Submitted by PPG Biologia Celular e Molecular (bcm@pucrs.br) on 2018-03-15T12:31:20Z No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado Adilio.pdf: 2662669 bytes, checksum: 73c86d6d555c94d57c1f0714b5c2ccbc (MD5) / Approved for entry into archive by Tatiana Lopes (tatiana.lopes@pucrs.br) on 2018-03-23T11:44:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado Adilio.pdf: 2662669 bytes, checksum: 73c86d6d555c94d57c1f0714b5c2ccbc (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-23T11:52:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado Adilio.pdf: 2662669 bytes, checksum: 73c86d6d555c94d57c1f0714b5c2ccbc (MD5) Previous issue date: 2018-03-02 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Tuberculosis (TB), caused mainly by Mycobacterium tuberculosis, is an infectious disease responsible for a significant number of deaths worldwide. IQG-607 is an analog of isoniazid (INH). According to several experiments carried out by our research group, IQG-607 showed both in vitro and in vivo anti-TB activity. Initial studies showed that the compound INCT-TB551 (a quinoline derivative) also presents in vitro anti-TB activity. The aim of this study was to develop analytical methods by high performance liquid chromatography (HPLC-UV) for quantification of IQG-607 and INCT-TB551 in mice plasma, and therefore to perform pharmacokinetic studies. The analytical method for the determination of IQG-607 in mice plasma showed linearity (r = 0.9992) in 0.5? 50 ?g/mL concentration range. Intra- and inter-day precision was < 15%, and the recovery ranged from 92.07 to 107.68%, showing that the method provides a precise and accurate analysis of the compound. In addition, IQG-607 was stable in plasma for at least 30 days at ?80 ?C, and after plasma processing, for 4 h in the auto-sampler (6 ?C) and maintained on ice (recovery > 85%). The applicability of the method for pharmacokinetic studies was determined after intravenous (i.v.) and oral (fasted and fed conditions) administrations to mice. IQG-607 levels in plasma were quantified at time points for up to 2.5 h. A short half-life (t1/2) (1.14 h), a high clearance (CL) (3.89 L/h/kg), a moderate volume of distribution at steady state (Vdss, 1.22 L/kg), were observed after i.v. (50 mg/kg) administration. Similar results were obtained for oral administration (250 mg/kg) under fasted and fed conditions. The oral bioavailability (F), approximately 4%, was not altered by feeding. Plasma protein binding was 88.87 ? 0.9%. Recently, experiments in mice infected with M. tuberculosis have shown that the compound INCT-TB551 has no in vivo activity, unlike previous in vitro activity studies. An analytical method was developed for the determination of INCT-TB551 in mice plasma to assess compound absorption, if any, after oral administration. The analytical method presented linearity from 0.1-10 ?g/mL (r = 0.9999). After development of the analytical method, the compound was orally administered in mice and the plasma levels were quantified at time points for up to 1 h. The compound INCT-TB551 was detected in the plasma of animals, which indicated that INCT-TB551 was absorbed. Although absorbed when orally administered, the compound is not exhibiting activity against M. tuberculosis in this animal model. This finding may be associated with the formation of inactive metabolites and/or the plasma concentration of INCT-TB551 achieved may be inadequate to exert its therapeutic effect. However, these points require further investigations. The protocols described here may serve as support to initiate pharmacokinetic studies of promising compounds, collaborating to advance in earlier stages of drug development. / A tuberculose (TB) ? uma doen?a infecto-contagiosa, causada principalmente pelo Mycobacterium tuberculosis, respons?vel por um n?mero consider?vel de mortes em todo o mundo. O composto IQG-607 ? um an?logo da isoniazida (INH) que, de acordo com diversos experimentos realizados pelo grupo de pesquisa envolvido no seu estudo, apresenta atividade anti-TB in vitro e in vivo. Estudos iniciais do mesmo grupo demonstraram que o composto INCT-TB551 (um derivado quinol?nico) tamb?m apresenta promissora atividade anti-TB. O objetivo deste estudo foi desenvolver metodologias anal?ticas por cromatografia l?quida de alta efici?ncia (CLAE-UV) para a quantifica??o do composto IQG-607 e do INCT-TB551, em plasma de camundongos, para a realiza??o de estudos de farmacocin?tica. O m?todo anal?tico para a determina??o do composto IQG-607 em plasma de camundongos apresentou linearidade (r = 0.9992) na faixa de 0.5?50 ?g/mL. Os valores de precis?o intra e interensaio (CV < 15%) e de recupera??o (92.07-107.68%) demonstram que o m?todo ? preciso e exato para a an?lise do composto. Al?m disso, o IQG-607 se mostrou est?vel no plasma por at? 30 dias, quando armazenado no freezer -80 ?C, e est?vel ap?s o tratamento da amostra do plasma, por at? 4 horas (h) na bancada (gelo) e no autosampler do equipamento (6 ?C). A aplicabilidade do m?todo anal?tico para o estudo de farmacocin?tica foi determinada ap?s a administra??o i.v. e oral em camundongos (animais em jejum e animais alimentados). As concentra??es plasm?ticas de IQG-607 foram quantificadas por at? 2,5 h ap?s a administra??o nos animais. Quando administrado pela via i.v. foi observado um tempo de meia vida (t1/2) curto (1,14 h), elevado clearance (CL) (3,89 L/h/kg), e um moderado volume de distribui??o (Vdss) (1,22 L/kg). Resultados similares foram obtidos ap?s a administra??o oral (250 mg/kg) em camundongos que estavam em jejum ou alimentados. A biodisponibilidade oral (F) foi de aproximadamente 4 %, valor que n?o foi alterado pela alimenta??o. A taxa de liga??o a prote?nas plasm?ticas do IQG-607 ? de aproximadamente 88 ? 0.9%. Experimentos recentes em camundongos infectados com M. tuberculosis demonstraram que o composto INCT-TB551 n?o apresentou atividade neste modelo in vivo, ao contr?rio dos estudos de atividade in vitro realizados anteriormente. Um m?todo anal?tico para a determina??o do composto INCT-TB551 em plasma de camundongos foi desenvolvido para avaliar se o composto estava sendo absorvido ap?s a administra??o oral. O m?todo anal?tico apresentou linearidade na faixa de 0.1-10 ?g/mL (r = 0.9999). Ap?s o m?todo ter sido padronizado, o composto foi administrado por via oral em camundongos, e as concentra??es plasm?ticas foram quantificadas por at? 1 h ap?s a administra??o. O composto INCT-TB551 foi detectado no plasma dos animais, indicando que estava sendo absorvido. Apesar de absorvido quando administrado por via oral, o composto n?o est? apresentando atividade contra M. tuberculosis neste modelo animal, o que pode estar relacionado, por exemplo, com a forma??o de metab?litos inativos e/ou ainda, o n?vel plasm?tico atingido pode ser inadequado para que o composto consiga exercer o seu efeito terap?utico, e isto precisa ser melhor investigado. Os protocolos apresentados neste trabalho poder?o servir como suporte para estudos de farmacocin?ticoa de compostos que se apresentam promissores, colaborando para o avan?o nas etapas necess?rias para o desenvolvimento de poss?veis f?rmacos.