or partial trisomy of chromosome 21 (HC21). Rare cases of partial trisomy allowed the identification of a small region in HC21 common to all carriers called Down Syndrome Critical Region. The genes DCRA and DSCR8, mapped to this region, encode two proteins of unknown function. With the aim of contributing to a better characterization of these proteins, DSCR8 was subcloned and expressed in fusion with thiorredoxin in Escherichia coli Rosetta (DE3). Recombinant Trx-DSCR8, observed in the soluble fraction, was subjected to the initial purification assays by affinity chromatography in a Ni-NTA column. The gene DCRA was cloned and expressed in fusion with the proteins thiorredoxin and GFP allowing the partial purification of the protein and the achievement of crystallization and immunological assays. The amino acid sequence of DCRA showed 57% and 49% of identity to a protein of unknown function from Anopheles gambiae and Drosophila melanogaster respectively. Also, in silico analyses revealed that DCRA contains a putative Vps26 domain. Subcellular localization of DCRA in fusion with GFP was observed preferentially in the cytoplasm of the cell lines tested. These results contribute to a better characterization of DCRA and DSCR8 and open up possibilities towards the understanding of the cellular role of these proteins and their relationship with the Down syndrome. / A síndrome de Down é a causa mais freqüente de retardo mental que afeta milhões de pessoas em todo o mundo e resulta de uma trissomia completa ou parcial do cromossomo 21 (HC21). Casos raros de trissomia parcial permitiram identificar uma pequena região do HC21 comum a todos os portadores denominada de Região Crítica da Síndrome de Down. Os genes DCRA e DSCR8 foram mapeados nesta região e codificam proteínas de função desconhecida. Com o objetivo de contribuir para a caracterização destas proteínas DSCR8 foi expresso em fusão com seqüência codificadora da tiorredoxina na linhagem de Escherichia coli Rosetta (DE3) o que possibilitou a obtenção de Trx- DSCR8 na fração solúvel em quantidade suficiente para os ensaios iniciais de purificação em cromatografia de afinidade Ni-NTA. O DCRA foi clonado em fase com seqüências codificadores da tiorredoxina e GFP o que permitiu que a solução protéica fosse parcialmente purificada e que ensaios de cristalização e imunização pudessem ser realizados. A seqüência de aminoácidos da proteína DCRA possui 57% e 49 % de identidade respectivamente com proteínas de Anopheles gambiae e de Drosophila melanogaster, ambas de função desconhecida. Análises in silico da seqüência de aminoácidos demonstram que DCRA possui um provável domínio de Vps26. A localização subcelular da DCRA em fusão com a GFP foi observada preferencialmente no compartimento citoplasmático em todas as linhagens celulares analisadas. Esses resultados contribuem para melhor conhecimento da DCRA e da DSCR8 e estimulam futuras análises para o entendimento da função celular destas proteínas, bem como suas implicações na síndrome de Down.