El sarcoma de Kaposi (SK) es una enfermedad angioproliferativa con cuatro formas clínico-epidemiológicas: clásica (SK-C), africana endémica, relacionada con fármacos inmunosupresores y relacionada con el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SK-SIDA). La afectación del SK es generalmente cutánea, pero en los casos agresivos puede diseminarse a localizaciones extracutáneas. En la piel, las lesiones se clasifican clínicopatológicamente en máculas, placas y tumores de acuerdo con su progresión y severidad. El SK parece iniciarse como una proliferación vascular reactiva debida a una red de citocinas alterada, mientras que en estadios avanzados, se comporta como una neoplasia multifocal.El diferente comportamiento biológico del SK de acuerdo con sus presentaciones epidemiológicas y estadios puede estar relacionado con la presencia de alteraciones específicas en los mecanismos que controlan el crecimiento y desarrollo tumoral, como la sobreestimulación de citocinas y de factores de crecimiento angiogénicos o alteraciones en las oncoproteínas que controlan la proliferación celular y la apoptosis. Estas alteraciones podrían ofrecer los estímulos neoplásicos necesarios para el desarrollo, progresión y, en definitiva, un comportamiento más agresivo del SK.El factor de crecimiento hepatocitario (HGF) es una citocina angiogénica pleiotrópica que está sobreexpresada en cánceres humanos invasivos y puede actuar como factor de progresión tumoral, estimulando la angiogénesis y la invasividad de las células tumorales. Estas respuestas son transducidas a través del receptor c-Met. El HGF estimula la proliferación de las células fusiformes cultivadas de lesiones humanas de SK, y además las células del SK sintetizan y secretan HGF y expresan c-Met, creando un rizo de retroalimentación para la proliferación tumoral y la neovascularización. Hemos estudiado la expresión del c-Met en diferentes estadios histológicos de lesiones de SK-C y SK-SIDA, observando que la intensidad de tinción de c-Met fue mayor en los tumores que en las placas, de forma que el HGF se comporta como un factor de progresión en el SK.EL HHV-8, el factor etiológico del SK, codifica la v-ciclina, que formando complejo con la cinasa dependiente de ciclina (CDK) 6, contribuye a la fosforilación y degradación mediada por proteasoma del inhibidor de las cinasas dependientes de ciclina p27KIP1. La p27KIP1 regula negativamente la proliferación celular uniéndose e inhibiendo a los complejos ciclina-CDK de fase G1. Por otro lado, la infrarregulación de la expresión de la p27KIP1 parece facilitar el desarrollo tumoral y la diseminación metastásica; por ello la p27KIP1 ha sido considerada como un factor pronóstico independiente en una gran variedad de neoplasias humanas. Aunque la naturaleza neoplásica del SK todavía es controvertida, se ha demostrado repetidas veces que en algunos pacientes el SK puede comportarse como una neoplasia maligna y seguir un curso ominoso. Para determinar si la disminución de los niveles de la p27KIP1 está también relacionada con un comportamiento más agresivo del SK, decidimos investigar la inmunoreactividad de la p27KIP1 en biopsias de SK. De este modo, intentamos determinar si la disminución de los niveles de expresión de la p27KIP1 está relacionada con la afectación extracutánea en el SK, como ocurre en otras neoplasias cuando metastatizan. La media de porcentajes de células positivas para p27KIP1 era significativamente mayor en las biopsias de lesiones cutáneas y en las máculas-placas que en las lesiones extracutáneas y en los tumores respectivamente. Estos resultados apoyan la hipótesis de que la disminución de los niveles de la p27KIP1, que pueden ser producidos por la infección por el HHV-8, facilitan la progresión del SK a través de sus estadios histopatológicos y su eventual extensión extracutáneaEstudios recientes han demostrado que la degradación de la p27KIP1 a través de la vía ubicuitin-proteasoma está mediada por el complejo SCF/ p45SKP2 y por su receptor específico de sustrato F-box p45SKP2. La p45SKP2 está frecuentemente sobreexpresada en células transformadas, induce la fase S en células quiescentes y se sospecha que es un protooncogen en tumores humanos. De hecho, se ha determinado una asociación entre el incremento de los niveles de la p45SKP2 y la disminución de los niveles de la p27KIP1 en neoplasias epiteliales. Hemos estudiado si la expresión de la p45SKP2 está alterada en las lesiones agresivas del SK y su relación con la infrarregulación de la p27KIP1, sexo e infección por el VIH. La sobreexpresión nuclear de la p45SKP2 estaba presente en todos los estadios del SK, estando significativamente incrementada en los tumores cutáneos y en las lesiones extracutáneas en comparación con la máculas y placas. No se identificaron diferencias estadísticamente significativas en relación con el sexo y estatus VIH de los pacientes, y el análisis de regresión no mostró correlación entre la p45SKP2 y la p27KIP1. Estos hallazgos sugieren que la p45SKP2 está involucrada en el SK, no sólo promoviendo la degradación de la p27KIP1, sino también a través de otros mecanismos todavía desconocidos. / Kaposi's sarcoma (KS) is an angioproliferative disease with four clinical-epidemiological forms: classic (C-KS), African-endemic, immunosuppressive drug-related and acquired immune deficiency syndrome-related (AIDS-KS). KS involvement is usually limited to the