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Análise da expressão gênica no tumor ósseo de células gigantes /Babeto, Erica. January 2011 (has links)
Orientador: Paula Rahal / Banca: Aparecida Maria Fontes / Banca: Débora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Ana Elizabete Silva / Banca: Jane Lopes Bonilha / Resumo: O tumor ósseo de células gigantes (TCG) é um tumor benigno, que causa destruição osteolítica, com comportamento biológico incerto e com características particulares como um elevado número de células gigantes multinucleadas e comportamento agressivo. A recorrência local do TCG é freqüentemente observada em 20 a 50% dos casos. Mais agravante que a recorrência, é o fato de que após a recidiva, o paciente muitas vezes também apresenta metástases em outros órgãos, principalmente no pulmão. Dessa forma, o objetivo do trabalho foi á investigação da expressão gênica para identificar genes diferencialmente expressos no TCG, que podem estar envolvidos na biologia molecular e desenvolvimento da doença. A hibridização subtrativa rápida (RaSH) foi utilizada para identificar novos genes diferencialmente expressos, como KTN1, NEB, ROCK1 e ZAK, que foram validados por PCR quantitativo em tempo real (qPCR) e a imuno-histoquímica em amostras de TCG comparadas ao tecido ósseo normal. A anotação funcional indica que estes genes estão envolvidos em processos celulares relacionadas ao fenótipo tumoral. A expressão dos genes KTN1 e ROCK1 encontra-se aumentada e o gene ZAK tive sua expressão reduzida nas amostras de TCG analisadas. Pela presença de ilhas CpG na região promotora e baixa expressão no tecido tumoral, o padrão de metilação do gene ZAK foi analisado por MSP-PCR. Os genes identificados KTN1, ROCK1 e ZAK pode ser responsável pelas perda de homeostase celular no TCG uma vez que são responsáveis pela várias funções relacionadas com a tumorigênese, como a migração celular, organização do citoesqueleto, apoptose, controle do ciclo celular e, portanto esses resultados poderão contribuir para a compreensão das bases moleculares do TCG, assim ajudando a melhorar o diagnóstico, prognóstico e tratamento dos pacientes / Abstract: Giant cells tumors of bone (GCTB) are benign in nature but cause osteolytic destruction, with a number of particular characteristics. These tumors can have uncertain biological behavior, often contain a significant proportion of highly multinucleated cells, and may show aggressive behavior. We have studied differential gene expression in GCTB that may give a better understanding of their physiopathology, and might be helpful in prognosis and treatment. Subtractive hybridization (RaSH) was used to identify and measure novel genes that appear to be differentially expressed, including KTN1, NEB, ROCK1 and ZAK, using qRT-PCR and immunohistochemical in the samples of GCTBs compared to normal bone tissue. Normal bone was used in the methodology RaSH for comparison with the GCTB in identification of differentially expressed genes. Functional annotation indicated that these genes are involved in cellular processes related to their tumor phenotype. The differential expression of KTN1, ROCK1 and ZAK was independently confirmed by qRT-PCR and immunohistochemical. The expression of the KTN1 and ROCK1 genes were increased in samples by qRT-PCR and immunohistochemical and ZAK had reduced expression. Since ZAK have CpG islands in their promoter region and low expression in tumor tissue, their methylation pattern was analyzed by MSP-PCR. The genes identified, KTN1, ROCK1 and ZAK may be responsible for loss of cellular homeostasis in GCTB since they are responsible for various functions related to tumorigenesis such as cell migration, cytoskeletal organization, apoptosis, cell cycle control and thus may contribute at some stage in the process of formation and development of GCTB / Doutor
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Análise da expressão gênica no tumor ósseo de células gigantesBabeto, Erica [UNESP] 28 February 2011 (has links) (PDF)
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babeto_e_dr_sjrp.pdf: 649918 bytes, checksum: 812ddac8aa99c1d4ba6dfcdc980015a8 (MD5) / O tumor ósseo de células gigantes (TCG) é um tumor benigno, que causa destruição osteolítica, com comportamento biológico incerto e com características particulares como um elevado número de células gigantes multinucleadas e comportamento agressivo. A recorrência local do TCG é freqüentemente observada em 20 a 50% dos casos. Mais agravante que a recorrência, é o fato de que após a recidiva, o paciente muitas vezes também apresenta metástases em outros órgãos, principalmente no pulmão. Dessa forma, o objetivo do trabalho foi á investigação da expressão gênica para identificar genes diferencialmente expressos no TCG, que podem estar envolvidos na biologia molecular e desenvolvimento da doença. A hibridização subtrativa rápida (RaSH) foi utilizada para identificar novos genes diferencialmente expressos, como KTN1, NEB, ROCK1 e ZAK, que foram validados por PCR quantitativo em tempo real (qPCR) e a imuno-histoquímica em amostras de TCG comparadas ao tecido ósseo normal. A anotação funcional indica que estes genes estão envolvidos em processos celulares relacionadas ao fenótipo tumoral. A expressão dos genes KTN1 e ROCK1 encontra-se aumentada e o gene ZAK tive sua expressão reduzida nas amostras de TCG analisadas. Pela presença de ilhas CpG na região promotora e baixa expressão no tecido tumoral, o padrão de metilação do gene ZAK foi analisado por MSP-PCR. Os genes identificados KTN1, ROCK1 e ZAK pode ser responsável pelas perda de homeostase celular no TCG uma vez que são responsáveis pela várias funções relacionadas com a tumorigênese, como a migração celular, organização do citoesqueleto, apoptose, controle do ciclo celular e, portanto esses resultados poderão contribuir para a compreensão das bases moleculares do TCG, assim ajudando a melhorar o diagnóstico, prognóstico e tratamento dos pacientes / Giant cells tumors of bone (GCTB) are benign in nature but cause osteolytic destruction, with a number of particular characteristics. These tumors can have uncertain biological behavior, often contain a significant proportion of highly multinucleated cells, and may show aggressive behavior. We have studied differential gene expression in GCTB that may give a better understanding of their physiopathology, and might be helpful in prognosis and treatment. Subtractive hybridization (RaSH) was used to identify and measure novel genes that appear to be differentially expressed, including KTN1, NEB, ROCK1 and ZAK, using qRT-PCR and immunohistochemical in the samples of GCTBs compared to normal bone tissue. Normal bone was used in the methodology RaSH for comparison with the GCTB in identification of differentially expressed genes. Functional annotation indicated that these genes are involved in cellular processes related to their tumor phenotype. The differential expression of KTN1, ROCK1 and ZAK was independently confirmed by qRT-PCR and immunohistochemical. The expression of the KTN1 and ROCK1 genes were increased in samples by qRT-PCR and immunohistochemical and ZAK had reduced expression. Since ZAK have CpG islands in their promoter region and low expression in tumor tissue, their methylation pattern was analyzed by MSP-PCR. The genes identified, KTN1, ROCK1 and ZAK may be responsible for loss of cellular homeostasis in GCTB since they are responsible for various functions related to tumorigenesis such as cell migration, cytoskeletal organization, apoptosis, cell cycle control and thus may contribute at some stage in the process of formation and development of GCTB
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