Estudos recentes têm demonstrado uma participação importante do receptor toll-like 4 (TLR4) na evolução de doenças envolvendo desordens metabólicas, como a doença do fígado gorduroso não-alcoólico (NAFLD). No entanto, as alterações do metabolismo lipídico que poderiam ser influenciadas pela ativação do TLR4 são desconhecidas. Neste estudo propomos caracterizar o papel do receptor TLR4 no metabolismo de lipídios no fígado de camundongos deficientes para o receptor de LDL, um modelo que desenvolve NAFLD quando submetido a uma dieta rica em gordura saturada e colesterol. Camundongos controle (C57 black6), deficientes para o receptor de LDL (LDLrKO), deficientes para o receptor TLR4 (TLR4KO) ou deficientes para ambos (duplo KO) receberam dieta controle ou hiperlipídica por quatro, oito ou doze semanas. Após o tratamento e sacrifício dos animais, avaliamos o perfil de lipídios plasmáticos, o conteúdo de lipídios do fígado e a expressão gênica de enzimas relacionadas à síntese e degradação de triglicerídeos (TG) e colesterol no fígado. O perfil inflamatório no fígado também foi avaliado. A dieta hiperlipídica induziu uma hipertrigliceridemia e hipercolesterolemia nos animais LDLr KO e duplo KO, sendo que o grupo duplo KO apresentou níveis séricos inferiores de triglicérides (TG) e ácidos graxos livres a partir de oito semanas de tratamento em comparação aos animais LDLrKO. A dieta hiperlipídica também induziu um aumento significativo no conteúdo de TG e de colesterol no fígado de todos os grupos. Na análise da expressão gênica não foram encontradas diferenças na expressão de proteínas relacionadas à síntese de triglicérides e colesterol (ApoB100, MTTP, GPAT1 e GPAT4) entre os grupos. Porém houve aumento significativo na expressão de proteínas relacionadas à oxidação de ácidos graxos (CPT1, MTP, ACOX, PBE, tiolase) e à síntese de ácidos biliares (CYP7a1) no grupo duplo KO em comparação ao grupo LDLr KO. No perfil inflamatório, a expressão de F4/80 demonstrou infiltração de macrófagos significativamente elevada no grupo LDLrKO tratado com a dieta hiperlipídica comparada a todos os outros grupos. No entanto, houve maior expressão de IL-6, IL-1beta e TNF-alfa no grupo duplo KO em comparação ao grupo LDLr KO. Nossos dados sugerem que a ativação do TLR4 no fígado de animais alimentados com uma dieta hiperlipídica pode contribuir para o acúmulo de lipídios e início da esteatose hepática. Estratégias para a inativação hepática do TLR4 podem diminuir a NAFLD não somente devido a diminuição da inflamação, mas por aumentar a oxidação de ácidos graxos no fígado / Recent studies have shown an important role of toll-like receptor 4 (TLR4) in the evolution of diseases involving metabolic disorders, such as non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). However, changes in lipid metabolism regulated by TLR4 activation are still unknown. In this study, we characterized the role of TLR4 receptor in hepatic lipid metabolism of mice deficient for the LDL receptor, a model that develops NAFLD when exposed to a diet rich in saturated fat and cholesterol. We investigated the role of TLR4 activation in the pathogenesis of diet-induced NAFLD by crossing LDLr KO mice with the TLR4 knockout mice (double KO). Animals were fed for 4, 8 or 12 weeks with high-fat diet (HFD) containing 18% saturated fat and 1.25% cholesterol. We evaluated plasma lipid profile, hepatic lipid content and gene expression of enzymes related to the synthesis and degradation of triglycerides and cholesterol in the liver. Liver inflammatory status was also investigated. We observed that HFD induced hypertriglyceri-demia and hypercholesterolemia in LDLr KO and double KO mice, but double KO animals presented lower serum levels of triglycerides and free fatty acids after eight weeks of treatment. HFD also induced a significant increase in liver contents of triglycerides (TG) and of cholesterol in all groups. We did not find differences in the expression of proteins related to triglycerides and cholesterol synthesis (ApoB100, MTTP, GPAT1, GPAT4) between the groups. However, we observed a significant increase in the expression of proteins related to fatty acid oxidation (CPT1, MTP, ACOX, PBE, tiolase ) and bile acid synthesis (CYP7a1) in double KO group in comparison to LDLr KO. Regarding the inflammatory process, F4/80 expression was elevated in LDLr KO mice fed HFD when compared to all groups. On the other hand, IL-6, IL-1beta e TNF-alfa expression was induced by HFD only in double KO mice. Taken together, our results show that TLR4 activation in liver from mice fed on a high-fat diet may contribute to lipid accumulation and steatosis onset. Strategies regarding localized TLR4 inactivation may increase the oxidation of fatty acids and improve NAFLD not only due to decreased inflammation

