Diaphorina citri depende dos endossimbiontes presentes em seu bacterioma, as bactérias Carsonella e Profftella, para o fornecimento de nutrientes essenciais ao seu desenvolvimento. D. citri também está associada à bactéria Wolbachia, que infecta inúmeros tecidos desse inseto, incluindo seu bacterioma. Esses simbiontes são transmitidos verticalmente, sendo incorporados ao bacterioma. Neste estudo, são abordados os eventos relacionados à formação do bacterioma, à dinâmica da densidade dos simbiontes durante o ciclo biológico do hospedeiro e à sensibilidade dos simbiontes ao estresse térmico. A morfogênese do bacterioma durante a embriogênese de D. citri foi descrita por meio de histologia e marcação com sondas oligonucleotídicas fluorescentes (FISH) específicas para os simbiontes do bacterioma. No início da embriogênese, as bactérias permanecem agrupadas em uma massa no polo posterior do ovo. Vitelófagos se aderem à massa de simbiontes no início da blastulação, precedendo à formação dos bacteriócitos. O bacterioma transitório resultante possui bacteriócitos que contém o simbionte do sincício (Profftella), localizado externamente aos que contém o simbionte do bacteriócito (Carsonella). Na sequência do desenvolvimento, ocorre a reorganização dos bacteriócitos, evento seguido pela formação da região sincicial. O bacterioma é movido para a região abdominal do embrião durante a catatrepsis, passando ao formato trilobado típico ao final da embriogênese. A densidade dos simbiontes associados ao psílideo dos citros durante o seu desenvolvimento foi determinada por PCR quantitativo em tempo real (qPCR). A densidade dos diferentes simbiontes, dada pela análise do número de cópias dos genes 16S rRNA (Carsonella e Profftella) e ftsZ (Wolbachia), revelaram o crescimento contínuo dos simbiontes ao longo do desenvolvimento do hospedeiro. As curvas e taxas de crescimento dos simbiontes, estimadas por meio da equação de Gompertz, indicaram relação inversamente proporcional à especificidade das relações simbiontehospedeiro e o tempo para atingir a taxa máxima de crescimento. A densidade de Carsonella foi significativamente menor daquela de Profftella em todos os estágios analisados, apesar da tendência de aumento paralelo. As taxas de crescimento de Wolbachia foram similares às de Carsonella, mas a densidade foi inferior. Nos adultos, a densidade dos três simbiontes foi maior nos machos. Entretanto, esses simbiontes continuaram a apresentar crescimento em fêmeas em atividade de oviposição, mesmo com a sua incorporação aos oócitos, o que diverge da diminuição normalmente observada em outros sistemas. Os simbiontes de D. citri responderam de forma variável ao estresse térmico. Os diferentes simbiontes apresentaram resposta própria aos diversos períodos de exposição às diferentes condições térmicas de estresse. Ainda, foi detectada a influência de um simbionte na capacidade de resposta do outro, demonstrando a existência de mecanismos de comunicação e regulação entre os simbiontes de D. citri. O estudo demonstra a influência do estresse térmico sobre a densidade dos simbiontes e a necessidade de se compreender melhor a biologia das interações insetosimbiontes e a dinâmica das relações com o ambiente. / Diaphorina citri feeds on phloem-sap and depends on bacterial symbionts harbored in the bacteriome as a supplementary source of nutrients lacking in the diet. These bacteria are vertically transmitted, being incorporated into the developing bacteriome. Here, we focus on the events related to bacteriome morphogenesis, symbiont density during host development and the effects of exposure to high temperatures on the establishment of endosymbionts during immature development. The bacteriome morphogenesis during D. citri embryogenesis was investigated by means of histology and fluorescence in situ hybridization analysis (FISH) using symbiont-specific oligonucleotide probes. During early embryogenesis, the bacteria remain aggregated in a symbiont-ball at the posterior pole of the egg. Vitellophages adhere to the symbiont mass during early blastulation, preceding bacteriocyte formation. As a result, the transient bacteriome has the bacteriocytes that harbors the syncytium symbiont (Profftella) arranged externally to those harboring Carsonella. The bacteriome is moved to the embryo abdominal region as a result of katatrepsis, becoming trilobated during the later embryonic development. The infection density of the endosymbionts associated to the Asian citrus psyllid was determined using real-time quantitative PCR (qPCR), throughout the host life cycle. Copy number of genes 16S rRNA (Carsonella and Profftella) and ftsZ (Wolbachia), revealed the continuous growth of symbionts during host development. Growth curves and rates of symbionts estimated using the Gompertz equation indicated an inversely proportional correlation between the degree of symbiont cospeciation with the host and the time to achieve the maximum growth rate. Carsonella density was significantly lower than that of Profftella at all stages analyzed, despite their joint growth trend. The growth rates of Wolbachia were similar to those of Carsonella, but Wolbachia had a lower density. In adults, the density of the three symbionts was higher in males. However, density in reproductive females remained high, despite the incorporation of symbionts in the oocytes. The increased density of symbionts in postreproductive adults contrasts with the decrease observed in other symbiotic systems. The infection density is mutually related to biological effects, but the symbiont may vary the response to heat stress. Density of Profftella and Carsonella was higher than that of Wolbachia, although there were different response patterns related to temperatures and treatment times. Symbionts associated with D. citri have their growth affected by the symbionts. This study demonstrates the effects of the heat shock on symbiont density during nymphal development and illustrates the need of further work the biology of insect-symbiont interactions and the dynamics of its relationships with the environment for a better understading of such associations.

