Resumo:O câncer gástrico (CG) é um dos tipos mais comuns de câncer e apresenta altas taxas de mortalidade. Embora seja observada redução em sua incidência, o prognóstico para essa doença permanece ruim, principalmente quando o diagnóstico é feito nos estadios avançados. Recentes evidências têm identificado a metilação do DNA como um mecanismo importante na inativação de genes supressores de tumor. Infecção por Helicobacter pylori é considerada como um dos principais fatores etiológicos e o gene bacteriano CagA é associado com doenças gastroduodenais mais severas, incluindo câncer. Igualmente, o vírus Epstein-Barr é um outro agente infeccioso associado a pelo menos 10% dos casos de câncer gástrico. Neste estudo, nós determinamos o padrão de metilação dos genes CDH1, DAPK, COX2, hMLH1 e CDKN2A e a freqüência da Instabilidade de Microssatélites (MSI) em 89 amostras de tumores gástricos primários e buscamos por correlações com a infecção por Helicobacter pylori e vírus Epstein Barr e também, com características clinicopatológicas dos adenocarcinomas gástricos. COX2 foi o gene com a maior freqüência de metilação (63.5%) nestes pacientes, seguido por DAPK (55.7%), CDH1 (51%), CDKN2A (36%) e hMLH1 (30.3%). Nesse estudo, MSI foi associado com metilação em hMLH1 e inversamente correlacionado com metilação do gene DAPK. Também, MSI foi inversamente correlacionado com presence de cepas H. pylori CagA+, sugerindo novas evidências para a associação entre MSI e melhor prognóstico. / Abstract: Gastric cancer (GC) is one of the most common cancer types and it is associated with high mortality frequencies. Although a decrease in the worldwide incidence is observed, the prognosis of this disease still remains poor, mainly when the diagnosis is carried out at advanced stages. Recent evidences have identified DNA methylation as an important mechanism for tumor suppressor gene inactivation. Helicobacter pylori infection is considered one of the most important etiological factors and the CagA gene is associated with more severe pathologies including cancer. Likewise, EBV is another infectious agent that has been associated with gastric carcinoma in at least 10% of the cases. In this study, we determined the promoter methylation status of the CDH1, DAPK, COX2, hMLH1 and CDKN2A and MSI frequency in 89 primary gastric carcinomas and correlated the findings with the presence of H. pylori and EBV infections and also with clinicopathological features of gastric carcinomas. COX2 was the most frequently hypermethylated gene (63.5%) in these patients, followed by DAPK (55.7%), CDH1 (51%), CDKN2A (36%) and hMLH1 (30.3%). In this study, MSI was correlated with hMLH1 methylation, as shown before, and there was an inverse correlation between DAPK hypermethylation and MSI. Also, MSI was inversely correlated with H. pylori CagA+, providing new evidence for the association of MSI and better prognosis. / Orientador: Maria Inês de Moura Campos Pardini / Coorientador: Nídia Alice Pinheiro / Banca: Silvia Helena B. Rabenhorst / Banca: Clauida Aparecida Rainho / Banca: Fernnado Lopes Alberto / Banca: Magaly Machado Sales / Doutor

Orientador: Nídia Alice Pinheiro / Banca: Elaine Sbroggio de Oliveira Rodini / Banca: Daniel Araki Ribeiro / Resumo: O câncer gástrico é o quarto tipo mais comum e o segundo em mortalidade. Apesar da diminuição do número de casos nos últimos tempos ainda é um grande problema mundial. E mais, sua associação com o Helicobacter pylori (HP) está cada vez mais preocupante, devido à alta prevalência de cepas patogênicas dessa bactéria. Além disso, mutações em genes que agem no ciclo celular podem levar ao câncer. O gene que codifica a proteína p53 é responsável pelo reparo de lesões no DNA durante o ciclo celular funcionando como um regulador transcricional. Quando o reparo não é viável a proteína p53 induz a entrada da célula danificada em apoptose. Mutações mais freqüentes ocorrem nos exons 5, 6, 7 8 e 9. No atual trabalho investigou-se a possível associação da mutação no gene p53, correlação com presença da cepa patogênica CagA+ e estadiamento do tumor. Foram estudadas 55 amostras de câncer gástrico extraídas por biópsia durante gastrectomia. PCR foi utilizada para os exons 5 ao 9, análise de mutação por sequenciamento automático e dados clínicos foram coletados incluindo infecção por Helicobacter pylori/CagA+. Trinta e dois casos apresentaram mutações em p53 sendo que 6 deles apresentaram mutação em mais de um exon. 53% apresentaram-se infectados por HP CagA+. 