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<p>UVOD:&nbsp; Citopenija je jedna od glavnih&nbsp; karakteristika mnogih hematolo&scaron;kih bolesti. U&nbsp; rutinskoj transfuziolo&scaron;koj upotrebi su metode&nbsp; detekcije prisustva antitela u serumu ili na&nbsp; eritrocitima bolesnika. Primena direktnog testa utro&scaron;ka antihumanog globulina predstavlja&nbsp; efikasan način da se stekne kompletan uvid u imunolo&scaron;ka zbivanja na svim krvnim lozama, prati dinamika razvoja antitela i toka bolesti. MATERIJAL I METODE: Svim pacijentima su se iz uzoraka periferne&nbsp; krvi vr&scaron;ile sledeće analize krvi: 1) direktni antiglobulinski test mikrometodom&nbsp; aglutinacije u gel karticama (LISS)/ Coombs ID. Dobijeni rezultat aglutinacije mikrometodom na gelu moţe biti negativan ili pozitivan i 2) direktni test utro&scaron;ka antihumanog globulina metodom aglutinacije u epruveti. Očitavanje se vr&scaron;ilo određivanjem razlike u titru antihumanog globuli na i očitavanjem postojeće reakcije aglutinacije dobijene u uzorcima pacijenta u odnosu na rezultate reakcije aglutinacije dobijene sa uzorcima zdrave kontrolne osobe. Test se smatra o pozitivnim ukoliko se dobijala razlika u titru AHG - a za bar dva razređen ja sa pacijentovim ćelijama u odnosu na ćelije zdrave kontrolne osobe. Statistička značajnost&nbsp; je analizirana t - testom, Spirmanovim&nbsp; koeficijentom korelacije REZULTATI: Analizirano je 100 pacijenata sa dijagnozom anemije, leukopenije,&nbsp; limfoproliferativnih bolesti,&nbsp; trombocitopenije, trombotične trombocitopenijske purpure, idiopatske trombocitopenične purpure, mijelodisplastičnog sindroma, miastenije gravis i sistemskog eritematoznog lupusa pre i nakon primljene terapije. Direktni antiglobulinski test je biopozitivan u 20% slučajeva dok je direktni test utro&scaron;ka antihumanog globulina bio u 51%, odnosno za 31% vi&scaron;e. Nakon primljene terapije direktni antiglobulinski test je ostao pozitivan u 18% slučajeva a direktni test utro&scaron;ka antihumanog globulina u 46% &scaron;to je za 28% vi&scaron;e. Utvrđivanjem povezanosti između citopenije i stepena utro&scaron;ka antihumanog globulina dokazano je da svi praćeni parametri utiču na stepen utro&scaron;ka AHG-a: hemoglobin (&beta;=-0,579, p=0,000), hematokrit (&beta;=-0,568, p=0,000), eritrociti (&beta;=-0,519, p=0,000), trombociti (&beta;=-0,617, p=0,000) i leukociti(&beta;=-0,119, p=0,237). Takođe je dokazano da &scaron;to su vrednosti posmatranih parametara veće, razlika u titru direktnog testa utro&scaron;ka antihumanog globulina je manja &scaron;to bi i&scaron;lo u prilog boljoj prognozi posmatranog oboljenja. ZAKLJUČAK: Direktni test utro&scaron;ka antihumanog globulina je značajno osetljiviji test u odnosu na direktni antihumani globulinski test. Postoji pozitivna korelacija između citopenije i stepena konzumacije antihumanog globulina. Smanjenje titra antitela direktnog testa utro&scaron;ka antihumanog globulina je jedan od pokazatelja bolje prognoze bolesti.</p> / <p>INTRODUCTION: Cytopenia is one of the main characteristics of many hematologic diseases. In routine use are methods of detecting the presence of antibodies in the serum or on red blood cells of patients. The application of direct consumption test of antihuman globulin is an efficient way to gain complete insight into the immunological events at all bloodlines, monitor the dynamics of the development of antibodies and disease progression. MATERIALS AND METHODS: All patients samples were tested for: 1) direct antiglobulin test by micro agglutination method in the gel card (LISS) / Coombs ID. The result obtained by micro agglutination gel can be negative or positive, 2) direct consumption test of antihuman globulin in a test tube. Interpretation is performed by determining differences in titer of antihuman globulin by reading existing reactions of agglutination in samples of the patient and compare it to the results obtained with the samples of the healthy control persons. The test is considered positive if the difference in titres obtained AHG differs for at least two dilutions of a patient&#39;s cells compared to cells of healthy control persons. Statistical significance was analyzed by t-test, Spearman correlation coefficient. RESULTS: A total of 100 patients diagnosed withanemia, leukopenia, lymphoproliferative disease, thrombocytopenia, thrombotic