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AVALIAÇÃO DA PROLIFERAÇÃO CELULAR E ESPESSURA DO ENDOMÉTRIO DE CADELAS EM DIFERENTES PERÍODOS DO DIESTRO / EVALUATION OF CELL PROLIFERATION AND ENDOMETRIAL THICKNESS OF BITCHES IN DIFFERENT PERIODS OF DIESTRUS

Gossler, Vanessa da Silva Alves 25 September 2015 (has links)
Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Venessa.pdf: 465149 bytes, checksum: 5de5d2c13682e00d0026f0d3e3b581ab (MD5) Previous issue date: 2015-09-25 / This study aimed to determine the histological features of the endometrium of biches, as well as the cell proliferation at specific moments of diestrus, 10, 20, 30, 40, 50 and 60 days post-ovulation, correlating the endometrial thickness with the uterine cell proliferation and the metabolic state (weight, blood glucose and plasma cholesterol) of the animals. Therefore, the right and left uterine horns of 26 clinically healthy bitches submitted to ovariohysterectomy were histologically analyzed 10, 20, 30, 40, 50 and 60 days post-ovulation. The hematoxylin-eosin and AgNOR staining techniques were performed. All parameters were evaluated by the Shapiro-Wilk normality assumption and the samples subjected to ANOVA and post-hoc Tukey test (p<0.05). The correlation between endometrial thickness and uterine cell proliferation, weight, blood glucose and plasma cholesterol of animals was observed using the Pearson method (p<0.05). The software used was BioEstat® version 5.0. It was concluded that the endometrial thickness did not differs between post-ovulation days and was not correlated with the uterine cell proliferation, weight, blood glucose or serum cholesterol of the bitches. However, there was greater cell proliferation at 40 days post-ovulation compared to 60 days. / O presente estudo teve o objetivo de determinar as características histológicas do endométrio de cadela, assim como a sua proliferação em momentos específicos do diestro nos dias 10, 20, 30, 40, 50 e 60 pós-ovulação, correlacionando a espessura do endométrio com o peso, glicemia e colesterol das cadelas.Para tanto, foram analisados histologicamente os cornos uterinos direito e esquerdo de 26 cadelas clinicamente sadias ovariohisterectomizadas aos 10, 20, 30, 40, 50 e 60 dias após a ovulação. Foram realizadas a coloração de hematoxilina-eosinae também a coloração pelo método de AgNOR. Todos os parâmetros foram avaliados pelo pressuposto de normalidade de Shapiro-Wilk e as amostras submetidas a ANOVA seguida de Tukey (p<0,05). A correlação entre espessura de endométrio e peso, glicemia e colesterol plasmático foi verificada pelo método de Pearson (p<0,05). O programa utilizado foi o BioEstat® versão 5.0. Conclui-se que a espessura do endométrio não difere entre os dias pós-ovulação e que não tem correlação com o peso, glicemia ou o colesterol sérico das cadelas. Porém, há uma maior proliferação celular aos 40 dias pós-ovulação em relação aos 60 dias.
