Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-10-30T11:57:54Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Tese_ToxicidadeInvitroInvivo.pdf: 776314 bytes, checksum: 33f19517a288e14275d6fcf1fc1bc1be (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-10-30T13:38:57Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Tese_ToxicidadeInvitroInvivo.pdf: 776314 bytes, checksum: 33f19517a288e14275d6fcf1fc1bc1be (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-30T13:38:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Tese_ToxicidadeInvitroInvivo.pdf: 776314 bytes, checksum: 33f19517a288e14275d6fcf1fc1bc1be (MD5) Previous issue date: 2014 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O paracetamol (PAR) é um dos medicamentos de venda livre mais utilizado em todo o mundo. Entretanto, doses elevadas do PAR produzem toxicidade hepática e/ou renal. No intuito de minimizar a toxicidade do PAR e obter melhor atividade analgésica e anti-inflamatória, um estudo prévio realizou modificações na estrutura química do PAR por modelagem molecular, dando origem ao ortobenzamol (OBZ) – análogo do PAR. Assim, o OBZ foi sintetizado e avaliado em modelos de nocicepção e inflamação em animais. O estudo demonstrou atividade analgésica central do OBZ, com potência superior ao PAR. Além disso, nos testes de inflamação, essa droga apresentou inibição significativa no processo inflamatório. Entretanto, para que o OBZ possa ser considerado uma alternativa terapêutica nova e importante para o tratamento da dor e/ou da inflamação é necessário determinar sua toxicidade. Assim, este estudo objetivou avaliar a toxicidade in vitro e in vivo do OBZ e, compará-la com a do PAR. Para isso, a neurotoxicidade foi avaliada in vitro em culturas primárias de neurônios corticais, através de ensaios de viabilidade celular, determinação dos níveis de glutationa total e reduzida, assim como a possível capacidade neuroprotetora frente ao estresse oxidativo. Foram realizados estudos in vivo em camundongos, iniciados pela determinação da dose efetiva mediana (DE50) do PAR, a fim de compará-la com a do OBZ nos modelos de toxicidade estudados. Determinou-se o estresse oxidativo hepático e cerebral pela análise dos níveis de peroxidação lipídica e nitritos. A possível disfunção hepática e renal foi determinada, por meio da análise dos níveis plasmáticos das enzimas aspartato aminotransferase (AST), de alanina aminotransferase (ALT), gama glutamiltransferase (GGT) e, da creatinina no sangue. Avaliaram-se alterações nos parâmetros clínicos através do hemograma, leucograma e plaquetograma e, realizou-se a determinação da toxicidade aguda. Os resultados obtidos neste estudo demonstraram que o ortobenzamol é mais seguro que o paracetamol. Registrou-se ao ortobenzamol ausência de neurotoxicidade, menor potencial hepatotóxico e hematotóxico, ausência de nefrotoxicidade e, ainda, foi classificado como um xenobiótico de baixa toxicidade após a avaliação da toxicidade aguda. Portanto, o ortobenzamol pode ser considerado como uma futura alternativa terapêutica segura ao paracetamol, no tratamento da dor e inflamação. / Paracetamol (PAR) is the non-prescription medicine most used worldwide. However, high doses of PAR produce hepatic and/or renal toxicity. In order to minimize the toxicity of PAR and get better analgesic and anti-inflammatory activity, a previous study conducted by modifying the chemical structure of PAR through molecular modeling, gave rise to ortobenzamol (OBZ) – analog of PAR. Thus, the OBZ was synthesized and evaluated in models of nociception and inflammation in animals. The study showed central analgesic activity of OBZ, with superior potency when compared to PAR. In addition, tests showed a significant inhibition in the inflammatory process. However, to the OBZ be able to be considered as an important new therapeutic option for the treatment of pain and/or inflammation is necessary to determine its toxicity. Given that, this study aimed to evaluate the toxicity in vitro and in vivo OBZ and compare it with the PAR. For this purpose, in vitro neurotoxicity was evaluated in primary cultures of cortical neurons through cell viability assays, determination of the levels of total and reduced glutathione, as well as the possible neuroprotective capacity against oxidative stress. In vivo studies were performed in mice, initiated by determining the median effective dose (ED50) of PAR in order to compare it with the OBZ at toxicity models studied. It was determined the liver and brain oxidative stress by analyzing the levels of lipid peroxidation and nitrites. The possible hepatic and renal dysfunction was determined by analyzing plasma enzymes aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), gamma glutamyl transferase (GGT) levels and creatinine in the blood. We evaluated changes in clinical parameters through the CBC, WBC and platelet parameters and was held to determine the acute toxicity. The results of this study showed that in the tested doses, ortobenzamol is safer than paracetamol. The ortobenzamol displayed absence of neurotoxicity, less hepatotoxic and hematotoxic potential, absence of nephrotoxicity and also was rated as a xenobiotic with low toxicity after evaluation of acute toxicity. Therefore, the ortobenzamol can be considered as a safer alternative to the treatment of pain and inflammation when compared to paracetamol.