El presente trabajo tuvo como objetivo estandarizar y validar la técnica de RT-PCR en tiempo real para el diagnóstico del virus de la Necrosis Pancreática Infecciosa (IPNV) en la trucha arcoíris (Oncorhynchus mykiss) en el Perú. Se utilizaron muestras de riñón y bazo de truchas arcoíris provenientes de dos piscigranjas del departamento de Junín, tomándose 61 animales con signos clínicos de enfermedad y 60 animales aparentemente sanos. Todas las muestras fueron evaluadas mediante la técnica de Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) para determinar la presencia del virus. La prueba de RT-PCR tiempo real se realizó utilizando un kit comercial en dos pasos y utilizando el fluoróforo Sybr Green I. Se utilizaron los primers WB1 y WB2 para identificar un segmento genómico específico de la proteína estructural VP2. Como controles positivos se utilizaron virus inactivado IPNV cepa Sp, así como 10 muestras inoculadas con IPNV; y como controles negativos, se utilizaron virus relacionados a IPNV como son Rotavirus A y el virus de la Bursitis Infecciosa del pollo; así como virus no relacionados. A su vez, se llevó a cabo la inoculación viral en muestras de tejido en diluciones decrecientes para determinar el grado de sensibilidad. Los resultados fueron determinados a partir de los valores del Ciclo Umbral (Ct) y temperatura de Melting (Tm) de los productos amplificados. La prueba fue capaz de detectar al virus hasta concentraciones de 102 UFP/ml. Las 121 muestras de campo resultaron negativas a IPNV; los animales enfermos evidenciaron etiologías de tipos bacterianos y no virales. Los resultados obtenidos determinaron una especificidad del 100% y una sensibilidad del 100%; a su vez, los valores predictivo positivo y predictivo negativo resultaron en 100%. La técnica de RT-PCR en tiempo real estandarizada en el laboratorio representa una técnica valiosa para el diagnóstico de IPNV. Palabras Clave: Virus de la Necrosis Pancreática Infecciosa, IPNV, RT-PCR, RT-PCR tiempo real / --- This study aimed to standardize and validate the real-time RT-PCR technique for diagnosis of Infectious Pancreatic Necrosis Virus (IPNV) in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) in Peru. Kidney and spleen samples of rainbow trout (n=121) from two fish farms of Junin were taken, 61 animals showed signs of disease and 60 were apparently healthy animals. All samples were assessed by indirect immunofluorescence technique (IIF) to determine presence of virus. Real-time RT-PCR was carried out using a two-step commercial kit. We used WB1 and WB2 primers for amplification of a specific genomic segment of the VP2 structural protein. IPNV Sp strain and 10 samples inoculated with IPNV were used as positive controls; whereas related viruses, such as rotavirus and infectious bursal disease virus from chickens, as well as unrelated viruses were all used as negative controls. Also, we inoculated decreasing dilutions of virus into tissue samples to determine the sensitivity degree of the test. Results were assesssed according to the values of the threshold cycle (Ct) and melting temperature (Tm) of the amplified products. The test was able to detect the virus in concentrations up to 102 PFU/ml. All 121 field samples were negative for IPNV; sick animals were apparently infected by bacterial agents. Real Time RT-PCR’s specificity and sensitivity were around 100%; moreover, the positive predictive value and negative predictive value was also set in 100%. Real time RT- PCR technique standardized in our laboratory is a valuable diagnostic tool for IPNV detection in field samples. Key Words: Infectious Pancreatic Necrosis Virus, IPNV, RT-PCR, real time RT-PCR

