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Produção de microestacas de clones híbridos de Eucalyptus spp. pela micropropagação / Micro- cuttings production of Eucalyptus spp. hybrid clones via micropropagation

Gallo, Ricardo 10 December 2014 (has links)
Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-12-01T10:00:40Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2074063 bytes, checksum: 134cb38743509c9477bb8007bd4e851c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-01T10:00:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2074063 bytes, checksum: 134cb38743509c9477bb8007bd4e851c (MD5) Previous issue date: 2014-12-10 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Este trabalho visou avaliar a produção de microestacas obtidas pela micropropagação de clones híbridos de Eucalyptus spp., tendo como objetivos específicos avaliar: 1) o efeito de doses de AIB e de coletas sucessivas de microestacas em tufos de gemas em multiplicação na micropropagação de clones híbridos de Eucalyptus grandis x E.urophylla e Eucalyptus urophylla x E. globulus; 2) a produção de microestacas em sistema de micropropagação via tufos de gemas axilares em um clone de Eucalyptus grandis x E. urophylla, em diferentes recipientes e substratos; 3) o efeito de trocas gasosas e concentrações de sacarose na produção de microestacas oriundas da micropropagação via proliferação de gemas axilares em Eucalyptus grandis x E. urophylla; e 4) a produção de microestacas em sistema de micropropagação via microcepas em um clone de Eucalyptus grandis x E. urophylla, considerando-se posições de origem das microcepas, densidades de microcepas, qualidades de luz e de substratos. O material experimental utilizado neste trabalho foi proveniente da fase de multiplicação in vitro de um clone de Eucalyptus grandis x E. urophylla e de um clone de Eucalyptus urophylla x E. globulus, com 25 e 72 subcultivos, respectivamente. Os experimentos in vitro foram conduzidos no Laboratório de Cultura de Tecidos II do Instituto de Biotecnologia Aplicada à Agropecuária (BIOAGRO), da Universidade Federal de Viçosa (UFV), localizado no município de Viçosa/MG, e os experimentos ex vitro foram conduzidos no Viveiro de Pesquisas do Departamento de Engenharia Florestal da UFV. Com base nos resultados obtidos, pode-se concluir que: 1) as microestacas in vitro apresentaram boa produção no decorrer das coletas sucessivas, bem como foram ajustados os níveis de AIB para cada clone, variando de 0,25 a 0,50 mg L-1 de AIB para o clone Eucalyptus grandis x E.urophylla e de 0,75 a 1,0 mg L-1 para o clone Eucalyptus urophylla x E. globulus; nas condições ex vitro, a dosagem de AIB apresentou efeito residual, proporcionando bom enraizamento e sobrevivência nas dosagens de 0,25 a 0,50 mg L-1 de AIB para o clone Eucalyptus grandis x E.urophylla e de 0,50 a 1,0 mg L-1 para o clone Eucalyptus urophylla x E. globulus; 2) o melhor recipiente para produção de brotos maiores que 0,5 cm, bem como microestacas maiores que 2 cm, é o pote de polipropileno (500 mL); no entanto, quando se deseja maior produção por m 2, o frasco de vidro (250 mL) é mais vantajoso diante da melhor possibilidade de adensamento; os melhores substratos para produção de brotos maiores que 0,5 cm, bem como microestacas maiores que 2 cm, utilizando o recipiente Agripot ®, são o ágar ou a vermiculita; 3) a redução para 15 g L-1 de sacarose apresenta os melhores resultados; o sistema com troca gasosa atua negativamente no comprimento da maior microestaca; os tratamentos realizados in vitro apresentam efeito residual ex vitro, melhorando a sobrevivência das mudas durante todo seu processo de formação; 4) as microcepas oriundas de segmentos nodais basais de microestacas proporcionaram maior número de brotos bem como maior enraizamento; a densidade de três ou quatro microcepas por recipiente proporcionou os melhores resultados, e a iluminação 4 LEDs proporcionou maior vigor para as microestacas; o uso de ágar ou vermiculita apresentou as maiores médias para as características analisadas, porém o uso de ágar proporcionou baixas porcentagens de enraizamento. / This paper aimed to evaluate the micro-cuttings production obtained by the micropropagation of Eucalyptus spp. hybrid clones, with the following evaluations as specific objectives: 1) effect of IBA doses and successive collections of micro- cuttings on bud stumps in the micropropagation of Eucalyptus grandis x E.urophylla and Eucalyptus urophylla x E. globulus hybrid clones; 2) micro-cuttings productivity in micropropagation system via stumps of axillary buds in a Eucalyptus grandis x E. urophylla clone, in different types of containers and substrates; 3) effect of gas exchange and sucrose concentrations on the micro-cuttings productivity in micropropagation system via axillary bud proliferation in Eucalyptus grandis x E. urophylla; and 4) micro-cuttings productivity in micropropagation system via micro- stumps on Eucalyptus grandis x E. urophylla clone, considering micro-stumps origin position, micro-stumps density, light quality and substrates. The experimental material used in this work derived from the in vitro multiplication phase of one Eucalyptus grandis x E. urophylla