Diaphorina citri depende dos endossimbiontes presentes em seu bacterioma, as bactérias Carsonella e Profftella, para o fornecimento de nutrientes essenciais ao seu desenvolvimento. D. citri também está associada à bactéria Wolbachia, que infecta inúmeros tecidos desse inseto, incluindo seu bacterioma. Esses simbiontes são transmitidos verticalmente, sendo incorporados ao bacterioma. Neste estudo, são abordados os eventos relacionados à formação do bacterioma, à dinâmica da densidade dos simbiontes durante o ciclo biológico do hospedeiro e à sensibilidade dos simbiontes ao estresse térmico. A morfogênese do bacterioma durante a embriogênese de D. citri foi descrita por meio de histologia e marcação com sondas oligonucleotídicas fluorescentes (FISH) específicas para os simbiontes do bacterioma. No início da embriogênese, as bactérias permanecem agrupadas em uma massa no polo posterior do ovo. Vitelófagos se aderem à massa de simbiontes no início da blastulação, precedendo à formação dos bacteriócitos. O bacterioma transitório resultante possui bacteriócitos que contém o simbionte do sincício (Profftella), localizado externamente aos que contém o simbionte do bacteriócito (Carsonella). Na sequência do desenvolvimento, ocorre a reorganização dos bacteriócitos, evento seguido pela formação da região sincicial. O bacterioma é movido para a região abdominal do embrião durante a catatrepsis, passando ao formato trilobado típico ao final da embriogênese. A densidade dos simbiontes associados ao psílideo dos citros durante o seu desenvolvimento foi determinada por PCR quantitativo em tempo real (qPCR). A densidade dos diferentes simbiontes, dada pela análise do número de cópias dos genes 16S rRNA (Carsonella e Profftella) e ftsZ (Wolbachia), revelaram o crescimento contínuo dos simbiontes ao longo do desenvolvimento do hospedeiro. As curvas e taxas de crescimento dos simbiontes, estimadas por meio da equação de Gompertz, indicaram relação inversamente proporcional à especificidade das relações simbiontehospedeiro e o tempo para atingir a taxa máxima de crescimento. A densidade de Carsonella foi significativamente menor daquela de Profftella em todos os estágios analisados, apesar da tendência de aumento paralelo. As taxas de crescimento de Wolbachia foram similares às de Carsonella, mas a densidade foi inferior. Nos adultos, a densidade dos três simbiontes foi maior nos machos. Entretanto, esses simbiontes continuaram a apresentar crescimento em fêmeas em atividade de oviposição, mesmo com a sua incorporação aos oócitos, o que diverge da diminuição normalmente observada em outros sistemas. Os simbiontes de D. citri responderam de forma variável ao estresse térmico. Os diferentes simbiontes apresentaram resposta própria aos diversos períodos de exposição às diferentes condições térmicas de estresse. Ainda, foi detectada a influência de um simbionte na capacidade de resposta do outro, demonstrando a existência de mecanismos de comunicação e regulação entre os simbiontes de D. citri. O estudo demonstra a influência do estresse térmico sobre a densidade dos simbiontes e a necessidade de se compreender melhor a biologia das interações insetosimbiontes e a dinâmica das relações com o ambiente. / Diaphorina citri feeds on phloem-sap and depends on bacterial symbionts harbored in the bacteriome as a supplementary source of nutrients lacking in the diet. These bacteria are vertically transmitted, being incorporated into the developing bacteriome. Here, we focus on the events related to bacteriome morphogenesis, symbiont density during host development and the effects of exposure to high temperatures on the establishment of endosymbionts during immature development. The bacteriome morphogenesis during D. citri embryogenesis was investigated by means of histology and fluorescence in situ hybridization analysis (FISH) using symbiont-specific oligonucleotide probes. During early embryogenesis, the bacteria remain aggregated in a symbiont-ball at the posterior pole of the egg. Vitellophages adhere to the symbiont mass during early blastulation, preceding bacteriocyte formation. As a result, the transient bacteriome has the bacteriocytes that harbors the syncytium symbiont (Profftella) arranged externally to those harboring Carsonella. The bacteriome is moved to the embryo abdominal region as a result of katatrepsis, becoming trilobated during the later embryonic development. The infection density of the endosymbionts associated to the Asian citrus psyllid was determined using real-time quantitative PCR (qPCR), throughout the host life cycle. Copy number of genes 16S rRNA (Carsonella and Profftella) and ftsZ (Wolbachia), revealed the continuous growth of symbionts during host development. Growth curves and rates of symbionts estimated using the Gompertz equation indicated an inversely proportional correlation between the degree of symbiont cospeciation with the host and the time to achieve the maximum growth rate. Carsonella density was significantly lower than that of Profftella at all stages analyzed, despite their joint growth trend. The growth rates of Wolbachia were similar to those of Carsonella, but Wolbachia had a lower density. In