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Utilização da biópsia de mucosa e submucosa retal para o diagnóstico da Moléstia de Hirschsprung / Utilization of mucosal and submucosal rectal biopsy for the diagnosis of Hirschsprung\'s disease

Suellen Serafini 04 August 2017 (has links)
Introdução: A moléstia de Hirschsprung (MH) se caracteriza pela ausência de neurônios intramurais em segmentos variáveis do intestino grosso, levando a suboclusão intestinal. Na forma mais frequente o reto-sigmoide está comprometido. A biopsia retal é o método histológico de escolha no diagnóstico da MH. O método da hematoxilina e eosina (HE) é classicamente utilizado na prática histopatológica. Nessa técnica, um fragmento de parede total do reto é processado através de parafinização, para posteriormente ser seccionado e corado por HE. Esta coloração evidencia células neurais em intestinos normais e troncos nervosos hipertrofiados nos casos de MH. É uma técnica muito simples, ainda hoje muito utilizada no diagnóstico da doença, necessitando de fragmentos grandes de reto para um maior acerto no diagnóstico. Este detalhe torna o diagnóstico do recém-nascido mais difícil. Outro método de coloração utilizado no diagnóstico da MH é o método histoquímico de pesquisa de atividade de Acetilcolinesterase (AChE). Nesta técnica é necessário apenas um pequeno fragmento de mucosa e submucosa que será congelado e depois processado. A pesquisa de AChE, nos casos de MH mostrará a presença desta enzima em quantidade aumentada, corando troncos e ou fibrilas de cor acastanhado. Este método já vem sendo utilizado pelo Instituto da Criança - HCFMUSP há mais de 30 anos e possui um acerto diagnóstico superior a 90%. Porém, por ser uma técnica mais elaborada, pouquíssimos centros no Brasil a utilizam no diagnóstico da MH. Um outro método mais recente, e que também pode ser realizado em fragmentos menores, é a marcação imunohistoquímica da calretinina, que permite a visualização dos neurônios do plexo submucoso e das fibrilas finas na região da lâmina própria em não doentes. Esta técnica também apresenta maior complexidade e, portanto, não é utilizada. A possibilidade de realizar o diagnóstico da MH através da coloração HE em fragmentos menores poderia ser uma alternativa para os serviços que não dispõe de técnicas mais especificas. Objetivos: Avaliar a concordância dos resultados obtidos pelo método de coloração HE e da calretinina com a pesquisa de atividade de AChE em fragmentos de mucosa e submucosa no diagnóstico da Moléstia de Hirschsprung. Métodos: Para este trabalho foram selecionados 50 casos arquivados em nosso laboratório. O material encontrava-se emblocado em parafina. Foram feitos 60 níveis de cada fragmento para o HE e mais 3 níveis para a calretinina. Essas lâminas foram analisadas em microscópio, fotografadas e classificadas como positivas para MH quando não foram encontradas células neurais e houve a presença de troncos nervosos, e em negativas nos casos de visualização dos neurônios. Foi realizado estudo cego por dois pesquisadores. Os resultados da leitura das lâminas foram comparados com o da AChE. Resultados: Dos 50 casos avaliados pela técnica do HE, apenas 5 discordaram do diagnóstico realizado pela AChE, com um valor de Kappa de 0,800 e acurácia 90%. Na comparação entre a calretinina e a AChE 8 casos discordaram, com um valor de Kappa de 0,676 e acurácia de 84%. Conclusões: A concordância obtida entre os métodos da AChE e HE foi satisfatória. Tornando possível a utilização do método do HE em 60 níveis de fragmento de mucosa e submucosa como alternativa para o diagnóstico da MH. A técnica imunohistoquímica da Calretinina não apresentou a concordância esperada com a pesquisa de atividade de AChE em nosso estudo / Introduction: Hirschsprung disease (HD) is characterized by the absence of intramural neurons in variable segments of the large intestine, leading to intestinal subocclusion. In the most frequent form the rectum-sigmoid is compromised. Rectal biopsy is the histological method of choice in the diagnosis of HD. The hematoxylin and eosin (HE) method is classically used in histopathological practice. In this technique, a full-thickness rectum wall fragment is processed through paraffinization, to be later sectioned and stained by HE. This staining shows neural cells in normal intestines and hypertrophied nerve trunks in cases of HD. It is a very simple technique, still used today in the diagnosis of the disease, requiring large fragments of the rectum for a better diagnosis. This detail makes