clone and one Eucalyptus urophylla x E. globulus clone, with 25 and 72 subcultures, respectively. The experiments were carried out at the Plant Tissue Laboratory, Institute of Biotechnology Applied to Agriculture (BIOAGRO), Federal University of Viçosa, Viçosa/MG. Based on the results it may be concluded that: 1) in vitro, micro-cutting showed high yield after successive harvesting, as well as the IBA levels for each clone were adjusted, varying from 0.25 to 0.50 mg L-1 of IBA in the Eucalyptus grandis x E.urophylla clone, from 0.25 to 0.50 mg L-1 in the Eucalyptus grandis x E.urophylla clone, and from 0.75 to 1,0 mg L-1in the Eucalyptus urophylla x E. globulusclone; in ex vitro conditions the IBA dosage showed residual effect providing high rooting and survival, as well as other morphological parameters in dosages from 0.25 to 0.50 mg L-1in Eucalyptus grandis x E.urophylla clone, and from 0.50 to 1.0 mg L-1 in Eucalyptus grandis x E.urophylla clone; 2) the polypropylene pot (500 mL) was the best container for production of shoots higher than 0.5 cm, as well as micro-cuttings larger than 2 cm, however, for increase the productivity per m2, the glass flask (250 mL) are more favorable due to the best fit on the shelves. The agar and vermiculite were the best substrates for production of shoots higher than 0.5 cm, as well as micro-cuttings larger than 2 cm, using the container Agripot TM; 3) the reduction to 15 g L-1 sucrose provides the best results; the gas exchange system acts negatively on the length of the highest micro- cutting; and in vitro, treatments showed ex vitro residual effect, actively acting in the plantlets survival throughout their development process; 4) The micro-stumps originated from micro-cuttings basal nodal segments provide more shoots and roots; the density of three or four micro-stumps per container provided the best results and the 4 LEDs lighting provided more vigorous micro-cuttings; the use of agar or vermiculite showed the highest means for the evaluated parameters, however, the use of agar provided low rooting percentages.
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Jardim clonal in vitro na propagação vegetativa de Eucalyptus spp / In vitro clonal hedge in the vegetative propagation of Eucalyptus spp

Miranda, Natane Amaral 29 May 2018 (has links)
Submitted by MARCOS LEANDRO TEIXEIRA DE OLIVEIRA (marcosteixeira@ufv.br) on 2018-07-18T13:40:10Z No. of bitstreams: 1 textocompleto.pdf: 815433 bytes, checksum: a7fe6800581639d84e207a5794f98508 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-18T13:40:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 textocompleto.pdf: 815433 bytes, checksum: a7fe6800581639d84e207a5794f98508 (MD5) Previous issue date: 2018-05-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O sucesso da produtividade nos plantios de Eucalyptus no Brasil tem sido função da combinação de diversos fatores, entre os quais encontra-se os avanços das tecnologias da propagação clonal. A produção de miniestacas a partir do minijardim clonal em viveiro é a principal metodologia adotada para produção de mudas de Eucalyptus, com avanços importantes em produtividade, controle ambiental e fitossanitário; no entanto, ainda com algumas limitações e desafios. Como alternativas, a micropropagação tem sido considerada como promissora na produção de mudas clonais, havendo porém, limitações à sua adoção, como a necessidade de estrutura física e operacional de um laboratório, e de protocolos ajustados para cada material vegetal. Assim, objetiva-se nesse trabalho verificar a viabilidade de um jardim clonal in vitro por meio da avaliação de diferentes composições de substratos, tipos e tamanhos de recipientes, formas de vedação, concentrações de sacarose e diferentes intensidades e qualidade de luz. Avaliou-se em dez genótipos de Eucalyptus, diferentes tipos de recipientes e substratos. O recipiente frasco de vidro de 250 mL de capacidade permitiu melhor crescimento das plantas. O ágar e a vermiculita foram os substratos que possibilitaram melhor crescimento in vitro. Além das diferenças observadas entre substratos e recipientes, constatou-se efeito do fator genético sobre as características, o que possibilita a seleção de clones para propagação sob as condições avaliadas. Para estabelecimento de jardim clonal in vitro, sob condições que estimulam o comportamento fotoautotrófico, testou-se a ausência e presença de membranas para trocas gasosas, bem como diferentes concentrações de sacarose na formação inicial da microcepa. A sacarose foi importante, inicialmente, com resultados crescentes para todas as características com o uso de concentrações até 20 g L -1 , exceto para número de estacas obtidas aos 150 dias. A presença de membranas para maiores trocas gasosas nos frascos permitiu melhor crescimento das microestacas, tanto in vitro quanto ex vitro. Fontes luminosas fluorescentes e LED proporcionaram crescimento de microestacas in vitro, apresentando diferenças para algumas características analisadas. Em relação à intensidade luminosa, não foi observada diferença no crescimento das microcepas. O jardim clonal in vitro apresentou maior produtividade por área de microestacas comparativamente ao sistema