Orientador: Fabíola Taufic Monica Iglesias / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T12:19:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gonzalez_PauloGabriel_M.pdf: 1495536 bytes, checksum: 26ccc94133bf9c2af38d1a3c267493c1 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: É bem estabelecido que a acetilcolina (ACh) produz relaxamento da musculatura lisa vascular através da liberação endotelial do óxido nítrico (NO) e, portanto, é uma das ferramentas farmacológicas mais utilizadas para avaliar a integridade do endotélio. Experimentos preliminares feito pelo nosso grupo mostraram que a ACh não relaxou a aorta e nem artéria pulmonar de sagui (Callithrix jacchus), além de induzir contração neste último leito em vaso com endotélio íntegro. Assim, o presente estudo teve como objetivo caracterizar de maneira mais detalhada a resposta colinérgica em artéria pulmonar de sagui. Em artéria pulmonar, O ADP (0.01-100 µM) produziu relaxamento dependente da concentração, que foi reduzido a aproximadamente 42% na presença do L-NAME (100 ?M) ou da indometacina (inibidor não seletivo da cicloxigenase, 10 ?M). A ACh (0.00001-1 mM) induziu contração dependente da concentração com valores de potência (pEC50) e resposta maxima (Emax) de 5.83 ± 0.08 and 90 ± 5%, respectivamente. A Emax da ACh aumentou aproximadamente 28% e 22% na presença de L-NAME e após a remoção do endotélio, respectivamente. Os antagonistas muscarínicos mais seletivos para os subtipos M2 e M3, metoctramina e 4-DAMP, e a indometacina reduziram significativamente a contração induzida pela ACh. A estimulação elétrica (4-16 Hz, 80 V, 10 segundos de estimulação) induziu contração dependente da frequência que foi significativamente reduzida na presença de 4-DAMP (0.1 µM), metoctramina (0.1 µM) e fentolamina (10 ?M) e aumentada pela fisostigmina (10 µM). Na presença de hexametônio (1 ?M), fentolamina (10 µM) ou tetrodotoxina (1 ?M) a contração mediada pela ACh não foi alterada. A análise de imunofluorescência revelou a presença da colina acetiltransferase (ChAt) na tunica media. Estes dados mostram a presença de uma inervação colinérgica excitatória em artéria pulmonar de Callithrix jacchus / Abstract: It is well established that acetylcholine (ACh) produces relaxation of vascular smooth muscle by endothelial release of nitric oxide (NO) and thus is one of the most widely used pharmacological tools to assess the integrity of the endothelium. Preliminary experiments done by our group showed that ACh did not relax the aorta and pulmonary artery of marmoset (Callithrix jacchus), and induces contraction in the latter bed in vessel with intact endothelium. Thus, the present study aimed to characterize in more detail the cholinergic response in pulmonary artery marmoset. In pulmonary artery ADP (0.01-100 µM) produced concentration-dependent relaxation which was reduced to approximately 42% in the presence of L-NAME (100 µM) and indomethacin (nonselective cyclooxygenase inhibitor, 10 µM). ACh (0.00001-1mM) produced concentration-dependent contractions with potency values (pEC50) and maximum response (Emax) of 5.83 ± 0:08 and 90 ± 5%, respectively. The Emax of ACh increased by approximately 28% and 22% in the presence of L-NAME and after removal of the endothelium, respectively. The muscarinic antagonists more selective for subtypes M2 and M3, methoctramine and 4-DAMP, and indomethacin significantly reduced ACh-induced contraction. Electrical field stimulation (EFS 4-16 Hz, 80 V, 10 seconds of stimulation) induced frequency-dependent contraction, which was significantly reduced in the presence of 4-DAMP (0.1 µM), methoctramine (0.1 µM) and phentolamine (10 µM) and augmented by physostigmine (10 µM). In the presence of hexamethonium (1 µM), phentolamine (10 µM) or tetrodotoxin (1 µM) contraction mediated by ACh was not altered. The immunofluorescence analysis revealed the expression of choline acetyltransferase (Chat) in Tunica Media. These data show the presence of an excitatory cholinergic innervation in the pulmonary artery Callithrix jacchus / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000411148-Texto+Completo-0.pdf: 347017 bytes, checksum: e332ff9ec0944ee08b20b394c3339334 (MD5) Previous issue date: 2009 / The present study evaluated the effects of the pharmacological stimulation of cholinergic system by using an acetylcholinesterase (AChE) inhibitor and a cholinergic muscarinic agonist on