the diagnosis of the newborn more difficult. The staining histochemical methods more used are the research of acetylcholinesterase activity (AChE) and staining of calretinin. However, these techniques are not available in all centers and the possibility of diagnosing HD through HE staining in smaller fragments could be valuable alternative for services that do not have more specific techniques. Objectives: To evaluate the concordance of the results obtained by the HE staining and the calretinin method with the investigation of AChE activity in fragments of mucosa and submucosa in the diagnosis of Hirschsprung\'s disease. Methods: For this study, 50 cases from our laboratory were selected. The material was embedded in paraffin. Sixty levels of each fragment were made for HE and other 3 levels for calretinin. These slides were analyzed under microscope, photographed and classified as positive for HD when no nerve cells were found and there were nerve trunks present, and in negative in cases of visualization of the neurons. A blind study was carried out by two researchers. The results of reading the slides were compared with that of AChE. Results: Of the 50 cases evaluated by the HE technique, only 5 disagreed with the diagnosis performed by AChE, with a Kappa value of 0.800 and accuracy of 90%. In the comparison between calretinin and AChE, 8 cases disagreed, with a Kappa value of 0.676 and an accuracy of 84%. Conclusions: The concordance of results from AChE and HE methods was satisfactory, allowing the possibility of the use of the HE method in fragments of mucosa and submucosa as valid alternative for the diagnosis of HD. The immunohistochemical technique of Calretinin did not show a good agreement with the AChE activity in our study
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Utilização da biópsia de mucosa e submucosa retal para o diagnóstico da Moléstia de Hirschsprung / Utilization of mucosal and submucosal rectal biopsy for the diagnosis of Hirschsprung\'s disease

Serafini, Suellen 04 August 2017 (has links)
Introdução: A moléstia de Hirschsprung (MH) se caracteriza pela ausência de neurônios intramurais em segmentos variáveis do intestino grosso, levando a suboclusão intestinal. Na forma mais frequente o reto-sigmoide está comprometido. A biopsia retal é o método histológico de escolha no diagnóstico da MH. O método da hematoxilina e eosina (HE) é classicamente utilizado na prática histopatológica. Nessa técnica, um fragmento de parede total do reto é processado através de parafinização, para posteriormente ser seccionado e corado por HE. Esta coloração evidencia células neurais em intestinos normais e troncos nervosos hipertrofiados nos casos de MH. É uma técnica muito simples, ainda hoje muito utilizada no diagnóstico da doença, necessitando de fragmentos grandes de reto para um maior acerto no diagnóstico. Este detalhe torna o diagnóstico do recém-nascido mais difícil. Outro método de coloração utilizado no diagnóstico da MH é o método histoquímico de pesquisa de atividade de Acetilcolinesterase (AChE). Nesta técnica é necessário apenas um pequeno fragmento de mucosa e submucosa que será congelado e depois processado. A pesquisa de AChE, nos casos de MH mostrará a presença desta enzima em quantidade aumentada, corando troncos e ou fibrilas de cor acastanhado. Este método já vem sendo utilizado pelo Instituto da Criança - HCFMUSP há mais de 30 anos e possui um acerto diagnóstico superior a 90%. Porém, por ser uma técnica mais elaborada, pouquíssimos centros no Brasil a utilizam no diagnóstico da MH. Um outro método mais recente, e que também pode ser realizado em fragmentos menores, é a marcação imunohistoquímica da calretinina, que permite a visualização dos neurônios do plexo submucoso e das fibrilas finas na região da lâmina própria em não doentes. Esta técnica também apresenta maior complexidade e, portanto, não é utilizada. A possibilidade de realizar o diagnóstico da MH através da coloração HE em fragmentos menores poderia ser uma alternativa para os serviços que não dispõe de técnicas mais especificas. Objetivos: Avaliar a concordância dos resultados obtidos pelo método de coloração HE e da calretinina com a pesquisa de atividade de AChE em fragmentos de mucosa e submucosa no diagnóstico da Moléstia de Hirschsprung. Métodos: Para este trabalho foram selecionados 50 casos arquivados em nosso laboratório. O material encontrava-se emblocado em parafina. Foram feitos 60 níveis de cada fragmento para o HE e mais 3 níveis para a calretinina. Essas lâminas