convencional de produção de miniestacas no minijardim clonal, sendo as taxas de enraizamento e sobrevivência semelhantes nos dois sistemas. No entanto, acompanhamento em diferentes estações do ano, padrões de minijardins clonais, avaliações com diferentes genótipos (clones), assim como viabilidade técnica, operacional e econômica devem ser realizadas / The production of mini-cuttings from mini-clonal hedge in nursery stage is the most adopted methodology for the production of Eucalyptus plantlets, with important advances in productivity and environmental and phytosanitary control; however, there is still some limitations and difficulties. As an alternative, micropropagation has been considered promising in the production of clonal plantlets, but there are limitations to its adoption, such as the need for a physical and operational structure of a laboratory, and protocols to be adjusted for each species. The objective of this work was to verify the efficiency of an in vitro clonal hedge through the evaluation of different substrates compositions, types of vessels, forms of sealing, sucrose concentrations and different light intensities and quality. For this, ten Eucalyptus genotypes, different types of vessels and substrates were evaluated. As a result, the vessel that allowed the best plant growth was the 250 mL glass flask. For the substrate, agar and vermiculite enabled better in vitro growth of the plants. In addition to the differences observed among substrates and vessels, genetic control of the characteristics was also verified, which allows the selection of clones for propagation under those conditions. For the establishment of an in vitro clonal hedge, under conditions that stimulate photoautotrophy, the absence and presence of membranes that allow gas exchange, as well as different sucrose concentrations in the initial formation of micro-stumps were tested. Sucrose was important initially, and increasing results were observed with the use of concentrations up to 20 g L -1 for all characteristics except for number of cuttings obtained at 150 days. The presence of membranes that allow higher gas exchange led to a better development of the micro-cuttings both in vitro and ex vitro. Fluorescent and LED lights provided good plant development, showing differences for some characteristics analyzed. Regarding the intensity, no difference was observed in the development of micro-stumps. When comparing the mini-cutting/micro-cutting production, the conventional mini-clonal hedge system and the in vitro clonal hedge system show higher productivity per area in the in vitro clonal hedge, with rooting and survival rates being similar in both systems. However, monitoring in different seasons of the year, establishment of patterns of mini-clonal hedge, evaluations with different genotypes (clones), as well as technical, operational and economic viability should be performed
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Indução de embriões somáticos em Eucalyptus spp / Induction of somatic embryos in Eucalyptus spp

Moura, Luciana Coelho de 27 September 2016 (has links)
Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-01-04T16:13:07Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2270833 bytes, checksum: 96aab99f6b70bd80954147ae97d70a12 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-04T16:13:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2270833 bytes, checksum: 96aab99f6b70bd80954147ae97d70a12 (MD5) Previous issue date: 2016-09-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo do presente estudo foi determinar o conjunto de fatores que interferem nos estágios iniciais da embriogênese somática de Eucalyptus, tendo por base os seguintes objetivos específicos: 1) verificar o efeito de tipos de explantes, tipos e concentrações de auxinas na indução; tipos de meio de cultura e concentrações de auxina na proliferação de embriões somáticos em explantes juvenis de Eucalyptus grandis x E. urophylla; 2) verificar o efeito de concentrações e fontes de cálcio; concentrações e tempo de efeito de citocinina e poliamina, na indução e desenvolvimento de embriões somáticos em explantes juvenis de Eucalyptus grandis x E . urophylla; 3) verificar o efeito do pulso de auxina em diferentes estágios de desenvolvimento de embriões somáticos em explantes juvenis de Eucalyptus grandis x E . urophylla; 4) estimar a correlação genética entre as características de indução de embriões somáticos, além de estudar o controle genético relacionado às mesmas a fim de averiguar sua utilidade na seleção de genótipos com competência embriogênica de clones híbridos de Eucalyptus. A indução de pró-embriões somáticos de Eucalyptus grandis x E. urophylla pode ser obtida utilizando sementes ou cotilédones como fonte de explantes, e dicamba e picloram como reguladores de crescimento adicionados ao meio de cultura. Para a obtenção de médias mais altas no porcentual de indução de pró-embriões somáticos deve-se utilizar picloram e cotilédones como fontes de explantes. Para a proliferação de pró-embriões somáticos secundários, pode-se utilizar meio de cultura líquido adicionado de picloram. O meio de cultura JADS proporcionou maior calogênese em explantes