Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias . / Campylobacter jejuni (C. jejuni) y Campylobacter coli (C. coli) son microorganismos comensales en animales productivos y constituyen una de las principales causas de enteritis de transmisión alimentaria. C. jejuni es responsable del 90% de las campylobacteriosis humanas y C. coli cerca del 10%. Ambas especies son aisladas en proporciones similares de la carne de pollo, la principal fuente de infección del ser humano, representando cada una de ellas cerca del 50% de los Campylobacter spp. aislados. Para estas bacterias, la adherencia e invasión a células intestinales son mecanismos fundamentales de patogenicidad. Se han identificado diversos factores de virulencia asociados a estos mecanismos, como también diferencias entre C. jejuni y C. coli en las prevalencias y tamaños de algunos de los genes que los codifican. El propósito del presente trabajo fue caracterizar la capacidad de adherencia e invasión a células intestinales humanas de cepas de C. jejuni y C. coli aisladas de personas y animales productores de alimentos y relacionar esta capacidad con la presencia de siete genes de virulencia (cadF, flaA, racR, dnaJ, virB11, ciaB y pldA). La hipótesis fue que las cepas de C. jejuni tendrían mayor capacidad de adherir e invadir células intestinales humanas que las cepas de C. coli, y que esta capacidad se relacionaría positivamente con la presencia de genes de virulencia. Se emplearon 15 cepas de C. jejuni y 17 de C. coli aisladas desde pacientes humanos, cerdos, bovinos y pollos broiler. La presencia de los genes de virulencia de cada una de las cepas fue caracterizada en un estudio previo mediante la técnica de PCR convencional. Para evaluar la capacidad de adherencia e invasión a células intestinales humanas se realizaron estudios in vitro empleando la línea celular T84 de epitelio colónico T84 y midiendo el número de bacterias adheridas luego de una h de infección y las bacterias internalizadas luego de tres. La asociación con los genes de virulencia se valoró mediante análisis de regresión logística, el que se complementó con el test Kruskal-Wallis para evaluar diferencias en adherencia e invasión entre cepas portadoras y no portadoras de los genes. Los resultados demostraron que tanto las cepas humanas como las aisladas desde animales productores de alimento tienen la capacidad de adherir e invadir células intestinales in vitro y que esta capacidad varía entre las diferentes cepas. Estadísticamente, no se encontraron diferencias en la capacidad de adherencia e invasión entre C. jejuni y C. coli. El análisis Kruskal- Wallis (y test post-hoc Dunn) reveló que las cepas de C. coli portadoras del gen dnaJ tenían una mayor capacidad de invasión que las cepas de C. coli no portadoras del gen y que las cepas C. jejuni portadoras del mismo. Asimismo, con el análisis de regresión logística se encontró una asociación significativa entre la presencia del gen dnaJ y una mayor capacidad invasora en la especie C. coli. Los resultados de este trabajo sugieren que C. jejuni y C. coli tendrían la misma capacidad de adherir e invadir células intestinales humanas y que solo existiría una asociación positiva entre el gen dnaJ y la invasión de cepas de C. coli. / Campylobacter jejuni (C. jejuni) and Campylobacter coli (C. coli) are commensals microorganisms of food-producing animals, and they are considered one of the major causes of food-borne enteritis. 90% of human campylobacteriosis is caused by C. jejuni and most of the rest by C. coli. Both species are isolated in similar proportions from chicken meat, the main source of human infection, representing each of them almost the 50% of Campylobacter spp. isolated. The adherence to and invasion of human intestinal epithelial cells are essential mechanisms in Campylobacter pathogenesis. There have been identified several virulence factors related to these mechanisms, besides differences between C. jejuni and C. coli in the prevalence and size of some of the genes that encode them. The aim of this work was studied the adherence to and invasion of human intestinal epithelial cells by C. jejuni and C. coli isolated from humans and foodproducing animals, and to relate those abilities to the presence of seven virulence genes (cadF, flaA, racR, dnaJ, virB11, ciaB y pldA). The hypothesis was that C. jejuni strains would have more ability to adhere to and invade human intestinal epithelial cells than C. coli strains, and those abilities would be associated with the presence of virulence genes. We used 15 C. jejuni strains and 17 C. coli strains isolated from human patients, broiler chickens, swine, and bovines. The presence of virulence genes of each of the strains was determined using PCR before this work. We employed the human colonic epithelial cell line T84 to test in vitro the adherence and invasion abilities, and we checked them after one and three hours of infection to determine the number adhered and internalized bacteria, respectively. To test the association with the virulence genes we used logistic regression, and to evaluate differences of adherence and invasion between strains carrying and non-carrying virulence genes we used the Kruskal-Wallis