L'uridine-diphosphoglucuronosyltransférase 1A3 (UGT1A3) est un des enzymes les plus efficaces dans la conjugaison de l'estrone (Ei), un précurseur pour la biosynthèse de l'estradiol (E2) dans les tissus périphériques. Nous avons identifié certains mécanismes génétiques qui pourraient contribuer à la variation individuelle de l'expression UGT1A3 et de son activité. L'exon 1 et le promoteur ont été séquences chez 249 Canadiens-Français. Nous avons identifié 17 polymorphismes : 7 localisés au promoteur et 10 dans l'exon 1, dont 6 mènent à un changement d'acide aminé. Une réduction de l'activité transcriptionnelle a été associée à chacun des 6 promoteurs variables. Des analyses plus détaillées suggèrent que les polymorphismes -148 T>C et -581 C>T affectent des sites de reconnaissance de deux facteurs de transcription hépatique (HNF-la et HNF-4a). Par la suite, l'activité de conjugaison de l'Ei a été évaluée pour les 11 formes de protéines polymorphiques identifiées. Nous avons observé trois phénotypes : UGT1A3*1, * 2 (Wl IR, V47A) et * 3 (Wl IR) avec des valeurs de clairance intrinsèque (CLjnt) élevée ; UGT1A3*5 (Q6R, Wl IR), * 7 (FI 101), * 9 (WllR, M208L), * 10 (V47A) et * 11 (WllR, V47A et M114I) avec une CL,,, intermédiaire (réduction de 2 fois à 10 fois par rapport à * 1), tandis qu'UGTl A3*4 (R45W), * 6 (Wl 1R, V47A, M270V) et * 8 (A 158V) ont une CLinttrès faible (réduction de plus de 10 fois par rapport à * 1). Les analyses de diplotypes indiquent que plus de 20% de la population sont porteurs de deux alleles affectant l'expression UGT1A3 et/ou l'activité de la protéine. Bien que ce travail n'ait pas étudié l'association génotype-phénotype, les résultats suggèrent que certaines des variations génétiques identifiées et caractérisées pourraient contribuer à la variabilité de l'inactivation d'E| par UGT1A3 et donc, à une modification de l'exposition aux estrogènes chez les individus porteurs.

Le foie possède une forte activité d'hydrolyse de l'ATP extracellulaire associée aux canalicules biliaires qui a longtemps été utilisée comme marqueur de cette structure. Jusqu'à récemment, peu d'information était disponible quant à la nature exacte de cette activité. Le clonage d'une nouvelle ectonucléotidase fortement exprimée dans le foie, l'ectonucléoside triphosphate diphosphohydrolase-8 (NTPDase8), suggérait un nouveau candidat potentiel pouvant correspondre à l'ecto-ATPase canaliculaire hépatique. Le premier objectif de mon doctorat était donc de déterminer l'identité moléculaire de la protéine responsable de l'activité ATPasique canaliculaire hépatique. L'ADN complémentaire de la NTPDase8- de rat a été clone et utilisé pour la caractérisation biochimique de l'enzyme recombinante et la production de sera polyclonaux spécifiques. Les activités ATPase et ADPase hépatiques ont été détectées par histochimie enzymatique et l'expression de la NTPDase8 par immunohistochimie. L'activité ATPase majeure de foie de rat a été purifiée, caractérisée biochimiquement et ses propriétés enzymatiques comparées à celles de la NTPDase8 de rat recombinante. Tous les résultats obtenus démontrent que la NTPDase8 correspond à l'ecto-ATPase canaliculaire. Mon deuxième objectif de doctorat était d'étudier l'influence potentielle des NTPDases et de l'ecto-5'-nucléotidase/CD73 sur les concentrations extracellulaires de nucleotides hépatiques, selon leur localisation cellulaire respective. Les différentes ectonucléotidases exprimées à la surface des cellules hépatiques modulent l'activation des récepteurs de nucleosides Pl et/ou de nucleotides P2, en contrôlant les niveaux extracellulaires de leurs agonistes. Dans le foie, les NTPDases sont responsables majoritairement de l'hydrolyse des nucleotides extracellulaires comme l'ATP et l'ADP alors que l'ecto-5'-nucléotidase génère la principale quantité d'adénosine extracellulaire, à pH physiologique. Les activités ATPase, ADPase et AMPase hépatiques ont été détectées par histochimie enzymatique, et l'expression des NTPDasel, 2 et 8, et de l'ecto-5'-nucleotidase par immunofluorescence. L'expression de l'ecto-5'-nucleotidase a été analysée par cytometric de flux sur divers types cellulaires hépatiques primaires. Les profils d'hydrolyse de l'ATP en présence de différentes combinaisons NTPDase/ecto-5'-nucleotidase (reflétant la localisation hépatique de ces enzymes) ont été analysés par HPLC. Nos résultats montrent que les niveaux de nucléo(s/t)ides extracellulaires varient en fonction de la combinaison d'ecto-nucléotidases considérées et de la concentration initiale de substrat ATP extracellulaire.