foram analisadas em microscópio, fotografadas e classificadas como positivas para MH quando não foram encontradas células neurais e houve a presença de troncos nervosos, e em negativas nos casos de visualização dos neurônios. Foi realizado estudo cego por dois pesquisadores. Os resultados da leitura das lâminas foram comparados com o da AChE. Resultados: Dos 50 casos avaliados pela técnica do HE, apenas 5 discordaram do diagnóstico realizado pela AChE, com um valor de Kappa de 0,800 e acurácia 90%. Na comparação entre a calretinina e a AChE 8 casos discordaram, com um valor de Kappa de 0,676 e acurácia de 84%. Conclusões: A concordância obtida entre os métodos da AChE e HE foi satisfatória. Tornando possível a utilização do método do HE em 60 níveis de fragmento de mucosa e submucosa como alternativa para o diagnóstico da MH. A técnica imunohistoquímica da Calretinina não apresentou a concordância esperada com a pesquisa de atividade de AChE em nosso estudo / Introduction: Hirschsprung disease (HD) is characterized by the absence of intramural neurons in variable segments of the large intestine, leading to intestinal subocclusion. In the most frequent form the rectum-sigmoid is compromised. Rectal biopsy is the histological method of choice in the diagnosis of HD. The hematoxylin and eosin (HE) method is classically used in histopathological practice. In this technique, a full-thickness rectum wall fragment is processed through paraffinization, to be later sectioned and stained by HE. This staining shows neural cells in normal intestines and hypertrophied nerve trunks in cases of HD. It is a very simple technique, still used today in the diagnosis of the disease, requiring large fragments of the rectum for a better diagnosis. This detail makes the diagnosis of the newborn more difficult. The staining histochemical methods more used are the research of acetylcholinesterase activity (AChE) and staining of calretinin. However, these techniques are not available in all centers and the possibility of diagnosing HD through HE staining in smaller fragments could be valuable alternative for services that do not have more specific techniques. Objectives: To evaluate the concordance of the results obtained by the HE staining and the calretinin method with the investigation of AChE activity in fragments of mucosa and submucosa in the diagnosis of Hirschsprung\'s disease. Methods: For this study, 50 cases from our laboratory were selected. The material was embedded in paraffin. Sixty levels of each fragment were made for HE and other 3 levels for calretinin. These slides were analyzed under microscope, photographed and classified as positive for HD when no nerve cells were found and there were nerve trunks present, and in negative in cases of visualization of the neurons. A blind study was carried out by two researchers. The results of reading the slides were compared with that of AChE. Results: Of the 50 cases evaluated by the HE technique, only 5 disagreed with the diagnosis performed by AChE, with a Kappa value of 0.800 and accuracy of 90%. In the comparison between calretinin and AChE, 8 cases disagreed, with a Kappa value of 0.676 and an accuracy of 84%. Conclusions: The concordance of results from AChE and HE methods was satisfactory, allowing the possibility of the use of the HE method in fragments of mucosa and submucosa as valid alternative for the diagnosis of HD. The immunohistochemical technique of Calretinin did not show a good agreement with the AChE activity in our study
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Tolerância de variedades de cana-de-açúcar (Saccharum spp.) à toxidez por alumínio em solução / Tolerance of sugarcane (Saccharum spp.) varieties to aluminum toxicity in solution

Oliveira, Mariane de Souza 24 February 2012 (has links)
Made available in DSpace on 2016-06-02T18:55:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4194.pdf: 5569130 bytes, checksum: ebe68f310cd510f98aabaf88b820d952 (MD5) Previous issue date: 2012-02-24 / Universidade Federal de Minas Gerais / The influence of toxic aluminum (Al) on root development and absorption of water and nutrients has been identified as a major cause of low productivity of many soils. The theoretical and experimental study on the tolerance of varieties of sugarcane to adverse conditions of extreme acidity and, especially, high Al saturation, is still inconclusive The objectives of this study were: to develop and propose an experimental protocol for the study tolerance of varieties of sugarcane to Al in