Thesis (M.S.)--Washington State University, December 2007. / Includes bibliographical references (p. 68-86).

Enterobacter sakazakii é uma bactéria Gram-negativa, em forma de bastonete, pertencente a família Enterobacteriaceae e que não faz parte da microbiota normal do trato gastrointestinal humano ou animal. É reconhecida como um patógeno emergente de origem alimentar e já foi relacionada a diversos surtos e casos esporádicos de doenças envolvendo neonatos debilitados. A população de risco à infecção é composta por bebês prematuros ou bebês nascidos a termo até atingirem quatro a seis semanas de idade, bebês imunocomprometidos de qualquer idade e bebês que necessitem de cuidados especiais (UTI neonatal). Apesar do reservatório e do modo de transmissão de E. sakazakii não estarem claramente identificados, relatos mostraram que fórmulas infantis desidratadas, a base de leite, foram a fonte e o veículo de infecções para a população de risco. Os objetivos deste estudo foram avaliar a eficiência do meio cromogênico DFI na identificação do E. sakazakii; verificar a eficiência das metodologias ISO (TC 34/SC 5N) e FDA empregadas na enumeração de E. sakazakii e avaliar a população de Enterobacter sakazakii e de Enterobacteriaceae em fórmulas lácteas infantis, desidratadas, importadas ou nacionais, específicas para a faixa 0-6 meses de idade comercializadas na cidade de São Paulo, Brasil. Para tanto, foram examinadas 150 amostras de fórmulas lácteas infantis desidratadas, de diferentes lotes e marcas comerciais, adquiridas no comércio varejista da cidade de São Paulo. Para enumeração de E. sakazakii empregou-se o método preconizado pela ISO (TC 34/SC 5 N) com modificação. A enumeração de Enterobacteriaceae foi realizada empregando-se placas PetrifilmTM contagem de enterobactérias (3MTM). Todas as amostras examinadas, independente de marca comercial ou origem, apresentaram população de Enterobacter sakazakii < 0,03 NMP/100g e de Enterobacteriaceae < 5 UFC/g. O ágar DFI foi eficiente na identificação de colônias de E. sakazakii, mesmo na presença de Escherichia cloacae e Enterobacter aerogenes. E a metodologia ISO (TC 34/SC 5N) foi mais eficiente na enumeração de E. sakazakii que o método preconizado pelo FDA. / Enterobacter sakazakii is a Gram-negative rod from the Enterobacteriaceae family. This microorganism is not part of the normal microbiota of the human or animal gastrointestinal tract. It is recognized as an emergent pathogen of food origin and has already been related to outbreaks and sporadic cases of illnesses mainly involving weak in neonates. The population at risk of infection is composed by premature babies or newborn till they reach four to six weeks of age, immunocompromised babies of any age and babies in need of special care (neonatal ICU). Although the reservoir and the form of transmission of E. sakazakii is not clearly identified yet, studies have shown that milk-based dried-infant formula have been the source and the vehicle of infections for the at risk population. The objectives of this study were to evaluate the efficiency of DFI agar in the identification of E. sakazakii; to verify the efficiency of the methodologies proposed by ISO (TC 34/SC 5N) and FDA for the enumeration of E. sakazakii and to evaluate the population of Enterobacter sakazakii and Enterobacteriaceae in dehydrated infant milk formula, imported or domestic, specific for 0-6 months of age commercialized in the city of Sao Paulo, Brazil. 150 dehydrated milk infant formula samples from different commercial brands, acquired at retail level in the city of Sao Paulo, SP, Brazil were examined. For enumeration of E. sakazakii a modification of the method recommended by ISO (TC 34/SC 5N) was used. The enumeration of Enterobacteriaceae was carried out using PetrifilmTM Enterobacteriaceae count plate (3MTM). All the examined samples, independent of commercial brand or origin, presented population of Enterobacter sakazakii < 0,03 MPN/100g and < 5 CFU/g of Enterobacteriaceae. The DFI agar was efficient in the identification of colonies of E. sakazakii, even in the presence of Escherichia cloacae or Enterobacter aerogenes. The methodology ISO (TC 34/SC 5N) was more efficient for the enumeration of E. sakazakii that the one recomended by FDA.