thrombocytopenic purpura, idiopathic thrombocytopenic purpura, myelodysplastic syndrome, myasthenia gravis and systemic lupus erythematosus were analyzed before and after receiving treatment. Direct antiglobulin test was positive in 20% cases, while the direct consumption test of anti-human globulin was 51%, that is the difference of 31%. After treatment direct antiglobulin test remained<br />positive in 18% of cases and direct consumption test of antihuman globulin was in 46%, which is 28% higher. Determining the relationship between the degree of cytopenia and consumption of anti-human globulin showed that all monitored parameters affect the level of consumption: hemoglobin (&beta; = -0.579, p = 0.000), hematocrit (&beta; = -0.568, p = 0.000), erythrocytes (&beta; = -0.519 , p = 0.000), platelets (&beta; = -0.617, p = 0.000) and leukocytes (&beta; = -0.119, p = 0.237). It was also proved that if the values of observed parameters are higher, difference in titer of direct consumption test of antihuman globulin is lower, which can indicate better prognosis of disease. CONCLUSION: Direct consumption test of antihuman globulin was significantly more&nbsp; sensitive test than the direct anti-human globulin test. There is a positive correlation between the degree of cytopenia and consumption of anti-human globulin. Decrease in antibody titer in direct consumption test of antihuman globulinis an indicator of a better prognosis of the disease.</p>

O transplante de células-tronco hematopoiéticas tem sido a melhor opção terapêutica para muitas doenças. Seu sucesso, no entanto, depende de alguns fatores que influenciam a taxa de mortalidade. A doença do enxerto-contra-hospedeiro é uma causa de mortalidade. Apresenta duas formas, a aguda e a crônica, e ambas têm linfócitos T na patofisiologia. Outra causa são as infecções, cujos patógenos variam conforme o tempo de recuperação do sistema imune. O presente estudo avaliou a recuperação linfoide T com base no timo e distinção das subpopulações e citocinas nos pacientes que desenvolveram doença do enxerto-contra-hospedeiro crônica no primeiro ano de transplante. Os pacientes foram alocados no Hospital de Transplante Amaral Carvalho (Jaú/SP) e tinham entre 18 e 60 anos de idade. No pré-transplante, foram comparados com indivíduos saudáveis, pareados em idade. Após o transplante, todos os pacientes foram acompanhados por um ano e seis meses, para observação de possíveis eventos de doença do enxerto-contra-hospedeiro e/ou infecções. A análise laboratorial foi feita com o sangue do paciente, sendo a primeira antes do transplante, seguidas por mais quatro, com intervalos de três meses. Tais avaliações laboratoriais tinham por objetivos caracterizar a função tímica por quantificação de sjTREC; as subpopulações de linfócitos T, por citometria de fluxo e a análise de citocinas, por Luminex. Foram estudados 172 indivíduos, sendo 75 do transplante alogênico, 43 do transplante autólogo, além de 54 pessoas saudáveis. Nossos resultados mostraram que os pacientes apresentaram função tímica diminuída antes mesmo da realização do transplante. A função tímica enfraquecida foi um fator de risco para doença do enxerto-contrahospedeiro crônica e a recuperação do sistema imune foi melhor nos pacientes que não apresentaram doença do enxerto-contra-hospedeiro crônica após um ano do transplante. No entanto, a função tímica não foi diferente entre os pacientes que faleceram e os que estão vivos. No geral, não houve distinção quanto à apresentação das subpopulações de linfócitos T e à produção de citocinas entre os pacientes submetidos ao transplante alogênico que desenvolveram doença do enxerto-contra-hospedeiro crônica, relativamente aos demais pacientes. Com o tempo, foi observada a recuperação gradual do compartimento linfoide T e diminuição na incidência de infecções. A taxa de infecções não influenciou a apresentação das subpopulações de linfócitos T e a produção de citocinas nos pacientes que desenvolveram doença do enxerto-contrahospedeiro crônica em relação aos demais pacientes. Como conclusão, a função tímica apresentou-se deteriorada antes da realização do transplante, porém não foi determinante para que houvesse piora na evolução clínica após o transplante. Os pacientes que desenvolveram doença do enxerto-contra-hospedeiro crônica, independentemente da incidência de