El presente trabajo tuvo como objetivo estandarizar y validar la técnica de RT-PCR en tiempo real para el diagnóstico del virus de la Necrosis Pancreática Infecciosa (IPNV) en la trucha arcoíris (Oncorhynchus mykiss) en el Perú. Se utilizaron muestras de riñón y bazo de truchas arcoíris provenientes de dos piscigranjas del departamento de Junín, tomándose 61 animales con signos clínicos de enfermedad y 60 animales aparentemente sanos. Todas las muestras fueron evaluadas mediante la técnica de Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) para determinar la presencia del virus. La prueba de RT-PCR tiempo real se realizó utilizando un kit comercial en dos pasos y utilizando el fluoróforo Sybr Green I. Se utilizaron los primers WB1 y WB2 para identificar un segmento genómico específico de la proteína estructural VP2. Como controles positivos se utilizaron virus inactivado IPNV cepa Sp, así como 10 muestras inoculadas con IPNV; y como controles negativos, se utilizaron virus relacionados a IPNV como son Rotavirus A y el virus de la Bursitis Infecciosa del pollo; así como virus no relacionados. A su vez, se llevó a cabo la inoculación viral en muestras de tejido en diluciones decrecientes para determinar el grado de sensibilidad. Los resultados fueron determinados a partir de los valores del Ciclo Umbral (Ct) y temperatura de Melting (Tm) de los productos amplificados. La prueba fue capaz de detectar al virus hasta concentraciones de 102 UFP/ml. Las 121 muestras de campo resultaron negativas a IPNV; los animales enfermos evidenciaron etiologías de tipos bacterianos y no virales. Los resultados obtenidos determinaron una especificidad del 100% y una sensibilidad del 100%; a su vez, los valores predictivo positivo y predictivo negativo resultaron en 100%. La técnica de RT-PCR en tiempo real estandarizada en el laboratorio representa una técnica valiosa para el diagnóstico de IPNV. Palabras Clave: Virus de la Necrosis Pancreática Infecciosa, IPNV, RT-PCR, RT-PCR tiempo real / This study aimed to standardize and validate the real-time RT-PCR technique for diagnosis of Infectious Pancreatic Necrosis Virus (IPNV) in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) in Peru. Kidney and spleen samples of rainbow trout (n=121) from two fish farms of Junin were taken, 61 animals showed signs of disease and 60 were apparently healthy animals. All samples were assessed by indirect immunofluorescence technique (IIF) to determine presence of virus. Real-time RT-PCR was carried out using a two-step commercial kit. We used WB1 and WB2 primers for amplification of a specific genomic segment of the VP2 structural protein. IPNV Sp strain and 10 samples inoculated with IPNV were used as positive controls; whereas related viruses, such as rotavirus and infectious bursal disease virus from chickens, as well as unrelated viruses were all used as negative controls. Also, we inoculated decreasing dilutions of virus into tissue samples to determine the sensitivity degree of the test. Results were assesssed according to the values of the threshold cycle (Ct) and melting temperature (Tm) of the amplified products. The test was able to detect the virus in concentrations up to 102 PFU/ml. All 121 field samples were negative for IPNV; sick animals were apparently infected by bacterial agents. Real Time RT-PCR’s specificity and sensitivity were around 100%; moreover, the positive predictive value and negative predictive value was also set in 100%. Real time RT- PCR technique standardized in our laboratory is a valuable diagnostic tool for IPNV detection in field samples. Key Words: Infectious Pancreatic Necrosis Virus, IPNV, RT-PCR, real time RT-PCR

Las infecciones virales son la principal causa de infecciones respiratorias agudas, en la mayoría de los casos requieren tratamiento con medidas generales. Objetivo: realizar una Intervención educativa con madres para el control de las infecciones virales leves en el hogar. Metodología: Investigación cualitativa tipo Investigación acción con madres, de noviembre del 2008 a marzo del 2009. El estudio tuvo una fase diagnóstica de brechas en el manejo de las infecciones virales a través de un estudio etnográfico, etnológico y de observación actitudinal. Una fase de intervención con uso de metodología participativa y una fase de evaluación. Resultados: En la observación actitudinal las madres presentaron características con predominio de ansiedad. En el estudio etnológico desconocimiento de los virus como agentes causales; consideran que los resfriados se tratan con antibióticos; prevalecen pensamientos de no saber qué hacer y desesperación. En el estudio etnográfico predominaron las viviendas en asentamientos humanos, a más de 30 minutos de distancia del Policlínico, con áreas colindantes de tierra, construcción de madera, sin servicios intradomiciliarios