87% dos pacientes estavam em estadiamento avançado do tumor (II, III e IV) e 80% eram do tipo intestinal. Quanto a correlação de p53 e cagA+ a casuística é relativamente pequena, e assim a correlação de p53 e cagA não foi vista. Os resultados confirmam a relevância das mutações em p53 e da presença da cepa patogênica CagA nos casos de câncer gástrico, contudo estudos devem ser realizados com um maior número amostral. Neste caso, o uso da p53 mutada pode ser utilizada em diagnóstico indicando, assim um melhor tratamento, desde que há casos em que sua alteração impõe resistência... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The gastric cancer is the fourth most common type and the second in mortality. Despite the decrease in the number of cases in recent times is still a major problem worldwide. Moreover, its association with Helicobacter pylori (HP) is increasingly worrying, because of the high prevalence of pathogenic strains of this bacterium. Furthermore, mutations in genes that act in the cell cycle can lead to cancer. The gene encoding the p53 protein is responsible for repair of lesions in DNA during cell cycle working as a transcriptional regulator. When the repair is not viable in the p53 protein induces the entry of the cell into apoptosis damaged. Change frequently occur in exons 5, 6, 7 8 and 9. In the current work investigated is the possible association of the mutation in the p53 gene, correlation with the presence of pathogenic strain CagA + and staging of the tumor. We studied 55 samples of gastric cancer extracted by biopsy taken during gastrectomy. PCR was used to the exons 5 to 9, analysis of mutation by sequencing automatic and clinical data were collected including infection by Helicobacter pylori / CagA +. Thirty-two patients had mutations in p53 is that 6 of them had more than one mutation in exon. 53% showed up infected HP CagA +. 87% of the patients were in advanced staging of the tumor (II, III and IV) and 80% were of the intestinal type. As the correlation of p53 and cagA + the casuistic is relatively small, and thus the relationship of p53 and cagA was not seen. The results confirm the relevance of mutations in p53 in the presence of pathogenic strain CagA in cases of gastric cancer, but studies must be conducted with greater sample. In this case, the use of p53 mutant can be used in diagnosis indicating thus a better treatment, since there are cases where its amendment requires resistance to certain types of treatment, regardless of the presence of H pylori... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ana Elizabete Silva / Banca: Maria Inês Moura Pardini / Banca: Fátima Pereira de Souza / Resumo: O câncer gástrico é a segunda causa de morte por câncer no mundo e o quinto tipo com maior prevalência no Brasil, sendo previstos 21.800 casos novos em 2008. Esta neoplasia apresenta etiologia bastante complexa, envolvendo fatores genéticos e ambientais. Os fatores etiológicos de maiores destaques incluem a infecção pela bactéria Helicobacter pylori, a ingestão de determinados alimentos, como defumados, enlatados e com elevada quantidade de sal, além do estilo de vida dos indivíduos, associado ao consumo de cigarro e álcool. Uma lesão pré-cancerosa importante no desenvolvimento da neoplasia gástrica é a metaplasia intestinal, podendo aumentar o seu risco em até 10 vezes. Atualmente é reconhecida a participação de alterações epigenéticas como metilação aberrante do DNA, que atua de forma igualmente relevante e complementar no processo de desenvolvimento e progressão do câncer. Vários genes com papel importante no controle do ciclo celular, reparo do DNA, apoptose, angiogênese e adesão celular podem apresentar expressão alterada devido metilação aberrante de sua região promotora, assim a investigação do padrão de metilação de genes envolvidos com o processo neoplásico pode ser uma estratégia interessante para a indicação de marcadores moleculares que possam auxiliar no diagnóstico precoce do câncer. Desta forma, no presente trabalho foi investigado o padrão de metilação dos genes WT1 e RARß em metaplasia intestinal (35 amostras) e suas respectivas mucosas gástricas normais, em comparação com o câncer gástrico (8 amostras) também com suas respectivas mucosas normais, através da técnica MS-PCR (Methylation Specific PCR). Devido à participação da infecção pela H. pylori na carcinogênese gástrica, foi investigada molecularmente a presença dessa bactéria nas amostras...