Os objetivos deste estudo foram determinar as dosagens e selecionar isolados de Beauveria spp. e Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin, 1883, assim como desenvolver uma metodologia visando ao controle do Sphenophorus levis Vaurie, 1978. A pesquisa foi realizada no Laboratório de Patologia de Insetos do Departamento de Entomologia da ESALQ/USP e na Fazenda Retiro da Usina Santa Helena, em Piracicaba, SP. Foram testadas 4 dosagens do isolado 447 de B. bassiana (Bals.) Vuill. Para a realização deste bioensaio, os insetos adultos foram colocados juntamente com cada uma das dosagens do patógeno em um frasco de vidro de 500 ml e agitados por 2 minutos, sendo posteriormente retirados e mantidos em estufa incubadora, sob a temperatura de 26 ± 0,5°C e fotofase de 12 horas. Determinou-se a dose letal (DL50) de 8,8 x 10 conídios/frasco. Todavia a dosagem de 8 x 1011 conídios/frasco, foi utilizada nos bioensaios, visando selecionar os melhores isolados. Utilizando esta metodologia avaliaram-se 7 isolados de Beauveria spp. e 7 de M. anisopliae. Os 3 melhores isolados, de cada gênero do patógeno, foram submetidos a outro bioensaio, no qual utilizaram-se pedaços de cana-de-açúcar (iscas) tratadas com os fungos. A seleção dos isolados foi feita utilizando-se as seguintes variáveis: porcentagem de mortalidade, número de conídios produzidos por inseto, tempo letal (TL 50) e Potência Relativa para matar o hospedeiro. Os isolados 447 de B. bassiana e 259 de M. anisopliae foram selecionados para os testes de campo, por apresentarem as melhores características epizootiológicas. Nestas condições, na dosagem de 4,9 x 1011 conídios de B. bassiana e M. anisopliae por pedaço de cana-de-açúcar tratado (25 cm de comprimento), obtiveram-se respectivamente, 92,3 e 46,5% de mortalidade dos adultos de S. levis. As iscas de cana-de-açúcar, inoculadas com B. bassiana e M. anisopliae foram eficientes para o controle de adultos de S. levis e a sua atratividade não foi afetada pelos patógenos. / The objectives of this study were to determine dosages and select isolates of Beauveria spp. and Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin, 1883, and develop a methodology for control of Sphenophorus levis, Vaurie, 1978. The research was conducted in the Insect Pathology Laboratory in the Department of Entomology of ESALQ/USP and in the Farmer Retiro of the Usina Santa Helena in Piracicaba, SP, Brazil. Four dosages of Beauveria bassiana (Bals.)Vuill. isolate 447 were tested. For the bioassay, the adult insects were placed together in a 500 ml flask, the dosage of pathogen spores was added and the mixture was agitated for 2 minutes. Afterwards the insects were removed and maintained in chambers with a constant temperature of 26.0 ± 0.5°C and 12 hours photophase. It was determined that the lethal dose (LD50) 11 was 8.8 x 109 conidia/flask. However, a dosage of 8.0 x 1011conidia/flask was used for other bioassay to select the best isolates. Using this methodology 7 isolates of spp. and 7 of M. anisopliae were evaluated. The 3 best isolates of each genus of pathogen were subjected to another bioassay in which pieces of sugar cane baits treated with fungi were used. The selection of isolates was made using the following parameters: percent mortality, number of conidia produced per insect, lethal time (LT50) and relative potential to kill the host. The isolates of B. bassiana 447 and M. anisopliae 259 were selected for field tests because they showed the best epizootiological characteristics. Under these conditions a dos age of 4.9 x 1011 conidia of B. bassiana and M. anisopliae per piece of treated sugar cane (25 cm in length) yielded 92.3 and 46.5% of S. levis adult mortality respectively. The baits of pieces of sugar cane inoculated with B. bassiana and M. anisopliae were efficient for the control of adult S. levis and their attractiveness was not affected by the pathogens.