Estudos recentes têm demonstrado uma participação importante do receptor toll-like 4 (TLR4) na evolução de doenças envolvendo desordens metabólicas, como a doença do fígado gorduroso não-alcoólico (NAFLD). No entanto, as alterações do metabolismo lipídico que poderiam ser influenciadas pela ativação do TLR4 são desconhecidas. Neste estudo propomos caracterizar o papel do receptor TLR4 no metabolismo de lipídios no fígado de camundongos deficientes para o receptor de LDL, um modelo que desenvolve NAFLD quando submetido a uma dieta rica em gordura saturada e colesterol. Camundongos controle (C57 black6), deficientes para o receptor de LDL (LDLrKO), deficientes para o receptor TLR4 (TLR4KO) ou deficientes para ambos (duplo KO) receberam dieta controle ou hiperlipídica por quatro, oito ou doze semanas. Após o tratamento e sacrifício dos animais, avaliamos o perfil de lipídios plasmáticos, o conteúdo de lipídios do fígado e a expressão gênica de enzimas relacionadas à síntese e degradação de triglicerídeos (TG) e colesterol no fígado. O perfil inflamatório no fígado também foi avaliado. A dieta hiperlipídica induziu uma hipertrigliceridemia e hipercolesterolemia nos animais LDLr KO e duplo KO, sendo que o grupo duplo KO apresentou níveis séricos inferiores de triglicérides (TG) e ácidos graxos livres a partir de oito semanas de tratamento em comparação aos animais LDLrKO. A dieta hiperlipídica também induziu um aumento significativo no conteúdo de TG e de colesterol no fígado de todos os grupos. Na análise da expressão gênica não foram encontradas diferenças na expressão de proteínas relacionadas à síntese de triglicérides e colesterol (ApoB100, MTTP, GPAT1 e GPAT4) entre os grupos. Porém houve aumento significativo na expressão de proteínas relacionadas à oxidação de ácidos graxos (CPT1, MTP, ACOX, PBE, tiolase) e à síntese de ácidos biliares (CYP7a1) no grupo duplo KO em comparação ao grupo LDLr KO. No perfil inflamatório, a expressão de F4/80 demonstrou infiltração de macrófagos significativamente elevada no grupo LDLrKO tratado com a dieta hiperlipídica comparada a todos os outros grupos. No entanto, houve maior expressão de IL-6, IL-1beta e TNF-alfa no grupo duplo KO em comparação ao grupo LDLr KO. Nossos dados sugerem que a ativação do TLR4 no fígado de animais alimentados com uma dieta hiperlipídica pode contribuir para o acúmulo de lipídios e início da esteatose hepática. Estratégias para a inativação hepática do TLR4 podem diminuir a NAFLD não somente devido a diminuição da inflamação, mas por aumentar a oxidação de ácidos graxos no fígado / Recent studies have shown an important role of toll-like receptor 4 (TLR4) in the evolution of diseases involving metabolic disorders, such as non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). However, changes in lipid metabolism regulated by TLR4 activation are still unknown. In this study, we characterized the role of TLR4 receptor in hepatic lipid metabolism of mice deficient for the LDL receptor, a model that develops NAFLD when exposed to a diet rich in saturated fat and cholesterol. We investigated the role of TLR4 activation in the pathogenesis of diet-induced NAFLD by crossing LDLr KO mice with the TLR4 knockout mice (double KO). Animals were fed for 4, 8 or 12 weeks with high-fat diet (HFD) containing 18% saturated fat and 1.25% cholesterol. We evaluated plasma lipid profile, hepatic lipid content and gene expression of enzymes related to the synthesis and degradation of triglycerides and cholesterol in the liver. Liver inflammatory status was also investigated. We observed that HFD induced hypertriglyceri-demia and hypercholesterolemia in LDLr KO and double KO mice, but double KO animals presented lower serum levels of triglycerides and free fatty acids after eight weeks of treatment. HFD also induced a significant increase in liver contents of triglycerides (TG) and of cholesterol in all groups. We did not find differences in the expression of proteins related to triglycerides and cholesterol synthesis (ApoB100, MTTP, GPAT1, GPAT4) between the groups. However, we observed a significant increase in the