recognition memory impairment induced by iron neonatal treatment. In addition we evaluated the AChE activity and mRNA expression in brain regions of rats treated neonatally with iron. Evidence indicates that iron accumulation in the brain might be involved in neurological disorders, particularly in neurodegenerative disorders. It is well documented that the neonatal period is critical for the establishment of iron content in the adult brain, and iron uptake by the brain is maximal during the neonatal period. Treatment with iron, 10,0 mg/kg (iron concentration 1 mg/ml), during postnatal days 12 -14 in rats, promotes midbrain iron accumulation and impairs longterm recognition memory in the adulthood. The cholinergic pathways are intimately involved in cognitive functions, such as learning and memory, and disruption of this system is involved in cognitive decline observed in aging and in neurodegenerative disorders. Our results showed that a single administration of a AChE inhibitor, galantamine at the dose of 1. 0 mg/kg, immediately after training, completely reverses the recognition memory impairment induced by neonatal iron loading in adult rats (3 months of age).Using the same protocol, it was shown that the muscarinic agonist, oxotremorine, ameliorated the recognition memory deficits. Adult rats (3 months of age) treated neonatally with iron showed a decrease in AChE activity in striatum but nor in cortex neither in hippocampus, and this decrease of AChE activity was not accompanied by alterations its mRNA. Curiously, AChE activity in aged rats (24 months of age) does not differ between groups, and the activities are similar of the adult iron group (3 months of age). The present results suggest that, at least in part, iron-induced cognitive deficits are related to a dysfunction of cholinergic neural transmission in striatum with no cholinergic degeneration. / Neste trabalho foram avaliados os efeitos da manipulação farmacológica do sistema colinérgico através do uso de um fármaco inibidor da enzima acetilcolinesterase (AChE) e um agonista de receptores colinérgicos muscarínicos sob déficits na memória de reconhecimento induzidos pelo tratamento com ferro no período neonatal. Além disso, avaliou-se a atividade e expressão do RNAm da AChE em regiões cerebrais de ratos tratados com ferro no período neonatal. Desde a última década se sugere uma correlação entre o ferro e desordens neurológicas, especialmente as doenças neurodegenerativas. No período neonatal a absorção de ferro pelo cérebro é máxima, período em que os estoques e concentrações futuras deste metal se estabelecem. Ratos tratados do 12o ao 14o dia de vida com 10 mg/kg (concentração de 1 mg/ml de ferro na solução) de ferro via tubo intragástrico, se desenvolvem aparentemente saudáveis até a vida adulta, porém, ao serem avaliados em tarefas cognitivas apresentam severos déficits nas mesmas. O sistema colinérgico é um dos principais sistemas envolvidos em processos cognitivos, tanto que o declínio observado no envelhecimento e em algumas doenças neurodegenerativas é em parte associado à perda de função deste sistema. Este estudo demonstra que a administração intraperitoneal (i. p. ), única, imediatamente após o treino, de 1,0 mg/kg do inibidor da AChE, galantamina, a ratos adultos (3 meses) tratados com ferro é capaz de reverter totalmente o déficit cognitivo observado na tarefa de reconhecimento do objeto novo. De forma semelhante, o agonista muscarínico oxotremorine na dose de 0,5 mg/kg i. p. melhora o desempenho na mesma tarefa, mas sem total reversão do dano cognitivo. Ao se avaliar a atividade da AChE nas estruturas cerebrais de animais adultos (3 meses) tratados com ferro observou-se uma diminuição da mesma na região do estriado sem alterações nas regiões do córtex e hipocampo, porém essa diminuição da atividade ocorreu sem acompanhamento de alterações na expressão do RNAm, a qual não apresenta diferença entre o grupo controle e o tratado com ferro. Curiosamente, a atividade da AChE de ratos velhos (24 meses) não apresenta diferença entre o grupo controle e o grupo tratado, e os valores encontrados para ambos são semelhantes àqueles dos ratos jovens (3 meses) tratados com ferro. Os resultados obtidos nesse estudo sugerem que o dano cognitivo gerado pelo tratamento com ferro está relacionado, pelo menos em parte, a um dano na transmissão colinérgica estriatal, porém sem degeneração das fibras colinérgicas.