Orientador: Lucia Helena O'Dwyer de Oliveira / Banca: Teresa Cristina Goulart de Oliveira Sequeira / Banca: Kátia Denise Saraiva Bresciani / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência da infecção por parasitas dos gêneros Babesia e Hepatozoon em gatos domésticos, por meio da identificação em esfregaços sangüíneos corados por Giemsa e pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR). Foram colhidas amostras de sangue de 144 animais, sendo 113 do Estado de São Paulo e 31 do Distrito Federal. Os animais foram escolhidos aleatoriamente e não foram feitas distinções quanto à raça, idade, sexo ou estado de saúde dos gatos. A maioria dos animais habitava áreas rurais (52,8%) e, quando urbanas (47,2%), eram animais com livre acesso à rua. A extração do DNA das amostras de sangue foi realizada utilizando o GFXTM Genomic Blood DNA Purification Kit, de acordo com as recomendações do fabricante. Para a realização da PCR foram utilizados os oligonucleotídeos PiroA1 e PiroB para Babesia spp. e HepF e HepR para Hepatozoon spp. Pela análise dos esfregaços sangüíneos foram observadas estruturas intraeritrocitárias semelhantes à piroplasmídeos em cinco (3,47%) gatos, porém, apenas um (0,69%) foi positivo pela PCR para Babesia sp., com banda visualizada em 450pb. O seqüenciamento dessa amostra positiva demonstrou 100% de similaridade com Babesia canis vogeli já caracterizada no Brasil. Todas as amostras foram negativas para Hepatozoon spp., tanto pelo esfregaço quanto pela PCR. Por meio dos resultados obtidos neste estudo pode-se concluir que a freqüência desses hemoparasitas em gatos domésticos nessas regiões é muito baixa e técnicas moleculares são necessárias para o correto diagnóstico dessas hemoparasitoses nesses animais. / Abstract: The purpose of this study was to evaluate the occurrence of infection by parasites of the genus Babesia and Hepatozoon in domestic cats. Infection was identified using Giemsa stained blood smears and the Polymerase Chain Reaction (PCR). The blood samples were collected from one hundred and forty four (144) cats that resided in São Paulo (113) state and the Federal District (31). The DNA extraction of blood samples was performed with the GFXTM Genomic Blood DNA Purification Kit, according to the manufacturer's instructions. The PiroA1 and PiroB primers for Babesia spp. and the HepF and HepF primers for Hepatozoon spp were used for PCR execution. Blood smear examinations, demonstrated the presence of intraerythrocytic structures resembling piroplasmids in five (3.47%) cats, however, only one (0.69%) was positive for Babesia sp., by PCR, with a band visualized at 450 bp. The sequencing of this positive sample demonstrated close identity with Babesia canis vogeli, which has already been characterized in Brazil. All blood smear and PCR samples were negative for Hepatozoon spp. The frequency of these hemoparasites in domestic cats in Brazil is very low and molecular techniques are necessary for the correct diagnostic of these hemoparasitosis in these animals. / Mestre

Resumo: A Reação em Cadeia da Polimerase Quantitativa em Tempo Real (qPCR) foi utilizada para avaliar o nível de infecção por Babesia bovis e Babesia bigemina em bovinos de corte. Foram utilizados 149 animais, sendo 74 bezerros e 75 vacas de três grupos genéticos diferentes (puros Bos indicus, ½ Bos indicus + ½ Bos taurus e puros Bos taurus). Os resultados obtidos foram analisados com o objetivo de verificar se ocorrem variações entre os grupos genéticos e faixas etárias estudadas quanto ao nível de infecção por babesias. De cada bovino foram colhidas amostras de sangue da veia jugular e vasos periféricos, para extração de DNA, determinação do volume globular (VG) e confecção de esfregaços sanguíneos. As amostras de DNA extraídas de sangue venoso, colhidas com anticoagulante EDTA foram submetidas à amplificação pela técnica de qPCR, utilizando sequências iniciadoras específicas para B. bovis e B.bigemina. Pelo exame microscópico de esfregaços sanguíneos verificou-se que, nenhum animal adulto apresentou parasitemia patente por Babesia spp. Nos bezerros foram diagnosticados 10,8% de infecção por B. bigemina (8/74), sendo 26,1%, 3,8% e 4% para os grupos genéticos Angus, cruzados e Nelore, respectivamente. A taxa de infecção por B. bovis diagnosticados pela técnica de qPCR nos bovinos estudados foi de 98,0% (146/149), sendo 100,0%, 98,0% e 96,0% para os grupos genéticos Angus, cruzados e Nelore, respectivamente. As análises estatísticas do nível de infecção medido pelo número de cópias de DNA alvo nas amostras mostraram significância (P<0,05) dos três fatores avaliados: grupo genético, categoria e a interação entre eles. Foi possível observar ainda que bovinos Bos taurus apresentaram maior suscetibilidade às infecções por Babesia bovis e que a quantidade de DNA alvo desta... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Polymerase Chain Reaction Quantitative Real Time (qPCR) was used to assess the level of infection with Babesia bovis and Babesia bigemina in beef cattle. We used 149 animals, 74 calves and 75 cows from three different genetic groups (Bos indicus pure, ½ Bos indicus + ½ Bos taurus and Bos taurus pure). The results were analyzed with the objective of determining if there are variations between genotypes and age groups in the level of infection with babesias. Each calf was sampled blood from the jugular vein and peripheral vessels for DNA extraction, packed cell volume (VG) and preparation of blood smears. DNA samples extracted from venous blood collected with EDTA anticoagulant were subjected to qPCR amplification technique using sequence specific primers for B. bovis and B.bigemina. By microscopic examination of blood smears showed that no adult animals presented patent parasitemia by Babesia spp. Calves were diagnosed in 10.8% of infection by B. bigemina (8/74), and 26.1%, 3.8% and 4% for the Angus genetic groups, crossbred and Nellore, respectively. The rate of infection by B. bovis diagnosed by qPCR technique in cattle studied was 98.0% (146/149), and 100.0%, 98.0% and 96.0% for Angus genetic groups, crossbred and Nellore, respectively. Statistical analysis of the level of infection measured by the number of copies of target DNA in the samples showed significant (P <0.05) evaluated the three factors: genetic group, category and the interaction between them. It was also possible to observe that Bos taurus cattle showed greater susceptibility to infections by Babesia bovis and the amount of target DNA of this species of protozoa in calves, was significantly (P <0.05) higher than in cows. To B. bigemina, only DNA samples from cattle ½ Bos indicus + ½ Bos taurus and Bos taurus pure technique were assessed by qPCR, due to low concentration... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Henrique Nunes de Oliveira / Coorientador: Márcia Cristina de Sena Oliveira / Banca: Maria Eugênia Zerlotti Mercadante / Banca: Gilson Pereira de Oliveira / Mestre

Orientador: Lucia Helena O'Dwyer de Oliveira / Banca: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Alessandro Francisco Talamini do Amarante / Resumo: O trabalho teve como objetivo investigar a ocorrência de Hepatozoon spp., piroplasmas e hemoplasmas em felídeos neotropicais nascidos em vida livre. Amostras sanguíneas foram colhidas de 11 Leopardus pardalis, 10 Leopardus tigrinus, oito Puma yagouaroundi, um Leopardus wiedii e um Puma concolor, provenientes dos Estados do Pará, Maranhão, Piauí, Ceará e Minas Gerais. Esfregaços sangüíneos foram realizados para observação dos hemoparasitas e a extração de DNA foi feita para utilização em técnicas moleculares. Hepatozoon spp. e piroplasmas foram diagnosticados pela Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) e hemoplasmas felinos foram pesquisados pela PCR- RFLP e "Nested"-PCR. A caracterização molecular dos isolados obtidos foi feita após o sequenciamento e a análise filogenética. A ocorrência de pelo menos um hemoparasita diagnosticado pela técnica do esfregaço sanguíneo foi de 6,45% (2/31) e pela PCR foi de 45,16% (14/31), sendo observadas, 16,12% (5/31), 3,22% (1/31) e 38,70% (12/31) de infecções por Hepatozoon sp., Cytauxzoon felis e hemoplasmas (das espécies Mycoplasma haemofelis e/ou "Candidatus Mycoplasma haemominutum"), respectivamente. Foram encontradas infecções únicas e mistas nos felídeos. O diagnóstico positivo foi maior nos adultos (92,85%) (p=0,007) e na espécie L. pardalis (57,14% - 8/14). A detecção de C. felis em exemplar juvenil de P. concolor, recém capturado na natureza, indica sua presença na população de felídeos neotropicais de vida livre no Brasil. A caracterização molecular de Hepatozoon sp. em felídeos neotropicais e os relatos das infecções por este hemoparasita em L. tigrinus e por M. haemofelis e "Candidatus M. haemominutum" em P. yagouaroundi são inéditos no mundo. / Abstract: The aim of this study was to investigate the occurrence of Hepatozoon spp., piroplasms and hemoplasms in wild caught neotropical felids. Blood samples were drawn from 11 Leopardus pardalis, 10 Leopardus tigrinus, eight Puma yagouaroundi, one Leopardus wiedii and one Puma concolor coming from the States of Para, Maranhão, Piauí, Ceará and Minas Gerais. Blood smears were evaluated for parasites and DNA was extracted for molecular techniques. Hepatozoon spp. and piroplasms were diagnosed by Polymerase Chain Reaction (PCR) and feline hemoplasms were examined by both RFLP-PCR and Nested- PCR. Molecular characterization of the isolates obtained was performed after sequencing and phylogenetic analyses. The occurrence of at least one hemoparasite diagnosed by blood smear technique was 6.45% (2/31) and by PCR was 45.16% (14/31). Infections of Hepatozoon sp., Cytauxzoon felis and feline hemoplasms (from species Mycoplasma haemofelis and/or "Candidatus Mycoplasma haemominutum") were observed, respectively, in 16.12% (5/31), 3.22% (1/31) and 38.70% (12/31) from the total of animals studied. Infections and co-infections were found among felids. The positive diagnosis were higher in adults (92.85%) (p= 0,007) and in L. pardalis (57.14% - 8/14). The detection of C. felis in a juvenile, recently wild caught P. concolor, indicates the presence of this piroplasm in the wild felid population of Brazil. The molecular characterization of Hepatozoon sp. in neotropical felids and the report of this hemoparasite infection in L. tigrinus as well as the report of M. haemofelis and "Candidatus M. haemominutum" in P. yagouaroundi are novelties in the world. / Mestre