expression of proteins related to fatty acid oxidation (CPT1, MTP, ACOX, PBE, tiolase ) and bile acid synthesis (CYP7a1) in double KO group in comparison to LDLr KO. Regarding the inflammatory process, F4/80 expression was elevated in LDLr KO mice fed HFD when compared to all groups. On the other hand, IL-6, IL-1beta e TNF-alfa expression was induced by HFD only in double KO mice. Taken together, our results show that TLR4 activation in liver from mice fed on a high-fat diet may contribute to lipid accumulation and steatosis onset. Strategies regarding localized TLR4 inactivation may increase the oxidation of fatty acids and improve NAFLD not only due to decreased inflammation

Introdução: A incidência de obesidade é crescente e alarmante, principalmente no mundo ocidental. De acordo com o National Center for Health Statistics, cerca de 61% da população adulta nos Estados Unidos está acima do peso e 30% é obesa, sendo que 5 a 6% está classificada na faixa de obesidade Grau III. No Brasil, o Ministério da Saúde aponta que 32,9% dos brasileiros estão fora da faixa de peso ideal, e 4,8% dos homens e 11,7% das mulheres encaixam-se na faixa de obesidade Grau III. Devido a alta prevalência da Doença Hepática Gordurosa Não Alcoólica (DHGNA) em pacientes portadores de obesidade grave e os escassos conhecimentos acerca de sua evolução para doença crônica do fígado após cirurgias bariátricas, foram objetivos deste estudo avaliar os efeitos da cirurgia gastrorredutora com derivação intestinal em Y de Roux Cirurgia de Fobi-Capella) sobre DHGNA após 24 meses. Métodos: Dentre 40 pacientes com IMC > 40 kg/m2 submetidos à cirurgia bariátrica (cirurgia de Fobi-Capella) no período de 2001 a 2003, 18 pacientes foram seguidos por aproximadamente 24 meses (700 ± 42 dias) e incluídos no estudo, realizando-se exames laboratoriais, tais como enzimas hepáticas, perfil lipídico e glicêmico; e a biopsia hepática no perioperatório e 24 meses após a cirurgia. O diagnóstico histológico de DHGNA e Esteatohepatite Não Alcoólica (ENA) foi determinado segundo a classificação padronizada por meio da revisão pelo Pathology Committee of the NASH Clinical Research Network Americano, que designou e validou as características histológicas e um sistema de escore de atividade para DHGNA para estudos clínicos. esultados: O IMC médio inicial dos 18 pacientes foi de 51,7 ± 7 kg/m2 e na segunda biopsia, após 24 meses de seguimento foi de 32,3 ± 6 kg/m2, com excesso do índice de massa corpórea perdida de 72,56%. DHGNA foi constatada no exame histológico inicial em 100% dos pacientes, sendo steatohepatite em 67% (10 pacientes com escore de atividade da DHGNA maior ou igual a 5 e dois pacientes com escore 4 com algum grau de fibrose) e 33% com esteatose isolada. Dos pacientes com ENA, 8,3% apresentavam cirrose. Após cerca de 24 meses houve desaparecimento da esteatose em 89% e manutenção da esteatose Grau I em 11% (p < 0,001). Em relação à fibrose, observada inicialmente em 10 (55%) dos pacientes, somente 4 (22,22%) dos pacientes mantiveram algum grau de fibrose (p = 0,020). No que se refere ao infiltrado inflamatório, 78% mantiveram discreto infiltrado lobular (Grau I) não relacionado à degeneração gordurosa. A balonização hepatocelular desapareceu em 50% dos pacientes e manteve-se discreta (Grau I) em 50% (p < 0,001). Não houve diferença estatística no que se refere às aminotranferases no pré e pós-operatório tardio. Houve redução significativa dos lípides e glicemia em quase a totalidade dos pacientes. Conclusão: A correção da síndrome metabólica obtida pela acentuada perda de peso após cirurgia de Fobi-Capella promoveu melhora da esteatose, fibrose, e os escores de atividade da DHGNA menores que 5, respectivamente em 89%, 75% e 100%dos pacientes previamente portadores de DHGNA, não se observando efeito deletério na histologia hepática nesta série. / Background: The incidence of obesity is increasing in western countries at an alarming rate. The National Center for Health Statistics of United Stated estimated in adult population 61% the prevalence of overweight or obesity, and 30% has obesity, and 5 to 6% were classified in severe obesity. In Brazil, the Ministry of Health reported 32.9% the prevalence of overweight or obese in adult brazilian population, and severe obesity 4.8% were men and 11.7% were women. Although nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) has been proved very frequent among morbidly obese patients and the effect of