solution and to study the sensitivity of nine varieties of sugarcane (RB928064, RB966928, RB937570, RB855156, RB855453, RB935744, RB867515, RB925345, SP813250) to Al stress solution through a series of analyzes: (a) review the allocation of the Al at the tip roots, (b) observation of the root apices and (c) root growth; identify the main changes in the root; identify the critical dose to the Al root growth and identify the most efficient method for the classification of varieties on the Al in solution. The experiment was conducted in laboratory conditions in a completely randomized design with three replications. After the germination period, the mini-stalks of sugarcane were acclimated in tanks with nutrient solution. After six days, the mini-cuttings were transferred to containers with nutrient solution and increasing doses of Al (0, 130, 380, 500, 800, 1000, 1400, 2000, 3000 and 4000 &#956;mol L -¹), where they remained for six days and subsequently were removed for analyzes. The development of the experimental protocol was efficient for the evaluation of tolerance and its main factors were germination method, selecting the range of Al concentration in solution and the methods of tolerance assessment. The varieties differed in Al tolerance according to the analyzes. The main changes of the tip root were mucilage production, loss of epidermal cells of the root cap and its disintegration, and brown staining of root tips. The root elongation rate (TAR) depended on the interaction between variety and concentration of Al, and, for the varieties studied, the critical value ranged from 130 to 3000 &#956;mol L-¹. The TAR method was considered more efficient to evaluate the tolerance of varieties of sugarcane to Al in solution and in accordance with this method the varieties were classified as tolerance in the following order: RB928064 > RB935744 > RB855453 = RB966928 > RB925345 = RB867515 > SP813250 > RB855156 > RB937570. / A influência da toxidez por alumínio (Al) sobre o desenvolvimento do sistema radicular e a absorção de água e de nutrientes tem sido apontada como uma das principais causas da baixa produtividade de muitos solos. O referencial teórico e experimental sobre a tolerância de variedades de cana-de-açúcar a condições adversas de acidez extrema e, principalmente, à alta saturação por Al, ainda é inconclusivo Os objetivos deste estudo foram: desenvolver e sugerir um protocolo experimental para o estudo da tolerância de variedades de cana-de-açúcar ao Al em solução; estudar a sensibilidade de 9 variedades de cana-de-açúcar (RB928064, RB966928, RB937570, RB855156, RB855453, RB935744, RB867515, RB925345 e SP813250) ao estresse por Al em solução através de um conjunto de análises: (a) exame da alocação do Al na extremidade das raízes; (b) observação do ápice radicular e (c) crescimento radicular; identificar as principais alterações na raiz; identificar a dose crítica de Al ao crescimento radicular e identificar o método mais eficiente para a classificação das variedades quanto ao Al em solução. O experimento foi conduzido em condições de laboratório em delineamento inteiramente casualizado, com três repetições. Após o período de germinação, os mini-toletes de cana-de-açúcar foram aclimatados em tanques com solução nutritiva. Após seis dias, os mini-toletes foram transferidos para recipientes com solução nutritiva e doses crescentes de Al (0, 130, 380, 500, 800, 1000, 1400, 2000, 3000 e 4000 &#956;mol L-¹), onde permaneceram por seis dias e posteriormente foram retirados para análises. O desenvolvimento do protocolo experimental foi eficiente para a avaliação da tolerância e seus principais fatores foram método de germinação, seleção da faixa de concentração de Al em solução e os métodos de avaliação da tolerância. As variedades apresentaram diferenças quanto à tolerância ao Al de acordo com as análises realizadas. As principais alterações dos ápices radiculares foram a produção de mucilagem, perda de células epidérmicas da coifa, desintegração da coifa e coloração parda. A taxa de alongamento radicular (TAR) dependeu da interação entre variedade e concentração de Al, sendo que, para as variedades estudadas, o valor crítico variou de 130 a 3000 &#956;mol L-1. O método de TAR foi considerado o mais eficiente para a avaliação da tolerância de variedades de cana-de-açúcar ao Al em solução e de acordo com esse método as variedades foram classificadas quanto a tolerância na seguinte ordem: RB928064 > RB935744 > RB855453 = RB966928 > RB925345 = RB867515 > SP813250 > RB855156 > RB937570.