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2015-02-04T10:49:57Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Carla Caroline Cunha Bastos - 2014.pdf: 2798020 bytes, checksum: 01f91c35952b2cac65bd16b118d8967a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-02-05T14:20:06Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Carla Caroline Cunha Bastos - 2014.pdf: 2798020 bytes, checksum: 01f91c35952b2cac65bd16b118d8967a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-05T14:20:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Carla Caroline Cunha Bastos - 2014.pdf: 2798020 bytes, checksum: 01f91c35952b2cac65bd16b118d8967a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-04-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Intestinal mucositis is a limiting factor in anticancer therapies by causing gastrointestinal cell destruction reaching the majority of patients undergoing chemotherapy/radiotherapy and is often responsible for treatment discontinuation. Although several studies have already been conducted to treat this disease, there are still no universally accepted and standardized protocols of treatment. Plant species with anti-inflammatory and antioxidant properties have been considered for the treatment of mucositis, among them Bidens pilosa L. (BP) (Asteraceae) and Curcuma longa L. (CL) (Zingiberaceae). In this study, the effects of a formulation containing plant extracts of Bidens pilosa L. (BP) and Curcuma longa L. (CL), both with pharmaceutical technology of mucoadhesion in mice intestinal mucositis induced by 5-fluoruoacil (5-FU) were studied. This formulation was administered orally (gavage) for 6 days in each group of mice at doses of 75mg/kg + BP 3.75 mg / kg CL 100 mg / kg BP + 7.5 mg / kg or 125 mg CL / BP kg + 15 mg / kg CL. The treatment with the formulations occurred during six days, and in parallel with mucositis induction was performed with 5-FU (200 mg / kg, intraperitoneally) from day 4 to day 6. On day 7, the mice were euthanized and the duodenal portion of the intestine of each animal was extracted to perform the histomorphometry technique. From this analysis, the dose of 125 mg/kg mucoadhesive formulation showed best effectiveness results and was then chosen for the realization of the other tests: histopathology analysis, expression of Bax, Bcl-2, p53 and Ki-67 analysis via immunohistochemistry technique; analysis of the activity of myeloperoxidase (MPO) enzyme, and determination of malondialdehyde (MDA) levels. Furthermore, analysis of weight change and hematologic parameters were performed. To prove safety of the formulation, an oral toxicity test of mucoadhesive formulation, and effect evaluation of the plant extracts on the animals’intestine not submitted to mucositis were performed. The mucoadhesive formulation was able to assuage the histopathological damage caused by 5-FU; reduced weight loss, reduced levels of MPO and MDA; stimulated cell proliferation by increasing the expression of Ki-67; besides decreasing apoptosis observed by analyzing the expression of Bax and Bcl-2. The formulation at a dose of 2000mg/kg showed no signs of toxicity. It can be concluded that the formulation under study exerts preventive and/or therapeutic effects to intestinal mucositis with potential to be used with associated to anticancer treatment. / A mucosite intestinal é um fator limitante nas terapias com antineoplásicos por ocasionar destruição celular gastrointestinal atingindo a maioria dos pacientes submetidos à quimioterapia/radioterapia sendo muitas vezes responsável pela interrupção do tratamento. Apesar de vários estudos já terem sido realizados para o tratamento/prevenção desta patologia, ainda não existe nenhum protocolo padronizado aceito universalmente e com eficácia comprovada. Espécies vegetais com propriedades anti-inflamatórias e antioxidantes tem sido consideradas para o tratamento da mucosite, dentre elas a Bidens pilosa L. (BP) (Asteraceae) e a Curcuma longa L. (CL) (Zingiberaceae). Assim, neste estudo, os efeitos de uma formulação contendo os extratos vegetais de Bidens pilosa (BP) e Curcuma longa (CL), aliada à tecnologia farmacêutica de mucoadesão, foram estudados em animais portadores de mucosite intestinal induzida por 5-fluorouracil (5-FU). Esta formulação foi administrada por via oral (gavagem) durante 6 dias em cada grupo de camundongos nas doses de 75mg/kg BP + 3,75 mg/kg CL, 100 mg/kg BP+ 7,5 mg/kg CL ou 125 mg/kg BP + 15 mg/kg CL. O tratamento com as formulações foi de seis dias, sendo que em paralelo foi realizada a indução da mucosite com o 5-FU (200 mg/kg, intraperitonealmente) do 4º ao 6º dia. No 7º dia, os camundongos foram eutanasiados e a porção duodenal do intestino de cada animal foi extraída para realização da técnica de histomorfometria. A partir dessa análise, a dose de 125 mg/kg da formulação mucoadesiva obteve melhores resultados e foi escolhida então para a realização dos demais testes: análise histopatológica; análise da expressão de Bax, Bcl-2, p53 e Ki-67 pela técnica de imunohistoquímica; avaliação da atividade da enzima mieloperoxidase (MPO); e determinação dos níveis de malondialdeído (MDA). Além disso, foi realizada a análise de variação ponderal e a análise hematológica. Para comprovação da segurança da formulação estudada, foi realizado um teste de toxidade oral aguda da formulação mucoadesiva, e avaliação do efeito dos extratos vegetais sobre o intestino dos animais não submetidos à mucosite intestinal. A formulação mucoadesiva foi capaz de amenizar os danos histopatológicos causados pelo 5-FU; reduziu a perda de peso corporal, reduziu os níveis de MPO e MDA; estimulou proliferação celular verificada através do aumento da expressão de Ki-67; além de diminuir a apoptose observada através da análise da expressão de Bax e Bcl-2. A formulação na dose de 2000mg/kg não apresentou sinais de toxicidade. Pode-se concluir que a formulação em estudo exerce efeitos preventivos e/ou terapêuticos frente à mucosite intestinal com potencial para ser utilizada associada ao tratamento anticâncer.