O objetivo deste trabalho foi desenvolver um protocolo de extração hormonal à partir de fezes de onça-pintada (Panthera onca) e validar uma metodologia de análise destes extratos por eletroforese capilar, verificando a eficiência analítica desta técnica no estudo dos metabólitos de esteróides sexuais em fezes, com o intuito de utilização futura desta metodologia na rotina dos laboratórios de endocrinologia. Foram testados sete tratamentos para as amostras de fezes liofilizadas: quatro protocolos de extração em diferentes solventes, um de hidrólise ácida e dois protocolos de extração em fase sólida (SPE). O protocolo de extração em acetonitrila foi satisfatório como pré-tratamento da amostra e aliado à SPE C-18 apresentou bons resultados no que diz respeito à sensibilidade, precisão, recuperação e tempo de análise. Com base nos resultados obtidos, a eletroforese capilar pode ser considerada uma ótima alternativa para a prospecção de metabólitos de hormônios, podendo ser utilizada em análises de rotina nos laboratórios de endocrinologia animal, sobretudo naqueles que se dedicam às metodologias não-invasivas de avaliação da função reprodutiva em animais selvagens. / The objective of this work was to develop a protocol of hormonal extraction from jaguar feces (Panthera onca) and validate a methodology of analysis of these extracts with capillary electrophoresis, verifying the analytical efficiency of this technique in the study of the steroids metabolites in feces, with the objective of future use of this methodology in the routine of the endocrinology laboratories. Seven treatments were tested for the samples: four extraction protocols in different solvents, one of acid hydrolysis and two extraction protocols in solid phase (SPE). The extraction protocol in acetonitrila was satisfactory as pre-treatment of the samples and ally to SPE C-18, it presented good results with respect to the sensibility, precision, recovery and time of analysis. Based on the obtained results, the capillary electrophoresis can be considered a great alternative for the research of metabolites of hormones, it could also be used in routine analyses in the endocrinology laboratories, mainly in those that are devoted to the non-invasive evaluation methodologies of the reproductive function in wild animals.

Cabras leiteiras das raças Saanen e Toggenburg (n=10) mantidas num rebanho particular no Estado de São Paulo tiveram seus níveis séricos de progesterona e estradiol comparados às concentrações fecais, durante o período correspondente a três ciclos estrais. O perfil hormonal foi confrontado com as manifestações comportamentais de estro visando uma contribuição ao conhecimento do ciclo das cabras destas raças em condições brasileiras, que leve a um manejo reprodutivo mais eficiente. As correlações entre níveis séricos e fecais foram calculadas, sugerindo a validade do modelo de dosagem hormonal nas fezes em cervídeos. Foi verificada correlação extremamente significante entre as concentrações séricas de progesterona e as de progestinas fecais, com r=0,83 e p<0,0001. Entre as concentrações séricas de estradiol e as de seus metabólitos nas fezes não foi verificada correlação significante, com r=-0,16 e p<0,3916. A partir da observação dos resultados e sua análise estatística, pode-se concluir que, dentro das condições deste trabalho, as concentrações de progestinas fecais apresentam variação correspondente à da progesterona sérica ao longo do ciclo estral das cabras; por outro lado, diferentemente das observações de outros autores, o mesmo não ocorre com os metabólitos fecais do estradiol em relação ao estradiol sérico. / Saanen e Toggenburg dairy goats (n=10) kept in a private flock in São Paulo State had their serum levels of progesterone and estradiol compared to faecal concentrations of the respective metabolites, through an interval corresponding to 3 estrous cycles. Hormonal profile was checked with behavioural manifestations of estrous searching for a better knowledge of the cycle of these breeds in brazilian environment, leading to a more efficient reproductive management. Correlations between serum and faecal levels were calculated, suggesting that the model of faecal hormone measurements could be valuable in cervidae. It was found an extremely significant correlation between progesterone serum concentration and progestin faecal concentration, with r=0,83 and p<0,0001. Between estradiol serum concentrations and its faecal metabolites? concentrations no significant correlation was found, with r=-0,16 and p<0,3916. Based on results observation and statistical analysis, we can assume that, in the circumstances of this trial, progestin faecal concentrations show a variation profile similar to that one of serum progesterone, through estrous cycle of goats; however, this fact could not be observed for estradiol metabolites, compared to serum estradiol concentrations.

