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Expressão de microRNAs em pacientes com diagnóstico histopatológico prévio de Displasia Neuronal Intestinal do Tipo BAngelini, Marcos Curcio January 2018 (has links)
Orientador: Pedro Luiz Toledo de Arruda Lourenção / Resumo: Introdução: A Displasia Neuronal Intestinal tipo B (DNI-B) é uma entidade patológica caracterizada por anormalidades nos plexos nervosos submucosos do sistema nervoso entérico, comumente associada à constipação intestinal na infância. Os microRNAs (miRNAs) são pequenos RNAs não-codificantes com um papel importante na regulação da expressão gênica, e têm sido considerados potenciais biomarcadores diagnósticos em diversas doenças. Objetivo: Determinar o perfil de expressão global de miRNAs em amostras de plasma e tecido de biópsia retal de pacientes com DNI-B. Métodos: Cinqüenta pacientes, com idade entre 0 e 15 anos, diagnosticados com DNI-B entre 1998 a 2010, foram incluídos no estudo. Amostras de sangue periférico foram coletadas de todos os 50 pacientes e 10 crianças saudáveis, sem sintomas intestinais (grupo controle). Dos 50 pacientes dos quais o sangue foi coletado, 29 também apresentavam fragmentos embolcados de tecido retal suficiente para extração de RNA. Estes materiais foram processados por microdissecção e agrupados de acordo com as diferentes camadas da parede intestinal. A extração de miRNA foi realizada utilizando o kit miRNeasy Serum / Plasma e o kit de recuperação de todos os Nucleic Acid Isolation para tecidos de biópsia. A análise global da expressão de miRNA foi realizada utilizando a plataforma TaqMan Array Human MicroRNA Card A. Análise de correlação entre a expressão de miRNA em amostras de plasma e biópsia, bem como entre os tecidos derivados das camada... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction: Intestinal Neuronal Dysplasia type B (IND-B) is a pathological entity characterized by abnormalities in the submucous nerve plexuses of the enteric nervous system, commonly associated with intestinal constipation in childhood. microRNAs (miRNAs) are small non-coding RNAs with a potent role in gene expression regulation, and have been demonstrated as potential diagnostic biomarkers in several diseases. Objective: To determine the global expression profile of miRNAs in plasma and rectal biopsy tissue samples from patients with IND-B. Methods: Fifty patients, aged 0 to 15 years, who had been diagnosed with IND-B, from 1998 to 2010, were included in the study. Peripheral blood samples were collected from all 50 patients and an additional 10 healthy children, without intestinal symptoms (control group). Of the 50 patients from whom blood was collected, 29 also had sufficient rectal tissue for RNA extraction. Rectal biopsies were processed by microdissection and pooled according the different layers of the intestinal wall. miRNA extraction was performed using the miRNeasy Serum/Plasma Kit and the Recover All Total Nucleic Acid Isolation kit for biopsy tissues. Global miRNA expression analysis was performed using the TaqMan Array Human MicroRNA Card A platform. Correlation analysis between miRNA expression in plasma and biopsy samples as well as among tissues derived from the distinct intestinal layers was performed. Results: miRNA let-7a was over-expressed (~7 fold hi... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Displasia neuronal intestinal: análise de critérios morfológicos e comparação de métodos diagnósticos / Intestinal neuronal dysplasia: analysis of morphological criteria and comparison of diagnostic methodsTerra, Simone Antunes [UNESP] 01 March 2016 (has links)
Submitted by Simone Antunes Terra (simoneaterra@gmail.com) on 2016-03-03T14:12:56Z
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Previous issue date: 2016-03-01 / Introdução: A Displasia Neuronal Intestinal, tipo B (DNI-B) é uma doença neuromuscular gastrointestinal caracterizada por alterações complexas do sistema nervoso entérico. Seu diagnóstico depende da análise histopatológica de biópsias do reto, com mudanças dos critérios diagnósticos ao longo dos anos, o que dificulta a prática diagnóstica. O Consenso de Frankfurt, 1990, estabeleceu critérios histológicos qualitativos para diagnóstico de DNI-B, como hiperganglionose e hiperplasia do plexo nervoso submucoso. Meier-Ruge et al. 2004, 2006, definiu o diagnóstico de maneira quantitativa: mais de 20% de gânglios nervosos gigantes na submucosa, com mais de 8 neurônios cada, em 25 gânglios examinados, e em crianças maiores de 1 ano. Objetivos: Analisar as características morfológicas do sistema nervoso entérico em pacientes com DNI-B segundo os critérios do Consenso de Frankfurt de 1990, e testar a aplicabilidade dos critérios numéricos propostos por Meier-Ruge et al 2004. Pacientes e Métodos: Foram analisadas retrospectivamente peças cirúrgicas de cólon distal de 29 pacientes, com idade de 0 a 16 anos, com diagnóstico de DNI-B, em cortes histológicos processados para histologia convencional pela hematoxilina e eosina (H&E) e para imuno-histoquímica da calretinina. Resultados: Apenas 1 paciente contemplou estes critérios numéricos. Houve imunopositividade para calretinina nos neurônios, porém a contagem de neurônios foi menor em relação ao H&E (p=0,002). Não houve diferenças significativas entre os grupos etários de crianças menores e maiores de 1 ano em relação à hiperganglionose (p=0,789), número de neurônios (p=0,359), gânglios com sinais de imaturidade (p=0,664) e neurônios hipogênicos (p>0,999). Conclusões: Os critérios numéricos recomendados em cortes de 15µm, corados por painel histoquímico específico, apresentam aplicabilidade limitada quando transpostos à análise histopatológica convencional. Houve concordância pobre nos critérios analisados entre a H&E e a calretinina. Em