adults, the density of the three symbionts was higher in males. However, density in reproductive females remained high, despite the incorporation of symbionts in the oocytes. The increased density of symbionts in postreproductive adults contrasts with the decrease observed in other symbiotic systems. The infection density is mutually related to biological effects, but the symbiont may vary the response to heat stress. Density of Profftella and Carsonella was higher than that of Wolbachia, although there were different response patterns related to temperatures and treatment times. Symbionts associated with D. citri have their growth affected by the symbionts. This study demonstrates the effects of the heat shock on symbiont density during nymphal development and illustrates the need of further work the biology of insect-symbiont interactions and the dynamics of its relationships with the environment for a better understading of such associations.

O bem-estar animal pode influenciar o sistema produtivo na avicultura de postura. Sendo assim, o sistema free-range ou \"ao ar livre\" sem o uso de antibióticos surge como uma alternativa aos sistemas confinados. Espera-se que esse sistema torne-se cada vez mais difundido em atenção à demanda do mercado consumidor e bem-estar animal. Neste estudo, são abordados à influência da ambiência nas características qualitativas da cama aviária e ninhos, qualidade do ar, padrões fisiológicos e comportamentais, e avaliação da microbiota intestinal de galinhas poedeiras criadas no sistema free-range sem o uso de antibióticos. O estudo foi conduzido em um galpão comercial de galinhas poedeiras da linhagem Lohmann Brown. O período experimental correspondeu da 18ª a 24ª semanas de idade, para as avaliações relacionadas à ambiência, parâmetros fisiológicos e comportamentais. Para a estimativa da densidade bacteriana intestinal, as aves foram avaliadas durante o período de produção dos ovos, correspondendo à idade de pré-pico de postura (13ª semana), pico de postura (24ª semana) e pós-pico de postura (63ª semana). Água e ração foram fornecidas ad libitum. Constatou-se que as condições climáticas foram favoráveis, ou seja, as aves permanceram dentro da zona de termoneutralidade e na faixa de conforto térmico ideal. Resultados referentes à amônia volatilizada foram satisfatórios, assim como a umidade da cama e ninhos. Não houve incidência de pododermatite e as condições de empenamento das aves permaneceram íntegras nas regiões avaliadas. As avaliações comportamentais das aves demonstrou que as mesmas estavam em totais condições de bem-estar animal, ademais os níveis de corticosterona foram significativamente inferiores. Em relação ao estudo da microbiota intestinal das aves, as análises revelaram diferentes padrões de densidade dos simbiontes em relação às regiões estudas. A população das bactérias benéficas foi significativamente maior em comparação as bactérias patogênicas. Os simbiontes intestinais estudados demonstraram crescimento diferencial ao longo do período estudo. Diante do exposto, podemos reportar que o sistema free-range sem o uso de antibióticos apresentou qualidade de vida às aves poedeiras no que tange o bem-estar animal. / Animal welfare quality may affect egg laying livestock. Thus, the antibiotics-free free-range rearing system (AFFRS) came to light as an alternative to conventional production systems. Furthermore, it is expected AFFRS become more and more widespread as a response to consumer demand and animal welfare rules. In here, we aimed to evaluate the influence of the ambiance on the avian litter and nests, air quality, bird physiology and behavioral patterns, and their intestinal microbiota as well. The study was carried out using Lohmann Brown laying hens breed of the 18th to the 24th weeks-old kept in a commercial shed, and the environmental, physiological and behavioral parameters were evaluated. Additionally, gut microbiota was estimated by using hens of three different egg production cycles. The first cycle was represented by grower hens with 13th weeks of age as their reproductive organs were developing (i.e. early cycle), followed by 24th weeks-old grower hens (high egg production cycle), and 63th weeks-old grower cycle hens (late egg-laying cycle). Water and feed were supplied ad libitum. Data demonstrated birds were in optimal thermal comfort and the volatilized ammonia concentration remained at very low rates, as well as the bed and nest moisture levels. There was no incidence of pododermatitis and the conditions of feathering of the birds remained intact. Animal welfare conditions were optimal as demonstrated through behavioral data and corticosterone levels. Furthermore, gut microbiota densities were different between target symbiont-groups of the same gut region and among different gut segments investigated. Beneficial bacteria densities were significantly higher than pathogenic bacteria and gut symbionts showed differential growth curve throughout the studied period. Thus, our results demonstrated that the AFFRS met the laying hen\'s welfare quality rules and can be considered a good alternative rearing system to the egg production industry.