de agua y desagüe. Constitución familiar predominante de tipo nuclear. Lograron conocer las infecciones virales, su manejo sintomático en el hogar; cambio de actitud al referir “sentirse más tranquilas, “a seguir paso a paso” y “a saber que pueden aplicar lo aprendido”. Conclusión: Una intervención educativa con metodología participativa considerando aspectos conceptuales, procedimentales y actitudinales logra que las madres controlen las infecciones virales no complicadas en el hogar confiando en sus capacidades desarrolladas. / --- Viral infections are the main cause of acute respiratory infections; in the majority of cases they only require general measurements for treatment. Objective: make on an educational intervention with mothers in order to control the mild viral infections at home. Methods: Qualitative research, actions with mothers from November 2008 to March 2009 The study had a diagnostic phase of breaches in the management of viral infections through an ethnographic study, ethnological and observation of attitudes. One phase of intervention using participation methodology and a phase of evaluation. Results: They presented in the observation characteristics with predominance of anxiety. In the ethnological study, lack of knowledge of the virus as a causal agent; they believe that cold symptoms are treated with antibiotics; it is prevalent in their minds not to know what to do and despair. In the ethnographic study, there was predominance of housing in human settlements, located more than 30 minutes from the policlinics, surrounded by land, wood constructions’, without water and drainage system. The main family type was the nuclear type. They learned about viral infections, the symptomatic management at home; change of attitude while saying “they feel calmer”, “to follow step by step and “to know they can apply what they learned. Conclusion: An educational intervention applying a participation methodology, considering concepts, procedures and changes in attitude get the mothers management at home viral infections not complicate trusting its developed capacities. / Tesis de segunda especialidad

Los enterovirus (EV) son la causa más común de infecciones de las vías respiratorias en humanos y se clasifican en siete especies (EV A-D y rhinovirus [RHV] A-C) con más de 200 serotipos diferentes. Poco se sabe acerca del rol de EV en las infecciones respiratorias en América del Sur. El objetivo principal de este estudio fue determinar la prevalencia de los EV en niños ≤ 15 años con enfermedad tipo influenza incluidos en un estudio de vigilancia pasiva de Influenza y otros virus respiratorios en el distrito de Piura durante el año 2011. Se obtuvo de cada participante una muestra de hisopado faríngeo y datos epidemiológicos. El aislamiento viral se realizó mediante cultivo celular utilizando cuatro líneas celulares (LLCMK2, Vero E6, RD y A549). La identificación y determinación del serotipo de EV se realizaron mediante el ensayo de inmunofluorescencia utilizando anticuerpos monoclonales. Los aislamientos no serotipificables por inmunofluorescencia, fueron seleccionados para su análisis mediante RT-PCR, seguido por secuenciamiento. En total se analizaron 424 muestras, aislándose EV en 47 muestras (11,1%). 46.8% de estos EV se encontraron en niños ≤ 1 año de edad. Nuestros resultados revelaron un predominio de especies EVB (62,5%). No se aislaron especies EVD. Se identificaron quince serotipos, 4 EVA, 8 EVB, y 2 EVC. Por otra parte, siete muestras no pudieron ser correctamente clasificadas con nuestra metodología. Los serotipos más frecuentes fueron coxsackievirus B2, coxsackievirus A2, y echovirus 9. El uso de células RD y A549 incrementó el aislamiento de EV. Este estudio proporciona datos sobre los serotipos de EV que circulan en el distrito de Piura y establece la necesidad de realizar más estudios. / Enteroviruses (EVs) are the most common cause of respiratory tract infections in humans and are classified into seven species (EVA-D and rhinovirus [RHV] A-C) with more than 200 different serotypes. Little is known about the role of EVs in respiratory infections in South America. The main objective of this study was to determine the prevalence of EVs in children aged ≤ 15 years with influenza-like illness enrolled in an Influenza and other respiratory viruses’ passive surveillance network in the district of Piura during 2011. Throat swabs and epidemiological data were collected from each participant. Virus isolation was performed by cell culture using four cell lines (LLCMK2, Vero, RD and A549). The identification and serotyping of EV were performed by immunofluorescence assay using monoclonal antibodies. Isolates non-serotypeable by immunofluorescence were selected for analysis by RT-PCR, followed by sequencing. A total of 424 samples were analyzed, and EVs were found in 47 samples (11.1%). 