Orientador: Ana Liz Garcia Alves / Resumo: Os queratinócitos são células presentes na epiderme, constituída pelo epitélio estratificado pavimentoso queratinizado. Estas células organizam-se em camadas de diferentes estágios de maturação celular (camada basal ou germinativa, espinhosa, granulosa, lúcida e córnea) e tem a função de revestimento desses tecidos. Diversos estudos buscam elucidar e caracterizar tecidos hígidos de origem epitelial, como pele, olhos e casco, para que possam identificar os mecanismos de desenvolvimento de enfermidades nesses tecidos. O casco equino é formado por epiderme em diferentes estágios de queratinização, subdivididos em estrato externo ou parede do casco, estrato médio e estrato interno, nesse último estão localizadas as lâminas epidermais primárias (LEP) e secundárias (LES) onde os queratinócitos estão presentes junto a membrana basal (transição de epiderme e derme, junção que faz a adesão do casco com a falange distal). É notória a importância do casco na saúde dos equinos, mas o conhecimento em nível celular é pouco entendido. Estudos envolvendo o cultivo de queratinócitos equinos são escassos. Sabe-se que o desenvolvimento de cultivos de queratinócitos in vitro é uma condição para estudos sobre a biologia molecular, crescimento e diferenciação celular. Alguns métodos já estão estabelecidos, como para cultivo de queratinócitos de pele, mas poucas metodologias são encontradas para queratinócitos lamelares. O objetivo desse estudo, foi padronizar o cultivo de queratinócitos provenient... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The keratinocytes are cells presented in the epidermis, constituted by the stratified keratinized squamous epithelium. These cells organized in layers of different stages of cell maturation (basal or germinative, prickly, granular, lucid and corneal layers) and have a tissue coating function. Several studies seek to elucidate and characterize healthy tissues of epithelial origin, such as skin, eyes and hoof, so that they can identify the mechanisms of development of diseases in these tissues. The equine hoof is composed of epidermis at different stages of keratinization, subdivided into external stratum, middle stratum and internal stratum, in which the primary epidermal lamellae (PEL) and secondary epidermal (SEL) are located and where keratinocytes are present along the basement membrane (Transition of the epidermis and dermis, which joins the hoof to the distal phalanx). It is evident the importance of the hoof health of horses, but the knowledge at the cellular level is poorly understood. Studies involving the culture of equine keratinocytes are scarce. The development of keratinocyte cultures in vitro is a condition for studies on molecular biology, cell growth and differentiation. Some methods are already established, such as for culture of skin keratinocytes, but few methodologies are found for lamellar keratinocytes. The aim of this study was to standardize the cultivation of keratinocytes from equine hoof, aiming future associate with the study of regenerative medici... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2016-01-20T13:43:03Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Bruno Moraes Assis - 2015.pdf: 6677163 bytes, checksum: a2704584ebce8e9d25969d79a0fc639e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-01-21T07:11:50Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Bruno Moraes Assis - 2015.pdf: 6677163 bytes, checksum: a2704584ebce8e9d25969d79a0fc639e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-21T07:11:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Bruno Moraes Assis - 2015.pdf: 6677163 bytes, checksum: a2704584ebce8e9d25969d79a0fc639e (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-10-29 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Despite not being a common subject of studies about buffalo, the incidence of hulls diseases has important scientific aspects as these animals, as they are breeded in adverse conditions, have different resistance for the occurrence of podais diseases when compared to cattle, especially dairy cattle. The knowledge about microstructural structures of buffalo’s hoof generated important information for understanding of the intrinsic resistance of buffaloes foot diseases. This study aimed to investigate the microstructure of adult Jafarabadi buffaloes, through histomorphometric ratings, two-dimensional microtomography, three-dimensional, nanohardness test and biochemical composition. Histomorphometric ratings revealed important features not yet investigated by other researchers, highlighting the structural behavior of epidermal papillae in different regions of corneal layer, the morphology and disposition of the horn tubules, the architecture of extratubular and intratubular keratin and even organization of melanosomes . It was observed that the average length of buds, thickness and spacing in pelvic and thoracic digit did not show statistically significant differences. However, an increase in thickness of the laminar corium papillae of the wall and spacing was observed when comparing the average of the coronary corium and wall and sole laminar corium. When compared to the findings of other researchers, this study