La maladie alcoolique du foie (MAF) représente un large spectre de sévérité de maladies incluant la stéatose, l’hépatite alcoolique, la fibrose hépatique dont le stade le plus sévère est la cirrhose et l’hépatocarcinome. Cependant, si on observe la présence d’une stéatose chez quasi la totalité des individus ayant une consommation excessive d’alcool, seulement 10 à 35% d’entre-eux vont développer une maladie sévère. La physiopathologie de la MAF est complexe et n’est encore que partiellement comprise. Par ailleurs, différents facteurs tels que la quantité d’alcool consommée, le sexe, la surcharge pondérale, la présence d’autres maladies hépatiques associées ou certains facteurs génétiques ont été identifiés comme des facteurs de risque de progression de la MAF. Il existe différents scores qui vont permettre d’évaluer le pronostic des patients atteints d’une MAF et certains facteurs cliniques tels que la présence d’une infection, d’une insuffisance rénale ainsi que la présence d’une dénutrition ou la poursuite d’une consommation d’alcool vont également influencer le pronostic de ces patients. L’identification de facteurs influençant la sévérité de la maladie est primordiale afin d’identifier les patients les plus à risque de progression et d’optimaliser leur prise en charge. Le but de ce travail de thèse a été d’évaluer le rôle de différents marqueurs biologiques et histologiques dans la sévérité de la MAF. Nous avons tout d’abord étudié l’implication de la chimiokine CCL2 (MCP-1) dans la MAF et nous avons démontré que la concentration sérique et l’expression hépatique de CCL2 étaient augmentées dans la MAF et étaient corrélées à la sévérité de la maladie. Nous avons également montré une corrélation entre l’expression hépatique de CCL2 et l’infiltrat neutrophilique suggérant l’implication de CCL2 dans la MAF via le recrutement des neutrophiles. Par la suite nous avons montré que le degré d’insulino-résistance était associé à l’hypertension portale et à la présence de varices oesophagiennes chez les patients porteurs d’une MAF. Enfin nous avons étudié la survie à long terme de patients admis pour décompensation hépatique et ayant une stéatohépatite alcoolique prouvée histologiquement et un score de Maddrey inférieur à 32, définissant une hépatite alcoolique non sévère, et nous avons montré que leur mortalité à 1 et 5 ans étaient significatives (20% de décès à 1 an et 50% à 5 ans) et que les facteurs pronostiques de mortalité à 5 ans de ces patients étaient la présence d’une encéphalopathie au moment du diagnostic de stéatohépatite alcoolique et la poursuite d’une consommation d’alcool.En conclusion, ces différents travaux ont permis d’identifier des facteurs intervenant dans la physiopathologie et la progression de la MAF et influençant le pronostic des patients porteurs d’une maladie alcoolique du foie. Ces résultats contribuent donc à l’identification des patients à plus haut risque de progression afin d’améliorer leur prise en charge. / Doctorat en Sciences médicales (Médecine) / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn’s disease (CD) and ulcerative colitis (UC), are chronic inflammatory immune-mediated diseases of the gastrointestinal tract. Two-thirds of IBD patients will develop severe disease, with complications that will require frequent surgeries and hospital admissions, and will seriously impair their quality of life. The ultimate clinical challenge of precision medicine in IBD is to find predictive markers to anticipate the development of severe disease and to monitor treatment in these patients.In the first part of my PhD thesis, we have carried out several studies monitoring the biologics used in IBD patients with severe disease. We have evaluated the pharmacokinetics of the following biologics used in IBD patients: infliximab, vedolizumab, and ustekinumab. We have focused on measuring trough levels (TLs) (defined as the serum drug level measured just before the next drug administration) early on after initiating biologic treatment to predict patient outcomes, including long- term responses in patients treated with infliximab and vedolizumab. In addition, we are currently conducting a prospective multicentric study that aims to design a pharmacokinetic model of infliximab at induction in IBD patients (EudraCT: CT 2015- 004618-10) (End of study expected by December 2019 but interim analysis available in the present work). Moreover, we have reported on the