weight loss after bariatric surgery in inflammation and fibrosis related NAFLD is still a matter of debate. The aim of this study was to evaluate the impact of Fobi-Capella surgery in NAFLD in a follow up of 24 months. Methods: Forty patients with body mass index (BMI) IMC > 40 kg/m2 were submitted to Roux-en-Y gastric bypass with intraoperatory liver biopsies between 2001 a 2003, and 18 patients were followed and selected to underwent a liver biopsies after 24 months (700 ± 42 days). Blood biochemical tests and liver histology were compared before and after weight loss. The histological diagnosis of Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) and Nonalcoholic steatohepatitis (NASH) was analyzed using the classification proposed by Pathology Committee of the NASH Clinical Research Network, which designed and validated a histological feature scoring system that address the characteristics of NASH lesions and a NAFLD activity score (NAS) for use in clinical trials. Eighteen patients with body mass index >40 kg/m2 submitted to Roux-n-Y gastric bypass were enrolled, and wedge liver biopsy was obtained at the operation. After 24 months, patients agreed to be submitted to a percutaneous liver biopsy. Results: The initial average BMI of 18 patientes were 51.7 ± 7 kg/m2. After following 24 months, average BMI was 32.3 ± 6 kg/m2. The average of percent excess body mass index loss was 72.56%. NAFLD was present in all 18 patients at the initial biopsy, NASH in 67% (10 patient had score of NAS ? 5 and two patients with score 4 had some degree of fibrosis) and 33% with steatosis only; 8.3% of patients with NASH has cirrhosis. After 24 months steatosis disappeared in 89% (p < 0,001) and fibrosis disappeared in 60% of the patients (p = 0.020). Hepatocellular ballooning disappeared in 50% (p < 0.001). A slight lobular inflammatory infiltrate remained in 78%, apparently unrelated to fatty degeneration. Since liver biochemical variables AST and ALT had been found within normal limits in 88% and 89%, respectively of patients at initial biopsy, no difference was found 24 months later (p = 1.000). Lipid profile and blood sugar plasma concentration were closer to normal in all patients after 24 months of follow up (p < 0.05). Conclusions: The improvement of metabolic syndrome related a severe obesity after sustained weight loss surgery promoted significant improvement in liver histology. The steatosis, fibrosis and NAS ? 5 were decreased in 89%, 75% and 100% of patients, respectively. None patient had progression of hepatic fibrosis in this series.

Introdução: A incidência de obesidade é crescente e alarmante, principalmente no mundo ocidental. De acordo com o National Center for Health Statistics, cerca de 61% da população adulta nos Estados Unidos está acima do peso e 30% é obesa, sendo que 5 a 6% está classificada na faixa de obesidade Grau III. No Brasil, o Ministério da Saúde aponta que 32,9% dos brasileiros estão fora da faixa de peso ideal, e 4,8% dos homens e 11,7% das mulheres encaixam-se na faixa de obesidade Grau III. Devido a alta prevalência da Doença Hepática Gordurosa Não Alcoólica (DHGNA) em pacientes portadores de obesidade grave e os escassos conhecimentos acerca de sua evolução para doença crônica do fígado após cirurgias bariátricas, foram objetivos deste estudo avaliar os efeitos da cirurgia gastrorredutora com derivação intestinal em Y de Roux Cirurgia de Fobi-Capella) sobre DHGNA após 24 meses. Métodos: Dentre 40 pacientes com IMC > 40 kg/m2 submetidos à cirurgia bariátrica (cirurgia de Fobi-Capella) no período de 2001 a 2003, 18 pacientes foram seguidos por aproximadamente 24 meses (700 ± 42 dias) e incluídos no estudo, realizando-se exames laboratoriais, tais como enzimas hepáticas, perfil lipídico e glicêmico; e a biopsia hepática no perioperatório e 24 meses após a cirurgia. O diagnóstico histológico de DHGNA e Esteatohepatite Não Alcoólica (ENA) foi determinado segundo a classificação padronizada por meio da revisão pelo Pathology Committee of the NASH Clinical Research Network Americano, que designou e validou as características histológicas e um sistema de escore de atividade para DHGNA para estudos clínicos. esultados: O IMC médio inicial dos 18 pacientes foi de 51,7 ± 7 kg/m2 e na segunda biopsia, após 24 meses de seguimento foi de 32,3 ± 6 kg/m2, com excesso do índice de massa corpórea perdida de 72,56%. DHGNA foi constatada no exame histológico inicial em 100% dos pacientes, sendo