Cabras leiteiras das raças Saanen e Toggenburg (n=10) mantidas num rebanho particular no Estado de São Paulo tiveram seus níveis séricos de progesterona e estradiol comparados às concentrações fecais, durante o período correspondente a três ciclos estrais. O perfil hormonal foi confrontado com as manifestações comportamentais de estro visando uma contribuição ao conhecimento do ciclo das cabras destas raças em condições brasileiras, que leve a um manejo reprodutivo mais eficiente. As correlações entre níveis séricos e fecais foram calculadas, sugerindo a validade do modelo de dosagem hormonal nas fezes em cervídeos. Foi verificada correlação extremamente significante entre as concentrações séricas de progesterona e as de progestinas fecais, com r=0,83 e p<0,0001. Entre as concentrações séricas de estradiol e as de seus metabólitos nas fezes não foi verificada correlação significante, com r=-0,16 e p<0,3916. A partir da observação dos resultados e sua análise estatística, pode-se concluir que, dentro das condições deste trabalho, as concentrações de progestinas fecais apresentam variação correspondente à da progesterona sérica ao longo do ciclo estral das cabras; por outro lado, diferentemente das observações de outros autores, o mesmo não ocorre com os metabólitos fecais do estradiol em relação ao estradiol sérico. / Saanen e Toggenburg dairy goats (n=10) kept in a private flock in São Paulo State had their serum levels of progesterone and estradiol compared to faecal concentrations of the respective metabolites, through an interval corresponding to 3 estrous cycles. Hormonal profile was checked with behavioural manifestations of estrous searching for a better knowledge of the cycle of these breeds in brazilian environment, leading to a more efficient reproductive management. Correlations between serum and faecal levels were calculated, suggesting that the model of faecal hormone measurements could be valuable in cervidae. It was found an extremely significant correlation between progesterone serum concentration and progestin faecal concentration, with r=0,83 and p<0,0001. Between estradiol serum concentrations and its faecal metabolites? concentrations no significant correlation was found, with r=-0,16 and p<0,3916. Based on results observation and statistical analysis, we can assume that, in the circumstances of this trial, progestin faecal concentrations show a variation profile similar to that one of serum progesterone, through estrous cycle of goats; however, this fact could not be observed for estradiol metabolites, compared to serum estradiol concentrations.

O objetivo deste trabalho foi desenvolver um protocolo de extração hormonal à partir de fezes de onça-pintada (Panthera onca) e validar uma metodologia de análise destes extratos por eletroforese capilar, verificando a eficiência analítica desta técnica no estudo dos metabólitos de esteróides sexuais em fezes, com o intuito de utilização futura desta metodologia na rotina dos laboratórios de endocrinologia. Foram testados sete tratamentos para as amostras de fezes liofilizadas: quatro protocolos de extração em diferentes solventes, um de hidrólise ácida e dois protocolos de extração em fase sólida (SPE). O protocolo de extração em acetonitrila foi satisfatório como pré-tratamento da amostra e aliado à SPE C-18 apresentou bons resultados no que diz respeito à sensibilidade, precisão, recuperação e tempo de análise. Com base nos resultados obtidos, a eletroforese capilar pode ser considerada uma ótima alternativa para a prospecção de metabólitos de hormônios, podendo ser utilizada em análises de rotina nos laboratórios de endocrinologia animal, sobretudo naqueles que se dedicam às metodologias não-invasivas de avaliação da função reprodutiva em animais selvagens. / The objective of this work was to develop a protocol of hormonal extraction from jaguar feces (Panthera onca) and validate a methodology of analysis of these extracts with capillary electrophoresis, verifying the analytical efficiency of this technique in the study of the steroids metabolites in feces, with the objective of future use of this methodology in the routine