relação à idade, nosso estudo mostrou que crianças maiores de 1 ano podem apresentar os mesmos aspectos histológicos de imaturidade neuronal que crianças menores de 1 ano, questionando a necessidade de um critério de idade para o diagnóstico da DNI-B. / Introduction: Intestinal Neuronal Dysplasia type B (INDB) is a gastrointestinal neuromuscular disease characterized by complex changes in the enteric nervous system. The diagnosis depends on the histopathological analysis of rectal biopsies and the diagnostic criteria have changed over the years, making it difficult to diagnostic practice. The Frankfurt Consensus, 1990, established qualitative criteria for the histological diagnosis of INDB, such as gigant ganglia and hyperplasia of submucosal nerves. Meier-Ruge et al. 2004, 2006, defined quantitative criteria: over 20% of giant ganglia, with more than 8 nerve cells each, on 25 ganglia examined, and in children older than one year. Objectives: Analyze the morphological characteristics of the enteric nervous system in patients with INDB according to the Frankfurt Consensus Criteria 1990 and test the applicability of the numerical criteria proposed by Meier-Ruge et al. 2004. Patients and Methods: Surgical specimens of distal colon from 29 patients, aged 0-16 years old, diagnosed with INDB, in histological sections processed for conventional histology by hematoxylin and eosin (H&E) and for immunohistochemistry of calretinin, were retrospectively analyzed. Results: Only one patient met these numerical criteria. There was immunostaining for calretinin in neurons but the neurons count was lower in relation to H&E (p=0.002). There were no significant differences between the age groups of children younger and older than 1 year old in relation to hyperganglionosis (p=0.789), number of neurons (p=0.359), ganglion with immaturity (p=0.664) and hypogenic neurons (p>0.999). Conclusions: The numerical criteria recommended for 15μm cut, stained with specific histochemical panel, have limited applicability when transferred to conventional histopathology. There was poor agreement on the criteria analyzed between H&E and calretinin. Regarding the age, our study showed that children older one year old may present the same histological features of neuronal immaturity as children younger one year old, challenging the need for an age criterion for the diagnosis of INDB.
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Displasia neuronal intestinal análise de critérios morfológicos e comparação de métodos diagnósticos /Terra, Simone Antunes January 2016 (has links)
Orientador: Maria Aparecida Marchesan Rodrigues / Resumo: Introdução: A Displasia Neuronal Intestinal, tipo B (DNI-B) é uma doença neuromuscular gastrointestinal caracterizada por alterações complexas do sistema nervoso entérico. Seu diagnóstico depende da análise histopatológica de biópsias do reto, com mudanças dos critérios diagnósticos ao longo dos anos, o que dificulta a prática diagnóstica. O Consenso de Frankfurt, 1990, estabeleceu critérios histológicos qualitativos para diagnóstico de DNI-B, como hiperganglionose e hiperplasia do plexo nervoso submucoso. Meier-Ruge et al. 2004, 2006, definiu o diagnóstico de maneira quantitativa: mais de 20% de gânglios nervosos gigantes na submucosa, com mais de 8 neurônios cada, em 25 gânglios examinados, e em crianças maiores de 1 ano. Objetivos: Analisar as características morfológicas do sistema nervoso entérico em pacientes com DNI-B segundo os critérios do Consenso de Frankfurt de 1990, e testar a aplicabilidade dos critérios numéricos propostos por Meier-Ruge et al 2004. Pacientes e Métodos: Foram analisadas retrospectivamente peças cirúrgicas de cólon distal de 29 pacientes, com idade de 0 a 16 anos, com diagnóstico de DNI-B, em cortes histológicos processados para histologia convencional pela hematoxilina e eosina (H&E) e para imuno-histoquímica da calretinina. Resultados: Apenas 1 paciente contemplou estes critérios numéricos. Houve imunopositividade para calretinina nos neurônios, porém a contagem de neurônios foi menor em relação ao H&E (p=0,002). Não houve diferenças significa... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction: Intestinal Neuronal Dysplasia type B (INDB) is a gastrointestinal neuromuscular disease characterized by complex changes in the enteric nervous system. The diagnosis depends on the histopathological analysis of rectal biopsies and the diagnostic criteria have changed over the years, making it difficult to diagnostic practice. The Frankfurt Consensus, 1990, established qualitative criteria for the histological diagnosis of INDB, such as gigant ganglia and hyperplasia of submucosal nerves. Meier-Ruge et al. 2004, 2006, defined quantitative criteria: over 20% of giant ganglia, with more than 8 nerve cells each, on 25 ganglia examined, and in children older than one year. Objectives: Analyze the morphological characteristics of the enteric nervous system in patients with INDB according to the Frankfurt Consensus Criteria 1990 and test the applicability of the numerical criteria proposed by Meier-Ruge et al. 2004. Patients and Methods: Surgical specimens of distal colon from 29 patients, aged 0-16 years old, diagnosed with INDB, in histological sections processed for conventional histology by hematoxylin and eosin (H&E) and for immunohistochemistry of calretinin, were retrospectively analyzed. Results: Only one patient met these numerical criteria. There was immunostaining for calretinin in neurons but the neurons count was lower in relation to H&E (p=0.002). There were no significant differences between the age groups of children younger and older than 1 year old in... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre
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