Graduation date: 1995

L'objectif de ce travail est d'introduire, par ingénierie génétique, un site allostérique dans une enzyme pour moduler son activité catalytique par la liaison d'un ligand choisi. Ces enzymes pourraient servir de senseurs moléculaires pour la détection, voire le dosage du ligand. Nous avons décidé de créer ces sites allostériques dans la beta-lactamase TEM-1 d'E. coli, une enzyme dégradant les antibiotiques de type pénicilline, en réalisant l'ingénierie de trois boucles de l'enzyme. Celles-ci sont proches l'une de l'autre dans l'espace et pourraient servir d'épitope discontinu pour la reconnaissance par un anticorps ou de paratope, à savoir le site de liaison d'un anticorps, pour la reconnaissance d'autres protéines ou de petites molécules. Notre hypothèse de travail est que ces beta-lactamases chimériques partageront certaines similitudes avec les anticorps de camélidés dont le site de reconnaissance n'est constitué que de trois boucles. Comme nous ne savions pas a priori quelles sont les séquences à introduire pour lier la molécule cible, nous avons introduit des séquences dégénérées pour créer une grande banque de mutants et sélectionner dans cette banque les clones ayant une affinité pour le ligand d'intérêt. La partie la plus difficile de ce projet fut la création de la collection d'enzymes mutantes contenant trois boucles dégénérées. La dégénérescence de la boucle 1, située à proximité du site actif, a été réalisée en remplaçant aléatoirement trois résidus. Dans la boucle 2, un peptide aléatoire de cinq, six ou sept résidus a été inséré entre deux cystéines et dans la boucle 3, une insertion de six résidus aléatoires a été réalisée. En pratique, l'ingénierie des boucles 1 et 2 a été effectuée dans la même construction pour créer trois banques (trois tailles d'insert différentes dans la boucle 2). D'autre part, nous disposions déjà de la banque contenant l'insertion dans la boucle 3. Ces banques de première génération ont ensuite subit une sélection in vivo pour ne garder que les clones possédant une certaine activité catalytique, par culture des bactéries infectées sur un milieu contenant de l'ampicilline. Cette étape nous a permis d'avoir un contrôle sur la qualité des banques créées car tous les mutants d'insertions retenus ont obligatoirement une structure tertiaire. Nous avons également montré que la présence de deux résidus cystéines est nécessaire de part et d'autre de l'insert dans la boucle 2 pour maintenir une certaine activité enzymatique. D'autre part, la boucle 1 ne semble pas tolérer d'insertion peptidique et ne permet que la mutagenèse par remplacement. Les banques de première génération ont ensuite été combinées pour créer une banque de seconde génération contenant les trois boucles dégénérées. Cette construction hiérarchisée a permis, avec un bon rendement, la création d'une banque combinatoire de grande taille et de bonne qualité. Grâce à la technique d'expression en surface de phage, cette banque a ensuite été soumise à une sélection in vitro afin d'isoler les clones ayant acquis de l'affinité pour des molécules cibles. Ces ligands sont un ion métallique, le Ni(II), et deux petites molécules organiques, la kanamycine et la sulfanilamide, pour lesquelles une protéine liante serait intéressante comme outil de détection. En ce qui concerne les clones sélectionnés avec le nickel, tous les clones testés contiennent des résidus histidine et montrent une modulation de l'activité en présence du métal, que ce soit une activation ou une inhibition de celle-ci. La meilleure activation a été obtenue pour le clone Ni-5-Amp20-#11, qui voit son activité doublée lorsqu'il est complexé au nickel, tandis que la meilleure inhibition a été obtenue pour le clone Ni-5-#2 avec une diminution de 77 % de l'activité. Quant à la meilleure affinité, elle a été obtenue pour le clone Ni-5-#12 avec une constante de dissociation de 7.10-5 M. Les autres valeurs de Kd varient entre 10-4 M et 10-3 M. Parmi les clones issus de la sélection avec la kanamycine, nous avons trouvé un mutant dont l'activité catalytique est augmentée de 44 % en présence du ligand. Sa constante de dissociation est de 6,6.10-4 M. Quant à la sélection avec la sulfanilamide, elle ne nous a pas permis à ce jour d'isoler des clones ayant acquis une affinité détectable pour cette molécule. Ces résultats nous laissent espérer que la banque construite contient potentiellement des clones ayant la capacité de lier une variété de cibles différentes. Si c'est le cas, ces enzymes chimériques possèdent des avantages sur les anticorps conjugués habituellement utilisés en immuno-détection, car la fonction de reconnaissance et la fonction enzymatique sont portées par la même molécule. Ces protéines pourraient donc être produites facilement et à plus faible coût. De plus, la modulation d'activité permet en principe de détecter la présence du ligand cible en phase homogène.