of the endocrinology laboratories. Seven treatments were tested for the samples: four extraction protocols in different solvents, one of acid hydrolysis and two extraction protocols in solid phase (SPE). The extraction protocol in acetonitrila was satisfactory as pre-treatment of the samples and ally to SPE C-18, it presented good results with respect to the sensibility, precision, recovery and time of analysis. Based on the obtained results, the capillary electrophoresis can be considered a great alternative for the research of metabolites of hormones, it could also be used in routine analyses in the endocrinology laboratories, mainly in those that are devoted to the non-invasive evaluation methodologies of the reproductive function in wild animals.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-09-02Bitstream added on 2014-06-13T19:15:01Z : No. of bitstreams: 1 mituo_mao_me_botfmvz.pdf: 229069 bytes, checksum: 463e7bf31bee3d6da258a9da068d45b8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Este trabalho objetivou determinar o turnover do carbono-13 no Pectoralis major, quilha, tíbia e fígado de frangos de corte em diferentes períodos de crescimento, utilizando a técnica de isótopos estáveis. Foram utilizados 184 pintos de corte, machos, Cobb, distribuídos ao acaso em sete tratamentos com dias de substituição das dietas distintos: 0; 7; 14; 21; 28; 35; 42 dias de idade, denominados: T0-14, T7-21, T14-28, T21-35, T28-42, T35-49 e T42-56 respectivamente. Para mensurar o turnover do carbono-13 (diluição isotópica) nos tecidos em determinado intervalo de tempo, foram utilizados o modelo sigmoidal de regressão de Boltzmann ou função exponencial do tempo. Os valores de meias-vidas foram: 2,5; 2,8; 2,9; 4,9; 5,1; 5,5 e 6,0 dias para músculo peitoral; 2,7; 2,9; 3,1; 4,6; 5,3; 4,1 e 8,0 dias para quilha; 4,4; 3,6; 5,4; 5,8; 4,3; 5,2 e 6,3 dias para tíbia e 1,3; 1,9; 1,4; 1,5; 1,9; 1,7 e 2,1 dias para fígado, nos tratamentos T0-14, T7-21, T14-28, T21-35, T28-42, T35-49 e T42-56 respectivamente. Dessa forma, a meia-vida dos tecidos estudados, em geral, aumentou de acordo com o avanço da idade de avaliação. Dentre os tecidos estudados, a tíbia apresentou maiores valores de meia-vida, indicando lenta incorporação do carbono-13 e o fígado, os menores, sugerindo rápida incorporação. De acordo com os resultados deste estudo, pode-se concluir que a tíbia apresenta turnover e metabolismo lento indicando o sinal isotópico das dietas iniciais da criação dos frangos de corte; e o fígado, turnover e metabolismo rápido, indicado para refletir a dieta próxima da fase de avaliação. / This study aimed to evaluate carbon-13 turnover on Pectoralis major, keel, tibia and liver of poultry at different life stages using the carbon stable isotopes technique. In this trial, 216 male chick lings (Cobb) were allocated in 36 galvanized iron cages with gutter-like feeders and nipple-like water dispensers. The trial was conduced in a totally random distribution consisting on seven treatments with distinct days for diet substitution (0, 7, 14, 21, 28, 35, 42 days old). Either Boltzmann sigmoid regression or the exponential time function was used in order to measure the carbon-13 turnover (isotopic dilution) in a specific period of time. The values of half-life was: 2.5, 2.8, 2.9, 4.9, 5.1, 5.5 and 6.0 days for muscle tissue, 2.7, 2.9, 3.1, 4.6, 5.3, 4.1 and 8.0 days for keel, 4.4, 3.6, 5.4, 5.8, 4.3, 5.2 and 6.3 days for tibia; and 1.3, 1.9, 1.4, 1.5, 1.9, 1.7 and 2.1 days for liver, on T1, T2, T3, T4, T5, T6 and T7 treatments, respectively. Generally, the half-life of the studied tissues increased along with the increase on the evaluated ages. The half-life of tibia was higher than the other tissues, indicating the slow carbon- 13 incorporation. The half-life of liver presented the smallest value indicating fast incorporation of carbon-13. According to the results of this study, it is possible to conclude that tibia has slow metabolism and it may indicate the isotopic signature of initial broiler diets, and the liver, fast metabolism tissue, is appropriated to reflect the diets fed at a closer evaluation period.