Techn. Universiẗat, Diss., 2003--Berlin.

University, Diss., 2003--Osnabrück.

Universiẗat, Diss., 2004--Bonn.

Universiẗat, Diss., 2003--Stuttgart.

Universiẗat, Diss., 2004--Bonn.

Thesis (Ph. D.)--University of Washington, 2007. / Vita. Includes bibliographical references (leaves 112-125).

Proefschrift Universiteit van Amsterdam. / Auteursnaam op omslag: Thessa Vinkenvleugel. Met een samenvatting in het Nederlands. - Lit. opg.

Th.--Pharm.--Paris, 1906-1907. / Paris, 1906-1907, n ° 1.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-01-29Bitstream added on 2014-06-13T20:44:10Z : No. of bitstreams: 1 pigatto_cp_dr_jabo.pdf: 841661 bytes, checksum: 288fcbc74e176eac0befc1827d1bc15e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Escherichia coli produtoras de toxina Shiga (STEC) são reconhecidas como agentes causadores de infecções em humanos em todo o mundo. O principal reservatório é o bovino. Neste trabalho, cepas de STEC previamente isoladas de fezes bovinas foram caracterizadas usando PCR multiplex para determinar os genes de virulência (stx1, stx2, ehxA, eaeA e saa), soroaglutinação passiva reversa em látex (RPLA-VTEC screen) para avaliar a expressão da toxina Shiga, PCR-RFLP e sequenciamento para obter os subtipos e a variabilidade dos genes stx2, respectivamente. Foram determinados também os sorotipos, o perfil de sensibilidade e a viabilidade das cepas de STEC em queijo minas frescal. A freqüência de STEC nas amostras de fezes bovinas foi de 37%. Foram encontrados trinta e quatro sorotipos de STEC sendo os mais freqüentes o ONT:H7 (10%), O22:H8, O22:H16 e ONT:H21 (7% cada). Onze sorotipos encontrados não tinham sido associados com STEC até o momento. A maioria das STEC (96%) foi susceptível a todos os antimicrobianos testados. A produção de toxina Shiga determinada pelo ensaio RPLA foi de 89%. Os marcadores de virulência foram encontrados em 11 diferentes combinações, a mais freqüente foi stx2 (27%), stx1 stx2 e stx1 stx2 ehxA saa (16% cada). Foram detectados 8 subtipos de stx2: stx2OX3a/O111; stx2; stx2c; stx2(vha); stx2(vhb); stx2OX3b; stx2vnb/vhc e stx2O48. Os genes que apresentaram maior freqüência foram: stx2 e stx2c. As seqüências parciais obtidas sugerem a presença de elevada variabilidade nos genes do tipo stx2 nas STEC analisadas. A viabilidade de STEC não-O157 em queijo minas revelou que diferentes cepas de STEC podem ser detectadas nos queijos após 10 dias de armazenamento sob refrigeração. Os dados encontrados neste trabalho sugerem isolados com alto potencial de patogenicidade oferecendo risco de desencadear graves infecções à população. / Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) is recognize worldwide as an organism capable to cause human diseases. Cattle are the main source of STEC. In this research, STEC strains previously isolated were analyzed using multiplex-PCR for virulence genes, the RPLA assay to detect the Shiga toxin production and serotyping. PCR-RFLP and nucleotide sequence were analyzed to detect stx2 genes subtypes and their variability. Moreover tests for antimicrobial susceptibility and the vialbility of STEC in Minas Frescal cheese were done. The frequency of cattle shedding STEC was 37%. Thirty-four serotypes of STEC were found, the most frequent being ONT:H7 (10%), O22:H8, O22:H16 and ONT:H21 (7% each). Eleven serotypes had not been associate with STEC until the moment. Most of the strains (96%) were susceptible to all antimicrobial agents tested. Production of Shiga toxin by the RPLA assay was detected in most (89%) of the STEC strains. The frequency of virulence markers were found in 11 diferent combinations: stx2 (27%), stx1 stx2 e stx1 stx2 ehxA saa (16% each). Eigth stx2 subtypes were detect (stx2OX3a/O111; stx2; stx2c; stx2(vha); stx2(vhb); stx2OX3b; stx2vnb/vhc; stx2O48) and the most frequent were: stx2; stx2c. The partial sequences of stx2 genes suggested a high variability of stx2 types in the STEC analyzed. The STEC viability in cheese could be detected after 10 days of storage under refrigeration. The results found in this work suggest strains with high potential of pathogenicity offering risk to lead serious infections to the population.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-08-31Bitstream added on 2014-06-13T19:03:36Z : No. of bitstreams: 1 goncalves_vp_dr_jabo.pdf: 2137160 bytes, checksum: e87c3ecace3827353ad491c1f873e090 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Escherichia coli é a bactéria mais comum entre os patógenos entéricos causadores de doenças intestinais. As diferentes classes de E. coli causadoras de diarréia são reconhecidas através dos fatores de virulência que elas apresentam. As E. coli produtoras de Shiga toxina (STEC), especialmente o sorotipo O157:H7 tem sido associado a diversas doenças no ser humano. Além do sorotipo O157:H7, vários outros sorogrupos não-O157 também estão associados a infecções em humanos. Estas bactérias podem ser recuperadas de muitos animais, mas o gado bovino é reconhecido como o seu mais importante reservatório natural. Para análise da sobrevivência de cepas STEC não-O157 em sistemas de compostagem, inicialmente foram coletadas fezes de três vacas saudáveis que apresentaram E. coli portando o gene stx2, característico de cepas STEC. Foram montados dois sistemas de compostagem: o primeiro foi realizado em vala de 60cmd, no qual E. coli apresentando o gene stx2 foi eliminada após 8, 25 e 30 dias nas temperaturas de 40, 42 e 38°C, respectivamente; o segundo sistema foi realizado sobre o solo em um monte em forma de pirâmide com 1md, no qual as bactérias foram eliminadas após 4, 4 e 7 dias nas temperaturas de 65, 56 e 52°C, respectivamente. A temperatura alcançada durante a compostagem e os microrganismos presentes no esterco parecem ser os responsáveis pela eliminação do patógeno nos sistemas de compostagem, o qual pode ser útil para a redução da carga patogênica presente no esterco destinado para aplicações no solo. / Escherichia coli is the most common bacteria among the enteric pathogens able to cause intestinal disease. Several classes of diarrhea-causing E. coli are recognized on the basis of their virulence factors production. Shiga-like toxigenic E. coli (STEC), especially serotype O157:H7, have been associated with many diseases in human beings. Besides sorotype O157:H7, many others non-O157 sorogroups have also been associated with human infections. These bacterias can be isolated from a range of animals, but cattle is generally recognized as the major natural source. To analyze the survival of non-O157 STEC strains in composting system, first was collected faeces from three healthy cows that contain E. coli STEC cells carrying the stx2 gene. Two composting systems were used: the first one was a cave with 60cmd were the E. coli STEC cells with stx2 gene were eliminated after 8, 25 and 30 days at 40, 42 and 38°C, respectively; the second one was a heap pyramid system with 1md, where the cells were eliminated after 4, 4, 7 days at 65, 56 and 52°C, respectively. The reached temperature in the composting systems and the indigenous microorganisms present in the manure seems to contribute to pathogen elimination, what may be a useful means of reducing the pathogen load of manure destined for soil application.