O bem-estar animal pode influenciar o sistema produtivo na avicultura de postura. Sendo assim, o sistema free-range ou \"ao ar livre\" sem o uso de antibióticos surge como uma alternativa aos sistemas confinados. Espera-se que esse sistema torne-se cada vez mais difundido em atenção à demanda do mercado consumidor e bem-estar animal. Neste estudo, são abordados à influência da ambiência nas características qualitativas da cama aviária e ninhos, qualidade do ar, padrões fisiológicos e comportamentais, e avaliação da microbiota intestinal de galinhas poedeiras criadas no sistema free-range sem o uso de antibióticos. O estudo foi conduzido em um galpão comercial de galinhas poedeiras da linhagem Lohmann Brown. O período experimental correspondeu da 18ª a 24ª semanas de idade, para as avaliações relacionadas à ambiência, parâmetros fisiológicos e comportamentais. Para a estimativa da densidade bacteriana intestinal, as aves foram avaliadas durante o período de produção dos ovos, correspondendo à idade de pré-pico de postura (13ª semana), pico de postura (24ª semana) e pós-pico de postura (63ª semana). Água e ração foram fornecidas ad libitum. Constatou-se que as condições climáticas foram favoráveis, ou seja, as aves permanceram dentro da zona de termoneutralidade e na faixa de conforto térmico ideal. Resultados referentes à amônia volatilizada foram satisfatórios, assim como a umidade da cama e ninhos. Não houve incidência de pododermatite e as condições de empenamento das aves permaneceram íntegras nas regiões avaliadas. As avaliações comportamentais das aves demonstrou que as mesmas estavam em totais condições de bem-estar animal, ademais os níveis de corticosterona foram significativamente inferiores. Em relação ao estudo da microbiota intestinal das aves, as análises revelaram diferentes padrões de densidade dos simbiontes em relação às regiões estudas. A população das bactérias benéficas foi significativamente maior em comparação as bactérias patogênicas. Os simbiontes intestinais estudados demonstraram crescimento diferencial ao longo do período estudo. Diante do exposto, podemos reportar que o sistema free-range sem o uso de antibióticos apresentou qualidade de vida às aves poedeiras no que tange o bem-estar animal. / Animal welfare quality may affect egg laying livestock. Thus, the antibiotics-free free-range rearing system (AFFRS) came to light as an alternative to conventional production systems. Furthermore, it is expected AFFRS become more and more widespread as a response to consumer demand and animal welfare rules. In here, we aimed to evaluate the influence of the ambiance on the avian litter and nests, air quality, bird physiology and behavioral patterns, and their intestinal microbiota as well. The study was carried out using Lohmann Brown laying hens breed of the 18th to the 24th weeks-old kept in a commercial shed, and the environmental, physiological and behavioral parameters were evaluated. Additionally, gut microbiota was estimated by using hens of three different egg production cycles. The first cycle was represented by grower hens with 13th weeks of age as their reproductive organs were developing (i.e. early cycle), followed by 24th weeks-old grower hens (high egg production cycle), and 63th weeks-old grower cycle hens (late egg-laying cycle). Water and feed were supplied ad libitum. Data demonstrated birds were in optimal thermal comfort and the volatilized ammonia concentration remained at very low rates, as well as the bed and nest moisture levels. There was no incidence of pododermatitis and the conditions of feathering of the birds remained intact. Animal welfare conditions were optimal as demonstrated through behavioral data and corticosterone levels. Furthermore, gut microbiota densities were different between target symbiont-groups of the same gut region and among different gut segments investigated. Beneficial bacteria densities were significantly higher than pathogenic bacteria and gut symbionts showed differential growth curve throughout the studied period. Thus, our results demonstrated that the AFFRS met the laying hen\'s welfare quality rules and can be considered a good alternative rearing system to the egg production industry.