skin, but in aggressive cases it may disseminate to extracutaneous locations. In the skin, lesions are clinicopathologically classified into macules, plaques and tumours in agreement with their progression in severity. KS seems to begin as a reactive vascular proliferation due to an unbalanced cytokine network, whereas in advanced stages, it behaves as a multifocal neoplasm.The different biological behavior of KS according to its epidemiological presentations and stages might be related to the presence of specific alterations in the mechanisms controlling tumor growth and development, such as cytokine or angiogenic growth factor overstimulation or alterations of the oncoprotein networks that control cell proliferation and apoptosis. These alterations would provide neoplastic stimuli for the development, progression, and aggressive behaviour of KS. Hepatocyte growth factor (HGF) is a pleiotropic angiogenic cytokine that is overexpressed in invasive human cancers and may function as a tumor progression factor, stimulating tumour cell invasiveness and angiogenesis. These responses are transduced through the c-Met receptor. HGF stimulates proliferation of spindle cells cultured from human KS lesions, and KS cells synthesize and secrete HGF and express c-Met, thus providing an autocrine loop for tumour proliferation and neovascularization. We have studied the expression of c-Met in different histological stages of AIDS-associated and classic KS lesions. The staining intensity of c-Met was stronger in tumours than in plaques showing that HGF would be a progression factor in KS. HHV-8, the KS'etiologic factor, encoded v-cyclin, through its complexing with cyclin-dependent kinase (CDK) 6, contributes to the phosphorylation and proteasome-mediated degradation of p27KIP1, a cyclin-dependent kinase inhibitor. P27KIP1 regulates negatively cell proliferation by binding and inhibiting G1 cyclin-CDK complexes. On the other hand, down-regulation of p27KIP1 expression seems to facilitate tumour development and metastatic dissemination; then p27KIP1 has been considerated as an independent prognostic factor in a variety of human neoplasms. Although the neoplastic nature of KS remains controversial, it has been repeatedly demonstrated that in some patients KS may behave as a malignant neoplasm and follow an ominous course. To determine whether decreased p27KIP1 levels are also related to more aggressive behaviour in KS, it was decided to investigate p27KIP1 immunoreactivity in KS biopsy specimens. Thereby, we sought to determine whether the decrease in p27KIP1 expression levels is related to extracutaneous involvement in KS, as is the case in several other types of neoplasms when they metastasize. The mean percentages of p27KIP1-positive cells were significantly higher in biopsy specimens from skin lesions and in macules-plaques than in those from extracutaneous locations and tumours respectively. These results lend support to the hypothesis that decreased levels of p27KIP1, which may have been brought about by HHV-8 infection, play a role in KS progression through its various histopathological stages, to its eventual extracutaneous spread.Recent studies have demonstrated that p27KIP1 degradation through the ubiquitin-proteasome pathway is mediated by the SCF/p45SKP2 complex and by the substrate-specific receptor of this complex, the F-Box protein p45SKP2. P45SKP2 is frequently over-expressed in transformed cells, induces S phase in quiescent cells and is a suspected proto-oncogene in human tumours. In fact, there are recent reports of increased levels of p45SKP2 in association with reduced p27KIP1 levels in epithelial neoplasms. We have studied of whether p45SKP2 expression is altered in aggressive lesions of KS and its relation to p27KIP1 down-regulation, gender and HIV infection. P45SKP2 nuclear over-expression was present in all KS stages, being significantly increased in skin tumours and extracutaneous lesions as compared with macules and plaques. No statistically significant differences were found in regard to patients´ sex and HIV status and regression analysis failed to show a correlation among p45SKP2 and p27KIP1. These findings suggest that p45SKP2 is involved in KS, not only by promoting the degradation of p27KIP1 but also through other mechanisms still unknown.

<p>Soft tissue sarcomas (STSs) are a heterogeneous group of mesenchymal tumors comprised of >70 subtypes. An important question is how the cell of origin and the pathways to tumor development shape the broad array of STS subtypes. By forcing identical tumor-promoting mutations to different cell types in Genetically Engineered Mouse Models (GEMMs) of STS, I have a unique model system to investigate this question. In the process of performing these experiments I observed that genetic mutations are necessary, but not sufficient for rapid sarcoma formation. However, tissue injury dramatically accelerates sarcoma formation in our GEMM of STS. For my thesis, I have worked to understand how cell of origin affects sarcoma subtype and how the microenvironment in our models promotes transformation. I have observed that cell of origin plays an important, but not the only, role in defining STS subtype. Additionally, I have concluded that the microenvironment, and specifically the HGF/c-MET signaling pathway play a crucial role in promoting sarcoma development after acute tissue injury.</p> / Dissertation