efficacy of ustekinumab in a large national cohort of highly refractory CD patients and have also examined the benefit of early measurement of ustekinumab TLs in these patients. Finally, we have reported novel findings on the impact of different wash-out periods (defined as the time frame between the discontinuation of one biologic and the initiation of a second biologic on the pharmacokinetics of the second-line biologic). Altogether, over the past 3 years, our data suggest the importance of measuring TLs early on during induction to predict long-term response to biologics during maintenance therapyIn the second part of my PhD thesis, we have analysed the inter-variability of the immune response in healthy subjects. Inflammation is the obvious key driver and underlying mechanism of disease severity in IBD. Therefore, the magnitude of inflammation must help define the phenotype of mild to severe disease. Delineating the inter-variability of the immune response in a healthy cohort constitutes a fundamental step to uncovering the genetic factors underlying this variability. We have performed whole blood cell cultures in a highly selected population of more than 400 healthy subjects stimulated with several Toll-like receptor (TLR) agonists and a T-cell receptor (TCR) antagonist. We found that the magnitude of the immune response (the high- or low-cytokine producer phenotype) was independent of the cytokine measured and the TLR agonists used. Thus, a donor exhibits a specific immune (cytokine) response or “immunotype” across cytokines released and TLR stimulation. Importantly, the high- or low-cytokine producer phenotype was different and did not overlap between the TLR and TCR stimulation conditions. In other words, a donor who is ahigh-cytokine producer following TLR stimulation will not be a high-cytokine producer following TCR stimulation (or the inverse). Therefore, we have defined TLR- or TCR- related Immunotypes (IT) as “a grading classification of the magnitude of the cytokine immune response” with IT1, IT2, and IT3 as low, intermediate, and high immunotypes. This suggests that two independent TLR and TCR ITs (TLR IT1 and TCR IT3) can co-exist in the same subject. We are now currently evaluating the genetic markers underlying these ITs before validating them in large cohort of IBD patients with mild-to-moderate and severe disease.This PhD thesis provides some data suggesting that the assessment of the pharmacokinetics of biologics early on at the initiation of treatment could help predict how the patient will respond in the long run. In parallel, this PhD thesis provides some advances in the understanding of the inter-variability of the immune response, a fundamental step before the identification of potential genetic markers underlying the inter-variability of inflammation and, hence, the severity of disease in IBD. / Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine) / info:eu-repo/semantics/nonPublished

En 2016, environ 53 070 patients ont reçu un diagnostic d'adénocarcinome canalaire pancréatique (PDA) aux États-Unis et la plupart d'entre eux mourront de leur maladie dans les 5 ans. Le registre belge du cancer rapporte une incidence estimée à 1200 nouveaux cas par an. La survie globale à 5 ans pour toutes stades confondus a marginalement augmenté au cours des 50 dernières années, passant de 2 à 6%, malgré l'imagerie, les soins périopératoires et l'amélioration des techniques chirurgicales.La chirurgie reste la seule chance de guérison, cependant, seulement 10-15% des patients nouvellement diagnostiqués sont jugés éligibles pour une chirurgie. Même s'il existe peu d'autres modalités de traitement efficaces qui puissent considérablement prolonger la survie globale, la plupart des patients finiront par mourir de métastases au foie, au poumon et / ou au péritoine, les sites de propagation les plus courants. Les patients, les cliniciens et les chercheurs restent frustrés par le manqué d’outils thérapeutiques et des nouvelles stratégies sont nécessaires pour comprendre et mieux prendre en charge cette maladie.Le terme «cancer» engendre un sentiment de peur et colère, en particulier quand on est confronté au diagnostic dévastateur de cancer du pancréas. En plus, une réaction commune est de personnifier le cancer comme une entité maléfique qui doit être combattue pour sauver la vie du patient. Les armes pour cette bataille comprennent le scalpel d'un chirurgien, la chimiothérapie, la radiothérapie, les thérapies ciblées, les immunothérapies, les approches holistiques et la foi religieuse. Mais nous avons trop souvent oublié ou sous-estimé la contribution de la recherche translationnelle pour la médecine de précision, pour mieux adapter les thérapies et éviter les toxicités inutiles.Dans un sens biologique, qu'est-ce qu'un cancer du pancréas ou un cancer? Le cancer est une maladie génétique, soumise à un phénomène évolutif avec ses propres règles, contraintes et caractéristiques prévisibles qui mènent finalement à un phénotype unique.La stratégie "one size fits all" dans la PDA a souvent échoué dans les essais de nouveaux médicaments dans une population non sélectionnée.Cette thèse est une contribution modeste et authentique à une approche plus personnalisée du PDA, de l'acquisition tissulaire, à l'analyse de biomarqueurs tissulaires, à une analyse moléculaire plus profonde afin de mieux comprendre cette maladie mortelle et de proposer l'intégration de biomarqueurs dans le developpement d’etudes cliniques guides par les analyses moléculaires. / Doctorat en Sciences / info:eu-repo/semantics/nonPublished

L’endoscopie flexible a considérablement évolué au cours des cinquante dernières années. D’une procédure purement diagnostique, elle est aujourd’hui principalement thérapeutique. Des procédures telles que dilatation, implantation de prothèse et polypectomie sont pratiquées quotidiennement dans des centres qualifiés.Depuis toujours l’apposition tissulaire est pratiquée par les chirurgiens pour réaliser des anastomoses et des sutures. L’apposition de séreuse à séreuse, créant un attachement permanent par la cicatrisation, ne s’est développée que récemment en endoscopie. Pour réaliser cela, de nouveaux outils devaient être créés. L’idée principale pour permettre d’apposer et de suturer des tissus est d’obtenir un système de triangulation permettant de travailler perpendiculairement à l’axe de l’endoscope.En collaboration avec les ingénieurs de la faculté polytechnique de notre Université, un nouveau système de triangulation a été créé. Au début complexe et manipulé par un système robotique, il a ensuite été simplifié pour devenir mécanique et rigide.Cette plateforme pouvant être assemblée à l’intérieur du corps permet la réalisation de sutures endoluminales, sans équivalent actuel parmi les dispositifs médicaux disponibles. Cela nous a permis de mener des études scientifiques pour tester la validité, la sécurité et enfin l’efficacité de ce dispositif, ainsi que de concevoir et d’améliorer la technique dans une indication bariatrique, et de rechercher de nouvelles indications.La première partie de notre travail a révélé la performance de la réduction gastrique dans la prise en charge des patients obèses. La procédure a initialement été conçue et testée sur des animaux, puis une première étude de sécurité chez l’homme a été menée. Cette étude a mis en évidence la sécurité de la technique mais a également fourni des résultats préliminaires en termes d’efficacité. Une deuxième étude multicentrique d’efficacité a ensuite été menée sur 51 patients. Les résultats de cette étude ont été positifs en termes de perte de poids et de sécurité de la technique. Ensuite, pour évaluer l’efficacité intrinsèque de la procédure, une étude randomisée a été menée. Actuellement tous les patients ont été inclus. Le suivi à 1 an n’est pas encore disponible mais les résultats préliminaires à 6 mois sont discutés.Ayant ce nouveau dispositif à notre disposition, nous nous sommes intéressés à d’autres indications. La première concernait le traitement des diverticules œsophagiens, une maladie bénigne et difficile à traiter, que nous avons abordée initialement avec un traitement utilisant des aimants pour l’apposition des tissus. Cependant le système de sutures, initialement développé, a été modifié et utilisé avec succès dans cette indication. Parmi les autres indications explorées figurent le syndrome de l’anse afférente et la reprise de poids post Bypass gastrique. Ces études sont toujours en cours.La résection en paroi complète est une autre indication que nous avons évaluée. Dans cette indication particulière, nous avons effectué une première étude de sécurité et de faisabilité animale, qui nous a permis, via des ajustements de matériel, de démarrer une étude chez l’homme. Le premier patient traité avec succès ayant déjà été rapporté.Nous évaluons actuellement d’autres indications telles que le traitement des comorbidités associées à l’obésité (Diabète de type 2 et NASH) ou la prise en charge du reflux gastro-œsophagien.En résumé, ce travail rend compte des différentes études cliniques issues du développement, avec nos collègues ingénieurs, d’un nouveau dispositif médical. Il illustre les différentes étapes nécessaire pour établir la sécurité et l’efficacité d’une nouvelle procédure qui pourrait représenter un changement de paradigme dans la gestion de l’obésité, mais montre également comment un nouveau concept peut représenter un intérêt pour d’autres indications rares et nouvelles. / Doctorat en Sciences médicales (Médecine) / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Les maladies alcooliques du foie (MAF) sont responsables de 3,8% de la mortalité mondiale et restent une cause majeure de mortalité par maladies hépatiques, plus importante que l’hépatite C. Malgré le fardeau qu’elles représentent, tant sur le plan de la morbi-mortalité que sur le plan économique, il n’existe que très peu d’options thérapeutiques hormis l’abstinence et la transplantation hépatique. Une meilleure compréhension de la pathophysiologie et des facteurs impliqués dans les MAF permettrait d’identifier de nouvelles cibles thérapeutiques afin d’améliorer la prise en charge et le pronostic des patients.Il est largement admis que les patients souffrant de MAF présentent une dérégulation de leur réponse immunitaire. A l’état de base, il existe déjà une hyper-activation de leurs monocytes circulants et une élévation de leurs taux plasmatiques de cytokines pro-inflammatoires, dont le tumor necrosis factor-α (TNF-α). Lors d’une stimulation, la réponse inflammatoire des patients avec une MAF est exacerbée, les taux de TNF-α augmentent rapidement. Cet état, dont tous les mécanismes ne sont pas encore élucidés, est associé avec la sévérité et la mortalité de la MAF, ainsi qu’avec la survenue de complications de la cirrhose. Identifier les facteurs qui sous-tendent à cette réponse inflammatoire excessive et délétère aiderait probablement à mieux la réguler. Les patients atteints de MAF présentent de manière très fréquente un état de dénutrition qui est également associé au développement de complications et à la mortalité de la cirrhose. Les études de supplémentation nutritionnelle, dont les résultats sont controversés, se sont portées principalement sur le versant protéino-calorique des carences, alors que les patients souffrant de MAF présentent aussi des déficiences spécifiques en micro-nutriments, notamment en vitamines A et D, dont la signification pathophysiologique n’a jamais été étudiée. En effet, les vitamines A et D possèdent, en plus de leurs effets classiquement décrits, des effets immuno-modulateurs, anti-inflammatoires, anti-TNF-α et anti-fibrosants. Les carences en vitamine A et en vitamine D, ou en leurs métabolites actifs, l’acide all-trans rétinoïque (ATRA) et la 1α,25-dihydroxyvitamine D (1,25(OH)2D), pourraient donc être impliquées dans l’hyper-réponse inflammatoire délétère et dans la fibrose présentes dans les MAF. Dans un premier temps, nous avons étudié l’association entre les taux plasmatiques des vitamines A, D et d’ATRA, et la sévérité et la mortalité des MAF. Nous avons confirmé l’existence de déficiences en ces micro-nutriments chez les patients souffrant de MAF et nous avons montré l’association significative de ces carences avec la sévérité de la maladie, évaluée par les scores de MELD et de Child-Pugh, ainsi qu’avec la mortalité. Ces observations épidémiologiques très intéressantes ne permettent, cependant, pas de déterminer le rôle biologique potentiel des carences en vitamines A et D dans le développement et la progression des lésions hépatiques liées à l’alcool. En effet, le foie étant l’organe principal de stockage de la vitamine A et le lieu de la première hydroxylation de la vitamine D, les carences pourraient aussi bien être la conséquence de l’insuffisance hépatique et donc, un marqueur de sévérité, qu’une cause aux lésions, et donc une cible thérapeutique potentielle. Afin de déterminer l’existence d’un lien causal entre déficience et maladie hépatique, nous avons élaboré des expérimentations in vitro sur des cellules de patients et in vivo chez la souris. Nous montrons que les supplémentations in vitro en ATRA ou en 1,25(OH)2D modifient la réponse inflammatoire exacerbée des lymphomonocytes circulants (PBMC :peripheral blood mononuclear cells) de patients avec MAF. Elles diminuent l’expression et la production de TNF-α et augmentent celle de l’interleukine-10 (IL-10), cytokine anti-inflammatoire, en ce qui concerne l’ATRA. L’action de ce dernier est pré-transcriptionnelle puisqu’il agit sur l’expression de TNF-α, et semble être dépendante de son récepteur à l’acide rétinoïque de type RAR. En effet, l’ATRA agit via sa liaison à deux types de récepteurs, le RAR et le RXR, récepteur rétinoïque X. Nos données montrent que l’utilisation d’un agoniste RAR reproduit les mêmes effets que l’ATRA, à l’inverse de l’utilisation d’un agoniste RXR. In vivo, dans un modèle murin de MAF, nous montrons que la supplémentation orale en 1,25(OH)2D est capable de diminuer l’expression intra-hépatique de TNF-α qui est augmentée par le régime alcoolisé. Nos résultats montrent donc que dans le contexte des lésions hépatiques liées à l’alcool, les supplémentations en métabolites actifs des vitamines A et D, in vitro, sur des cellules de patients, et in vivo, dans le modèle Lieber-DeCarli, ont un effet inhibiteur sur le TNF-α circulant et intra-hépatique. En parallèle à ces données de supplémentation, nous montrons que la carence en vitamine A chez des souris s’accompagne d’une augmentation de l’activation et de la fonction de leurs macrophages péritonéaux, état réversible par l’administration orale d’ATRA. De manière intéressante, nous observons également un état d’hyper-activation des monocytes circulants de patients avec MAF, dont la déficience en vitamine A a été démontrée. Ces données suggèrent que la carence en vitamine A présente chez les patients atteints de MAF pourrait faire partie des mécanismes favorisant cet état d’hyper-réponse inflammatoire.Certaines données montrent que la consommation chronique d’alcool induit une stabilisation de l’ARNm de TNF-α, expliquant en partie l’augmentation de ses taux plasmatiques chez les patients avec MAF. D’autres montrent qu’un traitement par l’ATRA est capable de déstabiliser l’ARNm de TNF-α, accélérant ainsi sa dégradation. Nos résultats montrent que la carence en vitamine A chez la souris s’accompagne d’un allongement du temps de demi-vie de l’ARNm de TNF-α exprimé par les macrophages péritonéaux murins, illustrant sa plus grande stabilité comparée aux souris non carencées en vitamine A. La déficience en vitamine A présente dans les MAF pourrait donc expliquer, du moins en partie, l’augmentation des taux de TNF-α par la stabilisation de son ARNm.Finalement, nous avons étudié l’effet de la 1,25(OH)2D sur le phénotype de cellules stellées humaines, impliquées dans le processus de fibrose hépatique. Le traitement de ces cellules par le métabolite actif de la vitamine D diminue leur activation, modifie l’expression de gènes pro- et anti-fibrosants, mais n’a pas d’action sur l’apoptose.En conclusion, nous montrons pour la première fois l’association entre les déficiences en vitamine A/ATRA et vitamine D, et la sévérité des MAF. De plus, nos résultats suggèrent que les carences vitaminiques, présentes chez les patients avec une MAF, pourraient participer à la pathophysiologie de ces maladies en activant les cellules immunitaires, et que leur supplémentation pourrait diminuer l’état pro-inflammatoire et pro-fibrosant délétère de la cirrhose. Les déficiences en vitamines A et D ne seraient pas seulement le reflet de la sévérité de la MAF, mais joueraient bien un rôle dans le développement et la progression des lésions hépatiques. Leur évaluation et leur correction devraient être étudiées comme cible thérapeutique dans la prise en charge des MAF. / Doctorat en Sciences médicales (Médecine) / info:eu-repo/semantics/nonPublished

The prevalence of post-bariatric complications and post-bariatric leaks has dramatically increased over the last two decades, in line with the pandemic of morbid obesity and the growing number of bariatric surgeries. For bariatric leaks, re-operation with drainage, and possibly an attempt at surgical closure, has, for a long time, been considered as the only possible treatment.In the early 2000s, our team started to be involved in post bariatric complications management and, with the experience we acquired in other diseases associated with upper gastrointestinal leakages, endotherapy became logically a good theoretical option to treat these leaks. It offers a potentially less invasive alternative to an unsatisfactory surgical management.Insertion of a self-expandable stent to cover the leak and facilitate its closure was our initial treatment strategy. Our retrospectives studies in this field, in addition to demonstrating good results, helped to identify major clinical factors associated with treatment success, such as early endoscopic management after leakage diagnosis. We promoted the use of partially covered stents which helps to reduce the risk of migration, probably increases watertightness, and can be efficiently extracted after the insertion of a fully covered stent.However, post bariatric leaks is a serious and difficult clinical situation and we experienced disappointing results with stent treatment alone in several patients. This led us to develop complementary techniques, such as fistula plug insertion or internal drainage with double pig tail stents, which provided additional positive results. Internal drainage even appears to be effective as an isolated strategy in selected patients.The present work illustrates the evolution of this new clinical modality and demonstrates, based on our published results, how endotherapy has become a first-line option that now plays a pivotal role in the multimodal approach to post-bariatric leakage. We show that, in the hands of an experienced team and with treatment tailored to the variety of clinical presentations, endotherapy can reach almost 90% success. Based on our results and on our current experience, we propose a treatment algorithm for management of post bariatric leaks and fistulas in which deployment of intraluminal self-expandable stents remains the cornerstone.As prospective and comparative study for management of this life-threatening complication are lacking, we also propose several direction for future clinical researches in this area which could help to standardize the multimodal treatment of post-bariatric leaks. / Doctorat en Sciences médicales (Médecine) / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Hirschsprung’s disease is a common pathology in pediatric surgery. Besides, long-term outcome of surgically-treated patients remains a crucial issue. The management of Hirschsprung’s disease has remarkably advanced over the years, but difficulties persist particularly in the developing countries (such as Vietnam), where essential diagnostic procedures, such as preoperative histopathological exploration techniques/ facilities (mainly for acetylcholinesterase staining), or adequate postoperative management and follow-up requirements are unavailable.We, therefore, contemplated to work-out a relevant histo-diagnostic approach to overcome these constraints that limit our diagnostic approaches, namely, in Vietnam, and we introduced a “less-demanding” diagnostic approach, namely calretinin immunohistochemical staining which is known to be adequate for formalin-fixed tissues (and thus not necessitating frozen section equipment). We thus used calretinin immunohistochemistry in a prospective study on a large cohort of Vietnamese HD cases. Results showed that rectal suction biopsy using calretinin immunohistochemistry provides an effective histopathological diagnostic tool that can replace AChE and provides a valuable evaluating approach for both preoperative and postoperative management.In addition, we also studied long-term outcome in operated patients and impact of postoperative morbidities on their quality of life. Indeed, a long-term multidisciplinary management with dedicated procedures such as anorectal manometry is essentially required for patients with severe defecation disorders. / Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine) / info:eu-repo/semantics/nonPublished

L’overdose au paracétamol est l’une des intoxications médicamenteuses la plus fréquente au monde, caractérisée par une atteinte hépatique dont l’issue peut être fatale. Les études réalisées sur ce phénomène ont montré que la phase initiale de la toxicité est induite par le métabolite actif du paracétamol, le N-acétyl-p-benzoquinone imine (NAPQI). Ce dernier, en l’absence de quantité suffisante de glutathion, s’accumulent dans la cellule et finit par se lier à d’autres protéines, principalement mitochondriales, formant alors des adduits. Cette liaison va altérer la fonction primaire des protéines et conduire, en cas d’overdose sévère, à la mort des hépatocytes. La mort cellulaire s’accompagne alors de la libération de composants cellulaire dont le rôle sera d’alerter le système immunitaire des lésions tissulaires. Ces composants prennent alors le nom d’«alarmines» ou de « damage-associated molecular patterns » (DAMPs). La protéine HMGB1 (High Mobility Group Box 1) fait partie de cette catégorie.Au cours de cette thèse nous nous sommes intéressés de plus près à la protéine HMGB1, à son origine ainsi qu’à son rôle dans l’amplification et la propagation des lésions hépatiques initialement induites par l’overdose au paracétamol. Nos travaux se sont d’abord portés sur l’étude de la protéine HMGB1 dans un modèle murin d’hépatite au paracétamol. Nos expériences nous permettent, d’une part, de confirmer que la libération d’HMGB1 est liée à la sévérité des lésions hépatiques et d’autre part, de démontrer que l’amplification et la propagation de ces lésions, dans les phases précoces de l’intoxication au paracétamol, peuvent se produire indépendamment des cellules immunitaires. Sur base de ces résultats, nous avons émis l’hypothèse de l’existence d’un dialogue entre la protéine HMGB1 et les hépatocytes plutôt que du dialogue, généralement décrit dans la littérature, entre la protéine HMGB1 et les cellules du système immunitaire Nos travaux se sont donc poursuivis, in vitro, sur une lignée cellulaire d’hépatocytes humains, les cellules HepaRG. Ces expériences nous ont permis, d’une part, de confirmer l’implication de la protéine HMGB1 dans l’hépatotoxicité au paracétamol et de mettre en évidence la capacité de cette protéine à provoquer, sans intermédiaire, la mort des cellules HepaRG. D’autre part, ces expériences nous permettent de suggérer la participation de la protéine HMGB1 dans la propagation et l’amplification de la mort des hépatocytes exposés au paracétamol par une voie de signalisation impliquant l’axe TLR4/TRIF/RIPK3. Finalement, l’inhibition de la protéine HMGB1 semblant être bénéfique, nous avons investigué la potentielle efficacité de l’administration d’une combinaison de N-acétylcystéine et de glycyrrhizine dans notre modèle murin. L’idée était de combiner une drogue qui agit sur l’accumulation du métabolite toxique et une seconde qui agit sur la phase de propagation du signal. Nos résultats, bien que préliminaires, ont démontré l’efficacité de cette combinaison à la fois sur la nécrose hépatique et sur la survie des souris. En conclusion, nos travaux confirment l’importance du rôle joué par la protéine HMGB1 dans l’hépatotoxicité induite par le paracétamol et nous permettent de mettre en évidence un nouveau mécanisme, impliquant la protéine HMGB1, qui pourrait contribuer à l’amplification et la propagation des lésions hépatiques induites par une overdose de paracétamol. / Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine) / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Les maladies inflammatoires à médiation immunitaire représentent un groupe de maladies cliniquement distinctes mais liées par de multiples mécanismes pathogéniques inflammatoires sous- jacents, associant facteurs génétiques, immunitaires et environnementaux. La pathogenèse de ces maladies n’est toujours pas complètement établie, en particulier l’importance et les interactions entre ces différents facteurs, mais leur étude a permis d’établir un lien entre diverses maladies, comme les spondylarthropathies et les maladies des barrières épithéliales telles que le psoriasis et les maladies inflammatoires de l’intestin. En effet, ces dernières partagent des voies biologiques communes perturbées, notamment au niveau de l’immunité de type 3.Afin d’étudier les interactions entre les articulations, la peau et l’intestin dans un contexte inflammatoire, nous avons utilisé un modèle murin développant un syndrome inflammatoire spontané multi-organique lié à une déficience en tristétraproline, qui est une protéine impliquée dans la régulation post-transcriptionnelle de nombreuses cibles inflammatoires. Ce syndrome présente des similitudes avec le groupe des spondylarthropathies, par l’atteinte des articulations et de la peau, et une dépendance au TNFα et à l’IL-23. Dans ce contexte, nous avons investigué les bases cellulaires et moléculaires responsables de ce syndrome spontané, et les liens entre les différents organes, grâce à des approches transgéniques et interventionnelles.Dans un premier temps, nous nous sommes intéressés aux interactions entre la peau et les articulations. Nous avons montré qu’une inflammation cutanée se développait en l’absence de tristétraproline, liée à une dérégulation de