Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3314099 bytes, checksum: 6718a7629561d518b36935f1ca31ec59 (MD5) Previous issue date: 2013-10-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The fungi have become, over the last two decades, a major cause of illness in humans. Fungi of the genus Penicillium can be found in various substrates and affect immunocompromised people, hospitalized patients, many animals and plants, as well as compromise the quality of air indoors. The indiscriminate use of antibiotics and the resulting framework of resistance of microorganisms to conventional antimicrobial therapy has been stimulating researchers to seek alternative sources of these compounds, among them products derived by medicinal plants. Tendency to get phytochemicals from extracts, fractions, fixed or essential oils obtained from plant species is currently observed. In this context, the present study evaluated the in vitro antifungal activity of seven phytochemicals: carvacrol, citral, geraniol, linalool, pcymene, terpinolene and thymol, against twelve strains of Penicillium. Firstly, screening was carried out to find the phytochemical with the best activity by determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) by the broth microdilution technique. Following, the tests were proceeded with thymol, which were: determination of Minimum Fungicidal Concentration (MFC), effect of the phytochemical on mycelial growth kinetics, interference of thymol on germination of conidia and evaluation of the influence of thymol on the fungal morphology. To this end, we selected two strains, one that was more resistant and another with a more sensitive profile. The value of thymol MIC50 and MIC90 was 128μg/ml, while the CFM value ranged from 128μg/ml to 1024μg/ml. It was observed total radial mycelial growth inhibition at the three thymol concentrations used (128μg/ml, 256μg/ml and 512μg/ml) over 14 days of exposure. In the study of the interference of thymol on the conidia germination was observed inhibitory effect. At the concentration of 512μg/mL was found greater than 80% inhibition, at 256 μg/mL inhibition was higher than 75%, while in 128μg/mL inhibition was higher than 60%, all this for both strains tested, revealing concentration-dependent inhibitory effect. In the presence of thymol, morphological changes were observed in mycelial structure, such as decrease in the amount of conidia, reduction in the formation of reproductive structures with the appearance of rudimentary reproductive structures, besides the abnormal development of hyphae. Given the above, it is concluded that thymol has antifungal activity against strains of Penicillium and therefore represents a new possibility in the arsenal of products for the treatment of infections caused by this fungus. / Os fungos tornaram-se, ao longo das últimas duas décadas, uma das principais causas de doença em humanos. Fungos do gênero Penicillium podem ser encontrados nos mais variados substratos e afetam indivíduos imunocomprometidos, pacientes hospitalizados, animais e plantas diversas, além de comprometerem a qualidade do ar de ambientes internos. O uso indiscriminado de antibióticos e o decorrente quadro de resistência dos microrganismos à terapêutica antimicrobiana convencional vem impulsionando os pesquisadores a buscarem fontes alternativas desses fármacos, dentre elas, produtos de plantas medicinais. Observa-se, atualmente, uma tendência à obtenção de fitoconstituintes a partir de extratos, frações, óleos fixos ou essenciais, obtidos de espécies vegetais. Nesse contexto, o presente estudo avaliou a atividade antifúngica in vitro de sete fitoconstituintes: carvacrol, citral, geraniol, linalol, pcimeno, terpinoleno e timol, sobre doze cepas de Penicillium. Primeiramente, realizou-se uma triagem para encontrar o fitoconstituinte com melhor atividade, através da determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM), pela técnica de microdiluição. A seguir, prosseguiram-se os testes com o timol, quais foram: determinação da Concentração Fungicida Mínima (CFM), efeito do fitoconstituinte sobre a cinética de crescimento micelial do fungo, interferência do timol sobre a germinação dos conídios e avaliação da influência do timol sobre a micromorfologia fúngica. Para tanto, foram selecionadas duas cepas, uma que se mostrou mais resistente e outra com perfil mais sensível. O valor da CIM50 do timol, bem como da CIM90, foi 128μg/ml, já o valor da CFM variou de 128μg/ml a 1024μg/ml. Observou-se total inibição do crescimento micelial radial, nas três concentrações de timol utilizadas (128μg/ml, 256μg/ml e 512μg/ml), ao longo de 14 dias de exposição. No estudo da interferência do timol sobre a germinação dos conídios, observou-se efeito inibitório. Na concentração de 512μg/mL foi encontrada uma inibição superior a 80%, em 256 μg/mL a inibição foi superior a 75%, enquanto que em 128μg/mL a inibição foi superior a 60%, para as duas cepas testadas, revelando um efeito inibitório dependente da concentração. Na presença do timol, foram observadas alterações morfológicas na estrutura micelial, tais como diminuição do número de conídios, redução da formação de estruturas de reprodução com surgimento de estruturas reprodutivas rudimentares, além de desenvolvimento anormal das hifas. Diante do exposto, conclui-se que o timol apresenta atividade antifúngica contra cepas de Penicillium e, conseqüentemente, representa uma nova possibilidade no arsenal de produtos para o tratamento de infecções por este fungo.