The SUPDUP protocol provides for login to a remote system over a network with terminal-independent output, so that only the local system need know how to handle the user's terminal. It offers facilities for graphics and for local assistance to remote text editors. This memo contains a complete description of the SUPDUP protocol in fullest possible detail.

Thesis (Ph. D.)--Oregon State University, 1982. / Typescript (photocopy). Includes bibliographical references (leaves 174-179). Also available on the World Wide Web.

L'objectif de ce travail est d'introduire, par ingénierie génétique, un site allostérique dans une enzyme pour moduler son activité catalytique par la liaison d'un ligand choisi. Ces enzymes pourraient servir de senseurs moléculaires pour la détection, voire le dosage du ligand. Nous avons décidé de créer ces sites allostériques dans la beta-lactamase TEM-1 d'E. coli, une enzyme dégradant les antibiotiques de type pénicilline, en réalisant l'ingénierie de trois boucles de l'enzyme. Celles-ci sont proches l'une de l'autre dans l'espace et pourraient servir d'épitope discontinu pour la reconnaissance par un anticorps ou de paratope, à savoir le site de liaison d'un anticorps, pour la reconnaissance d'autres protéines ou de petites molécules. Notre hypothèse de travail est que ces beta-lactamases chimériques partageront certaines similitudes avec les anticorps de camélidés dont le site de reconnaissance n'est constitué que de trois boucles. Comme nous ne savions pas a priori quelles sont les séquences à introduire pour lier la molécule cible, nous avons introduit des séquences dégénérées pour créer une grande banque de mutants et sélectionner dans cette banque les clones ayant une affinité pour le ligand d'intérêt. La partie la plus difficile de ce projet fut la création de la collection d'enzymes mutantes contenant trois boucles dégénérées. La dégénérescence de la boucle 1, située à proximité du site actif, a été réalisée en remplaçant aléatoirement trois résidus. Dans la boucle 2, un peptide aléatoire de cinq, six ou sept résidus a été inséré entre deux cystéines et dans la boucle 3, une insertion de six résidus aléatoires a été réalisée. En pratique, l'ingénierie des boucles 1 et 2 a été effectuée dans la même construction pour créer trois banques (trois tailles d'insert différentes dans la boucle 2). D'autre part, nous disposions déjà de la banque contenant l'insertion dans la boucle 3. Ces banques de première génération ont ensuite subit une sélection in vivo pour ne garder que les clones possédant une certaine activité catalytique, par culture des bactéries infectées sur un milieu contenant de l'ampicilline. Cette étape nous a permis d'avoir un contrôle sur la qualité des banques créées car tous les mutants d'insertions retenus ont obligatoirement une structure tertiaire. Nous avons également montré que la présence de deux résidus cystéines est nécessaire de part et d'autre de l'insert dans la boucle 2 pour maintenir une certaine activité enzymatique. D'autre part, la boucle 1 ne semble pas tolérer d'insertion peptidique et ne permet que la mutagenèse par remplacement. Les banques de première génération ont ensuite été combinées pour créer une banque de seconde génération contenant les trois boucles dégénérées. Cette construction hiérarchisée a permis, avec un bon rendement, la création d'une banque combinatoire de grande taille et de bonne qualité. Grâce à la technique d'expression en surface de phage, cette banque a ensuite été soumise à une sélection in vitro afin d'isoler les clones ayant acquis de l'affinité pour des molécules cibles. Ces ligands sont un ion métallique, le Ni(II), et deux petites molécules organiques, la kanamycine et la sulfanilamide, pour lesquelles une protéine liante serait intéressante comme outil de détection. En ce qui concerne les clones sélectionnés avec le nickel, tous les clones testés contiennent des résidus histidine et montrent une modulation de l'activité en présence du métal, que ce soit une activation ou une inhibition de celle-ci. La meilleure activation a été obtenue pour le clone Ni-5-Amp20-#11, qui voit son activité doublée lorsqu'il est complexé au nickel, tandis que la meilleure inhibition a été obtenue pour le clone Ni-5-#2 avec une diminution de 77 % de l'activité. Quant à la meilleure affinité, elle a été obtenue pour le clone Ni-5-#12 avec une constante de dissociation de 7.10-5 M. Les autres valeurs de Kd varient entre 10-4 M et 10-3 M. Parmi les clones issus de la sélection avec la kanamycine, nous avons trouvé un mutant dont l'activité catalytique est augmentée de 44 % en présence du ligand. Sa constante de dissociation est de 6,6.10-4 M. Quant à la sélection avec la sulfanilamide, elle ne nous a pas permis à ce jour d'isoler des clones ayant acquis une affinité détectable pour cette molécule. Ces résultats nous laissent espérer que la banque construite contient potentiellement des clones ayant la capacité de lier une variété de cibles différentes. Si c'est le cas, ces enzymes chimériques possèdent des avantages sur les anticorps conjugués habituellement utilisés en immuno-détection, car la fonction de reconnaissance et la fonction enzymatique sont portées par la même molécule. Ces protéines pourraient donc être produites facilement et à plus faible coût. De plus, la modulation d'activité permet en principe de détecter la présence du ligand cible en phase homogène.