test. We observed that both Campylobacter isolates from humans and from food-producing animals are capable of adhering to and of invading intestinal epithelial cells in vitro, and there are variations between strains in those abilities. Statistically, no significant differences were detected between C. jejuni and C. coli in their abilities to adhere to and to invade T84 cells. The Kruskal-Wallis test (and post-hoc Dunn test) showed that C. coli strains carrying dnaJ gene invaded more than C. coli strains non-carrying the gene, and more than C. jejuni strains carrying the same gene. Besides, a significant association was detected between the presence of the dnaJ gene and a higher invasion in C. coli strains by logistic regression. Our results suggest that C. jejuni and C. coli would have the same adherence and invasion abilities, and that, statistically, it would exist only a positive association between the dnaJ gene and the invasion ability of C. coli strains. / Financiamiento: Programa de Apoyo Económico de Actividades de Investigación para estudiantes de Magíster en Ciencias Animales Veterinarias.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Salmonella spp., es un agente bacteriano patógeno responsable de una gran variedad de cuadros clínicos en animales y humanos, incluyendo cuadros de tipo gastroentéricos e invasivos, a través de diversas rutas de transmisión, ya sea en mamíferos, aves, peces, anfibios, insectos y reptiles. En el caso de los reptiles, son una de las especies exóticas común de encontrar como animal de compañía, ganando cada vez más popularidad a pesar de ser reconocidos como reservorio de Salmonella. Junto con esto se ha observado un mayor número de casos de salmonelosis humana asociada a estos animales. En reptiles, la especie de Salmonella principalmente asociada es S. bongori, junto con las subespecies arizonae, houtanae, salamae y enterica de la especie S. enterica. Los principales reptiles relacionados a casos de salmonelosis en humanos son los Ophidios (serpientes), Saurios (lagartos), Quelonios (tortugas) y Rhynchocephalios (iguanas), animales que son comúnmente mantenidos como mascotas. La salmonelosis humana asociada a reptiles se manifiesta con diferentes cuadros, pudiendo ser exclusivamente gastrointestinal o presentándose con cuadros invasivos. Algunos autores han asociado el tipo de manifestación clínica con la exposición a distintos tipos de reptiles, aunque no se han investigado los factores de virulencia presentes en dichas cepas. En Salmonella, actualmente se reconoce la existencia de una organización de genes de virulencia en sectores cromosomales, denominados islas de patogenicidad (IP), donde se asocian varios factores que dan cuenta de la enfermedad gastrointestinal (IP-1) o invasiva (IP-2). Es por esto, que la identificación de los factores de virulencia en Salmonella spp. es importante para la caracterización del agente, más aún, frente al hecho de que en Chile existen reptiles que portan esta bacteria y que no han sido caracterizados más allá de su perfil fenotípico de resistencia antimicrobiana. En este estudio, se determinará la presencia de algunos genes de virulencia asociados a la invasión de enterocitos, en cepas de Salmonella aisladas de reptiles mantenidos en cautiverio en la Región Metropolitana de Chile. / Salmonella spp., is a pathogenic bacterial agent that –through different routes of transmission- causes a variety of gastroenteric and invasive manifestations. Although transmission by means of contaminates food is the most frequent route, transmission by direct or indirect contact with animals is now a reality. Reptiles, an exotic species increasing in popularity, represent an example of the above mentioned. It is common to find these animals as pets despite having been recognized as reservoirs for Salmonella. This tendency continuous to grow, bringing with it a greater number of human salmonellosis associated with the reptile, confirming at least four cases in minors in Chile, from 2012 to 2015. Taking into consideration the above, the objective of this thesis was to detect six virulence genes associated with invasion in strains located on the pathogenic islands one and five in Salmonella spp., isolated from reptile kept in captivity in the Metropolitan Region of Chile. To achieve this objective, a strain collection of thirty-four strains of Salmonella spp., was used. The genes invA and hilA were detected in 100% of the strains, while the orgA, sopE, sopB and sipB were detected in 47%, 23%, 85% and 97% of the strains accordingly; yhese being similar results to those observed in Salmonella strains isolated from birds, eggs, pigs, environmental samples and human and food samples, among others. The low percentage of strains that presented the orgA gene is noteworthy, a situation that could be explained by considering that Salmonella is limited to intraluminal intestinal infection in reptiles. In this study it was possible to conclude that, due to the presence of some genes that encode virulence factors associated with trans epithelial migration, these strains could represent a potential risk for the community. Keywords: Salmonella, reptile, virulence, pathogenicity islands.