infecções, apresentaram semelhança no perfil das subpopulações de linfócitos T e das citocinas, quando comparados aos demais / Hematopoietic stem cell transplantation has been the best therapeutic option for many diseases. Its success depends on some factors that influence the mortality rate. Graftversus- host disease is one cause of mortality. It has two forms, acute and chronic, and both have T lymphocytes in their pathophysiology. Other causes are infections, whose pathogens vary according to immune system recovery time. The present study evaluated the lymphoid T recuperation through the thymus and the differentiation of subpopulations and cytokines in patients who developed chronic graft-versus-host disease at the first year of transplantation. The patients were allocated at Hospital de Transplantes Amaral Carvalho (Jaú/SP). They were between 18 and 60 years old. At pre-transplant phase, patients were compared to healthy individuals, age-matched. After transplantation, they were all assisted for one year and six months, so that graft-versushost disease\'s and infections\' events could be observed. The laboratory analysis was done by blood sample; the first occurred before the transplant, followed by four more, every three months. Laboratory examinations were performed to characterize thymic function by quantification of sjTREC; T lymphocyte subpopulations, by flow cytometry, and cytokine analysis, by Luminex. A total of 172 individuals were studied: 75 allogeneic transplant patients, 43 autologous transplant patients and 54 healthy persons. Our results showed that patients presented thymic function impaired even before the transplant. The weakening of the thymic function was a risk factor for chronic graft-versus-host disease and immune system recovery was better in patients who did not develop chronic graft-versus-host disease after one year of transplantation. However, the thymic function was not different between patients who died and those who remained alive. In general, there was no distinction of the presentation of T lymphocyte subpopulations and cytokines production among patients who underwent allogeneic transplant and developed chronic graft-versus-host disease, in comparison to the other patients. Over time, a gradual recovery of the T lymphoid compartment and a decrease in the infections incidence were observed. The infection rate did not influence the presentation of the T lymphocyte subpopulations and the production of cytokines in patients who developed chronic graft-versus-host disease in comparison to the other patients. In conclusion, the thymic function was impaired before transplantation, but it was not relevant for clinical evolution worsening after transplantation. Patients who developed chronic graft-versus-host disease, regardless of the incidence of infections, showed similar profile of T lymphocytes subpopulations and cytokines, relatively to other patients

O transplante de células-tronco hematopoiéticas tem sido a melhor opção terapêutica para muitas doenças. Seu sucesso, no entanto, depende de alguns fatores que influenciam a taxa de mortalidade. A doença do enxerto-contra-hospedeiro é uma causa de mortalidade. Apresenta duas formas, a aguda e a crônica, e ambas têm linfócitos T na patofisiologia. Outra causa são as infecções, cujos patógenos variam conforme o tempo de recuperação do sistema imune. O presente estudo avaliou a recuperação linfoide T com base no timo e distinção das subpopulações e citocinas nos pacientes que desenvolveram doença do enxerto-contra-hospedeiro crônica no primeiro ano de transplante. Os pacientes foram alocados no Hospital de Transplante Amaral Carvalho (Jaú/SP) e tinham entre 18 e 60 anos de idade. No pré-transplante, foram comparados com indivíduos saudáveis, pareados em idade. Após o transplante, todos os pacientes foram acompanhados por um ano e seis meses, para observação de possíveis eventos de doença do enxerto-contra-hospedeiro e/ou infecções. A análise laboratorial foi feita com o sangue do paciente, sendo a primeira antes do transplante, seguidas por mais quatro, com intervalos de três meses. Tais avaliações laboratoriais tinham por objetivos caracterizar a função tímica por quantificação de sjTREC; as subpopulações de linfócitos T, por citometria de fluxo e a análise de citocinas, por Luminex. Foram estudados 172 indivíduos, sendo 75 do