Alternating-current thin-film electroluminescent (ACTFEL) devices are used in the formation of pixels in flat panel displays. ACTFEL flat panel displays have many advantages over other flat panel technologies. Specifically, ACTFEL panels are emissive displays, they have high brightness, wide viewing angles, and rugged construction. Although much is already known about the operation of ACTFEL devices, several topics related to the device physics and modeling of these devices require further research. In this work, existing ACTFEL device models are refined by expanding the understanding of ACTFEL device physics and operation. Modeling is separated into three levels of increasing complexity as follows; (1) equivalent circuit modeling, (2) device physics or electrostatic modeling, or (3) Monte Carlo modeling. Each level of model is addressed in this thesis. Existing equivalent circuit models are empirically refined to account for device response to variations in the shape of the driving waveform pulse. The device physics model is expanded by presenting evidence for the formation of space charge in the phosphor layer and the equations prescribing device response are modified accordingly. Also, a new technique for measuring the distribution of interface states in ACTFEL devices is presented. This gives new insight into device operation, as the interface state distribution is one of the most difficult parameters to estimate/measure in the device physics model. Finally, an experiment is presented which attempts to measure the maximum energy of hot electrons during conduction in the phosphor. This research leads to a recommendation of the complexity of the conduction band model needed for accurate Monte Carlo simulation of ACTFEL devices. / Graduation date: 1993

Detta ingenjörsarbete är utfört hos Syntronic Research and Development AB i Gävle och går ut på att undersöka möjligheten att separera en display-modul från sin styrande processor-krets samt att skapa ett generellt gränssnitt för att möjliggöra ett enkelt utbyte av display-moduler. Detta har genomförts genom att konstruera en prototyp, baserad på en så kallad serializer / deserializer-lösning. En förstudie har genomförts där lämpliga komponener valts ut för uppgiften och olika lösningar vägts mot varandra. En prototyp har sedan konstruerats, mönsterkort har tillverkats men tyvärr inte monterats (på grund av ett logistiskt missöde). Resultatet är, förutom ovan nämnda begränsning, en prototyp som väl uppfyller de specifikationer som anges i uppdragsbeskrivningen. Flera förslag till vidareutveckling presenteras som kan utöka funktionaliteten. / This engineering work has been conducted at Syntronic Research and Development AB in Gävle and aims to explore the possibilities of separating a display module from its controlling processor circuit and to create a general interface to allow easy replacement of display modules. This has been implemented by designing a prototype, based on a so-called serializer / deserializer solution. A pilot study has been carried out where appropriate components has been selected for the task, and various solutions have been weighted against each other. A prototype has been designed, printed circuit boards have been produced but unfortunately not mounted (because of a logistical mishap). The result is, with the above limitations, a prototype that fully satisfies the specifications outlined in the task description. Several suggestions for further development are presented, which could extend the functionality.