46.8% of these EVs were found in children aged ≤ 1 year. Our results revealed a predominance of EVB species, 62.5%. No EVD isolates were isolated. Fifteen serotypes were identified, 4 EVA, 8 EVB, and 2 EVC species. Moreover, seven samples could not be correctly classified with our methodology. The most common serotypes were coxsackievirus B2, coxsackievirus A2, and echovirus 9. The use of cells RD and A549 increase the isolation of EVs. This study provides data about the serotypes of EVs circulating in the district of Piura and sets the need for further studies. Keywords: Enterovirus, respiratory infections, Piura

En el presente trabajo de tesis se analizaron 2775 muestras de suero de aves (Gallus gallus) recolectadas en el programa de Monitoreo Serológico realizado en el Perú por el Servicio Nacional de Sanidad Agraria (SENASA) desde el 27 de agosto del 2001 al 18 de enero del 2002. Las muestras fueron clasificadas de acuerdo al tipo de explotación en: Aves de Postura (n =299), Pollos de Carne (n =704), Aves de Crianza Casera (n =1200) y Aves de Riña (n =492). Para el análisis de resultados se diseño una tabla de interpretación, la cual con la intervención de un panel de expertos consistió en la estandarización de resultados serológicos de la prueba de inhibición de la hemoaglutinación (HI), para la enfermedad de Newcastle, de acuerdo a los títulos de anticuerpos obtenidos. El resultado del análisis del total de muestras analizadas dio una frecuencia de 4.7% de aves consideradas positivas las que presentaron títulos de anticuerpos compatibles a desafío de campo al virus de la ENC. El análisis por tipo de explotación dio una frecuencia de 11.71% para las aves de crianza tecnificada de postura y de 3.9% para las aves de crianza no tecnificada casera. El análisis de regresión logística multinomial muestra al grupo de aves de postura como factor de riesgo, asociado al titulo de anticuerpos de la prueba HI compatible con desafío al virus de la ENC. El presente estudio concluye que el virus de la ENC es endémico en las aves de crianza tecnificada para los departamentos de Ica, Arequipa, Moquegua, Tacna, Junín, Huancavelica, Ayacucho, Cuzco, Apurímac y Puno, siendo en esta zona las aves de postura el principal factor de riesgo. / In the present thesis work has been analyzed 2775 samples of avian serum collected in the serologic screening of Peru done by El Servicio nacional de Sanidad Agraria (Senasa) from August 27 2001 to January 18 2002. The samples were classified according to the type of exploitation in: Layers (n =299) , broilers (n =704), in-house breeding (n =1200) and cock fight breeding (n =492). The analysis of the results was interpreted by the use of a chart of interpretation designed by a panel of experts, which consisted in the standardization of the serologist results of the inhibition of hemoaglutination test (HI), for the Newcastle disease (ND) according to the level of antibody titel obbteined. The result of the analysis of the total of samples analyzed gave a frequency of 4.7% of birds considered positives which presented tittles of antibodies compatibles to a field challenge of the ND virus. The analysis by type of exploitation gave a frequency of 11.71% for the layers and a 3.9% for the in-house breeding. The analysis of multinomial logistic regression shows that the group of layers as a risk factor, associated to the title of antibodies of the HI test compatible to a challenge of the ND virus. The present study concludes that the ND virus is endemic in the layers breeding for the de departments of Ica, Arequipa, Moquegua, Tacna, Junín, Huancavelica, Ayacucho, Cuzco, Apurímac and Puno.