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-04-29T15:20:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) dissertaçao1.2novaantimicrobiana1final1.2.pdf: 1493025 bytes, checksum: 3516ce495abc1dca6a61ef9a8cbe8786 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-29T15:20:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) dissertaçao1.2novaantimicrobiana1final1.2.pdf: 1493025 bytes, checksum: 3516ce495abc1dca6a61ef9a8cbe8786 (MD5) Previous issue date: 2015-08-31 / FACEPE / Propriedades farmacológicas de plantas são reconhecidas, empiricamente, há séculos. Neste aspecto, o interesse por vegetais deve-se, sobretudo, à aptidão destes em produzir compostos biologicamente ativos. As samambaias, apreciadas pelo uso ornamental, são utilizadas para a cura de doenças. Além da atividade antimicrobiana, várias outras, tais como antioxidante, antinociceptiva, antitumoral, anti-inflamatória, citotóxica são relatadas como propriedades biológicas destes vegetais. Com a ascensão das doenças crônicas não transmissíveis, especialmente das doenças do aparelho circulatório e das neoplasias, e a persistência das doenças infecciosas e parasitárias, marcadas pela resistência microbiana a antibióticos, a busca por novos fármacos com ação antimicrobiana e citotóxica torna-se imprescindível. Diante deste contexto, este estudo objetivou avaliar a atividade antimicrobiana e citotóxica dos extratos de Asplenium serratum L. e Marsilea minuta L., samambaias ocorrentes no Brasil, e descritas na terapêutica popular. Os extratos metanólico de A. serratum e etanólico de M. minuta foram obtidos, respectivamente, por esgotamento a frio e maceração. A análise fitoquímica foi feita por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) para os padrões quercetina e cafeína. Na atividade antimicrobiana foram utilizadas bactérias padrão, Escherichia coli, Shigela flexneri, Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus MSSA, e a Concentração Inibitória Mínima (CIM) foi determinada pelo método de microdiluição, com concentrações variando de 5mg/mL a 0,005mg/mL. O sinergismo, testado contra E. coli e S. aureus MSSA, foi realizado pelo método checkerboard. A citotoxicidade foi verificada através do método MTT (brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio), frente a células tumorais humanas NCI-H29, HEp-2, MCF-7 e HL-60. A quercetina e cafeína foram sugeridas como constituintes de M. minuta. Os extratos apresentaram CIM de 5,0 mg/mL frente à S. aureus MSSA e S. typhimurium, e de 2,5 mg/mL contra E. coli e S. flexneri. Em sinergismo, perante S. aureus MSSA, apresentaram atividade bactericida em concentrações ≥ 2,56 mg/mL (A. serratum) e ≥ 0,33 mg/mL (M. minuta). No caso de E. coli, a ação bactericida foi ≥ 1,31 mg/mL (A. serratum) e ≥ 2,62 mg/mL (M. minuta). Os extratos foram considerados inativos frente às células tumorais testadas, com percentuais de inibição inferiores a 50 % para concentração de 50 μg/ mL. Portanto, foi possível concluir que os extratos das espécies em estudo possuem potencial antimicrobiano e exibem efeito sinérgico, além de apresentarem metabólitos, ainda a serem identificados. / Pharmacological properties of plants are recognized, empirically, for centuries. In this aspect, interest in plants is mainly because their ability to produce biologically active compounds. Ferns, appreciated by their ornamental use, are utilized to cure diseases. Besides antimicrobial activity, several others properties such as antioxidant, anti-nociceptive, antitumor, anti-inflammatory, cytotoxic and biological are reported for these plants. With the rise of non-communicable chronic diseases, especially circulatory diseases and neoplasms, and the persistence of infectious and parasitic diseases, marked by microbial resistance to antibiotics, the search for new drugs with antimicrobial and cytotoxic action becomes imperative. In front of this context, this study aimed to evaluate antimicrobial and cytotoxic activity of extracts from Asplenium serratum L. and Marsilea minuta L., occurring ferns in Brazil, described in popular therapy. Extracts, methanolic of A. serratum and ethanolic of M.minuta, were obtained, respectively, by cold exhaustion and maceration. Phytochemical analysis was performed by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) for standards of quercetin and caffeine. Default bacteria Escherichia coli, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus MSSA, were used in antimicrobial activity. The Minimal Inhibitory Concentration (MIC) was determined by the microdilution method, with concentrations ranging from 5mg / mL to 0.005 mg / mL. Synergism tested against E. coli and S. aureus MSSA was executed by checkerboard method. Cytotoxicity was assessed by MTT (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide) against human tumor cells, NCI-H29, HEp-2, MCF-7 and HL -60. Quercetin and caffeine have been suggested as constituents of M. minuta. The extracts showed MIC of 5.0 mg / mL against S. aureus MSSA and S. typhimurium, and 2.5 mg / mL against E. coli and S. flexneri. In synergism, against S. aureus MSSA, fern extracts showed bactericidal activity at concentrations ≥ 2.56 mg / mL (A. serratum) and ≥ 0.33 mg / mL (M. minuta). In the case of E. Coli, the bactericidal action was ≥ 1.31 mg / mL (A. serratum) and ≥ 2.62 mg / mL (M. minuta). The extracts were considered inactive in front of the tumor cells tested, with percentages lower than 50% inhibition at concentration of 50 μg / ml. Therefore, the extracts of studied species have antimicrobial potential and exhibits synergistic effect, besides having metabolites, yet to be identified.