Enterobacter sakazakii é uma bactéria Gram-negativa, em forma de bastonete, pertencente a família Enterobacteriaceae e que não faz parte da microbiota normal do trato gastrointestinal humano ou animal. É reconhecida como um patógeno emergente de origem alimentar e já foi relacionada a diversos surtos e casos esporádicos de doenças envolvendo neonatos debilitados. A população de risco à infecção é composta por bebês prematuros ou bebês nascidos a termo até atingirem quatro a seis semanas de idade, bebês imunocomprometidos de qualquer idade e bebês que necessitem de cuidados especiais (UTI neonatal). Apesar do reservatório e do modo de transmissão de E. sakazakii não estarem claramente identificados, relatos mostraram que fórmulas infantis desidratadas, a base de leite, foram a fonte e o veículo de infecções para a população de risco. Os objetivos deste estudo foram avaliar a eficiência do meio cromogênico DFI na identificação do E. sakazakii; verificar a eficiência das metodologias ISO (TC 34/SC 5N) e FDA empregadas na enumeração de E. sakazakii e avaliar a população de Enterobacter sakazakii e de Enterobacteriaceae em fórmulas lácteas infantis, desidratadas, importadas ou nacionais, específicas para a faixa 0-6 meses de idade comercializadas na cidade de São Paulo, Brasil. Para tanto, foram examinadas 150 amostras de fórmulas lácteas infantis desidratadas, de diferentes lotes e marcas comerciais, adquiridas no comércio varejista da cidade de São Paulo. Para enumeração de E. sakazakii empregou-se o método preconizado pela ISO (TC 34/SC 5 N) com modificação. A enumeração de Enterobacteriaceae foi realizada empregando-se placas PetrifilmTM contagem de enterobactérias (3MTM). Todas as amostras examinadas, independente de marca comercial ou origem, apresentaram população de Enterobacter sakazakii < 0,03 NMP/100g e de Enterobacteriaceae < 5 UFC/g. O ágar DFI foi eficiente na identificação de colônias de E. sakazakii, mesmo na presença de Escherichia cloacae e Enterobacter aerogenes. E a metodologia ISO (TC 34/SC 5N) foi mais eficiente na enumeração de E. sakazakii que o método preconizado pelo FDA. / Enterobacter sakazakii is a Gram-negative rod from the Enterobacteriaceae family. This microorganism is not part of the normal microbiota of the human or animal gastrointestinal tract. It is recognized as an emergent pathogen of food origin and has already been related to outbreaks and sporadic cases of illnesses mainly involving weak in neonates. The population at risk of infection is composed by premature babies or newborn till they reach four to six weeks of age, immunocompromised babies of any age and babies in need of special care (neonatal ICU). Although the reservoir and the form of transmission of E. sakazakii is not clearly identified yet, studies have shown that milk-based dried-infant formula have been the source and the vehicle of infections for the at risk population. The objectives of this study were to evaluate the efficiency of DFI agar in the identification of E. sakazakii; to verify the efficiency of the methodologies proposed by ISO (TC 34/SC 5N) and FDA for the enumeration of E. sakazakii and to evaluate the population of Enterobacter sakazakii and Enterobacteriaceae in dehydrated infant milk formula, imported or domestic, specific for 0-6 months of age commercialized in the city of Sao Paulo, Brazil. 150 dehydrated milk infant formula samples from different commercial brands, acquired at retail level in the city of Sao Paulo, SP, Brazil were examined. For enumeration of E. sakazakii a modification of the method recommended by ISO (TC 34/SC 5N) was used. The enumeration of Enterobacteriaceae was carried out using PetrifilmTM Enterobacteriaceae count plate (3MTM). All the examined samples, independent of commercial brand or origin, presented population of Enterobacter sakazakii < 0,03 MPN/100g and < 5 CFU/g of Enterobacteriaceae. The DFI agar was efficient in the identification of colonies of E. sakazakii, even in the presence of Escherichia cloacae or Enterobacter aerogenes. The methodology ISO (TC 34/SC 5N) was more efficient for the enumeration of E. sakazakii that the one recomended by FDA.

Thesis (M.S. in food science)--Washington State University, December 2009. / Title from PDF title page (viewed on Jan. 20, 2010). "School of Food Science." Includes bibliographical references (p. 55-59).

Thesis (M.S.)--West Virginia University, 2008. / Title from document title page. Document formatted into pages; contains ix, 111 p. : ill. (some col.). Vita. Includes abstract. Includes bibliographical references (p. 104-110).

Orientadores: José Luiz Pereira, Valéria Christina Amstalden Junqueira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-18T21:41:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_RosanaFranciscoSiqueirados_D.pdf: 687405 bytes, checksum: a60c63628979fe94b8cd83acd31712df (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Cronobacter spp (Enterobacter sakazakii) é uma bactéria patogênica oportunista, que tem sido associada a surtos e casos esporádicos de meningite, enterocolite necrosante e sepse em recém nascidos. Em 2008 as cepas dessa espécie foram divididas em várias novas espécies e transferidas para o novo gênero Cronobacter spp. Um dos métodos mais recentes para sua detecção é o da ISO 22964 (2006), que inclui duas etapas de enriquecimento, o isolamento de colônias típicas (alfa-glicosidase positivas) no meio seletivo diferencial ESIA (Enterobacter sakazakii Isolation Agar) e a confirmação das culturas através de testes bioquímicos. Há, entretanto, necessidade de métodos e meios de cultura alternativos para o isolamento de Cronobacter spp (Enterobacter sakazakii), objetivo desse trabalho. Para isso, 83 amostras foram analisadas usando a técnica de PCR através do sistema BAX® (Dupont Qualicon), em comparação com o método cultural ISO/TS 22964:2006. Dois meios de cultura seletivos diferenciais foram usados para isolamento de culturas típicas: o Ágar de Isolamento de E.sakazakii (ESIA) e o Ágar Druggan-Forsythe-Iversen (DFI). Cronobacter spp (Enterobacter sakazakii) foi isolado em 13,25% das amostras analisadas, sendo mais freqüente em amostras de soja em grãos (destinada à preparação de bebidas à base de soja), em leite em pó e em amido de milho. Nas fórmulas infantis em pó o micro-organismo foi encontrado em 6% das amostras. A unidade analítica de 25g não se mostrou adequada para o isolamento das cepas, porque a contagem encontrada nas amostras positivas (unidade analítica de 500g) foi muito baixa (variando de <0,22 a >1,61NMP/100g). Em 27% das amostras positivas, Cronobacter spp só foi isolado de colônias atípicas (alfa-glicosidase negativas) no ESIA e/ou no DFI. Em 9% das amostras as cepas isoladas também não apresentaram pigmentação amarela no TSA. Os resultados mostraram desempenho equivalente do ESIA e do DFI, no protocolo de ensaio da ISO/TS 22964 (2006). O método do Sistema BAX® apresentou desempenho inferior ao método ISO/TS 22964 (2006), com uma alta porcentagem de resultados falsos positivos no PCR (73,33%) e uma porcentagem significativa de resultados falsos negativos na confirmação cultural (53,85%). Os resultados indicaram que, a pesquisa de Cronobacter spp (Enterobacter sakazakii) em produtos destinados à alimentação de recém nascidos, deve ser feito com unidade analítica de pelo menos 500g, preferencialmente maior, porque a contagem encontrada nas amostras positivas foi muito baixa / Abstract: Cronobacter spp (Enterobacter sakazakii) is an opportunist pathogenic bacterium, which has been associated to outbreaks and sporadically cases of meningitis, necrotizing enterocolitis and sepses in newborns. In 2008, strains of this species was divided in some new species and transferred to the new genus Cronobacter spp. One of the most recent method used to determine the microorganisms is ISO 22964 (2006), that includes two stages of enrichment, isolation of typical colonies (positive a- glycosidase) in the differential media selective ESIA (Enterobacter sakazakii Isolation Agar) and biochemical tests for confirmation. However, it already exists alternative and rapid methods for the isolation of Cronobacter spp (Enterobacter sakazakii), which were the aim of this study. For this, 83 samples were analyzed using the Polymerase Chain Reaction method (PCR) by BAX® System (DuPont Qualicon), in comparison with ISO/TS 22964:2006 method. Two differential selective media were used to isolation of typical colonies: Agar of Isolation for E. sakazakii (ESIA) and Agar Druggan-Forsythe-Iversen (DFI). Cronobacter spp (Enterobacter sakazakii) was isolated in 13.25% of the analyzed samples being more frequent in bean (designated to prepare soy base drink), powered milk and corn flour samples. In powered infantile formula, 6% of the samples were contaminated. The analytical unit of 25g was not adequate for the isolation this microorganism, where the count detected in the positive samples (analytical unit of 500g) was very low (among of <0.22 and >1,61MPN/100g). In 27% of positive samples, Cronobacter spp (Enterobacter sakazakii) was only isolated from atypical colonies (alpha-glycosidase negative) in ESIA and/or DFI. Nine per cent (9%) of the strains isolated from samples did not show yellow pigment in the TSA. Results showed equivalent performance of both ESIA and DFI medias, following the of ISO/TS 22964 (2006) assay protocol. The PCR method (BAX® System) showed lower performance when compared with ISO/TS 22964 (2006) method. A high percentage of false positive results (73.33%) and a significant percentage of false negative results in the cultural confirmation (53.85%) were observed with PCR method. The results indicated that the research of Cronobacter spp (Enterobacter sakazakii) in products destined to the feeding of just born, must be made with analytical unit of at least 500g (or major quantity) due to the counting found in the positive samples was very low / Doutorado / Ciência de Alimentos / Doutor em Ciência de Alimentos

Zugl.: Giessen, Universiẗat, Diss., 2008.

Zugl.: Giessen, Universiẗat, Diss., 2008.

Zugl.: Giessen, Univ., Diss., 2009

Enterobacter sakazakii has been associated with powdered infant formula outbreaks which caused high mortality rate illnesses in infants in recent years. Current research was mainly focused on searching for natural antimicrobial agents which may be incorporated into baby foods to control this emerging pathogen. Yogurt and muscadine products were used in this study. The antimicrobial effects of yogurt were evaluated on agar plates and in a simulated gastrointestinal model. In the agar spot tests, diluted yogurt sample containing lactic acid bacteria at 106 CFU/mL was antagonistic toward E. sakazakii. However, the antimicrobial effect of yogurt on E. sakazakii in the simulated GI model was not noted. Certain numbers of tested E. sakazakii and lactic acid bacteria in yogurt were able to survive the acidic gastric condition and recovered in the intestinal model. By measuring the viable E. sakazakii cells in liquid cultures, the strong antimicrobial activities of muscadine juices and muscadine seed extracts were demonstrated. Within two hours, all inoculated E. sakazakii at 106 CFU/mL were decreased to non-detectable level. Juice and seed extract from dark-skinned muscadine demonstrated stronger antimicrobial activities than those form white-skinned muscadine. The characteristics of muscadine juices and seed extracts were also analyzed. The high phenolics and organic acid contents, such as ellagic, gallic, tannic, and tartaric acids in muscadine were correlated to the inhibitory effect observed.