Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSSERTACAO CRISTINA.pdf: 3986017 bytes, checksum: add734135c93af474b22c106a3a51d41 (MD5) Previous issue date: 2007-02-23 / Tuberculosis (TB) caused by the Mycobacterium tuberculosis is responsible for more than 2 million deaths annually in the world. Although one third of the world population carries the bacilli, only 5% of the infected people develop active disease. 80% of TB cases are concentrated among 21 countries and Brazil is one of them. Due to the flaws existent inherent to the TB diagnostic, many works try to discover TB antigens to be used on an ELISA assay to detect active TB in underdeveloped countries, endemic for other mycobacterias such as leprosy (L). Several researches are identifying bacilli proteins obtained under nutritional culture stress, in order to mimic the intracellular milieu. It has been selected the immunodominant ones as a disease marker. The objective of this work was to characterize the humoral immune response among TB patients to rMPT-51 and rGlcB using an ELISA indirect test. It was included voluntaries that were HIV negative and the ones without pregnancy, chronic disease or under immunosuppressant treatment. Serum IgM and IgG against MPT-51 and GlcB recombinant antigen from 49 patients with active tuberculosis were measured by indirect ELISA, paired by sex and age with: healthy PPD negative individuals (controls) and lepromatous leprosy patients (LL). Patients with TB (0.810±0.319) showed higher levels of IgM against rMPT-51 than both LL individuals (0.454±0.195) and control (0.448±0.162) with statistical significant, p= 0.001 and p<0.001) respectively. These test showed 96.9% specificity and 67.3% sensitivity. Conversely, tuberculosis, controls, and LL individuals showed lower of MPT-51 IgG levels, which could not be distinguished among the groups. rGlcB antigen was able to distinguished TB patients from controls for IgM levels (specificity, 95.9 % and sensitivity, 8.2% ) and IgG levels (specificity, 99% and sensitivity, 18.2%). In order to evaluate the profiles of IgM and IgG against rMPT-51 and rGlcB before and after chemotherapy, the sera from 11 patients was collected and paired according to the treatment status (before or after). IgM and IgG against MPT-51 remained with the same profile levels before and after the treatment. The levels of serum IgG against rGlcB clearly diminished after the chemotherapy (p<0.01). Our results suggest that serum IgM levels against recombinant MPT-51 could to be useful to distinguish between active TB, controls and LL individuals. In addition, after TB treatment the IgG response to rGlcB diminished suggesting that it could be used to follow up of the TB treatment / A tuberculose (TB) causada pelo Mycobacterium tuberculosis, resulta em mais de dois milhões de óbitos anualmente. Segundo dados da OMS cerca de 30% da população mundial está infectada com o bacilo e 5% desses infectados desenvolvem a doença ativa. O Brasil juntamente com outros 21 países albergam 80% de todos os casos de TB no mundo. Devido às falhas existentes nos diagnósticos atuais, muitos estudos tentam descobrir antígenos do Mycobacterium tuberculosis que podem ser usados no ensaio ELISA, um teste de baixo custo. Esse teste seria de grande valia na identificação da tuberculose, principalmente em países em desenvolvimento endêmicos também para outras micobactérias como M. leprae, causador da hanseníase. Várias pesquisas têm identificado componentes do bacilo, como as proteínas secretadas pelas micobactérias em cultura, sob condições de estresse nutricional, mimetizando a situação vivida pelo bacilo no meio intracelular. Dessas proteínas são selecionadas aquelas imunodominantes que podem ser usadas como marcadores da doença. O objetivo desse trabalho foi avaliar o reconhecimento de duas dessas proteínas: os antígenos recombinantes MPT-51 e GlcB do M. tuberculosis, por anticorpos séricos da classe IgM e IgG de pacientes com tuberculose ativa, pelo método imunoenzimático indireto (ELISA). Foram adotados como critério de inclusão aqueles indivíduos de qualquer grupo que fossem HIV negativos, sem doenças crônicas ou uso de medicamentos imunossupressores e mulheres não gestantes. Quarenta e nove pacientes com tuberculose ativa foram selecionados e comparados com os grupos: controles saudáveis PPD não reatores e pacientes hansenianos portadores da forma Virchoviana, pareados por sexo e idade. Os pacientes com TB (0,810±0,319) mostraram maiores concentrações de IgM anti-MPT-51 que os seus respectivos controles: pacientes com hanseníase 0,454±0,195) e controles saudáveis (0,448±0,162), com diferença estatística, p=0,001 e p<0,001 respectivamente. Os ensaios de ELISA nas dosagens de IgM e IgG anti-MPT-51 mostraram especificidade de 96,9% e 98,0% e sensibilidade 67,3% e 4,1% respectivamente. Para o antígeno GlcB, os ensaios de ELISA na dosagem de IgM e IgG mostraram especificidade de 95,9% e 99% e sensibilidade 8,2% e 18,2%. Onze pacientes com TB foram monitorados durante o tratamento, com realização de dosagens dos níveis de anticorpos IgM e IgG específicos ao rMPT-51 e rGlcB antes e após a terapia. Os níveis de anticorpos IgM e IgG anti-MPT-51 antes e após a terapia não sofreram alterações significativas. Entretanto, os níveis de IgG anti-GlcB diminuíram após a terapia (p<0,01). Nossos resultados sugerem que o rMPT-51 pode ser usado como marcador da tuberculose, quando mensuradas as concentrações de IgM específicos, pois foram capazes de discriminar pacientes TB, de controles e hansenianos. Apesar do ELISA ter demonstrado baixa sensibilidade quando o antígeno rGlcB foi utilizado, os níveis séricos dos anticorpos da classe IgG diminuíram após o tratamento da tuberculose (p<0,01) sugerindo que essa técnica poderia ser utilizada para o acompanhamento da terapêutica