have shown that the epidermal papillae on the hulls of these animals are presented larger than the epidermal papillae of Holstein and Gir animals, suggesting that the buffalo’s has greater keratin production and better epidermis and horny case fixing. It can be conjectured that such characteristics are associate with greater resistance to foot diseases of this animals, although additional studies are needed. Analysis of microtomography and nanohardness test showed increased medial digit of forelimbs and side-digit of hindlimbs exhibit increased horn tubules with larger diameters. But the abaxial wall of forelimbs digit showed higher values than hindlimbs digit. Even there was not significant difference between the digits analyzed, this study could clarify important aspects of the nanohardness of different regions of the corneal case of buffalo’s digits. 3D microtomography analysis revealed that the dorsal wall presents a greater hardness compared to the abaxial wall of intermediate hardness, and with the sole of the hoof, that showed the lowest hardness among the evaluated areas. It was inferred that tridimensional microtomography testing is more specific than Vickers nanohardness test for this structure. However, further research are required. Biochemical tests generated parameters about structural elements of the corneal case, which showed different concentrations in relation to the region and anatomical position of the hull. These differences are related to the digits wich recive higher load of body weight and impact. This study generated knowledge and parameters to be used in further researches on different bovine species and breeds. / As enfermidades de cascos, apesar de ser alvo de poucos estudos na espécie bubalina, apresentam aspectos científicos importantes uma vez que estes animais, mesmo criados em condições adversas, apresentam resistência diferenciada quanto à ocorrência de doenças podais, quando comparados aos bovinos, com destaque para os de aptidão leiteira. Acredita-se que o conhecimento microestrutural do casco de bubalinos gerou informações importantes para melhor entendimento da resistência podal intrínseca dos bubalinos às enfermidades podais. O presente estudo teve por finalidade pesquisar a microestrutura do estojo córneo de búfalas adultas, raça Jafarabadi, por meio de avaliações histomorfométricas, microtomografia bidimensional, tridimensional, teste de nanodureza e composição bioquímica. As avaliações histomorfométricas em bubalinos revelaram características importantes ainda não investigadas por outros pesquisadores, destacando o comportamento estrutural das papilas epidérmicas nas diferentes regiões do estojo córneo, a morfologia e disposição dos túbulos córneos, a arquitetura da queratina extratubular e intratubular e ainda organização dos melanossomas. Pode-se observar nessas avaliações que as médias de comprimento das papilas, espessura e espaçamento nos dígitos dos membros pélvicos e torácicos não apresentaram diferenças estatísticas significativas entre si. Todavia, ao comparar as médias do córion coronário, córion laminar da muralha e sola, observou-se entre as regiões do estojo córneo, um aumento da espessura das papilas do córion laminar da muralha e do espaçamento comparando-se as demais regiões. Os achados dessa pesquisa quando comparados aos achados de outros pesquisadores, demonstraram que as papilas epidérmicas nos cascos desses animais, apresentam-se maiores que as papilas epidérmicas de bovinos das raças, Holandesa e Gir, sugerindo que possuem maior capacidade de produção de queratina e melhor fixação da epiderme ao estojo córneo. Contudo, pôde-se conjecturar tais características com a maior resistência desses animais as enfermidades podais, embora haja a necessidade de estudos adicionais. Por meio das análises de microtomografia e teste de nanodureza, pode-se verificar que os dígitos mediais dos membros torácicos e os dígitos laterais dos membros pélvicos apresentaram maior quantidade de túbulos córneos com diâmetros maiores. Porém, a muralha abaxial dos dígitos dos membros torácicos apresentaram valores superiores aos dígitos dos membros pélvicos. Apesar de não ter sido observada diferença significativa entre os dígitos estudados, o presente estudo pôde esclarecer, ainda, aspectos importantes sobre a nanodureza das diferentes regiões do estojo córneo dos dígitos de bubalinos. A análise de microtomografia 3D revelou que a muralha dorsal apresenta maior dureza quando comparada com a muralha abaxial, de dureza intermediária, bem como, com a sola do casco, que apresentou menor dureza entre as regiões avaliadas. Inferiu-se assim que o teste de microtomografia tridimensional seja mais específico que o teste de nanodureza de Vickers para a estrutura considerada. No entanto, tal afirmação requer pesquisas adicionais. Os testes bioquímicos geraram parâmetros quanto aos elementos estruturais do estojo córneo, que demonstraram diferentes concentrações em relação à região e posição anatômica do casco, sendo essas diferenças associadas aos dígitos que recebem maior sobrecarga de massa corporal e impacto. O presente estudo gerou conhecimento e parâmetros a serem utilizados em outras investigações científicas, em outras espécies e raças de bovídeos.