Piscine nodaviruses are members of genus Betanodavirus, which infects a large number of species of fish and causes massive mortality in larvae and juveniles. The disease causes great economic losses in aquaculture and sea-ranching. Virus-like particles (VLPs) of dragon grouper nervous necrosis virus (DGNNV) were employed to screen the consensus sequences of paratopes by the phage display peptide technology. Using two biopanning methods to screen phages, their binding efficiency was examined by ELISA. The effects of treatment by different blocking buffers on the ELISA assays and the effects of the ELISA plates exposed to UV light were tested. The display phages with high binding efficiency were sequenced after the inserted fragment by PCR amplification. With NCBI BLAST, they were closely related to the claudin family and the consensus sequences were on the region of EL1 or EL2. Few non-claudin sequences demand further comparison with other kinds of receptors to ascertain the characters of these sequences.

Three subjects on the organic light-emitting diodes (OLEDs) have been studied. First, We inserted a NPB¡GAlq3 mixed layer between these two NPB and Alq3 layers to decrease the holes mobility and improve the combined efficiency between the holes and electrons. After inserting the NPB¡GAlq3 layer, the current density of the device( ITO/ MTDATA¡]5 nm¡^/ NPB¡]60-Y¡^nm¡^/NPB¡GAlq3 (Z wt%)(Y nm) / Alq3¡]60 nm¡^/ LiF(0.7 nm)/ Al(180 nm)) is decreased obviously. This result suggests that NPB¡GAlq3 layer could delay the holes mobility. The optimum concentration in our device is 30 wt% while the total thickness is 30nm. Then we combined NPB and Rubrene to obtaine white emission and fabricate a white organic light emitting diode (WOLED). The structure of WOLEDs is ITO/ MTDATA/ NPB/ NPB:Rubrene/ TPBI/ LiF/ Al. By change the concentration of NPB:Rubrene layer, the WOLED can emit white light. We can get the maximum luminance efficiency of 9.0 cd/A at 20.8mA/cm2 with 1 wt%. And the device emit greenish-white. In order to get higher efficiency and pure light WOLED, we use the grading structure to prepare OLED. The structures are device A: ITO/ MTDATA(5nm)/ NPB(10nm)/ NPB:Rubrene1%(25nm)/ NPB:Rubrene 0.5%(25nm)/ TPBI(60nm)/ LiF(0.7nm)/Al (180nm); device B: ITO/ MTDATA(5nm)/NPB(10nm)/NPB:Rubrene2%(17nm)/ NPB:Rubrene1% (17nm)/NPB:Rubrene0.5%(17nm)/TPBI(60nm)/ LiF(0.7nm)/ Al (180nm) We get the maximum luminance of 17270 cd/m2 and 24280 cd/m2 , respectively and the optimum efficiency of 16.1 cd/A and 18.5 cd/A, respectively. The CIE coordinate of the device is x=0.35, y=0.36, which is identical to white light.

Flat electronic displays are ubiquitous in our environment from small handheld devices to large HDTVs. This report documents the design and development of a flexible electronic display system for low cost embedded applications. The main use of such a device would be in functions where flat displays are too rigid and too brittle to operate, like the emerging wearable electronics sector. A 10cm x 15cm, 224 pixel LED mesh display system is presented as a solution. A complete software stack was created in conjunction with the hardware. On the software side, a Visual Basic application allows users to easily generate image content for the display, five different global motion algorithms permit real time image manipulation, and an AVR assembly procedure handles screen refreshing. Altogether the system weighs 176 grams, can function under normal operating conditions for eight hours before recharging is required, and costs under $85 without volume discounts. / text