Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción. La producción de amonio genera alcalinización de saliva y biopelícula dental, este amonio puede ser producido a través de enzimas como la ureasa (U) y arginina deiminasa (ADS), ambas presente en la cavidad oral. Esta mayor producción de amonio puede estar relacionada con un factor protector de caries. Para ello es necesario establecer como primera medida una metodología que permita la medición de la actividad enzimática de U y ADS en saliva y biopelícula oral humana, a través del amonio generado por estas. Material y Método. Se recolectaron muestras de saliva y biopelícula dental de 20 sujetos, 10 correspondían al grupo de bajo COPD (COPD = 0) y 10 al grupo de alto COPD (4 o más caries dentinarias). Se construyó una curva estándar de amonio, una curva estándar de proteínas totales y se midió la producción de amonio en las muestras señaladas, siendo este amonio expresado por la cantidad de proteínas totales presente en cada muestra respectiva, lo cual represento la actividad enzimática estudiada. Resultados. La metodología establecida permitió medir la actividad de U y ADS en saliva y biopelícula oral humana. El modo de conservación de muestras propuesto no genero pérdidas. La curva de calibración de amonio presentó un coeficiente de correlación 0,976 y la curva de calibración de proteínas un coeficiente de correlación 0,902. La actividad enzimática, al compararla entre grupos de bajo y alto COPD, fue mayor en el grupo de bajo COPD en todos los sistemas medidos, U en saliva, ADS en saliva, U en biopelícula, ADS en biopelícula, siendo estas diferencias estadísticamente significativas. Conclusión. En la muestra de este estudio se pudo establecer una metodología adecuada para la medición de actividades enzimáticas de ureasa y arginina deiminasa, y su relación con el riesgo de caries. La metodología presentada permitió la discriminación en la producción de amonio, entre grupos con bajo y alto COPD. Estos resultados sugieren menor presencia de caries en individuos con mayor producción de amonio, a través de los sistemas enzimáticos estudiados, dado por la alcalinización que genera el amonio en el medio oral.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su tesis en el Portal de Tesis Electrónicas / INTRODUCCIÓN: Especies bacterianas anaeróbicas potencialmente patogénicas constituyen un porcentaje significativo de la microbiota normal de la cavidad bucal y hoy se sabe que su capacidad de colonizar y sobrevivir durante la niñez temprana, depende de las condiciones medioambientales que ofrezca el hospedero. Sin embargo, se desconoce la edad en que estas especies bacterianas comienzan a colonizar la cavidad bucal de los niños, como es el caso de Porphyromonas gingivalis, considerado uno de los periodontopatógenos más importantes. Esta especie posee múltiples factores de virulencia, entre los cuales se ha destacado la expresión de fimbrias, apéndices externos que juegan un rol determinante en la adhesión e invasión de los tejidos periodontales. Las fimbrias están constituidas por una subunidad proteica denominada fimbrilina (FimA), codificada por el gen fimA. Se han descrito 6 tipos de genes fimA en base a su secuencia de nucleótidos, codificando cada uno un tipo de fimbria diferente, las que se han asociado con distintos grados de salud y enfermedad periodontal. OBJETIVO: Investigar la presencia de Porphyromonas gingivalis, genotipos fimA-I, II, III y IV, en la microbiota bucal de niños de 4 a 8 años de edad. METODOLOGÍA: Se tomo muestras de hisopado de dorso lingual de 92 niños, de 4 a 8 años de edad, a quienes se les realizó un examen en búsqueda de signos clínicos de gingivitis y se distribuyeron según edad. La presencia de Porphyromonas gingivalis se investigó mediante cultivo microbiológico, pruebas bioquímicas y Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). La detección de los genotipos fimA se llevó a cabo mediante PCR. RESULTADOS: Se detectó Porphyromonas gingivalis en el 11,95% de los niños (n=11), mediante cultivo y PCR, y 3 sujetos resultaron positivos a la presencia del genotipo fimA-IV de esta especie. Los 8 sujetos restantes no presentaron ninguno de los otros genotipos analizados en este estudio. CONCLUSIONES: Porphyromonas gingivalis puede ser miembro de la microbiota comensal de niños de 4 a 8 años de edad. La detección del genotipo fimA-IV podría indicar una colonización preferencial a edades tempranas por parte de este genotipo, lo que ameritaría una revisión en el tiempo, para evaluar su permanencia, reemplazo o asociación con la aparición de patologías periodontales

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción La generación de álcali en saliva y biofilm dental (biopelícula) es producto de la actividad de dos vías enzimáticas productoras de amonio: a) hidrólisis de urea por la enzima ureasa y b) hidrólisis de arginina a través de enzimas del sistema arginina deiminasa (SAD), ambas provenientes de bacterias presentes en la cavidad oral. El potencial alcalinogénico de estos mecanismos enzimáticos podría estar asociado positivamente con un menor índice de caries. Por lo tanto, es primordial, a través de métodos establecidos, cuantificar la actividad de ambos mecanismos enzimáticos y correlacionarlos con índice de caries en una población infantil. Materiales y Métodos Fueron examinados, mediantes métodos visual y táctil, por examinadores calibrados (índice de Kappa= 0,77) según criterios OMS, 65 niños de 8 años de edad de tres colegios seleccionados. Se recolectaron muestras de saliva y biofilm dental de todos los niños. Se determinó la suma del índice COPD y ceod de cada niño y se agruparon en; Bajo, Moderado, Alto. En muestras de saliva y biofilm dental se determinó concentración de amonio, proteínas y actividad específica de ureasa y SAD. Resultados Con curvas de calibración de amonio y proteínas con coeficiente de correlación cercano a 1, se determinó la actividad enzimática medida a través de la cuantificación de amonio. Al medir actividad de ureasa en saliva se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre los grupos (p<0,05). Al medir actividad de ureasa en biopelícula y SAD en saliva y biopelícula no se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre los grupos (p>0,05). Al comparar índice de caries entre colegios de zona urbana y rural, existe tendencia al aumento en ambos índices en niños de colegio rural, pero estos no son estadísticamente 2 significativos (p>0,05). Conclusión El aumento de actividad de ureasa en saliva se asocia con la disminución de índices de COPD-ceod en niños de 8 años provenientes de la R.M. La actividad de ureasa en biopelícula no se asocia con la disminución de índices de COPD y ceod en niños de 8 años. Existe unan clara tendencia al aumento de la producción de álcali de ambos sistemas enzimáticos en saliva, en niños con menores índices de caries, que pueden influir en el equilibrio ácido-base del medio ambiente oral. Existe tendencia a mayores índices de caries en niños de 8 años que habitan en zona rural de la Región Metropolitana. Son necesarios nuevos estudios que controlen factores externos que puedan influir considerablemente en los resultados