Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-01-14T11:39:59Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Alexandre Lamaro Cardoso - 2015.pdf: 3044296 bytes, checksum: a1b0257c1b7a1f083429fbd5076a9887 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-01-15T08:09:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Alexandre Lamaro Cardoso - 2015.pdf: 3044296 bytes, checksum: a1b0257c1b7a1f083429fbd5076a9887 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-15T08:09:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Alexandre Lamaro Cardoso - 2015.pdf: 3044296 bytes, checksum: a1b0257c1b7a1f083429fbd5076a9887 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-05-22 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Stromal vascular fraction and irradiation with low level laser are resources potencially applicable in the treatment of burn injuries. Objectives This study aimed to: (i) analyze the macroscopic, microscopic and morphometric effects of stromal vascular fraction application compared to conventional care in 3rd degree burn injuries in rats; (ii) analyze the macroscopic, microscopic and morphometric effects of stromal vascular fraction containing adipose derived stem cells application associated with low level laser compared to conventional care in 3rd degree burn injuries in rats; (iii) whether the macroscopic, microscopic and morphometric effects of stromal vascular fraction containing adipose derived stem cells application associated with low level laser irradiation are dependent on the irradiation dose applied. Method: This project was approved by the Ethics Committee on the use of animals at UFG, protocol number 035/2013. All animals received injections of stromal vascular fraction prepared from adipose tissue extracted from a animal donor and occlusive dressing. The animals were divided into 5 groups: control (CT), stromal vascular fraction (SVF), stromal vascular fraction plus Laser at 27mW of power (SVFL27), stromal vascular fraction plus Laser at 53mW of power (SVFL53) and stromal vascular fraction plus Laser at 76mW of power (SVFL76).The animals were followed ove days 3, 7 and 30 for the evaluation of macroscopic, microscopic and morphometric aspects. For statistical analysis we used the parametric "t test". Results: The morphometric analysis showed a reduction in wound area in SVFL27 group compared to the others, but without statistically significant difference. In SVFL76 group was observed inhibition of wound contraction compared to SVFL27 and CT groups (p <0,05). Was observed on day 3 significantly increased (p <0.05) infiltration of polymorphonuclear, fibrin formation and in the number of fibroblasts in all treated groups compared to CT. On the 7th day the mononuclear infiltrate, angiogenesis, collagen and number of fibroblasts was significantly higher in all treated groups compared to CT (p <0.05). The SVFL27 group also showed a higher number of fibroblasts compared to groups SVF, SVFL53 and SVFL76. At 30 days significantly increased reepitalization and collagen deposition were observed in all treated groups compared to CT (p <0.05). The SVFL53 group also showed higher polymorphonuclear infiltrate compared to other groups (p <0.05). Conclusion: Isolated application of SFV or in combination with low level Laser gives better results than conventional care in burn injury in rats and the effects of the combination of the two features are dose / Fração estromal vascular e irradiação com Laser de baixa potência são recursos potencialmente aplicáveis no tratamento de lesões por queimadura. O presente estudo teve por objetivo: (i) analisar os efeitos macroscópicos, microscópicos e morfométricos da aplicação de fração estromal vascular contendo células-tronco derivadas de tecido adiposo comparada ao cuidado convencional em lesões por queimadura de 3º grau em ratos; (ii) analisar os efeitos macroscópicos, microscópicos e morfométricos da aplicação de fração estromal vascular contendo células-tronco derivadas de tecido adiposo associada ao Laser de baixa potência comparada ao cuidado convencional em lesões por queimadura de 3º grau em ratos; (iii) analisar se os efeitos macroscópicos, microscópicos e morfométricos da aplicação de fração estromal vascular associada ao Laser de baixa potência são dependentes da dose de irradiação aplicada. Método: Este projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética no uso de animais da UFG, protocolo número 035/2013. Todos os animais receberam injeções de fração estromal vascular preparada a partir do tecido adiposo extraído de animal doador e curativo oclusivo. Os animais foram distribuídos em 5 grupos: controle (CT), fração estromal vascular (FEV), fração estromal vascular mais Laser a 27mW de potência (FEVL27), fração estromal vascular mais Laser a 53mW de potência (FEVL53) e fração estromal vascular mais Laser a 76mW de potência (FEVL76). Foram acompanhados ao longo dos dias 3, 7 e trinta para a avaliação dos aspectos macroscópicos, microscópicos e morfométricos. Para análise estatística foi utilizado o teste Kruskal-Wallis. Resultados: a análise morfométrica mostrou redução da área da ferida mais acentuada no grupo FEVL27 comparado ao demais, porém, sem diferença estatisticamente significante. No grupo FEVL76 foi observada inibição da contração da ferida comparada aos grupos FEVL27 e CT. Foi observado no 3º dia aumento significativo (p <0,05) do infiltrado polimorfonuclear, formação de fibrina e número de fibroblastos em todos os grupos tratados comparados ao CT. No 7º dia o infiltrado mononuclear, angiogênese, colágeno e número de fibroblastos foi significativamente maior em todos os grupos tratados comparados ao CT (p <0,05). O grupo FEVL27 também apresentou maior número de fibroblastos comparado aos grupos FEV, FEVL53 e FEVL76. Aos 30 dias aumento significativo da reepitalização e deposição de colágeno foram observados em todos os grupos tratados comparados ao CT (p <0,05). O grupo FEVL53 também apresentou maior infiltrado polimorfonuclear comparado aos demais grupos (p <0,05). Conclusão: aplicação isolada de FEV ou em associação com Laser de baixa potência confere melhores resultados que o cuidado convencional em lesões por queimadura em ratos e os efeitos da associação dos dois recursos são dose dependentes.