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dis Bruna D de S Silva 2010.pdf: 942780 bytes, checksum: 696823192ee17b463193f279bf7aed38 (MD5) Previous issue date: 2010-11-19 / Tuberculosis (TB) is a disease that afflicts mankind catastrophically, causing millions of new cases and deaths worldwide. It is estimated that one third of the world population is infected with the TB bacillus, Mycobacterium tuberculosis. Currently, the major challenges in TB control are the iden-tification of latent individuals, who are have increased chances to become ill, and the effective treat-ment of individuals with active disease. Understanding the immunology of this disease is of crucial importance for the development of new diagnostic tests and vaccines to combat this disease effec-tively. In order to elucidate the cellular immune response in tuberculosis, we evaluated the subpopu-lations of TCD4+ Th1, Th17 and T regulatory cells of patients with active pulmonary tuberculosis and rheumatoid arthritis against the recombinant antigen GLcB of M. tuberculosis. Peripheral blood mononuclear cells were obtained from twenty one patients with active pulmonary tuberculosis, re-cruited at Anuar Auad Hospital, twenty five patients with rheumatoid arthritis (RA), eleven individu-als with latent tuberculosis (TST+) and twelve healthy subjects (TST-). These cells were cultured, stimulated with antigen recombinant GLcB and Th1, Th17 and T regulatory subsets cells were eva-luated by flow cytometry. It was found that patients with active pulmonary tuberculosis have a high-er response of Th1 (8.2&#61617;1.9), Th17 (3.92.1) and T regulatory (2.81.2) antigen-specific recombi-nant GLcB when compared with individuals with latent infection (Th17=2.81.3; Treg=3.11.2) and healthy controls (Th17=1.40.8; Treg=0.60.3). Individuals with latent infection have only a signifi-cant percentage of Th1 cells specific (4.61.1) to GLcB when compared to controls (1.71.0). RA Patients that developed tuberculosis had immune response similar to those with only TB. Given these results, we conclude that the Th1 cells, Th17 and regulatory T cells are directly involved in active disease. / A Tuberculose (TB) é uma doença que atinge a humanidade de forma catastrófica, causando milhões de casos novos e de mortes no mundo todo. Estima-se que um terço da população mundial esteja infectada com o bacilo da TB, Mycobacterium tuberculosis. Atualmente, os principais desafios no controle da TB são: a identificação dos indivíduos latentes, que são os principais indivíduos com potencial desenvolvimento da doença e o tratamento efetivo dos indivíduos com doença ativa. O entendimento da resposta imunológica nessa doença é de crucial importância para o desenvolvimen-to de novos testes diagnósticos e novas vacinas para combater de forma efetiva essa enfermidade. Com o intuito de elucidar a resposta imune celular envolvida no desenvolvimento da tuberculose ativa, avaliamos as subpopulações de células TCD4+ Th1, Th17 e T reguladoras de pacientes com tuberculose pulmonar e pacientes com artrite reumatóide ativa frente ao antígeno recombinante GLcB do M. tuberculosis. Foram obtidas células mononucleares do sangue periférico de vinte e um pacientes com tuberculose pulmonar ativa, recrutados no Hospital de Doenças Tropicais Anuar Au-ad, vinte e cinco pacientes com artrite reumatóide, onze indivíduos com tuberculose latente (PT+) e doze indivíduos saudáveis (PT-). Estas células foram cultivadas, estimuladas com o antígeno recom-binante GLcB e as subpopulações Th1, Th17 e T reguladoras foram avaliadas através da análise das citocinas IFN-&#61543;, IL-17 e TGF-&#61538; e IL-10, respectivamente, por citometria de fluxo. Constatou-se que pacientes com tuberculose pulmonar ativa apresentam maior resposta de células Th1 (8.2&#61617;1.9), Th17 (3.92.1) e T reguladoras (2.81.2) específicas ao antígeno recombinante GLcB quando comparados com indivíduos com infecção latente (Th17=2.81.3; Treg=3.11.2), e controles saudáveis (Th17=1.40.8; Treg=0.60.3). Indivíduos com infecção latente apresentam somente porcentagem significativa de células Th1 (4.61.1) específicas ao GLcB quando comparado aos controles (1.71.0). Pacientes com AR não apresentaram diferença significativa na porcentagem destas células quanto à classificação em PT+ e PT-. Porém, pacientes com AR que desenvolveram tuberculose a-presentaram resposta semelhante aos pacientes com TB. Diante destes resultados, podemos concluir que as células Th1, Th17 e T reguladoras estão diretamente envolvidas na doença ativa.