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Worldwide, the gastric cancer is the second cause of death by cancer. In Brazil, it is the fifth type with more abundant, foreseen 21.800 new cases in 2008. This neoplasia presents very complex etiology involving genetic and environmental factors. The main etiologic factors include: infection by H. pylori, intake of specific foods such as curing food, canned food, and high consumption of salt wealthy food, besides people life style associated to alcohol and cigarette consumptions. An important previous-cankered lesion in development of gastric neoplasia is the intestinal metaplasia, what can increase your risk in ten times. At this moment, it is recognized the participation of epigenetic alterations like ADN aberrant methylation, which actuate in a same way considerable and complementary in development process and cancer evolution. Many genes with important role in control of cellular cycle, ADN repair, apoptosis, angiogenesis and cellular adhesion can present changed expression due aberrant metthylation of your promoter region. In this manner, the investigation of metithyation pattern of genes involved with the neoplasic process can be an interesting strategy for the indication of molecular markers that can help in cancer precocious diagnosis. Thus, in this present study were investigated the metthylation pattern of RARß and WT1genes (35 samples) and their respective normal mucous gastrics by technic MSPCR (Methylation Specific PCR). Due to participation of infection by H. pylori in gastric carcinogenesis, it was too molecular investigated the presence of this bacterium in the studied samples and the possible association with the metthylation pattern presented by both genes. The results showed high pattern of methylation in both valued lesions, that is, 97% and 100%, respectively of methylated samples in metaplasia group ...(Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ana Elizabete Silva / Banca: Kátia Ramos Moreira Leite / Banca: Cristiane Damas Gil / Resumo: No presente estudo foram investigados os níveis de expressão gênica e protéica da anexina-1 (ANXA1/AnxA1) e galectina-1 (LGALS1/Gal-1) na carcinogênese do estômago e associações com infecção pela Helicobacter pylori e o genótipo de virulência bacteriano cagA+. A análise foi realizada em 40 biópsias de mucosa gástrica com gastrite crônica (CG), 20 de câncer gástrico (GA) e 10 de mucosa normal (C), pelas técnicas de qPCR para quantificar os níveis de RNAm; imuno-histoquímica para caracterizar a expressão protéica na mucosa gástrica, e PCR para diagnóstico molecular da H. pylori e cepa cagA+. O estudo mostrou resultados inéditos quanto à expressão desses genes em gastrite crônica, ainda sem descrições na literatura. Foi demonstrada expressão relativa elevada do mRNA de ANXA1 em 80% dos casos de GA (média de 4,38 + 4,77) e em 90% dos casos de CG (média de 4,26 + 2,03), sem diferença significante entre os grupos (p = 0,33). O gene LGALS1 apresentou expressão elevada em 60% dos casos GA (média de 2,44 + 3,26) e, expressão constitutiva na CG (média de 0,43 + 3,13), mostrando, portanto, diferença significante entre os grupos (p < 0,01). A imuno-histoquímica revelou que as proteínas AnxA1 e Gal-1 não são expressas na mucosa normal. Ao contrário, durante o processo inflamatório de CG, imunomarcação citoplasmática positiva para a AnxA1 foi observada na porção basal do epitélio e estroma e, para Gal-1 a expressão foi constatada na porção apical e borda estriada do epitélio além do estroma. No adenocarcinoma tipo intestinal foi observada expressão citoplasmática em toda extensão epitelial e estroma tanto para a AnxA1 quanto para a Gal-1. Por outro lado, no tipo difuso imunomarcação positiva também foi observada no núcleo e membrana plasmática... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In this study we investigated the levels of gene and protein expression of annexin-1 (ANXA1/Anxa1) and galectin-1 (LGALS1/Gal-1) in gastric carcinogenesis and associations with Helicobacter pylori infection and bacterial virulence genotype cagA+. The analysis was performed in 40 biopsies of gastric mucosa with chronic gastritis (CG), 20 with gastric cancer (GA) and 10 of normal mucosa (C), by the techniques of qPCR to quantify mRNA levels, immunohistochemistry to characterize the protein expression in gastric mucosa, and PCR for molecular diagnosis of H. pylori cagA+ strains. This is the first study regarding the expression of these genes in chronic gastritis. High ANXA1expression levels were demonstrated in 80% of GA cases (mean 4.38 + 4.77) and in 90% of GC cases (mean 4.26 + 2.03), with no significant difference between groups (p = 0.33). High LGALS1 