Sphenophorus levis (Coleoptera: Curculionidae) é uma das principais pragas de importância econômica na cana-de-açúcar. Seu ataque pode causar a morte da planta, promovendo falhas na rebrota e dependendo do nível de infestação, inviabilizar novos cortes. Além disso, é considerado um inseto de difícil manejo. Dentre as razões, destacam-se o hábito críptico de suas larvas, que se alimentam no interior do colmo da cana, e dos adultos, que permanecem boa parte de seu tempo abaixo da palhada sobre o solo. Por esta razão, os métodos tradicionais de controle, como os agroquímicos têm sido pouco eficientes. Neste sentido, a busca por novos conhecimentos e novas estratégias para o manejo desta praga tem se tornado frequente. Assim, o objetivo principal deste trabalho foi o de reinvestigar o feromônio de S. levis, visando a possível existência de novos compostos químicos na sua composição. Além disso, foram estudados ainda a morfologia e morfometria de S. levis, visando uma ágil e fácil separação por sexo nesta espécie, e uma amostragem populacional das formas biológicas de S. levis em campo, ao longo de uma safra, tendo em vista o manejo desta praga. As fêmeas apresentaram maior tamanho corporal que os machos, porém, houve sobreposição entre o tamanho mínimo da fêmea e máximo do macho, comprometendo uma distinção pelo tamanho. A separação dos sexos em S. levis pode ser feita observando-se a parte ventral do abdome, com os machos apresentando toda a região pilosa e as fêmeas somente com pelos na região apical. Uma maior concavidade presente no final do abdome dos machos, também pode ser utilizada como um parâmetro auxiliar nesta separação. Observando-se a flutuação populacional das diferentes fases biológicas de S. levis, por meio de trincheiras, verificou-se que as larvas ocorrem praticamente durante todos os meses do ano, enquanto que pupas e adultos recém emergidos, em menos da metade das amostras. O pico populacional de larvas, pupas e adultos recém emergidos ocorreu em outubro. Para os adultos, a amostragem por meio de iscas indicou que o pico de maior intensidade foi em dezembro. Na etapa de reinvestigação do feromônio de agregação de S. levis, foram obtidas respostas positivas nas antenas de machos e fêmeas para três compostos químicos. Um destes compostos foi o álcool 2-metil-4-octanol, já identificado anteriormente por Zarbin et al. (2003). Os outros dois, são novos compostos denominados 2,3-butanodiol diacetil (2,3 diacetilbutano) e meso 2,3 butanodiol diacetil (meso 2,3 diacetilbutano). Os três compostos sintéticos foram testados em GC-EAG, porém ainda sem uma resposta conclusiva. Novos testes necessitam ainda ser conduzidos para elucidar a composição química do feromônio de agregação de S. levis. / Sphenophorus levis (Coleoptera: Curculionidae) is one of the main pests of economic importance in sugarcane in Brazil. The attack can result plant death promoting the regrowth and failures depending on the level of infestation, derail further cuts. S. levis is a hard management pest. Among the reasons, it highlights the cryptic habits of larva, which feed inside the sugarcane stalk, and adults live in the soil surface, above of straw. Due to this, the traditional control methods such as agrochemicals have been inefficient. The search for new knowledge and new strategies for the management of this pest has become frequent. Thus, the main objective of this work was to reinvestigate the S. levis pheromone, aiming the possible existence of new chemical compounds in its composition. Beside that, this study aimed to morphometric and morphological comparison between males and females, seeking sex separation in a fast and effective manner. Moreover, population sample of S. levis in field was performed, aiming at an improvement in planning of the management of this pest. Females of S. levis have a greater body size than males; however this parameter cannot be used as a sex indicator, because there was overlap between the minimum and maximum body sizes of females and males respectively. S. levis sex separation can be carried observing abdomen ventral side, where males present hairy venter and females just a tuft in the apical region, and by a greater concavity of the end of the abdomen in males. The fluctuation of S. levis biological stages through trenches, it was found that the larvae occurs during almost all months of the year, while pupae and recently emerged adults in less than half of the samples. The population peak for larvae, pupae and recently emerged adults was in October. For adults, the sampling through baits indicated that the peak intensity was higher in December. Then, in the reinvestigate the S. levis pheromone, natural extracts from males showed responses of antennas of males and females of the species for three chemical compounds. One of these compounds was the alcohol 2-methyl-4-octanol, previously identified by Zarbin et al. (2003). The other two are new compounds, called 2.3-butanediol diacetil (2.3 diacetilbutano) and meso 2.3 butanediol diacetyl (meso 2.3 diacetilbutano). The three synthetic compounds were tested in GC-EAG, but there is still no conclusive answer. New tests still need to be conducted to elucidate the chemical composition of S. levis aggregation pheromone.