El presente estudio tuvo por objeto determinar la presencia de anticuerpos contra Chlamydophila felis , causante de la conjuntivitis en gatos domésticos. Las muestras fueron tomadas de 60 felinos domésticos de diferentes edades, sexo, razas, antecedentes clínicos y distritos de Lima, que fueron llevados a la Clínica de Animales Menores de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Para tal fin se recolectaron al azar muestras para la detección de anticuerpos mediante la prueba de Inmunofluorescencia Indirecta. Siete felinos fueron positivos, estos representaban el 11.7+ 6.9% (I.C. 95%) demostrándose así que dicha bacteria está presente en la población de gatos de la ciudad de Lima. No se halló asociación estadística significativa (p>0.05) entre la presencia de anticuerpos con el sexo, edad y raza de los animales, sin embargo, se encontró una asociación significativa (p<0.05) entre la presencia de estos anticuerpos con animales que tenían acceso a la calle. Se reporta así la presencia de Chlamydophila felis en felinos domésticos en Lima, que fueron pacientes de la Clínica de Animales Menores . / The present study had for object to determine the presence of antibodies against Chlamydophila felis, causing of the conjunctivitis in domestic cats. The samples were taken from 60 domestic felines of different ages, sex, races, clinical antecedents and districts of Lima that were taken to the Clinic of Small Animals of Veterinary Medicine School of the Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Therefore, blood samples were randomly collected for the detection of antibodies by means of Indirect Inmunofluorescence Assay. Seven felines were positive, they represented 11.7 + 6.9% (I.C. 95%). This shows that the bacteria is present in the population of cats of the Lima. There was not significant statistical association (p>0.05) among the presence of antibodies with the sex, age and race of the animals, however, there was a significant association (p <0.05) among the presence of these antibodies with animals that had access to the street. It is reported the presence of Chlamydophila felis in domestic felines in Lima evaluating patients of the Clinic of Small Animals of Veterinary Medicine School.

El presente estudio evaluó la protección conferida por una vacuna contra la enfermedad de Gumboro en pollas de postura comercial. Se utilizaron 300 pollas de postura distribuidas en tres grupos de 100 aves cada uno, el grupo A vacunado y no desafiado, el grupo B vacunado y desafiado y el grupo C fue desafiado, no vacunado. / -- This study evaluated the protection conferred by a vaccine against Gumboro disease in laying hens. Were used 300 laying hens distributed in three groups of 100 hens each one, group A was vaccinated and unchallenged, group B was vaccinated and challenged and group C was challenged but not vaccinated.

La demanda de trucha arco iris en nuestro país se ha incrementado significativamente en estos últimos años, por ello la industria dedicada al cultivo de esta especie también ha incrementado su número, y los que ya se dedicaban a esta actividad se han visto en la necesidad de aumentar la producción de truchas cultivadas. La enfermedad entérica de la boca roja es una de las principales enfermedades que afectan al cultivo de las truchas, generando grandes pérdidas económicas, el agente etiológico es la bacteria Yersinia ruckeri, la cual se transmite de un pez a otro por contacto y a través del agua. La presente investigación tuvo como objetivo, aislar y caracterizar a nivel fenotípico y molecular estirpes de Yersinia ruckeri en truchas arco iris obtenidas en el centro piscícola “El Ingenio” – Huancayo, para incrementar el conocimiento de la biología de este agente patológico, y relacionar las estirpes aisladas a partir de peces con sintomatología de enfermedad, con las aisladas a partir de peces sin sintomatología de enfermedad. El presente estudio se desarrolló en el Centro Piscícola “El Ingenio”- Junin y en el laboratorio de Microbiología Molecular y Biotecnología de la UNMSM- Lima, en el año 2010. Se recolectaron peces con sintomatología de enfermedad entérica de la boca roja (EBR) y sin sintomatología de ésta, identificándose a través de pruebas bioquímicas, 34 cepas presuntivas de Y.ruckeri y confirmándose por PCR, 30 de ellas; todas las cepas identificadas pertenecen al biotipo 1. Se realizaron pruebas de susceptibilidad antimicrobiana encontrándose cepas resistentes a ácido oxolínico, cloranfenicol, tetraciclina y amoxicilina; se reporta 4 cepas con resistencia múltiple. Para el análisis genético molecular se utilizó las técnicas Enterobacterial repetitive intergenic consensus PCR (ERIC-PCR), repetitive extragenic palindromic PCR (REP-PCR) y extragenic repeating elements PCR (BOX-PCR), determinándose variabilidad intraespecífica tanto en cepas aisladas de peces con sintomatología como en peces sin sintomatología de la EBR. Palabras clave: Enfermedad entérica de la boca roja (EBR), Yersinia ruckeri, trucha arco iris, caracterización fenotípica de Y. ruckeri, caracterización molecular de Y. ruckeri. / Demand for rainbow trout in our country has increased significantly in recent years, so the industry dedicated to the culture of this species has also increased its number, and those already engaged in this activity have been in need of increase production of farmed trout. The disease enteric red mouth is one of the major diseases affecting the cultivation of trout, causing major economic losses, the causative agent is the bacterium Yersinia ruckeri, which is transmitted from one fish to another by contact and by water . The present study aimed to isolate and characterize phenotypic and molecular strains of Yersinia ruckeri in rainbow trout fish obtained in the center "El Ingenio" - Huancayo, to increase knowledge of the biology of this disease agent, and relate strains isolated from fish with symptoms of disease, with those isolated from fish without symptoms of disease. This study was to realize at the Fish Farming Center "El Ingenio" - Junin and laboratory of Molecular Microbiology and Biotechnology of San Marcos, Lima, in the 2010. Fish were collected with symptoms of enteric disease red mouth (EBR) and without symptoms of this, identified through biochemical tests, 34 strains Y.ruckeri presumptive and confirmed by PCR, 30 of them, all strains identified belong to biotype 1. Susceptibility testing was performed antimicrobial resistant strains found oxolinic acid, chloramphenicol, tetracycline, amoxicillin; 4 are reported multiple resistant strains. For molecular genetic analysis techniques used Enterobacterial repetitive intergenic consensus PCR (ERICPCR), repetitive extragenic palindromic PCR (REP-PCR) and PCR extragenic repeating elements (BOX-PCR), determining intraspecific variability in strains isolated from fish with symptoms like fish without symptoms of EBR. Keywords: Enteric redmouth disease (ERM), Yersinia ruckeri, rainbow trout, phenotypic characterization of Y. ruckeri, molecular characterization of Y. ruckeri. / Tesis

El presente estudio evaluó la protección conferida por una vacuna contra la enfermedad de Gumboro en pollas de postura comercial. Se utilizaron 300 pollas de postura distribuidas en tres grupos de 100 aves cada uno, el grupo A vacunado y no desafiado, el grupo B vacunado y desafiado y el grupo C fue desafiado, no vacunado. / This study evaluated the protection conferred by a vaccine against Gumboro disease in laying hens. Were used 300 laying hens distributed in three groups of 100 hens each one, group A was vaccinated and unchallenged, group B was vaccinated and challenged and group C was challenged but not vaccinated.

El presente estudio tuvo por objeto determinar la presencia de anticuerpos contra Chlamydophila felis , causante de la conjuntivitis en gatos domésticos. Las muestras fueron tomadas de 60 felinos domésticos de diferentes edades, sexo, razas, antecedentes clínicos y distritos de Lima, que fueron llevados a la Clínica de Animales Menores de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Para tal fin se recolectaron al azar muestras para la detección de anticuerpos mediante la prueba de Inmunofluorescencia Indirecta. Siete felinos fueron positivos, estos representaban el 11.7+ 6.9% (I.C. 95%) demostrándose así que dicha bacteria está presente en la población de gatos de la ciudad de Lima. No se halló asociación estadística significativa (p>0.05) entre la presencia de anticuerpos con el sexo, edad y raza de los animales, sin embargo, se encontró una asociación significativa (p<0.05) entre la presencia de estos anticuerpos con animales que tenían acceso a la calle. Se reporta así la presencia de Chlamydophila felis en felinos domésticos en Lima, que fueron pacientes de la Clínica de Animales Menores . / The present study had for object to determine the presence of antibodies against Chlamydophila felis, causing of the conjunctivitis in domestic cats. The samples were taken from 60 domestic felines of different ages, sex, races, clinical antecedents and districts of Lima that were taken to the Clinic of Small Animals of Veterinary Medicine School of the Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Therefore, blood samples were randomly collected for the detection of antibodies by means of Indirect Inmunofluorescence Assay. Seven felines were positive, they represented 11.7 + 6.9% (I.C. 95%). This shows that the bacteria is present in the population of cats of the Lima. There was not significant statistical association (p>0.05) among the presence of antibodies with the sex, age and race of the animals, however, there was a significant association (p <0.05) among the presence of these antibodies with animals that had access to the street. It is reported the presence of Chlamydophila felis in domestic felines in Lima evaluating patients of the Clinic of Small Animals of Veterinary Medicine School.