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Distribuição do neuroepitélio olfatório em concha média e superior em cadáveres humanos / Distribution of olfactory neuroepithelium in the middle and superior turbinate of human cadavers

Pinna, Fabio de Rezende 03 September 2008 (has links)
INTRODUÇÃO: A biópsia do neuroepitélio olfatório (NeuO) oferece perspectivas para aplicações terapêuticas tanto em doenças do olfato como doenças neurodegenerativas. Uma coleta bem sucedida desse tecido in vivo ainda não é rotina, devido á carência de estudos sobre a distribuição do NeuO em conchas superior (CS) e média (CM). Neste trabalho, descrevemos a distribuição do NeuO na CS e CM em cadáveres a partir da retirada integral dessas estruturas e posterior análise histológica por coloração de hematoxilina e eosina (HE) e imunoistoquímica. Além disso, também analisamos a influência do sexo, idade e lateralidade no grau de presença do NeuO nas CS e CM. CASUÍSTICA E MÉTODOS: Estudo anatômico prospectivo realizado de março de 2006 a janeiro de 2008. A CS e a CM foram endoscopicamente retiradas de um total de 25 cadáveres frescos com menos de 12 horas de óbito. Cada concha foi seccionada na metade de seu comprimento ântero-posterior. Assim, cada um dos 25 cadáveres deu origem a oito fragmentos de mucosa de regiões anatômicas distintas, totalizando 200 lâminas para análise tanto por coloração de HE como por reação de imunoistoquímica. Nas lâminas coradas por HE, classificamos a distribuição do NeuO em graus 0, 1, 2, 3, 4, sendo que a análise foi realizada por 3 patologistas de forma cega. Para imunoistoquímica, só obtivemos positividade com a proteína S-100. A concordância entre os três patologistas foi avaliada aos pares utilizando-se o coeficiente de Kappa. A distribuição do NeuO foi analisada de acordo com a idade, sexo, tempo de óbito, simetria entre as fossas nasais e acurácia da imunoistoquímica. RESULTADOS: Pela HE na CS, o NeuO esteve presente em 82,9% das vezes e, na CM, em 17,1%. Na CS, o NeuO foi detectado em 82,9 % das lâminas, 4,9 vezes a prevalência na CM, que foi de 17,1 % das lâminas (p < 0,001). Pela imunoistoquímica, foi possível encontrar NeuO em um total de 15 fragmentos. Desses, 10 (20%) eram da metade posterior da CS e cinco (7,6%) da metade anterior da CS. Pelo cálculo da razão de prevalência, temos que a chance de encontrar NeuO é 4,9 vezes maior na CS do que na CM (IC95%: 3,3 7,4). Dos 15 fragmentos com marcação positiva para proteína S-100, sete corresponderam aos que tinham uma distribuição grau 3 (>50% e 75%) pela HE e outros sete aos que tinham uma distribuição grau 4 (acima de 75%). Somente um fragmento teve marcação positiva para imunoistoquímica no grupo 2 (entre 26 e 50%) na HE. A proteína S-100 apresentou uma sensibilidade de 13,5% e especificidade de 100% para detecção de NeuO. Não houve diferença estatisticamente significante na prevalência de NeuO quando os fragmentos foram divididos de acordo com o sexo, idade de óbito e lado da fossa nasal. No entanto, ao analisarmos a presença de NeuO de acordo com o grau de distribuição entre cada lado, não se percebe uma concordância. CONCLUSÕES: A quantidade total de NeuO foi simetricamente distribuída entre as fossas nasais, mas não houve uma concordância entre os lados quanto à maneira como o NeuO está distribuído. O NeuO apresenta maior probabilidade de ser encontrado na metade posterior de CS. A HE é um método eficaz para distinção entre NeuO e epitélio respiratório, devido a grande concordância entre três patologistas distintos. / INTRODUCTION: Olfactory neuroepithelium (ON) biopsy provides perspectives for several therapeutic applications, both in disorders of olfaction and in neurodegenerative diseases. Successful in vivo collection of ON is still not routine, due to a dearth of studies on ON distribution in the superior and middle turbinate (ST and MT respectively). This study describes the distribution of ON in cadaver ST and MT as determined by complete endoscopic removal of turbinates and histological analysis with hematoxylin and eosin (H&E) and immunohistochemical staining. We also analyzed the influence of gender, age, and naris side on the extent to which ON is present in the superior and middle turbinate. CASE SELECTION AND METHODS: We conducted a prospective anatomical study from March 2006 to January 2008. The superior and middle turbinates of 25 fresh cadavers (less than 12 hours post-mortem) were removed endoscopically. Each turbinate was halved into anterior and posterior fragments. Eight anatomically distinct fragments were therefore obtained from each of the 25 cadavers