Mesenchymal stem cells (MSCs) have demonstrated significant potential for clinical use due to their convenient isolation, lack of significant immunogenicity, lack of ethical controversy and their potential to differentiate into tissue-specific cell types. MSCs reside in almost all tissues including the adipose tissue. Adipose tissue has main advantages as wide distribution in the organism, suitable isolation and considerable amount of resident multipotent stem cells. Therefore, in this study, adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (AT-MSCs) were isolated from BALB/c mice omentum and epididymis fat pats. During AT-MSCs maintenance and expansion in vitro, they were characterized for the expression of antigenic surface markers and for osteogenic, chondrogenic, and adipogenic differentiation potential. AT-MSCs form both sources expressed mesenchymal surface markers, CD73, and CD105 and were negative for a hematopoietic marker, CD45. The cultures derived from both adipose tissues differentiated into all three lineages. However, differences were observed in mesenchymal surface marker expression profiles as well as in the differentiation potential of AT-MSCs from different fat sources. Furthermore, AT-MSCs isolated from omentum fat depot were cultured with differentiation medium containing retinoic acid and testicular cell conditioned medium. After treatment periods, AT-MSCs showed Gdnf gene expression, this gene is a marker for Sertoli cells. The results showed that AT-MSCs from distinct fat depots have different characteristics related to stem cell surface marker expression profiles and differentiation potential. / Células-tronco mesenquimais têm demonstrado significativo potencial para aplicação terapêutica devido ao seu fácil isolamento, baixa imunogenicidade, ausência das implicações éticas e sua ampla plasticidade. Essas células estão nos mais diversos tecidos, destacando-se o tecido adiposo devido á sua ampla distribuição no organismo, conveniente obtenção e o considerável número de células-tronco mesenquimais multipotentes que podem ser isoladas desse tecido. Assim sendo, no presente estudo, células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo (AT-MSCs) foram isoladas do tecido adiposo localizado nas regiões próximas ao omento e testículos de camundongos BALB/c. Durante a manutenção e expansão das AT-MSCs in vitro, elas foram caracterizadas quanto à presença de marcadores antigênicos de superfície e potencial de diferenciação nas linhagens osteogênica, condrogênica e adipogênica. AT-MSCs de ambas as fontes expressaram os marcadores mesenquimais de superfície, CD73 e CD105, assim como foram negativas para o marcador de linhagens hematopoiéticas, CD45. Quanto ao potencial de diferenciação, os cultivos provenientes das duas origens de tecido adiposo apresentaram capacidade de diferenciar nas três linhagens acima citadas. Porém, foram observadas discretas diferenças tanto nos padrões de expressão dos marcadores mesenquimais de superfície quanto nos potenciais de diferenciação entre as AT-MSCs provenientes dos diferentes locais de deposição de gordura. Além disso, as AT-MSCs isoladas do tecido adiposo depositado em contato com o omento quando cultivadas com meios de diferenciação, contendo ácido retinóico e meio condicionado testicular demonstraram expressão do gene Gdnf o qual é reconhecidamente expresso pelas células de Sertoli. Portanto, os resultados obtidos demonstram que conforme a origem do tecido adiposo as AT-MSCs possuem diferentes características relacionadas aos marcadores de superfície assim como aos potenciais de diferenciação.