transplante alogênico, 43 do transplante autólogo, além de 54 pessoas saudáveis. Nossos resultados mostraram que os pacientes apresentaram função tímica diminuída antes mesmo da realização do transplante. A função tímica enfraquecida foi um fator de risco para doença do enxerto-contrahospedeiro crônica e a recuperação do sistema imune foi melhor nos pacientes que não apresentaram doença do enxerto-contra-hospedeiro crônica após um ano do transplante. No entanto, a função tímica não foi diferente entre os pacientes que faleceram e os que estão vivos. No geral, não houve distinção quanto à apresentação das subpopulações de linfócitos T e à produção de citocinas entre os pacientes submetidos ao transplante alogênico que desenvolveram doença do enxerto-contra-hospedeiro crônica, relativamente aos demais pacientes. Com o tempo, foi observada a recuperação gradual do compartimento linfoide T e diminuição na incidência de infecções. A taxa de infecções não influenciou a apresentação das subpopulações de linfócitos T e a produção de citocinas nos pacientes que desenvolveram doença do enxerto-contrahospedeiro crônica em relação aos demais pacientes. Como conclusão, a função tímica apresentou-se deteriorada antes da realização do transplante, porém não foi determinante para que houvesse piora na evolução clínica após o transplante. Os pacientes que desenvolveram doença do enxerto-contra-hospedeiro crônica, independentemente da incidência de infecções, apresentaram semelhança no perfil das subpopulações de linfócitos T e das citocinas, quando comparados aos demais / Hematopoietic stem cell transplantation has been the best therapeutic option for many diseases. Its success depends on some factors that influence the mortality rate. Graftversus- host disease is one cause of mortality. It has two forms, acute and chronic, and both have T lymphocytes in their pathophysiology. Other causes are infections, whose pathogens vary according to immune system recovery time. The present study evaluated the lymphoid T recuperation through the thymus and the differentiation of subpopulations and cytokines in patients who developed chronic graft-versus-host disease at the first year of transplantation. The patients were allocated at Hospital de Transplantes Amaral Carvalho (Jaú/SP). They were between 18 and 60 years old. At pre-transplant phase, patients were compared to healthy individuals, age-matched. After transplantation, they were all assisted for one year and six months, so that graft-versushost disease\'s and infections\' events could be observed. The laboratory analysis was done by blood sample; the first occurred before the transplant, followed by four more, every three months. Laboratory examinations were performed to characterize thymic function by quantification of sjTREC; T lymphocyte subpopulations, by flow cytometry, and cytokine analysis, by Luminex. A total of 172 individuals were studied: 75 allogeneic transplant patients, 43 autologous transplant patients and 54 healthy persons. Our results showed that patients presented thymic function impaired even before the transplant. The weakening of the thymic function was a risk factor for chronic graft-versus-host disease and immune system recovery was better in patients who did not develop chronic graft-versus-host disease after one year of transplantation. However, the thymic function was not different between patients who died and those who remained alive. In general, there was no distinction of the presentation of T lymphocyte subpopulations and cytokines production among patients who underwent allogeneic transplant and developed chronic graft-versus-host disease, in comparison to the other patients. Over time, a gradual recovery of the T lymphoid compartment and a decrease in the infections incidence were observed. The infection rate did not influence the presentation of the T lymphocyte subpopulations and the production of cytokines in patients who developed chronic graft-versus-host disease in comparison to the other patients. In conclusion, the thymic function was impaired before transplantation, but it was not relevant for clinical evolution worsening after transplantation. Patients who developed chronic graft-versus-host disease, regardless of the incidence of infections, showed similar profile of T lymphocytes subpopulations and cytokines, relatively to other patients