for a total of 200 specimens, which were analyzed through H&E staining and immunohistochemistry. Hematoxylin and eosin-stained slides were subjected to blind examination by three independent pathologists; ON distribution was graded on a fivepoint numeric scale (grade 0, 1, 2, 3, or 4). Immunohistochemistry was only positive through S-100 staining. Pairwise agreement between pathologists was assessed by means of the Kappa coefficient. The distribution of ON was analyzed regarding age, gender, time elapsed between death and specimen harvesting, symmetry between nares, and accuracy of immunohistochemistry results. RESULTS: In H&E-stained slides, olfactory neuroepithelium was present in 82.9% of ST and 17.1% of MT specimens; prevalence in the superior turbinate was therefore 4.9-fold greater (p < 0.001). Immunohistochemical analysis was able to identify ON in 15 fragments, 10 of which (20%) were from the posterior half of the superior turbinate; the remaining five specimens (7.6%) were from the anterior ST. According to prevalence ratio, the odds of finding ON are 4.9 times greater in superior turbinate than in the middle turbinate (CI, 95%; 3.37.4). Of the 15 immunohistochemistry-positive fragments, seven were assigned distribution grade 3 (>50% and 75% presence of ON) on H&E staining seven others were graded 4 (>75% presence of ON). A single immunohistochemistrypositive fragment was found to have grade 2 ON distribution (i.e., it contained 26% to 50% olfactory neuroepithelium) on H&E staining. S-100 staining showed a sensitivity of 13.5% and specificity of 100% for ON detection. There was no statistically significant difference in ON prevalence when fragments were compared according to gender, age at time of death, and naris side. However, when we analyzed ON presence according to the degree of ON distribution in each side, we found no concordance. CONCLUSIONS: Total ON was distributed symmetrically between nares, but we found no concordance between sides in the manner in which ON is distributed. ON is most likely to be found in the posterior half of the superior turbinate. Hematoxylin and eosin (H&E) staining is an effective method for distinguishing ON from respiratory epithelium, as shown by high inter-rater agreement among three independent pathologists
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Distribuição do neuroepitélio olfatório em concha média e superior em cadáveres humanos / Distribution of olfactory neuroepithelium in the middle and superior turbinate of human cadavers

Fabio de Rezende Pinna 03 September 2008 (has links)
INTRODUÇÃO: A biópsia do neuroepitélio olfatório (NeuO) oferece perspectivas para aplicações terapêuticas tanto em doenças do olfato como doenças neurodegenerativas. Uma coleta bem sucedida desse tecido in vivo ainda não é rotina, devido á carência de estudos sobre a distribuição do NeuO em conchas superior (CS) e média (CM). Neste trabalho, descrevemos a distribuição do NeuO na CS e CM em cadáveres a partir da retirada integral dessas estruturas e posterior análise histológica por coloração de hematoxilina e eosina (HE) e imunoistoquímica. Além disso, também analisamos a influência do sexo, idade e lateralidade no grau de presença do NeuO nas CS e CM. CASUÍSTICA E MÉTODOS: Estudo anatômico prospectivo realizado de março de 2006 a janeiro de 2008. A CS e a CM foram endoscopicamente retiradas de um total de 25 cadáveres frescos com menos de 12 horas de óbito. Cada concha foi seccionada na metade de seu comprimento ântero-posterior. Assim, cada um dos 25 cadáveres deu origem a oito fragmentos de mucosa de regiões anatômicas distintas, totalizando 200 lâminas para análise tanto por coloração de HE como por reação de imunoistoquímica. Nas lâminas coradas por HE, classificamos a distribuição do NeuO em graus 0, 1, 2, 3, 4, sendo que a análise foi realizada por 3 patologistas de forma cega. Para imunoistoquímica, só obtivemos positividade com a proteína S-100. A concordância entre os três patologistas foi avaliada aos pares utilizando-se o coeficiente de Kappa. A distribuição do NeuO foi analisada de acordo com a idade, sexo, tempo de óbito, simetria entre as fossas nasais e acurácia da imunoistoquímica. RESULTADOS: Pela HE na CS, o NeuO esteve presente em 82,9% das vezes e, na CM, em 17,1%. Na CS, o NeuO foi detectado em 82,9 % das lâminas, 4,9 vezes a prevalência na CM, que foi de 17,1 % das lâminas (p < 0,001). Pela imunoistoquímica, foi possível encontrar NeuO em um total de 15 fragmentos. Desses, 10 (20%) eram da metade posterior da CS e cinco (7,6%) da metade anterior da CS. Pelo cálculo da razão de prevalência, temos