Submitted by JOÃO RAFAEL DE CONTE CARVALHO DE ALENCAR (jralencar@gmail.com) on 2016-08-02T21:26:02Z No. of bitstreams: 1 Tese Completa João 31-06-2016.pdf: 1972389 bytes, checksum: 65cb391e11ab0faad1c090aead364836 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-08-04T18:22:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 alencar_jrdcc_dr_jabo.pdf: 1972389 bytes, checksum: 65cb391e11ab0faad1c090aead364836 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-04T18:22:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 alencar_jrdcc_dr_jabo.pdf: 1972389 bytes, checksum: 65cb391e11ab0faad1c090aead364836 (MD5) Previous issue date: 2016-07-04 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A cana-de-açúcar é uma das principais culturas do Brasil em área e produção, lhe conferindo problemas fitossanitários em igual proporção. Dentre estes problemas os insetos-praga acabam por limitar a produtividade. Sphenophorus levis é conhecido como uma das principais pragas da cana-de-açúcar. O gorgulho-da-cana tem a amostragem e o controle difíceis de serem realizados devido ao seu hábito subterrâneo durante as fases iniciais de desenvolvimento. Este trabalho, portanto teve como objetivo estudar a dinâmica populacional. o padrão de distribuição e desenvolver um plano de amostragem sequencial de S. levis na cultura da cana-de-açúcar. Foram levantados dados da praga em uma área de 1,05 hectares entre o segundo e o terceiro corte da cultura, em duas safras seguidas 2013/2014 e 2014/2015. As áreas foram divididas em 100 parcelas onde se realizou a contagem de larvas, pupas e adultos, soma das formas biológicas e rizomas atacados pelo gorgulho da cana. Para isso, foram amostradas duas trincheiras por parcela de 0,5 x 0,5 x 0,5 m (largura, altura e profundidade) a cada duas semanas. E para os adultos também foi usado armadilhas com toletes tratados com melaço de cana. Com estes dados coletados foi possível verificar satisfatoriamente a praga e seus danos, e constatar que eles permanecem o ano inteiro presentes na área de cultivo. Além disso, foi determinado os períodos em que cada fase de desenvolvimento ocorram com maior e menor incidência, e correlacionar estes dados aos fatores do clima como a temperatura máxima, média e mínima, precipitação e umidade relativa do ar. Através do método “stepwise” foi constatado que a temperatura mínima, precipitação e umidade relativa do ar, são as variáveis climáticas que mais interferem no desenvolvimento de S. levis. Quanto à distribuição espacial, foi notório que tantos os índices de dispersão estudados, razão variância/média, índice de Morisita, coeficiente de Green e o expoente k da distribuição binomial negativa, indicaram que o gorgulho-da-cana e seus danos são altamente agregados. Este resultado foi confirmado com o melhor ajuste ao modelo probabilístico de distribuição pelo teste do qui-quadrado da distribuição binomial negativa. Além disso, foi estimado o k comum para desenvolver o plano de amostragem sequencial para os rizomas atacados por S. levis, utilizando-se os dados do teste da razão da máxima verossimilhança, com nível de controle de 10 e 5% de rizomas atacados, com número máximo de unidades amostrais esperado de 21 trincheiras. / The sugarcane is one of the main Brazilian crops in area as well in production. This fact ensures major phytosanitary problems associated too. Among these problems pests end up limiting production in several areas. Sphenophorus levis is known as one of the major pests of sugar cane. The sugarcane weevil sampling and control are difficult to done due their subterranean habit during the early stages of life. Therefore, this work aimed to study the population dynamics, the distribution pattern and to develop a sequential sampling plan for S. levis in sugarcane crops. Pest's data were raised from areas of 1.05 hectares between the second and third harvest cycle in two crops, 2013/2014 and 2014/2015. The areas were divided into 100 plots, where was held the counting of larval, pupae, adults and sum of biological forms from the weevil. The rhizomes attacked by this pest were also counted. For this, were sampled two trenches of 0.5 x 0.5 x 0.5 m (width, height and depth) every two weeks. Also, the adults were collected with pieces of sugarcane treated with molasses in traps. With these collected data was possible to check satisfactorily that the pest and its damage still present for all the crop. In Addition, it was Determined the periods of each development phase, occurring with greater and lesser incidence. Maximum, medial and minimal temperature, such as precipitation and relative humidity were correlated by stepwise method with the dynamics of the pest and its damage. It was found that the minimum temperature, precipitation and relative humidity, are climate variables that most affect the development of S. levis The dispersion indexes studied were variance/mean ratio, Morisita index, Green coefficient and the exponent k of the negative binomial distribution. They indicated that the sugarcane weevil and their damage are highly aggregated. This result was confirmed by the greater fit to the probabilistic distribution model, using the chi-square test for the negative binomial distribution adjustment. Also, it was estimated the common k to develop the sequential sampling plan for attacked rhizomes, using the ratio from the maximum likelihood test data , with 10 and 5 % level of control. The maximum number of sample units expected for Attacked rhizomes was 21 trenches.