l’immunité de type 3 et que la tristétraproline avait un rôle essentiel au sein des kératinocytes dans le maintien de l’homéostasie cutanée, mais également dans le contrôle d’une inflammation systémique et articulaire. Nous avons ensuite étudié plus spécifiquement le rôle de la tristétraproline au niveau de l’homéostasie intestinale. Nous avons observé que la perte de tristétraproline n’entraînait pas de pathologie intestinale franche grâce à la présence de mécanismes régulateurs locaux tels qu’une expansion intestinale de lymphocytes T régulateurs et de cellules lymphoïdes innées du groupe 3, et que la perte de la tristétraproline au sein des cellules épithéliales intestinales ne perturbait pas l’homéostasie intestinale. Par contre, la modulation du microbiote intestinal a permis de montrer son impact direct sur le contrôle de l’inflammation locale mais également sur les manifestations systémiques de ce syndrome spontané. Enfin, la modulation des voies de détection microbienne a montré de façon plus complexe un rôle amplificateur ou inhibiteur selon les compartiments investigués.En conclusion, malgré une complexité liée aux différents types cellulaires probablement impliqués et au nombre d’organes atteints, ce modèle murin spontané a donc permis une étude plus détaillée des liens entre la peau, les intestins et les articulations dans un contexte inflammatoire, ainsi que le rôle du microbiote, dans le but d’une meilleure compréhension de la pathogenèse de maladies inflammatoires humaines et de leur prise en charge. / Doctorat en Sciences médicales (Médecine) / info:eu-repo/semantics/nonPublished

La majeure partie de l'héritabilité des maladies inflammatoires des intestins (MICI) comprenant essentiellement la maladie de Crohn (MC) et la rectocolite ulcéro-hémorragique (RCUH) reste manquante. A côté des formes classiques de MICI polygéniques, un nombre croissant de maladies rares monogéniques avec un syndrome d’immunodéficience primaire innée ou acquise (ou Primary Immune Deficiency (PID) disorders) et un tableau clinique de maladie inflammatoire gastro-intestinale semblable aux MICI ont été identifiées au cours de ces dernières années. Les gènes mutés au sein de ces PID pourraient contenir des variants rares associés aux MICI dont l'identification aurait échappé aux études d'association du génome (GWAS) et qui pourraient être détectés avec le séquençage à haut débit. Nous avons sélectionné 23 gènes candidats associés à dix maladies monogéniques avec manifestations gastro-intestinales inflammatoires ressemblant aux MICI et avons évalué la contribution éventuelle de ces gènes à la prédisposition héréditaire à développer une MC via d'une part une étude d'association sur base des données de génotypage de 17000 patients atteints de MC issus des GWAS de l'IIBDGC et d'autre part, via une étude de séquençage à haut débit au sein d'une cohorte de 2390 patients atteints de MC. Nous avons identifié 4 nouveaux variants du gène XIAP qui sont associés chez les patients porteurs de la mutation, à un défaut d'activation de la voie de NOD2 après stimulation par le muramyl dipeptide (MDP). En complément à l'étude des formes monogéniques de MICI, les formes non européennes peuvent également constituer une source de données à exploiter pour pallier à l'héritabilité manquante. En effet, la plupart des GWAS ont été effectuées au sein de populations d'origine européenne. Or en combinant plusieurs groupes ethniques, il est possible d'identifier de nouveaux loci de susceptibilité tel qu'on a pu l'observer dans la première étude trans-éthnique réalisée au sein de patients atteints de MICI. Très peu d'études génétiques ont été réalisées au sein de la population d'origine marocaine qui est la population non européenne la plus prépondérante en Belgique. Nous avons entrepris une étude d'association sur des puces de génotypage de type Immunochip au sein d'une population de 306 patients d'origine marocaine atteints de MICI, se focalisant sur les 163 variants communs de susceptibilité connus dans les MICI lorsque l'étude a été débutée. L'étude a identifié une association significative aux MICI pour dix loci notamment au sein des gènes tels que IL23R, JAK2, CARD9 ou CCR6. Ces associations sont nouvelles et n'ont pas été étudiées ou confirmées dans les précédentes études faites au sein de patients d'origine marocaine atteints de MICI. / Doctorat en Sciences médicales (Médecine) / info:eu-repo/semantics/nonPublished