cotiledonares de Eucalyptus grandis x E. urophylla, quando comparado ao meio de cultura MS. A adição de 28,36 μM de putrescina ao meio de cultura proporcionou maior porcentual de indução de embriogênese somática nesses mesmos explantes. O número de pró-embriões somáticos formados por explante foi superior quando se acrescentou BAP e principalmente putrescina ao meio de cultura se comparado com o meio contendo somente picloram. Acréscimos na concentração de cálcio nos meios MS e JADS não proporcionam melhorias no que se refere à indução de embriogênese somática. Tratamentos com pulso da auxina picloram (207,02 μM) podem ser utilizados como fonte de estresse inicial para aquisição da competência embriogênica em explantes cotiledonares em Eucalyptus grandis x E. urophylla. A indução média de calos embriogênicos foi superior no intervalo de dois dias de pulso de auxina, em relação aos outros dois intervalos testados tanto aos 30 dias, como aos 37 e 44 dias de avaliação. A oxidação dos explantes, quando colocados em meio de indução, pode ser considerada um indício de formação de calos embriogênicos. A presença de pectinas em regiões periféricas de pró-embriões somáticos pode ser vista como marcador de embriogênese somática em explantes cotiledoneres de Eucalyptus gradis x E. urophylla. A característica porcentual de pró-embriões somáticos apresenta controle genético. A correlação genética alta e positiva entre calogênese em média intensidade e indução de pró-embriões somáticos indica que a seleção para a primeira característica resulta em consistentes respostas na segunda. Os híbridos triplos utilizados no presente estudo apresentaram maiores valores genéticos para porcentual de indução de pró- embriões somáticos, quando comparados aos demais híbridos estudados, indicando maior facilidade na indução de embriogênese somática para essa espécie. / The objective of this study was to determine the set of factors that interfere in the early stages of somatic embryogenesis of Eucalyptus, and by the following specific objectives based on: 1) verify the effect of explants types, types and concentrations of auxin in the induction; types of culture media and auxin concentrations on the proliferation of somatic embryos in juvenile explants of Eucalyptus grandis x E. urophylla; 2) verify the effect of concentrations and sources of calcium; and cytokinin and polyamine concentrations and effect of time, in the induction and development of somatic embryos in juvenile explants of Eucalyptus grandis x E. urophylla; 3) verify the effect of auxin pulse at different stages of development of embryos in juvenile explants of Eucalyptus grandis x E. urophylla; 4) estimate the genetic correlation between the somatic embryo induction characteristics, in addition to studying the genetic control related to them to ascertain its usefulness in the selection of genotypes with embryogenic competence of hybrid clones of Eucalyptus. The induction of somatic pro-embryos of Eucalyptus grandis x E. urophylla. can be obtained using cotyledon or seed as a source of explants, dicamba and picloram as growth regulators added to the culture medium. However, to obtain higher means the percentage of somatic pro-embryos induction should be used picloram and cotyledon as source of explants. For the proliferation of secondary somatic pro-embryos may be used a liquid culture medium added picloram. The JADS culture medium showed higher callus formation in cotyledon explants of Eucalyptus grandis x E. urophylla when compared to MS medium. Addition of 28.36 μM of putrescine to the culture medium provided a higher percentage of somatic embryogenesis induction in these same explants. The number of somatic pro-embryos formed per explant was higher when added BAP and mainly putrescine to the culture medium compared to medium containing only picloram. Increases in calcium concentration in the MS and JADS media does not provide improvements with regard to the induction of somatic embryogenesis. Treatments with pulse auxin picloram (207.02 μM) can be used as a source of initial stress for the acquisition of embryogenic competence in cotyledons and Eucalyptus grandis x E. urophylla. The average of embryogenic callus induction was better in the interval of two days auxin pulse of the two other ranges tested both after 30 days and after 37 and 44 days of assessment. Oxidation of the explants, when placed on induction medium, can be considered a sign of formation of embryogenic callus. The presence of pectin in peripheral regions of somatic pro-embryos can be seen as a marker of somatic embryogenesis in cotyledon explants of Eucalyptus grandis x E. urophylla. The characteristic percentage of somatic pro-embryos has genetic control. High and positive genetic correlation between callus formation in average intensity and somatic pro-embryos induction indicates that selection for the first feature should lead to consistent responses in the second. Tree-cross hybrids used in this study showed higher genetic values of somatic pro-embryos induction when compared to other hybrids studied, indicating greater ease in inducing somatic embryogenesis in this species.

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