gene expression was found in 60% of GA cases (average 2.44 + 3.26), and constitutive expression was found in CG (mean 0.43 + 3.13), showing therefore a significant difference between groups (p <0.01). Immunohistochemistry revealed that the proteins AnxA1 and Gal-1 are not expressed in normal mucosa. In contrast, during the inflammatory process of CG, positive cytoplasmic immunostaining for AnxA1 was observed in the basal epithelium and stroma, and Gal-1 expression was detected in the apical portion and striated border of the epithelium and stroma. In intestinal-type adenocarcinoma was observed cytoplasmic expression in all epithelial and stromal extension for both AnxA1 and Gal-1. On the other hand, in diffuse-type adenocarcinoma positive immunostaining was also observed in the nucleus and plasma membrane of both proteins. Infection by H. pylori showed no association with the expression of both genes, but the genotype cagA+ is associated with about 2.5 times... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ana Elizabete Silva / Banca: Claudia Regina Bonini Domingos / Banca: Dorotéia Rossi Silva Souza / Banca: Eny Maria Goloni Bertollo / Banca: Cláudia Aparecida Rainho / Resumo: A carcinogênese gástrica apresenta um modelo de múltiplas etapas, que pode iniciar a partir de uma gastrite crônica, frequentemente associada à infecção pela bactéria Helicobacter pylori, e progredir para atrofia gástrica, metaplasia intestinal, displasia e câncer gástrico. Outra via, trata do surgimento do câncer gástrico a partir de um sítio de úlcera péptica benigna. Há relatos de algumas alterações genéticas bem estabelecidas nos estágios iniciais e avançados da carcinogênese gástrica, mas em lesões benignas precursoras como a metaplasia intestinal e a úlcera gástrica, relativamente pouco é conhecido. Deste modo, estudos genéticos destas lesões poderão fornecer informações importantes sobre os eventos iniciais da carcinogênese do estômago e contribuir para estratégias de diagnóstico precoce e prevenção. A partir de dados da literatura foram selecionados genes envolvidos com a carcinogênese do estômago como TERT, COX-2, NOS2, HGF, MET, KRAS, TFF1 e CLDN18, que atuam na manutenção dos telômeros, processos celulares e proteção da mucosa gástrica. Diante do exposto, este trabalho teve por objetivos avaliar mudanças de expressão gênica e protéica destes genes selecionados, em metaplasia intestinal (MI - 37 casos) e úlcera gástrica (UG - 30 casos), comparadas com suas respectivas mucosas normais (MN) e com adenocarcinoma gástrico (CG - 22 casos) e verificar possíveis correlações entre a expressão destes genes nos três grupos estudados, bem como associações entre os níveis de expressão gênica e protéica e fatores como infecção pela H. pylori e tipo histológico de MI e CG. A expressão relativa do RNAm dos referidos genes foi analisada pela técnica de PCR em tempo real, enquanto a expressão das respectivas proteínas foi avaliada por imuno-histoquímica. A avaliação da expressão gênica revelou níveis médios relativos do RNAm... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Gastric carcinogenesis presents a model of multiple steps, which can be triggered by a chronic gastritis, often associated with infection caused by the bacterium Helicobacter pylori, and progress to gastric atrophy, intestinal metaplasia, dysplasia and gastric cancer. However, another pathway has attracted interest in recent decades and refers to origin of gastric cancer from one site of benign peptic ulcer. There are reports of some well-established genetic alterations in the early stages and advanced gastric carcinogenesis, however, in precursor benign lesions as intestinal metaplasia and gastric ulcer, relatively little is known. Thus, genetic studies of these lesions may provide important information regarding the initial events of carcinogenesis of the stomach and contribute to strategies for early diagnosis and prevention. The genes selected for this study TERT, COX-2, NOS2, HGF, MET, KRAS, TFF1 and CLDN18, act, usually, in cell cycle processes, telomere maintenance and protection of the gastric mucosa. So, this study aimed to evaluate changes in gene and protein expression of these genes, altered in intestinal metaplasia (IM- 37 cases) and gastric ulcer (GU- 30 cases), compared with their corresponding normal mucosa (NM) and gastric cancer (GC - 22 cases) and to verify possible correlations between the expressions of these genes among the three groups studied, and also examine associations between gene and protein expression levels and factors such as H. pylori infection and histological type of IM and GC. The relative mRNA expression of these genes was analyzed by real time PCR, while the expression of respective proteins was assessed by immunohistochemistry. Evaluation of gene expression showed mRNA relative mean levels, increased in GC compared to NM to TERT (17.3-fold), COX-2 (27.6-fold), NOS2 (12.8-fold), HGF (1.8-fold), MET (3.5-fold) and KRAS (1.7-fold). For TFF1, there was... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Ana Elizabete Silva / Banca: Dertia Villalba Freire-Maia / Banca: Spencer Luiz Marques Payao / Banca: Débora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Mariangela Torreglosa Ruiz / Resumo: O câncer gástrico é uma doença caracterizada como multifatorial associada a fatores ambientais e genéticos. A carcinogênese do estômago pode progredir de uma inflamação crônica da mucosa gástrica, resultante da infecção pela bactéria Helicobacter pylori que ativa a resposta inflamatória do hospedeiro. Portanto, selecionamos um grupo de polimorfismos presentes em genes de citocinas pró-inflamatórias (IL8, TNFA e TNFB), anti-inflamatórias (IL10 e IL-1RN) e receptores de reconhecimento de padrões moleculares associados aos microorganismos, denominados toll like receptor (TLR). Considerando a escassez e controvérsia de estudos de polimorfismos desses genes em câncer gástrico e seu envolvimento na carcinogênese de estômago, propôs-se avaliar, pelas técnicas de PCR- alelo específico ou PCR-RFLP, a associação dos polimorfismos TLR2 -196 a -174 del, TLR4 (+896 A/G rs4986790 e +1196 C/T rs4986791), IL-1RN VNTR, TNFB 252A/G (rs909253), TNFA (-308 G/A rs1800629 e -857 C/T rs1799724), IL8 (-251 T/A rs4073 e -845 T/C rs2227532) e IL10 (-592 C/A rs1800872) com risco de câncer gástrico, gastrite crônica e fatores de risco ambientais. Também, procurou-se associar, pela técnica de qPCR em tempo real, os polimorfismos com os níveis de expressão dos genes das citocinas, cujas variantes ocorrem em regiões promotoras (TNFA, IL8 e IL10). De modo geral, a genotipagem dos referidos genes foi realizada em amostras de DNA de 723 indivíduos (207 de câncer gástrico-CG; 276 de gastrite crônica-GC e 246 controles saudáveis-C), enquanto que nas análises de expressão gênica foi utilizado o cDNA de tecido gástrico proveniente de 45 pacientes com CG e 47 com GC. Observou-se que, os SNPs TLR4+1196C/T, TNFB+252A/G, TNFA-308G/A e IL8-251T/A não foram associados com o risco de gastrite crônica e câncer gástrico. Contudo, as freqüências dos genótipos TLR2 ins/del +del/...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Gastric cancer is a multifactorial disease characterized as associated with environmental and genetic factors. The carcinogenesis of the stomach can progress to a chronic inflammation of the gastric mucosa, resulting from infection by the bacterium Helicobacter pylori that activates the inflammatory response of the host. Therefore, we selected a group of polymorphisms in genes of pro-inflammatory cytokines (IL8, TNFA and TNFB), anti-inflammatory (IL10 and IL-1RN) and receptor recognition of molecular patterns associated with microorganisms, the toll like receptors (TLR). Considering the scarcity and controversy of these polymorphisms studies in gastric cancer and their involvement in carcinogenesis of the stomach, this study proposed to evaluate, by PCR allele-specific or PCR-RFLP the association of polymorphisms TLR2 -196 to -174 del , TLR4 (rs4986790 and rs4986791), IL-1RN VNTR, TNFB 252A/G (rs909253), TNFA (rs1800629 and rs1799724), IL8 (rs4073 and rs2227532) and IL10 (rs1800872) with risk of gastric cancer, chronic gastritis and environmental risk factors. Also, we tried to associate, for the technique of real-time qPCR, polymorphisms with levels of expression of cytokine genes whose variations occur in the promoter region (TNFA, IL8 and IL10). Overall, the genotyping of these genes was performed on DNA samples from 723 individuals (207 gastric cancer-GC, 276 chronic gastritis-CG, and 246 healthy controls-C), whereas in the analysis of gene expression was used cDNA of gastric tissue from 45 patients with GC and 47 CG. It was observed that TLR4 SNPs +1196C/T, TNFB +252A/G, TNFA-308G/A and IL8-251 T/A were not associated with risk of chronic gastritis and gastric cancer. In the analysis of polymorphisms of toll like receptor, the frequencies of genotypes TLR2 ins / del + del / del and TLR4 +896 AG were significantly higher (p <0.01) in GC group (33.5% and 13% respectively)... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor