Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En este estudio se evalúa la respuesta inmunitaria de avestruces adultas y en recría, en base al alza de anticuerpos séricos específicos, frente a la inoculación del virus de la Enfermedad de Newcastle (VNC) inactivado, incorporado en adyuvante oleoso (Seppic ®) y en un adyuvante mineral comercial de hidróxido de aluminio (Alhidrogel ®). A su vez, se mide clínicamente la reacción tisular local, a los adyuvantes utilizados. Para lo anterior se desarrollaron inóculos, combinando el antígeno con los adyuvantes, el oleoso y mineral, además de una solución placebo incorporada en idénticos adyuvantes; posteriormente, las aves fueron sometidas a un esquema experimental de 7 semanas, con inoculaciones de los productos desarrollados en las semanas 1, 3 y 5; además de muestreos serológicos todas las semanas, para la medición de anticuerpos específicos contra el VNC mediante la prueba de Inhibición de la Hemoaglutinación (IHA) Como resultado, no se encontró una asociación estadística significativa entre la edad de las aves y los títulos de anticuerpos obtenidos. El uso del adyuvante oleoso generó una respuesta inmune significativamente más alta, que la generada por el adyuvante Alhidrogel. No se encontraron alteraciones dérmicas; tampoco se observó reacciones de hipersensibilidad en las aves en estudio Como conclusión se demostró la efectividad de los productos inoculados, los cuales generaron anticuerpos específicos contra el virus Newcastle. Esta investigación aporta resultados preliminares en el estudio de la inmunización de avestruces frente al VNC en Chile

Las pruebas serológicas de Inhibición de la Hemaglutinación (HI) y la Prueba de Inmunoensayo con enzimas asociadas (ELISA) son usadas rutinariamente para la detección de anticuerpos contra el virus de la Enfermedad de Newcastle (vENC). El antígeno de la prueba de HI puede ser una cepa de tropismo respiratorio o de tropismo entérico. En el presente estudio fue analizada la concordancia entre las dos pruebas de HI y la prueba de ELISA. Con tal fin fueron analizados los resultados serológicos obtenidos en 196 sueros colectados en pollos de engorde de 26 y 42 días, antes y después de ser desafiados con una cepa velogénica viscerotrópica del virus de la enfermedad de Newcastle. Los anticuerpos detectados por ambas pruebas fueron agrupados en cuatro escalas según su nivel de detección (negativo, bajo, medio y alto) para posteriormente ser analizados por la prueba estadística de Kappa de Cohen. Se analizó la concordancia entre las dos pruebas de HI con antígeno respiratorio o entérico y, entre cada una de estos últimas (HI respiratoria y HI entérica) con la prueba de ELISA. Se determinó que la concordancia entre las prueba de HI y ELISA, tanto usando antígeno entérico como antígeno respiratorio fue muy pobre, mientras que la concordancia entre las dos pruebas de HI (con antígeno respiratorio o entérico) fue moderada. Palabras claves: virus de la enfermedad de Newcastle (ENC), ELISA, HI, índice de kappa, concordancia. / --- Hemagglutination Inhibition (IH) and Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) Serological tests are routinely used for antibodies detection against the virus of Newcastle disease (NDV). Antigen for IH test may be a strain of respiratory tropism or enteric tropism. This study analyzed the concordance between the HI and ELISA tests. For this purpose, the serological results obtained on 196 sera collected in broilers of 26 and 42 days old were analyzed, before and after being challenged with a velogenic viscerotropic strain of newcastle disease virus. The antibodies detected by both tests were grouped into four scales according to their detection level (negative, low, medium and high) in order to later be analyzed by the Kappa Cohen statistic test. Concordance between the two tests of IH with respiratory or enteric antigen was analyzed, and concordance between each these (IH respiratory and IH enteric) with the ELISA test was analyzed. It was found that the concordance between IH test and ELISA, using both enteric antigen and respiratory antigen was very poor, while the concordance between the two IH tests (respiratory or enteric antigen) was moderate. Keywords: virus Newcastle disease (NDV), ELISA, HI, kappa index, concordance.

En el presente trabajo de tesis se analizaron 2775 muestras de suero de aves (Gallus gallus) recolectadas en el programa de Monitoreo Serológico realizado en el Perú por el Servicio Nacional de Sanidad Agraria (SENASA) desde el 27 de agosto del 2001 al 18 de enero del 2002. Las muestras fueron clasificadas de acuerdo al tipo de explotación en: Aves de Postura (n =299), Pollos de Carne (n =704), Aves de Crianza Casera (n =1200) y Aves de Riña (n =492). Para el análisis de resultados se diseño una tabla de interpretación, la cual con la intervención de un panel de expertos consistió en la estandarización de resultados serológicos de la prueba de inhibición de la hemoaglutinación (HI), para la enfermedad de Newcastle, de acuerdo a los títulos de anticuerpos obtenidos. El resultado del análisis del total de muestras analizadas dio una frecuencia de 4.7% de aves consideradas positivas las que presentaron títulos de anticuerpos compatibles a desafío de campo al virus de la ENC. El análisis por tipo de explotación dio una frecuencia de 11.71% para las aves de crianza tecnificada de postura y de 3.9% para las aves de crianza no tecnificada casera. El análisis de regresión logística multinomial muestra al grupo de aves de postura como factor de riesgo, asociado al titulo de anticuerpos de la prueba HI compatible con desafío al virus de la ENC. El presente estudio concluye que el virus de la ENC es endémico en las aves de crianza tecnificada para los departamentos de Ica, Arequipa, Moquegua, Tacna, Junín, Huancavelica, Ayacucho, Cuzco, Apurímac y Puno, siendo en esta zona las aves de postura el principal factor de riesgo. / In the present thesis work has been analyzed 2775 samples of avian serum collected in the serologic screening of Peru done by El Servicio nacional de Sanidad Agraria (Senasa) from August 27 2001 to January 18 2002. The samples were classified according to the type of exploitation in: Layers (n =299) , broilers (n =704), in-house breeding (n =1200) and cock fight breeding (n =492). The analysis of the results was interpreted by the use of a chart of interpretation designed by a panel of experts, which consisted in the standardization of the serologist results of the inhibition of hemoaglutination test (HI), for the Newcastle disease (ND) according to the level of antibody titel obbteined. The result of the analysis of the total of samples analyzed gave a frequency of 4.7% of birds considered positives which presented tittles of antibodies compatibles to a field challenge of the ND virus. The analysis by type of exploitation gave a frequency of 11.71% for the layers and a 3.9% for the in-house breeding. The analysis of multinomial logistic regression shows that the group of layers as a risk factor, associated to the title of antibodies of the HI test compatible to a challenge of the ND virus. The present study concludes that the ND virus is endemic in the layers breeding for the de departments of Ica, Arequipa, Moquegua, Tacna, Junín, Huancavelica, Ayacucho, Cuzco, Apurímac and Puno.

El objetivo del presente estudio fue determinar la presencia del virus de la Enfermedad de Newcastle (PMAV-1) en patos de traspatio en dos provincias del departamento de Lima (Huaral y Huaura), en el departamento de Lima. Seiscientas muestras de hisopado cloacal de patos de traspatio fueron colectadas desde febrero hasta julio del 2012. Dichas muestras se analizaron mediante aislamiento viral en huevos embrionados SPF. La presencia del virus de Newcastle fue determinada por la actividad hemaglutinante del fluido alantoideo, y confirmada mediante la prueba de Inhibición de la Hemaglutinación utilizando anticuerpos específicos. El total de las muestras analizadas en este estudio fueron negativas a la presencia del virus de la Enfermedad de Newcastle. La técnica de evaluación de riesgo mediante simulación de Monte Carlo (programa @Risk) indico que la probabilidad de encontrar el vENC en patos de traspatio fue de 0.1% con un intervalo de confianza de 0.004 a 0.6%. La prevalencia encontrada fue muy baja para considerar a estas aves como posible fuente de infección hacia las aves domésticas.

En el presente trabajo de tesis se analizaron 2775 muestras de suero de aves (Gallus gallus) recolectadas en el programa de Monitoreo Serológico realizado en el Perú por el Servicio Nacional de Sanidad Agraria (SENASA) desde el 27 de agosto del 2001 al 18 de enero del 2002. Las muestras fueron clasificadas de acuerdo al tipo de explotación en: Aves de Postura (n =299), Pollos de Carne (n =704), Aves de Crianza Casera (n =1200) y Aves de Riña (n =492). Para el análisis de resultados se diseño una tabla de interpretación, la cual con la intervención de un panel de expertos consistió en la estandarización de resultados serológicos de la prueba de inhibición de la hemoaglutinación (HI), para la enfermedad de Newcastle, de acuerdo a los títulos de anticuerpos obtenidos. El resultado del análisis del total de muestras analizadas dio una frecuencia de 4.7% de aves consideradas positivas las que presentaron títulos de anticuerpos compatibles a desafío de campo al virus de la ENC. El análisis por tipo de explotación dio una frecuencia de 11.71% para las aves de crianza tecnificada de postura y de 3.9% para las aves de crianza no tecnificada casera. El análisis de regresión logística multinomial muestra al grupo de aves de postura como factor de riesgo, asociado al titulo de anticuerpos de la prueba HI compatible con desafío al virus de la ENC. El presente estudio concluye que el virus de la ENC es endémico en las aves de crianza tecnificada para los departamentos de Ica, Arequipa, Moquegua, Tacna, Junín, Huancavelica, Ayacucho, Cuzco, Apurímac y Puno, siendo en esta zona las aves de postura el principal factor de riesgo. / In the present thesis work has been analyzed 2775 samples of avian serum collected in the serologic screening of Peru done by El Servicio nacional de Sanidad Agraria (Senasa) from August 27 2001 to January 18 2002. The samples were classified according to the type of exploitation in: Layers (n =299) , broilers (n =704), in-house breeding (n =1200) and cock fight breeding (n =492). The analysis of the results was interpreted by the use of a chart of interpretation designed by a panel of experts, which consisted in the standardization of the serologist results of the inhibition of hemoaglutination test (HI), for the Newcastle disease (ND) according to the level of antibody titel obbteined. The result of the analysis of the total of samples analyzed gave a frequency of 4.7% of birds considered positives which presented tittles of antibodies compatibles to a field challenge of the ND virus. The analysis by type of exploitation gave a frequency of 11.71% for the layers and a 3.9% for the in-house breeding. The analysis of multinomial logistic regression shows that the group of layers as a risk factor, associated to the title of antibodies of the HI test compatible to a challenge of the ND virus. The present study concludes that the ND virus is endemic in the layers breeding for the de departments of Ica, Arequipa, Moquegua, Tacna, Junín, Huancavelica, Ayacucho, Cuzco, Apurímac and Puno.