steatohepatite em 67% (10 pacientes com escore de atividade da DHGNA maior ou igual a 5 e dois pacientes com escore 4 com algum grau de fibrose) e 33% com esteatose isolada. Dos pacientes com ENA, 8,3% apresentavam cirrose. Após cerca de 24 meses houve desaparecimento da esteatose em 89% e manutenção da esteatose Grau I em 11% (p < 0,001). Em relação à fibrose, observada inicialmente em 10 (55%) dos pacientes, somente 4 (22,22%) dos pacientes mantiveram algum grau de fibrose (p = 0,020). No que se refere ao infiltrado inflamatório, 78% mantiveram discreto infiltrado lobular (Grau I) não relacionado à degeneração gordurosa. A balonização hepatocelular desapareceu em 50% dos pacientes e manteve-se discreta (Grau I) em 50% (p < 0,001). Não houve diferença estatística no que se refere às aminotranferases no pré e pós-operatório tardio. Houve redução significativa dos lípides e glicemia em quase a totalidade dos pacientes. Conclusão: A correção da síndrome metabólica obtida pela acentuada perda de peso após cirurgia de Fobi-Capella promoveu melhora da esteatose, fibrose, e os escores de atividade da DHGNA menores que 5, respectivamente em 89%, 75% e 100%dos pacientes previamente portadores de DHGNA, não se observando efeito deletério na histologia hepática nesta série. / Background: The incidence of obesity is increasing in western countries at an alarming rate. The National Center for Health Statistics of United Stated estimated in adult population 61% the prevalence of overweight or obesity, and 30% has obesity, and 5 to 6% were classified in severe obesity. In Brazil, the Ministry of Health reported 32.9% the prevalence of overweight or obese in adult brazilian population, and severe obesity 4.8% were men and 11.7% were women. Although nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) has been proved very frequent among morbidly obese patients and the effect of weight loss after bariatric surgery in inflammation and fibrosis related NAFLD is still a matter of debate. The aim of this study was to evaluate the impact of Fobi-Capella surgery in NAFLD in a follow up of 24 months. Methods: Forty patients with body mass index (BMI) IMC > 40 kg/m2 were submitted to Roux-en-Y gastric bypass with intraoperatory liver biopsies between 2001 a 2003, and 18 patients were followed and selected to underwent a liver biopsies after 24 months (700 ± 42 days). Blood biochemical tests and liver histology were compared before and after weight loss. The histological diagnosis of Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) and Nonalcoholic steatohepatitis (NASH) was analyzed using the classification proposed by Pathology Committee of the NASH Clinical Research Network, which designed and validated a histological feature scoring system that address the characteristics of NASH lesions and a NAFLD activity score (NAS) for use in clinical trials. Eighteen patients with body mass index >40 kg/m2 submitted to Roux-n-Y gastric bypass were enrolled, and wedge liver biopsy was obtained at the operation. After 24 months, patients agreed to be submitted to a percutaneous liver biopsy. Results: The initial average BMI of 18 patientes were 51.7 ± 7 kg/m2. After following 24 months, average BMI was 32.3 ± 6 kg/m2. The average of percent excess body mass index loss was 72.56%. NAFLD was present in all 18 patients at the initial biopsy, NASH in 67% (10 patient had score of NAS ? 5 and two patients with score 4 had some degree of fibrosis) and 33% with steatosis only; 8.3% of patients with NASH has cirrhosis. After 24 months steatosis disappeared in 89% (p < 0,001) and fibrosis disappeared in 60% of the patients (p = 0.020). Hepatocellular ballooning disappeared in 50% (p < 0.001). A slight lobular inflammatory infiltrate remained in 78%, apparently unrelated to fatty degeneration. Since liver biochemical variables AST and ALT had been found within normal limits in 88% and 89%, respectively of patients at initial biopsy, no difference was found 24 months later (p = 1.000). Lipid profile and blood sugar plasma concentration were closer to normal in all patients after 24 months of follow up (p < 0.05). Conclusions: The improvement of metabolic syndrome related a severe obesity after sustained weight loss surgery promoted significant improvement in liver histology. The steatosis, fibrosis and NAS ? 5 were decreased in 89%, 75% and 100% of patients, respectively. None patient had progression of hepatic fibrosis in this series.