Göttingen, Univ., Diss., 2004. / Computerdatei im Fernzugriff.

Göttingen, Universiẗat, Diss., 2004.

Submitted by Biblioteca da Faculdade de Farmácia (bff@ndc.uff.br) on 2017-04-19T16:57:00Z No. of bitstreams: 1 Pontes, Simone Gomes [Dissertação, 2012].pdf: 1302242 bytes, checksum: 7aab3cecd1b771d41f103c491d846579 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-19T16:57:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pontes, Simone Gomes [Dissertação, 2012].pdf: 1302242 bytes, checksum: 7aab3cecd1b771d41f103c491d846579 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A dihidroxiacetona (DHA) é uma molécula constituída por três carbonos e não tóxica, utilizada como insumo para as indústrias de cosméticos, fármacos e química fina. É produzida industrialmente por fermentação, utilizando a bactéria Gluconobacter oxydans. Esse processo tem como principal limitação a inibição do crescimento tanto pelo substrato – glicerol – quanto pelo produto – DHA e, por tal, estudos recentes descrevem propostas para melhoria do processo. Sendo a conversão de glicerol a DHA realizada por uma única enzima em uma etapa, o presente trabalho considera que tal processo se enquadra nas definições de uma biotransformação, ou seja, a utilização de um catalisador biológico com o propósito de converter um substrato a um produto estruturalmente similar, através de modificações específicas e utilizando um número limitado de etapas enzimáticas. Dessa forma, neste estudo foram avaliados comparativamente a secagem de células em acetona e, em um segundo momento, a utilização de células de Gluconobacter oxydans previamente crescidas, para a produção de DHA a partir de glicerol. Objetivando contornar o principal problema do processo, que é a inibição do crescimento microbiano pelo substrato e pelo produto, foram testadas duas linhagens. A utilização de células secas em acetona se mostrou possível, porém os resultados não foram reprodutíveis e células previamente crescidas por 24 horas passaram a ser usadas nos experimentos de biotransformação. O pH e a temperatura de reação foram selecionados a partir de um planejamento delineamento composto central rotacional como sendo de 34ºC e pH de 4,5, para G. oxydans CCT 0552 e de 26ºC e pH de 4,5 para G. oxydans CCT 0174. A linhagem G. oxydans CCT 0552 se mostrou mais adequada à oxidação de glicerol à DHA, com aumento do acúmulo de DHA no meio reacional com o tempo (2,1 g/g biomassa) e com a produtividade constante (0,45 g/g biomassa). Foi constatada perda de atividade nas células estocadas por congelamento, o que leva à necessidade de selecionar um melhor método de conservação das células para a utilização na produção / The dihydroxyacetone (DHA) is a non-toxic molecule consisting of three carbons, used in the cosmetics, pharmaceuticals and fine chemicals industry. The DHA is industrially produced by fermentation, using the bacteria Gluconobacter oxydans. The main bottleneck of this process is the growth inhibition by the substrate – glycerol – and the product – DHA. This problem leads recent studies to describe proposals for improving the process. As the conversion of glycerol to DHA is performed by a single enzyme in one step, this study considers that this process fits in the definitions of biotransformation, in other words, the use of a biological catalyst in order to convert a substrate for a structurally similar products, by speficic modifications, and using a limited number of enzymatic steps. Thus, this study were assessed by comparison with drying of cells in acetone and in second stage, the use of previously grown cells of Gluconobacter oxydans for the production of DHA from glycerol. The use of dried cells proved to be possible, but the results were not reproducible and the biotransformation experiments were done with previously grown cells of 24 hours age. . The best pH and temperature for the reaction were selected from a central composite design as being 34o C and pH 4.5 for G. oxydans CCT 0552 and 26o C and pH 4.5 for G. oxydans CCT 0174. The strain G. oxydans CCT 0552 was more suitable for the oxidation of glycerol to DHA, with increased accumulation of DHA in the reaction media (2,1 g/g biomass) and constant productivity (0,45 g/g biomass). Loss of activity was observed in cells stored by freezing, which leads to the need to select a best method of preserving cells for the production

Techn. Universiẗat, Diss., 2005--München.

Thesis (doctoral)--Universität Kiel, 2000.

Thesis (MSc (Genetics. Institute for Plant Biotechnology (IPB)))--Stellenbosch University, 2008. / Dextran is a high value glucose polymer used in medicine and an array of laboratory techniques. It is synthesised by lactic-acid bacteria from sucrose but has also reportedly been produced by Gluconobacter oxydans (G. oxydans) from a range of maltooligosaccharides (MOS) via the action of dextrin dextranase (DDase). In this study the presence of DDase is investigated in two G. oxydans strains (ATCC 621H and ATCC 19357) and shown to be present in the ATCC 19357 strain, but not in the ATCC 621H strain. The enzyme was partially purified from the ATCC 19357 strain, and its kinetic properties investigated. The partially purified protein was also digested with trypsin, and de novo peptide sequences obtained from it. Several attempts were made to obtain the gene coding for the DDase. These include amplifying an open reading frame from the G. oxydans genome coding for a glycosyltransferase with the approximate molecular weight of the DDase, using the peptide sequences obtained from the partially purified protein to design degenerate PCR primers and the production of a genomic DNA library for functional screening in E. coli. None of these approaches led to the successful isolation of the extracellular DDase sequence.

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Made available in DSpace on 2014-12-17T15:18:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CarolinaCSO.pdf: 673645 bytes, checksum: 65edb3dd5d260d66ee98b34da41f4185 (MD5) Previous issue date: 2009-02-27 / Gluconacetobacter diazotrophicus ? uma alfa-proteobact?ria Gram-negativa, tolerante a meios ?cidos, fixadora de nitrog?nio atmosf?rico e foi a primeira bact?ria diazotr?fica endof?tica isolada da cana-de-a??car. Por sua vez, Gluconobacter oxydans, tamb?m alfa-proteobact?ria Gram-negativa, possui a capacidade de oxidar incompletamente alco?is e carboidratos. Ambas de interesse biotecnol?gico e industrial, essas bact?rias tiveram seus genomas seq?enciados completamente em 2007. Desta forma, foi de interesse desse trabalho analisar e comparar os genes de reparo do DNA devido sua import?ncia na manuten??o da integridade gen?mica. Sendo assim, as vias de reparo presentes nos dois organismos foram identificadas, utilizando como base uma terceira alfa-proteobact?ria, a Caulobacter crescentus, cujos genes de reparo foram descritos por um trabalho anterior e tamb?m os genes bem estabelecidos para o reparo do DNA em Escherichia coli. Para esse estudo, um banco de dados contendo ort?logos para os genes de reparo de DNA encontrados nos organismos foi criado e an?lises comparativas por similaridade usando o pacote Blast e o software Clustal foram feitas. Este estudo demonstrou que as principais vias de reparo ao DNA reparos por excis?o, reparo direto, reparo recombinacional e reparo pelo sistema SOS est?o presentes nos organismos analisados, demonstrando, na maioria das vezes, boa similaridade com E. coli. Interessantemente, foram encontradas duplica??es g?nicas nos quais uma das c?pias estava presente no cromossomo e a outra, no plasm?deo, como no caso de UvrD, DnaE e Ssb, possivelmente caracterizando eventos de transfer?ncia lateral. Por fim, uma grande novidade foi a identifica??o de ort?logos para RecB em G. diazotrophicus e G. oxydans e de ort?logos duplicados de RecD em G. diazotrophicus. At? o momento, n?o havia sido relatada a presen?a de membros da via de inicia??o RecBCD do reparo recombinacional em alfaproteobact?rias