El objetivo del presente estudio fue evaluar el grado de susceptibilidad, el efecto patológico y respuesta serológica de la paloma silvestre (especie Columba livia) frente a la inoculación experimental con una cepa de virus velogénico de la enfermedad de Newcastle. Se capturaron 28 aves adultas, 14 fueron inoculadas con una cepa velogénica viscerotrópica de la enfermedad de Newcastle, vía nasal y oral, mientras las restantes fueron criadas como grupo control. En las aves inoculadas se registró los signos clínicos y mortalidad. Se tomaron muestras de diferentes tejidos de aves que murieron así como del grupo control, para su análisis histopatológico. Se tomaron muestras de pulmón y tráquea e hisopado de cloaca para la recuperación viral, semanalmente durante seis semanas. El 64% de aves del grupo inoculado presentó signos clínicos y se obtuvo una mortalidad del 42.8%. Se presentaron estornudos a partir del cuarto día post inoculación. El erizamiento de plumas, aislamiento y letargia, se observó a partir del quinto día en aves que presentaron signos respiratorios y nerviosos. Al séptimo día se observó en el 42.8% opistótonos, tremores de cabeza y cuello que se exacerbaban al estímulo de ruidos. Al octavo día sólo en el 21 % de las aves mostraron diarrea. Los hallazgos a la necropsia consistieron en una congestión generalizada de los diferentes órganos y esplenomegalia. Las lesiones microscópicas más marcadas fueron edema, gliosis, manguito perivascular a mononucleares en cerebro y cerebelo, pérdida de cilios, infiltrado de linfocitos en tráquea, congestión interalveolar en pulmón, congestión en proventrículo, congestión e infiltración de linfocitos en intestinos y despoblamiento linfoide en bazo. El grupo inoculado mostró un incremento en sus títulos de anticuerpos a partir de la primera semana post inoculación llegando a su máximo nivel promedio geométrico de título (P.G.T) de 4.9 en la segunda semana para luego descender por completo a la quinta semana. Se logró la recuperación viral a partir de muestras de pulmón y tráquea durante las tres primeras semanas post inoculación. Se demostró que la especie Columba livia es susceptible a la inoculación experimental con una cepa velogénica del virus de la enfermedad de Newcastle. / -- This study was designed to asses the susceptibility, pathologic effect and serologic response of wild pigeons (sp. Columba livia) to Newcastle virus. A total of twenty eight adult wild pigeons were captured, fourteen were inoculated with a velogenic viscerotropic strain of Newcastle virus by oral and nasal route. The remaining pigeons were used as control group. The birds were observed to record clinical signs and mortality, also blood samples were collected for hemaglutination inhibition technique and tissue samples from lungs, tracheas and cloacal swabs were harvested for the viral recovery and histological studies. The 64 % of the inoculated group showed clinical signs and a mortality of 42.8 %. The clinical signs (sneezes, ruffled plumage, isolation and lethargy) started the fourth day post inoculation. The 43 % showed nervous signs: opisthotonos, tremors of head and neck that was exaggerated to the stimulus of noises and the 21 % showed diarrhea. In the necropsy were observed a widespread congestion and splenomegaly. The microscopic injuries were edema, gliosis, mononuclear perivascular cuffing in brain and cerebellum, loss ciliar, lymphoid infiltration in trachea, lungs congestion, proventricular congestion, and lymphocitic infiltration in intestines and lymphoid depletion in spleen. The inoculated group showed an increase in the antibody titers the first week post inoculation reaching the highest titer mean (P.G.T=4.9) in the second week after this they descended. The viral recovery was made upon lungs and tracheas tissues and from a cloacal swab in dead birds. It was showed that the specie Columba livia was susceptible to the experimental inoculation with a velogenic strain of Newcastle diasease virus.

El objetivo del presente estudio fue evaluar el grado de susceptibilidad, el efecto patológico y respuesta serológica de la paloma silvestre (especie Columba livia) frente a la inoculación experimental con una cepa de virus velogénico de la enfermedad de Newcastle. Se capturaron 28 aves adultas, 14 fueron inoculadas con una cepa velogénica viscerotrópica de la enfermedad de Newcastle, vía nasal y oral, mientras las restantes fueron criadas como grupo control. En las aves inoculadas se registró los signos clínicos y mortalidad. Se tomaron muestras de diferentes tejidos de aves que murieron así como del grupo control, para su análisis histopatológico. Se tomaron muestras de pulmón y tráquea e hisopado de cloaca para la recuperación viral, semanalmente durante seis semanas. El 64% de aves del grupo inoculado presentó signos clínicos y se obtuvo una mortalidad del 42.8%. Se presentaron estornudos a partir del cuarto día post inoculación. El erizamiento de plumas, aislamiento y letargia, se observó a partir del quinto día en aves que presentaron signos respiratorios y nerviosos. Al séptimo día se observó en el 42.8% opistótonos, tremores de cabeza y cuello que se exacerbaban al estímulo de ruidos. Al octavo día sólo en el 21 % de las aves mostraron diarrea. Los hallazgos a la necropsia consistieron en una congestión generalizada de los diferentes órganos y esplenomegalia. Las lesiones microscópicas más marcadas fueron edema, gliosis, manguito perivascular a mononucleares en cerebro y cerebelo, pérdida de cilios, infiltrado de linfocitos en tráquea, congestión interalveolar en pulmón, congestión en proventrículo, congestión e infiltración de linfocitos en intestinos y despoblamiento linfoide en bazo. El grupo inoculado mostró un incremento en sus títulos de anticuerpos a partir de la primera semana post inoculación llegando a su máximo nivel promedio geométrico de título (P.G.T) de 4.9 en la segunda semana para luego descender por completo a la quinta semana. Se logró la recuperación viral a partir de muestras de pulmón y tráquea durante las tres primeras semanas post inoculación. Se demostró que la especie Columba livia es susceptible a la inoculación experimental con una cepa velogénica del virus de la enfermedad de Newcastle. / This study was designed to asses the susceptibility, pathologic effect and serologic response of wild pigeons (sp. Columba livia) to Newcastle virus. A total of twenty eight adult wild pigeons were captured, fourteen were inoculated with a velogenic viscerotropic strain of Newcastle virus by oral and nasal route. The remaining pigeons were used as control group. The birds were observed to record clinical signs and mortality, also blood samples were collected for hemaglutination inhibition technique and tissue samples from lungs, tracheas and cloacal swabs were harvested for the viral recovery and histological studies. The 64 % of the inoculated group showed clinical signs and a mortality of 42.8 %. The clinical signs (sneezes, ruffled plumage, isolation and lethargy) started the fourth day post inoculation. The 43 % showed nervous signs: opisthotonos, tremors of head and neck that was exaggerated to the stimulus of noises and the 21 % showed diarrhea. In the necropsy were observed a widespread congestion and splenomegaly. The microscopic injuries were edema, gliosis, mononuclear perivascular cuffing in brain and cerebellum, loss ciliar, lymphoid infiltration in trachea, lungs congestion, proventricular congestion, and lymphocitic infiltration in intestines and lymphoid depletion in spleen. The inoculated group showed an increase in the antibody titers the first week post inoculation reaching the highest titer mean (P.G.T=4.9) in the second week after this they descended. The viral recovery was made upon lungs and tracheas tissues and from a cloacal swab in dead birds. It was showed that the specie Columba livia was susceptible to the experimental inoculation with a velogenic strain of Newcastle diasease virus.

Diseña y analiza la generación de VLPs con membrana lipídica para un Adenovirus, que no posee membrana. Aprovecha la capacidad que tienen las principales proteínas estructurales del virus de la enfermedad de Newcastle (NDV), de tomar parte de la membrana del hospedero y autoensamblarse en viriones, para generar VLPs con envoltura conteniendo a la proteína Fibra-2 de FAdV-4. El primer paso es estandarizar la técnica de transfección con polietilenimina de 25 kDa (PEI25) en células DF-1. La eficiencia media máxima de transfección, medida en porcentaje de células que expresan EGFP, fue de 61.07%, la cual se obtiene utilizando 0.53 μg DNA más 1.59 μg de PEI25 por cm2 de células sembradas en monocapa. Luego, se expresa simultáneamente las proteínas Matriz (M) y Nucleoproteína (N) de NDV, con la proteína quimérica hnFib2. Esta última compuesta de la proteína Fibra-2 de FAdV-4 fusionada en su extremo N-terminal a los dominios citoplasmático y transmembrana de la proteína Hemaglutinina-Neuraminidasa (HN) de NDV, permitiendo la interacción de la Fibra-2 con la proteína M lo que facilita el ensamblaje de los viriones. Los VLPs purificados son evaluados por Western blot, obteniéndose bandas de ~40 kDa y ~55kDa positivas a suero anti-NDV correspondientes a las proteínas M y N, respectivamente; y a suero anti epítope CDSATMGNRPGDLNS de Fibra-2 obteniendo una banda de ~63 kDa. Esta investigación es el primer trabajo de la obtención de VLP para FAdV, dando un paso importante en el desarrollo de la siguiente generación de vacunas contra este patógeno. Estos VLP necesitan ser probados a nivel inmunológico para determinar su eficiencia como vacuna candidata contra FAdV-4. / Tesis

El documento digital no refiere asesor / Caracteriza a nivel molecular las cepas del virus de la Enfermedad de Newcastle (ENC) aislado de aves domésticas de diferentes regiones del Perú mediante la prueba de Transcripción Reversa- Reacción en Cadena de la Polimerasa (RT-PCR) y secuenciación del gen de la proteína de fusión. Las muestras clínicas de aves de traspatio, riña y granjas avícolas comerciales procedentes de brotes de ENC ocurridos en el país, fueron recolectados entre los años 2009 al 2011. Las pruebas de RT-PCR detectaron la presencia del virus de la ENC en todas las muestras de aves, se determinó cepas ENC de alta patogenicidad en aves de traspatio y riña y de baja patogenicidad en aves de traspatio y granjas avícolas comerciales. Con el propósito de evaluar la virulencia de los aislamientos virales, se amplificó y secuenció la principal región funcional del gen de la proteína de fusión, para así realizar el análisis filogenético y determinar el patotipo. La secuenciación del gen de la proteína de fusión de los aislamientos virulentos, presentó la secuencia 113RQKRF117 con aminoácidos básicos entre las posiciones 113 al 116 y una fenilalanina en la posición 117; lo cual es característico de los aislamientos virulentos velogénicos. Además, se agruparon en el genotipo VII y poseen mayor similitud con los virus Newcastle virulentos reportados en Perú y Malasia. La proteína fusión en las cepas de baja virulencia presentaron aminoácidos básicos en la posición 113 y 116 y una leucina en la posición 117, lo cual es característico de los virus ENC lentogénicos. Además se agruparon en los genotipos I y II, presentando ambos genotipos mayor similitud con los virus ENC de EEUU. / Tesis

Las aves son susceptibles a una serie de enfermedades infecciosas que afectan su productividad, dentro de ellas la enfermedad de Newcastle es considerada como una de las más importantes porque las cepas velogénicas del virus tienen un gran impacto sanitario sobre la industria avícola, siendo una enfermedad notificable a la Organización Mundial de Salud Animal (OIE). Los programas de vacunación para prevenir y controlar la enfermedad causada por este tipo de cepas velogénicas son diversos y varían en función del riesgo sanitario de la granja, muchos de ellos requieren de varias aplicaciones de vacunas durante la campaña de crianza de las aves, usualmente al 1,10 y 28 día de edad, este manejo podría generar un stress en los pollos y originar mermas en el rendimiento productivo del lote en el largo plazo. La genética actual ha hecho que los pollos de engorde de conformación sean altamente susceptibles a condiciones de estrés, por lo que existe la necesidad de inmunizar a las aves contra todos los agentes en planta de incubación evitando el stress de la vacunación y los riesgos que ésta conlleva. La hipótesis de la tesis es que la vacuna contra la enfermedad de Newcastle vectorizada en el virus HVT de la enfermedad de Marek aplicada a pollos al primer día de edad en planta de incubación protege contra cepas patógenas del vENC. Se realizó un Ensayo Clínico que probó la vacuna vectorizada en Marek comparándola con otros esquemas de vacunación y un grupo control. Las aves se desafiaron a los 26 días post vacunación, con una cepa velogénica de campo y se registraron los efectos adversos y la eficacia de las vacunas. El esquema con la mejor protección y el menor número de eventos adversos fue la vacuna vectorizada con Marek. / Tesis