que a chance de encontrar NeuO é 4,9 vezes maior na CS do que na CM (IC95%: 3,3 7,4). Dos 15 fragmentos com marcação positiva para proteína S-100, sete corresponderam aos que tinham uma distribuição grau 3 (>50% e 75%) pela HE e outros sete aos que tinham uma distribuição grau 4 (acima de 75%). Somente um fragmento teve marcação positiva para imunoistoquímica no grupo 2 (entre 26 e 50%) na HE. A proteína S-100 apresentou uma sensibilidade de 13,5% e especificidade de 100% para detecção de NeuO. Não houve diferença estatisticamente significante na prevalência de NeuO quando os fragmentos foram divididos de acordo com o sexo, idade de óbito e lado da fossa nasal. No entanto, ao analisarmos a presença de NeuO de acordo com o grau de distribuição entre cada lado, não se percebe uma concordância. CONCLUSÕES: A quantidade total de NeuO foi simetricamente distribuída entre as fossas nasais, mas não houve uma concordância entre os lados quanto à maneira como o NeuO está distribuído. O NeuO apresenta maior probabilidade de ser encontrado na metade posterior de CS. A HE é um método eficaz para distinção entre NeuO e epitélio respiratório, devido a grande concordância entre três patologistas distintos. / INTRODUCTION: Olfactory neuroepithelium (ON) biopsy provides perspectives for several therapeutic applications, both in disorders of olfaction and in neurodegenerative diseases. Successful in vivo collection of ON is still not routine, due to a dearth of studies on ON distribution in the superior and middle turbinate (ST and MT respectively). This study describes the distribution of ON in cadaver ST and MT as determined by complete endoscopic removal of turbinates and histological analysis with hematoxylin and eosin (H&E) and immunohistochemical staining. We also analyzed the influence of gender, age, and naris side on the extent to which ON is present in the superior and middle turbinate. CASE SELECTION AND METHODS: We conducted a prospective anatomical study from March 2006 to January 2008. The superior and middle turbinates of 25 fresh cadavers (less than 12 hours post-mortem) were removed endoscopically. Each turbinate was halved into anterior and posterior fragments. Eight anatomically distinct fragments were therefore obtained from each of the 25 cadavers for a total of 200 specimens, which were analyzed through H&E staining and immunohistochemistry. Hematoxylin and eosin-stained slides were subjected to blind examination by three independent pathologists; ON distribution was graded on a fivepoint numeric scale (grade 0, 1, 2, 3, or 4). Immunohistochemistry was only positive through S-100 staining. Pairwise agreement between pathologists was assessed by means of the Kappa coefficient. The distribution of ON was analyzed regarding age, gender, time elapsed between death and specimen harvesting, symmetry between nares, and accuracy of immunohistochemistry results. RESULTS: In H&E-stained slides, olfactory neuroepithelium was present in 82.9% of ST and 17.1% of MT specimens; prevalence in the superior turbinate was therefore 4.9-fold greater (p < 0.001). Immunohistochemical analysis was able to identify ON in 15 fragments, 10 of which (20%) were from the posterior half of the superior turbinate; the remaining five specimens (7.6%) were from the anterior ST. According to prevalence ratio, the odds of finding ON are 4.9 times greater in superior turbinate than in the middle turbinate (CI, 95%; 3.37.4). Of the 15 immunohistochemistry-positive fragments, seven were assigned distribution grade 3 (>50% and 75% presence of ON) on H&E staining seven others were graded 4 (>75% presence of ON). A single immunohistochemistrypositive fragment was found to have grade 2 ON distribution (i.e., it contained 26% to 50% olfactory neuroepithelium) on H&E staining. S-100 staining showed a sensitivity of 13.5% and specificity of 100% for ON detection. There was no statistically significant difference in ON prevalence when fragments were compared according to gender, age at time of death, and naris side. However, when we analyzed ON presence according to the degree of ON distribution in each side, we found no concordance. CONCLUSIONS: Total ON was distributed symmetrically between nares, but we found no concordance between sides in the manner in which ON is distributed. ON is most likely to be found in the posterior half of the superior turbinate. Hematoxylin and eosin (H&E) staining is an effective method for distinguishing ON from respiratory epithelium, as shown by high inter-rater agreement among three independent pathologists

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